三陰性乳腺癌中AR與Ki-67、CK5/6的表達及相關(guān)性分析

王會華 常慶龍△ 崔萍萍 原陽

鄭州大學第三附屬醫(yī)院 1)乳腺三科 2)科研中心 鄭州 450012

乳腺癌(breast cancer，BC)是女性中發(fā)病率位居第一的惡性腫瘤，隨著分子醫(yī)學的發(fā)展，BC的分子分型也更加詳細，針對不同靶點的治療方案也逐漸發(fā)展。三陰性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)是乳腺癌中的一種特殊分子分型，其免疫組化特征是雌激素受體(estrogen receptor，ER)、孕激素受體(progesterone receptor,PR)、人表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor-2，HER2)均不表達。TNBC呈高度異質(zhì)性，生物學行為侵襲性強，易早期復發(fā)，有較高遠處轉(zhuǎn)移、內(nèi)臟轉(zhuǎn)移及腦轉(zhuǎn)移率，進展快，預(yù)后差。TNBC缺乏已知治療靶點的受體表達，難以對這類患者進行相應(yīng)的個體化治療，這就造就了目前TNBC治療方案缺乏的困境，故探討TNBC的臨床病理特征及其各生物標志物間的關(guān)系以發(fā)現(xiàn)有效的治療靶點，已經(jīng)成為近年臨床研究的焦點。雄激素受體(androgen receptor, AR)在乳腺癌中廣泛表達，目前認為其在乳腺癌變及癌細胞的遷移及侵襲過程中有重要作用，雖然具體作用機制仍需進一步研究，但TNBC中AR的陽性表達使AR有望成為TNBC的潛在治療靶點[1]。細胞增殖指數(shù)(Ki-67)是一種腫瘤標志物，反映乳腺癌中癌細胞的增殖狀態(tài)，常用于預(yù)測乳腺癌患者的預(yù)后。細胞角蛋白5/6(cytokeratins5/6，CK5/6)因在基底層細胞特異性表達的特點一般被用于診斷TNBC中的基底細胞樣類型乳腺癌。有研究認為，AR通過調(diào)節(jié)PI3K的亞基激活TNBC細胞的遷移與侵襲[2]，而CK5/6與表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)共表達，可以激活包括PI3K/AKT/mTOR等在內(nèi)的一些下游信號通路[3-4]。本研究旨在探討AR、Ki-67、CK5/6與臨床病理特征的關(guān)系及其三者的相關(guān)性，以望能為TNBC的風險分級和基于分子格局的潛在治療方案提供一些支持。

1 資料與方法

1.1研究對象回顧性分析2016-01—2020-12在我院經(jīng)病理確診且已行手術(shù)治療的115例乳腺癌患者的臨床資料，均為女性；年齡為 29～68歲，中位年齡49歲。腫瘤最大直徑≤2 cm 29例，2～5 cm 86例。無淋巴結(jié)受累84例，淋巴結(jié)受累31例。組織學分級I～Ⅱ級48例，Ⅲ級67例。納入標準：(1)均參照2015年的St-Gallen共識標準[2]判定為TNBC(ER、PR、HER-2均為陰性)。(2)術(shù)前均未進行放療、化療、靶向及內(nèi)分泌等新輔助治療。臨床資料完整。排除標準：(1)合并高血壓、糖尿病等基礎(chǔ)疾病的患者。(2)初診時有遠處轉(zhuǎn)移的患者。所有患者的病理切片在顯微鏡下重新由兩位經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師進行雙盲獨立閱片并得出明確診斷。

1.2免疫組化檢測手術(shù)切除的腫瘤組織標本用10%的中性緩沖福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，切片。運用免疫組化SP法進行檢測，以已知陽性切片為陽性對照，并以PBS緩沖液代替一抗作陰性對照。AR、ER、PR、HER-2、Ki-67、CK5/6檢測試劑均自上海羅氏公司購入，試劑盒為即用型試劑盒。

1.3病理結(jié)果判讀(1) ER、PR判定標準：腫瘤陽性細胞數(shù)<1%則判定為陰性[5]。(2)HER-2判定標準：無著色或≤10的腫瘤細胞膜呈現(xiàn)微弱的、不完整著色為(-)，>10%的腫瘤細胞呈現(xiàn)微弱的、不完整著色為(+)，呈弱-中等的完整細胞膜著色的腫瘤細胞>10%或者呈強而完整的細胞膜著色的腫瘤細胞≤10%為(++)，呈強、完整且均勻的細胞膜著色的腫瘤細胞>10%為(+++)。HER-2表達(-)和(+)判定為陰性。(++)者行原位雜交熒光FISH檢測以進一步明確是否存在擴增，無擴增判定為陰性，有擴增則判定為陽性。(+++)者判定為陽性。(3)AR判定標準：陽性細胞數(shù)<10%為(-)，≥10%為(+)。 (4)Ki-67判定標準：細胞核染色呈黃色或棕黃色顆粒的腫瘤細胞即陽性細胞，本研究選擇以40%作為Ki-67分組的界值，陽性細胞率<40%為低表達組，陽性細胞率≥40%為高表達組[6]。(5) CK5/6判定標準：細胞質(zhì)中出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒的腫瘤細胞為陽性細胞，陽性細胞率≥1%判為陽性，<1%判為陰性。

1.4統(tǒng)計學分析采用SPSS 26.0軟件進行數(shù)據(jù)處理。分類變量差異性分析用χ2檢驗及Fisher確切概率法，AR與Ki-67及CK5/6的相關(guān)性選用Spearman 相關(guān)性分析。以α=0.05作為檢驗水平。

2 結(jié)果

115例腫瘤標本中，AR表達陽性40例(34.8%)，表達陰性75例(65.2%)。Ki-67高表達98例(85.2%)，低表達17例(14.8%)。CK5/6陽性表達80例(69.6%)，陰性表達35例(30.4%)。見表1。組織學分級在Ki-67分組間的差異存在統(tǒng)計學意義(P<0.05)，組織學分級I～Ⅱ級的TNBC患者在Ki-67低表達組中的占比率高于Ki-67高表達組?；颊叩哪挲g、腫瘤最大徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移在Ki-67分組間表達差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)?；颊叩哪挲g、腫瘤大小、組織學分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移在AR與CK5/6分組間表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表2。AR與Ki-67、CK5/6在TNBC的表達存在負相關(guān)關(guān)系，差異有統(tǒng)計學意義(r值分別為0.467和0.350，P<0.05)。見表3。

表1 各組計數(shù)及占比

表2 AR、Ki-67、CK5/6在TNBC的表達以及與臨床病理特征的關(guān)系

表3 AR、Ki-67、CK5/6的關(guān)系

3 討論

乳腺癌已成為女性發(fā)病率排名第一的癌癥，TNBC是乳腺癌的一個亞型，占10%～15%[7-8]，是不同表型乳腺癌的異質(zhì)性集合，目前尚無有效的基于分子標志物表達的治療方案，因此發(fā)現(xiàn)TNBC的治療靶點一直都是學者們關(guān)注的目標。分析TNBC分子標志物的表達特點及其各個分子標志物之間的關(guān)系是近年來研究的熱點，有研究發(fā)現(xiàn)AR通過調(diào)節(jié)PI3K的亞基推動TNBC細胞的遷移和侵襲性，CK5/6可以激活PI3K/AKT/mTOR信號通路[2-4]，而Ki-67被普遍認為可以預(yù)測乳腺癌患者的預(yù)后。本研究探討了TNBC中AR、Ki-67、CK5/6與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系及其三者之間的相關(guān)性，以期為TNBC的進一步危險分級及為潛在治療靶點提供理論支持。

AR廣泛表達于乳腺癌中，不同分型表達率有所不同，同時也是一種預(yù)后指標。有研究表明，AR在TNBC中有維持細胞增殖的作用，與AR相似的ER、PR目前已作為ER和PR陽性乳腺癌內(nèi)分泌治療的靶點。AR被認為是TNBC很有希望的潛在治療靶點，進一步進行探討對改善TNBC的治療效果具有重要的臨床意義[9-12]。本研究中，AR(+)占比為34.8%，和其他研究結(jié)果相近[1，13-15]。TNBC患者的臨床病理特征與AR表達之間無統(tǒng)計學意義的相關(guān)性，Asano、Payandeh等[16]的研究結(jié)果也證實了這一點。其他研究表明，AR的表達情況與組織學分級、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性[16-18]， AR陽性判定標準尚未統(tǒng)一，可能是研究結(jié)果不同的影響因素之一，同時參考文獻中的研究對象并不全是同一種人種，也是需要考慮的影響因素。

Ki-67 是目前最常用的反映腫瘤細胞增殖狀況的生物標志物，存在于細胞周期除G0期外的其他階段，與腫瘤的發(fā)生、浸潤、種植和轉(zhuǎn)移過程相關(guān)[19]。TNBC中Ki-67的陽性表達率遠高于其他分子分型。一項包含7 716名TNBC登記患者的薈萃分析研究表明，雖然目前Ki-67的最佳分界點仍不清楚，但以Ki-67的40%為界值可能可以更好區(qū)分不同死亡風險的TNBC患者[6]。以Ki-67的40%為分界點將Ki-67分組，本研究中患者的年齡、腫瘤最大徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與Ki-67表達無相關(guān)性，組織學分級與Ki-67表達存在相關(guān)性，與文獻[20]的研究結(jié)果基本一致。

腫瘤組織CKs常被用來明確腫瘤是否為上皮來源，CK5/6常被用來細分TNBC的基底細胞樣亞型，往往與預(yù)后不良有關(guān)[21-22]。本研究中CK5/6在TNBC中陽性表達占比為69.6%，在其他研究TNBC中CK5/6陽性占比率的范圍之內(nèi)[23]?；颊叩哪挲g、腫瘤大小、組織學分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與CK5/6無相關(guān)關(guān)系，這與金玉、劉中正等[22-23]的研究結(jié)果基本一致。

本研究通過Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，AR與Ki-67、CK5/6在TNBC的表達存在顯著的負相關(guān)關(guān)系，與周晨陽等[11,18，23]的研究結(jié)果基本一致。一項由Payandeh等[16]進行的研究認為AR表達狀態(tài)與Ki-67表達狀態(tài)無顯著相關(guān)關(guān)系，這可能跟目前AR陽性判定標準及Ki-67在TNBC中的最佳截斷值仍存在一定爭議有關(guān)，不同地區(qū)人群及不同人種也有可能會影響結(jié)果。

本研究的局限性在于納入研究的例數(shù)有限，以及患者的確診時間問題未將AR、Ki-67、CK5/6與預(yù)后指標進行相關(guān)分析。這也是需要進一步研究的問題，我們希望本研究對于TNBC的風險分級以及預(yù)后評估有一定幫助，同時也需要更多更深入的研究，有望發(fā)現(xiàn)與之有關(guān)的潛在治療方案。