妊娠中期染色體微陣列分析聯(lián)合超聲胎兒頸項透明層厚度診斷胎兒鼻骨缺失/發(fā)育不良效能

毛筱琳 丁玲燕 周 鍵 錢小華

江蘇省蘇州市第九人民醫(yī)院(215200)

妊娠中晚期可通過超聲對胎兒微小病變組織進行觀察[1]，主要包括頸部透明層增厚、脈絡膜囊腫、腸管回聲增強、腎盂分離、單臍動脈、心室腔，對胎兒早期畸形病變有臨床指導意義[2]。胎兒鼻骨缺失或發(fā)育不良是臨床較常見的超聲軟指標，與唐氏綜合征相比，其似然比為11.6～50.5[3]。所以，有專家認為，在對胎兒產(chǎn)前篩查時建議將胎兒單純性鼻骨缺失或發(fā)育不良作為重要檢測項目[4]。染色體微陣列分析(CMA)可通過高通量特異性核酸探針對全基因組進行分析，對病灶區(qū)域的基因拷貝數(shù)量變異，尤其是基因的微量缺失以及重復，提高產(chǎn)前診斷的準確性具有積極意義[5]。有研究報道，CMA對50kb以下的片段缺失以及重復有明顯優(yōu)勢[6]。而以往研究已證實，鼻骨缺失或發(fā)育不良的病理前提與基因突變具有相關(guān)性[7]。本研究通過CMA技術(shù)聯(lián)合產(chǎn)前超聲胎兒頸項透明層厚度(NT)異常篩查，分析有高危因素孕婦妊娠中期胎兒鼻骨缺失或發(fā)育不良染色體異常檢測價值，為臨床診斷提供科學依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 一般資料

收集2014年1月—2021年1月本院有高危因素孕產(chǎn)婦80例臨床資料，年齡(36.4±5.3)歲(24～41歲)，孕周(15.3±2.6周)(18～25周)，孕(1.1±0.2)次。鼻骨缺失/發(fā)育不良診斷標準[8]：妊娠14～38周對胎兒產(chǎn)前檢查，鼻骨長度小于正常值則為鼻骨發(fā)育不良，胎兒鼻骨超聲回聲相比其他表面回聲較弱則為鼻骨缺失，超聲檢測醫(yī)師均獲得英國胎兒基金會NT測量證書以及NBL測量證書。排除合并其他畸形；其他家族性異常疾病。孕婦均簽署知情同意書，本研究經(jīng)倫理委員會論證通過。

1.2 檢測方法

取孕婦羊水樣本提取DNA，聚合酶鏈反應(PCR)方法擴增，反應條件設定為95℃下5min，95℃ 40s，60℃ 20s，72℃ 15s，循環(huán)24次。對DNA酶切消化、純化以及片段化處理，雜交、標記以及洗滌后，采用微陣列片芯片(美國Affymetrix，Cytoscan 750K Array)對羊水DNA片段進行分析，通過在線公共數(shù)據(jù)[9]分析染色體異常情況。采用GE VolusonE8常規(guī)產(chǎn)前超聲檢查，探頭頻率設定為3.5Mhz，常規(guī)對脊柱、頭顱、肱骨、股骨、腹圍、雙頂徑以及頭圍等測量。NT異常：NT厚度在所有檢測對象的第95百分位數(shù)以上則為異常。

1.3 觀察指標

1.3.1CMA診斷對年齡≥35歲、胎兒超聲異常、不良接觸史、不良孕產(chǎn)史、夫妻一方染色體異常孕婦CMA診斷情況進行比較，分析CMA異常核型。

1.3.2檢測效能分析采用受術(shù)者工作特征曲線(ROC)分析CMA指標、超聲NT厚度診斷鼻骨缺失/發(fā)育不良效能。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 不同產(chǎn)前診斷指征者CMA診斷

本研究80例中CMA檢出異常7例，檢出率為8.8%，各高危因素孕婦CMA異常檢出情況見表1。

表1 不同高危因素孕婦CMA診斷情況[例(%)]

2.2 CMA診斷異常核型分析

本研究7例核型分析見表2。

表2 CMA診斷異常核型分析

續(xù)表

2.3 檢測效能分析

超聲檢查，80例中檢測NT異常陽性12例；CMA檢查聯(lián)合NT檢測診斷鼻骨缺失/發(fā)育不良的特異度高于單獨診斷。見表3。

表3 不同檢測方法診斷效能分析

2.4 ROC曲線分析

通過ROC曲線分析，CMA檢查聯(lián)合NT檢測鼻骨缺失/發(fā)育不良的ROC曲線下面積(AUC)高于單獨檢測，且具有較高預測價值。見表4。

表4 不同方法檢測鼻骨缺失/發(fā)育不良的ROC曲線分析

3 討論

流行病學調(diào)查顯示，妊娠15～22周正常胎兒以及唐氏綜合征胎兒中，鼻骨缺失/發(fā)育不良發(fā)病率為0.5%～43%[10]。唐氏綜合征患者的鼻骨缺失及發(fā)育不良的發(fā)病率高于正常胎兒。在英國的一項調(diào)查中，正常胎兒發(fā)生鼻骨缺失及發(fā)育不良的風險為1.2%[11]，而在唐氏綜合征患者中發(fā)病風險為62%[12]。所以臨床對胎兒診斷中，應將鼻骨缺失及發(fā)育不良納入新生兒篩查項目。

以往研究已證實，鼻骨缺失及發(fā)育不良與唐氏綜合征的似然比為11.6-50.5，所以在臨床研究中，將鼻骨缺失及發(fā)育不良納入產(chǎn)前診斷的呼聲隨之升高。目前染色體異常分析中，染色體G帶核型分析為染色體異常診斷的金標準[13]，已廣泛應用于臨床，但在實際應用中仍存在一定局限性，需羊水培養(yǎng)，耗費時間較長，技術(shù)要求較高。檢出的異常情況中，多數(shù)表現(xiàn)為非整倍體染色體異常，快速非整倍體檢測技術(shù)已在臨床廣泛應用，主要包括多重定量熒光聚合酶鏈反應、熒光原位雜交技術(shù)[14]、細菌人工染色體標記技術(shù)以及高分辨率溶解曲線分析技術(shù)，這些新技術(shù)顯著降低了臨床染色體檢測時間，但這些檢測方法僅能對染色體異常情況進行檢測，但對于全基因組檢測還存在一定局限性。目前超聲檢測異常胎兒已較廣泛應用于臨床[15]。以往超聲檢測鼻骨缺失及發(fā)育不良胎兒，主要表現(xiàn)為胎兒的雙頂徑、頭圍以及腹圍股骨長均在相應孕周3周內(nèi)，部分胎兒被檢測到存在腹膜部位室間隔缺損、主動脈騎跨以及右位主動脈弓。

本研究采用CMA對高危因素孕婦羊水進行分析，檢出的患者染色體異常主要表現(xiàn)為arr[hg19]5q23.1(118,253,123-120,744,968)×3，2.4Mb、arr[hg19]15q13.3(31,967,496-32,444,043)×1，476.5kb、arr[hg19]16q23.3(83,741,751-84,087,310)×3，345.5Kb、arr[hg19]15q11.2(24,940,792-25,282,886)×3，342kb，均表現(xiàn)為19號染色體異常表達。劉叢叢等[15]通過對孤立性鼻骨缺失以及發(fā)育不良患者分析，18例患者中僅有4例CMA檢測異常，這4例中有2例遺傳基因來自父母。在本研究中，超聲診斷80例中發(fā)現(xiàn)12例存在異常，與以往研究存在一定差異。分析原因認為，胎兒的鼻骨主要是在孕6周開始發(fā)育，在9～11周開始骨化，同時在兩側(cè)鼻骨間還會形成一定縫隙，隨著孕周增加兩側(cè)鼻骨形成的縫隙會逐步融合，最終形成上窄下寬的骨板。所以在胎兒頭臀長度達到42mm時，一般就可以看到胎兒的鼻骨結(jié)構(gòu)，但在不同地區(qū)以及家族間，胎兒的鼻骨長度也存在一定差異，對鼻骨發(fā)育不全的診斷帶來一定差異。本研究中對鼻骨發(fā)育不全診斷中，主要依靠臨床超聲回聲強度檢測進行診斷，未能形成量化依據(jù)，但從產(chǎn)生鼻骨缺失及發(fā)育不良患者的染色體核型分析與以往研究一致，提示臨床在行產(chǎn)前診斷時，可聯(lián)合染色體核型檢測提高診斷效能。

綜上所述，CMA技術(shù)聯(lián)合超聲NT檢測篩查高危因素孕婦妊娠中期胎兒鼻骨缺失/發(fā)育不良有較高臨床診斷價值。