牡蠣蛋白酶解物對小鼠慢性酒精性肝損傷的保護作用

蔡雯雯，葛小東，李 娜，龔世禹，劉 斌，陳福泉，曾 峰,*

（1.閩臺特色海洋食品加工及營養(yǎng)健康教育部工程研究中心，福建 福州 350002；2.福建農(nóng)林大學食品科學學院，福建 福州 350002；3.集美大學海洋食品與生物工程學院，福建 廈門 361021）

牡蠣是一種常見的海洋無脊椎動物，盛產(chǎn)于我國沿海地區(qū)，如福建、廣東、廣西、海南、山東等。牡蠣在中國傳統(tǒng)醫(yī)藥學中有著重要的地位，具有滋陰潛陽、鎮(zhèn)靜斂汗、固精止帶、化痰軟堅的功效，與其他中草藥搭配熬制服用，可以治療眩暈、自汗、盜汗等疾病，且效果顯著。牡蠣肉與牡蠣殼均可入藥，藥用價值廣泛，且牡蠣肉可食用，味道鮮美可口、營養(yǎng)豐富。此外，牡蠣提取物、酶解物及活性肽等活性成分還具有保肝、抗氧化、抗疲勞、抗衰老、降血糖、降血脂等多種生物活性。

肝臟在人體的新陳代謝中起著重要的作用。肝臟疾病主要是由病毒、過度飲酒和有毒化學物質(zhì)等引起。反復損傷性炎癥可導致肝炎、肝纖維化、肝硬化，甚至能使機體因肝衰竭而死亡。酒精性肝病中最嚴重的一種是酒精性肝炎，死亡率在20%～40%左右，多達75%的患者在確診為嚴重酒精性肝炎后90 d內(nèi)死亡。過量飲酒導致的酒精性肝病成為當今日益嚴重的公共衛(wèi)生問題。全世界每年約有330萬 人死于過度飲酒，約占總死亡人數(shù)的5.9%，過度飲酒可引起許多代謝性疾病。正常情況下，酒精通過胃和小腸吸收，然后通過血液進入肝臟。在肝臟中，乙醇通過乙醇脫氫酶被氧化成乙醛，乙醛經(jīng)乙醛脫氫酶代謝成乙酸，經(jīng)尿液排出體外。大量或長期飲用酒精飲料會使肝臟的解毒能力過載，導致酒精和乙醛的代謝物在血液和肝臟中積累，肝臟中過量的乙醛和乙醇的氧化代謝物會激活微粒體細胞色素P450系統(tǒng)，從而增加細胞色素P4502E1（CYP2E1）的活性，產(chǎn)生大量活性氧（reactive oxygen species，ROS）。因此，氧化損傷被認為是飲酒的主要危害之一，也是慢性酒精性肝損傷（alcoholic liver disease，ALD）發(fā)病機制中的關(guān)鍵靶點。目前，針對牡蠣酶解物對慢性ALD的保護作用鮮有報道。

本實驗構(gòu)建ALD小鼠模型，通過不同劑量的牡蠣酶解物干預慢性ALD小鼠，探究牡蠣酶解物對慢性ALD小鼠的血液和肝臟生化指標的影響，分析肝臟組織形態(tài)、關(guān)鍵基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平上的變化，基于16S rRNA高通量測序技術(shù)研究牡蠣酶解物對慢性ALD小鼠腸道菌群的影響，探究其保肝作用機制，以期為海洋生物資源的深加工及營養(yǎng)功能性食品的研究與開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

清潔級（SPF）雄性KM小鼠購自福州吳氏實驗動物中心，生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2014-0004。

牡蠣 福州市金山大潤發(fā)超市；中性蛋白酶北京索萊寶公司；RNA提取試劑盒、PrimeScipt反轉(zhuǎn)錄試劑盒、基因組去除試劑、熒光定量試劑盒 寶生物工程（大連）有限公司；Phusion Flash高保真聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）預混液、GeneJET凝膠回收試劑盒、Ion Plus片段文庫試劑盒 美國賽默飛世爾科技有限公司；谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alaninetransaminase，ALT）試劑盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）試劑盒、谷胱甘肽（glutathione，GSH）試劑盒、甘油三酯（triglyceride，TG）試劑盒、總膽汁酸（total bile acid，TBA）試劑盒、總蛋白定量測定試劑盒南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設備

XPR105DR電子天平 瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司；SpectraMax iD3酶標儀 美谷分子儀器（上海）有限公司；SMZ18光學顯微鏡 北京普瑞賽司有限公司；A2481 PCR儀 上海智巖科學儀器有限公司；ABI7300熒光定量PCR儀、UltiMate 300分析型液相色譜-質(zhì)譜儀 美國賽默飛世爾科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 牡蠣酶解物的制備

將牡蠣洗凈，磨成肉糜狀，分別用95%（體積分數(shù)，下同）乙醇溶液、55%乙醇溶液和水提取得到濾液I、濾液II和濾液III，經(jīng)濃縮和冷凍干燥，分別得到牡蠣95%乙醇提取物（OY95）、牡蠣55%乙醇提取物（OY55）和牡蠣水提取物（OYWE）。取水提剩余物殘渣，加入10 倍體積的去離子水，用1 400 U/g中性蛋白酶酶解（pH 7、4 h）得到濾液IV，經(jīng)濃縮和凍干后得牡蠣酶解物（OYEH）。OY95、OY55、OYWE、OYEH的干質(zhì)量得率按公式（1）計算。

1.3.2 牡蠣酶解物的多肽質(zhì)譜分析

稱取1 mg牡蠣酶解物，溶于1 mL 0.01 mol/L磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffered saline，PBS），將牡蠣酶解物溶液樣品轉(zhuǎn)移至對應的10 kDa超濾管中，于4 ℃離心（12 000×、10 min），上清液真空冷凍干燥。稱取1 mg干燥樣品重新溶于20 μL PBS，進行質(zhì)譜分析。

人體胃腸道微生態(tài)受到出生方式、喂養(yǎng)習慣、飲食、藥物、應激、地域、年齡等多種因素的影響[1]。胃腸道微生態(tài)參與機體的物質(zhì)代謝、炎癥信號通路轉(zhuǎn)導、調(diào)控適應性免疫、維持腸道的完整性、保護機體免受致病菌損傷[2-4]。微生態(tài)的失衡與人體胃腸道疾病、糖尿病、肥胖、代謝綜合征、自身免疫性疾病及腫瘤等相關(guān)，尤其是在人體胃腸道等多種疾病中觸發(fā)了重要的病理進程。而胃腸道微生態(tài)與胰腺疾病的研究也引起了學者們的關(guān)注。

一級質(zhì)譜分離的樣品經(jīng)離心干燥后，重新溶解于甲醇（色譜級）中進行液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（high performance liquid chromatography-mass spectrometry，HPLC-MS）分析。將3 μL溶解后的樣品上樣到nanoViper C預柱（3 μm，100 ?），然后保持流速300 nL/min，沖洗脫鹽5 min，采用Easy nLC 1000納升液相色譜系統(tǒng)，樣品脫鹽后再經(jīng)分析柱分離，分析柱是C反相色譜柱，流動相A為0.1%（體積分數(shù)，下同）甲酸-水，B為2%乙腈-水，洗脫條件：0～7 min，5%～20%A；7～9 min，20%～32% B；9～20 min，32%～55%A。采用PEAKS Studio 8.5軟件進行數(shù)據(jù)加工處理和檢索分析。

1.3.3 動物分組與慢性酒精性肝損傷實驗

實驗小鼠經(jīng)過1 周適應性喂養(yǎng)期后，將其隨機分為4 組，分別為正常組、模型組、牡蠣酶解物低劑量組（OYEL組）和牡蠣酶解物高劑量組（OYEH組），每組10 只。連續(xù)灌胃給予牡蠣酶解物4 周，每周記錄小鼠體質(zhì)量，每天上午9時牡蠣酶解物實驗組小鼠分別灌胃給予0.25 mL高劑量（80 mg/（kg·d））和低劑量（40 mg/（kg·d））牡蠣酶解物（溶于無菌蒸餾水中），正常組、模型組灌胃給予等體積生理鹽水。下午4時給予正常組小鼠灌胃5 mL/kg生理鹽水，給予模型組、OYEL、OYEH組小鼠5 mL/kg體積分數(shù)50%乙醇溶液。末次灌胃后，各組小鼠隔夜禁食16 h后眼眶取血，頸椎脫臼處死小鼠。

1.3.4 血清與肝臟生化指標的測定

取小鼠肝臟稱質(zhì)量，按公式（2）計算肝臟指數(shù)。

用離心管收集小鼠血液，室溫靜置1 h后3 000×離心10 min，取上清液按試劑盒說明測定ALT、AST含量和TBA濃度。

將9 倍體積的生理鹽水加入肝組織中，將肝組織在冰水浴中勻漿。將制備的勻漿在4 ℃條件下2 500×離心10 min，取上清液，根據(jù)試劑盒說明書測定肝臟TG、MDA、GSH含量。

1.3.5 肝組織形態(tài)學分析

取肝組織迅速置于質(zhì)量分數(shù)4%多聚甲醛溶液中固定，石蠟包埋。經(jīng)常規(guī)脫蠟、脫水后進行蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色，通過40×顯微鏡拍照觀察肝組織形態(tài)。

1.3.6 肝臟基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平分析

從肝組織中提取總RNA，并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。采用實時熒光定量PCR（quantitative PCR， qPCR）測定、、mRNA轉(zhuǎn)錄水平。小鼠基因引物序列如表1所示。PCR條件為95 ℃預變性30 s；95 ℃變形25 s，60 ℃退火30 s，40 個循環(huán)。通過Rotor-gene Q軟件進行數(shù)據(jù)分析，通過2法計算每個基因的相對轉(zhuǎn)錄水平。

表1 TLR4、NF-κB、TNF-α和β-actin的引物序列Table 1 Primer sequences used for amplication of TLR4, NF-κB,TNF-α and β-actin

1.3.7 小鼠腸道內(nèi)容物16S rRNA基因高通量測序

1.3.7.1 樣品的預處理

分別取正常組、模型組、OYEL組、OYEH組各6 只小鼠的盲腸腸道內(nèi)容物2 g，加入1×PBS，反復清洗，離心（3 000×、10 min）后獲得沉淀物。

1.3.7.2 基因組DNA的提取

使用十六烷基三甲基溴化銨法對各組的DNA進行提取，引物對應區(qū)域為16S V3～V4區(qū)。

1.3.7.3 牡蠣酶解物對小鼠腸道菌群影響的分析

基于R語言，繪制影響酒精性肝損傷的生化指標與屬水平上的腸道菌群的關(guān)聯(lián)熱圖，使用Cytoscape 3.6.1軟件繪制相關(guān)性網(wǎng)絡圖。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

使用DPS 6.50數(shù)據(jù)處理軟件和Excel軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。使用單因素方差分析統(tǒng)計分析差異顯著性，采用GraphPad 7.0軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 牡蠣不同極性提取物及酶解物的干質(zhì)量得率

牡蠣4 種提取物的干質(zhì)量得率如圖1所示，牡蠣提取物的干質(zhì)量得率依次為OY95（27.13%）＞OYEH（25.16%）＞OYWE（19.7%）＞OY55（9.29%）。牡蠣提取物的總得率為81.28%。

圖1 牡蠣不同提取物的干質(zhì)量得率Fig. 1 Dry mass yields of different extracts from oyster meat

2.2 牡蠣酶解物的多肽組成及序列

表2列出了牡蠣酶解物中主要多肽的序列。OYEH主要有20 個多肽序列。肽的豐度從高到低（前5）依次為GHPGLPGDAGPEGPRGNPG、IDLGAVN、EHPVL、GPAGPIGPR、MFLGPQ。豐度為前5的肽的一級質(zhì)譜圖和二級質(zhì)譜圖如圖2所示。

表2 HPLC-MS鑒定OYEH的肽譜Table 2 Peptide profile of OYEH identified by high performance liquid chromatography-mass spectrometry

圖2 前5 種高豐度肽的一級質(zhì)譜圖與二級質(zhì)譜圖Fig. 2 Primary and secondary mass spectra of the first five highabundance peptides

2.3 牡蠣酶解物對小鼠體質(zhì)量變化及狀態(tài)的影響

從圖3可以看出，在飼養(yǎng)第1周，各組間小鼠體質(zhì)量差異不顯著，2～4 周正常組的體質(zhì)量顯著高于其他組（＜0.05），在第2周后，OYEH組的體質(zhì)量高于OYEL組與模型組。

通過4 周的動物實驗，觀察并記錄了小鼠的外觀、行為。結(jié)果發(fā)現(xiàn)正常組毛發(fā)光亮緊湊，行動靈活自如。模型組毛發(fā)暗淡無光、雜亂無章，且精神狀態(tài)渙散，有嗜睡現(xiàn)象。OYEL與OYEH組的情況較模型組有所改善。

圖3 牡蠣酶解物對小鼠體質(zhì)量的影響Fig. 3 Effect of enzymatic hydrolysate from oyster on body mass of mice

2.4 牡蠣酶解物對小鼠血清生化指標的影響

肝組織膽固醇代謝的最終產(chǎn)物是TBA，通過測定小鼠血清TBA含量水平可間接反映肝臟受損傷的程度。如圖4A、B所示，OYEH組的ALT、AST活力都顯著低于模型組（＜0.05）。從圖4C可以看出，模型組的TBA濃度極顯著高于正常組（＜0.01），OYEL組與模型組相比沒有顯著差異，而OYEH組與模型組相比差異顯著（＜0.05），表明OYEH顯著降低ALD小鼠血清中TBA濃度。

圖4 牡蠣酶解物對小鼠血清ALT（A）、AST（B）活力和TBA濃度（C）的影響Fig. 4 Effect of oyster enzymatic hydrolysate on serum ALT (A) and AST (B) activity and TBA concentration (C) in mice

2.5 牡蠣酶解物對小鼠肝臟生化指標、肝組織形態(tài)的影響

從圖5A可以看出，模型組的肝臟指數(shù)極顯著高于正常組（＜0.01），OYEL與OYEH組的肝臟指數(shù)顯著低于模型組（＜0.01、＜0.05）。從圖5B可以看出，模型組的TG含量極顯著高于正常組（＜0.01），OYEL與OYEH組的TG含量都顯著低于模型組（＜0.05、＜0.01）。從圖5C中可以看出，模型組的GSH含量極顯著低于正常組（＜0.01），OYEL組和OYEH組的GSH含量極顯著高于模型組（＜0.01）。從圖5D可以看出，模型組的MDA含量顯著高于正常組（＜0.05），OYEL與OYEH組的MDA含量顯著低于模型組（＜0.05）。

圖5 牡蠣酶解物對小鼠肝臟指數(shù)（A）和TG（B）、GSH（C）、MDA（D）含量的影響Fig. 5 Effect of oyster enzymatic hydrolysate on liver index (A), and TG (B), GSH (C) and MDA (D) contents in mice

從圖6A可以看出，正常組的肝細胞較完整，無細胞破裂、自溶或壞死的現(xiàn)象，分布均勻，肝細胞呈規(guī)則的球狀。圖6B中，肝小葉周圍的細胞消融嚴重，且肝小葉中有溶血的情況，細胞分裂嚴重；細胞形狀不規(guī)則，出現(xiàn)皺縮，大小不均一。肝細胞之間的邊緣模糊，有脂肪空泡。由圖6C、D可以看出，OYEL與OYEH干預后，相對于模型組，細胞的溶血情況有改善，其中OYEH組呈現(xiàn)出最接近正常組小鼠肝臟組織狀態(tài)。

圖6 牡蠣酶解物對ALD小鼠肝臟形態(tài)的影響Fig. 6 Effect of enzymatic hydrolysate from oyster on liver morphology in mice with chronic alcoholic liver injury

2.6 牡蠣酶解物對小鼠肝臟相關(guān)基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響

牡蠣酶解物對慢性ALD小鼠肝臟中、和在mRNA轉(zhuǎn)錄水平上的影響如圖7所示。與正常組相比，模型組小鼠肝臟、和mRNA的轉(zhuǎn)錄水平都顯著升高（＜0.05）。與模型組相比，OYEL組與OYEH組3 個基因的轉(zhuǎn)錄水平都顯著下調(diào)（＜0.05、＜0.01）。表明牡蠣酶解物能降低小鼠體內(nèi)炎癥因子的mRNA轉(zhuǎn)錄水平。

圖7 牡蠣酶解物對小鼠肝臟TLR4（A）、NF-κB（B）和TNF-α（C）基因轉(zhuǎn)錄水平的影響Fig. 7 Effect of oyster enzymatic hydrolysate on transcription levels of TLR4 (A), NF-κB (B) and TNF-α (C) genes in liver of mice

2.7 小鼠腸道菌群多樣性及其與生化指標的關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果

2.7.1 小鼠腸道菌群物種相對豐度分析結(jié)果

用OYEH飲食干預小鼠4 周后，測定正常組、模型組、OYEL組和OYEH組小鼠腸道菌群的相對豐度，如圖8所示，各實驗組在門水平上的主要優(yōu)勢菌門為厚壁菌門（Firmicutes）和擬桿菌門（Bacteroidetes），其余菌門相對豐度較低。與正常組相比，模型組的Firmicutes相對豐度極顯著降低（＜0.01），Bacteroidetes的相對豐度極顯著升高（＜0.01），模型組Firmicutes/Bacteroidetes的比值降低。與模型組相比，OYEL組與OYEH組中Firmicutes相對豐度顯著升高（＜0.05），OYEH組中Bacteroidetes相對豐度極顯著降低（＜0.01）。表明在門水平上，牡蠣酶解物對慢性ALD小鼠腸道菌群的物種豐度影響顯著。

圖8 小鼠腸道菌群門水平上的物種相對豐度Fig. 8 Relative abundance of intestinal microflora at phylum level in mice

根據(jù)腸道菌群測序結(jié)果，選擇正常組和牡蠣酶解物干預組屬水平上豐度前3的物種，由圖9可知，在屬水平上的優(yōu)勢菌屬主要有、和。與模型組比較，牡蠣酶解物干預組3 種菌屬的相對豐度均呈上升趨勢，推測這3 種菌屬具有益生作用。

圖9 小鼠腸道菌群屬水平上的優(yōu)勢菌相對豐度Fig. 9 Relative abundance of dominant intestinal microflora at the genus level in mice

2.7.2 小鼠腸道菌群豐度與ALD生化指標水平的關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果

在屬水平上選擇豐度在前30的物種，基于Spearman相關(guān)檢驗指數(shù)分析，研究屬水平下小鼠腸道菌群豐度與影響ALD生化指標水平之間的統(tǒng)計學相關(guān)性，如圖10所示，在各組中富集的、豐度與肝臟指數(shù)、血清ALT活力和AST活力、MDA含量、TG含量、、和基因的轉(zhuǎn)錄水平呈正相關(guān)（＞0），與體質(zhì)量呈負相關(guān)（＜0），豐度與AST活力、MDA含量呈負相關(guān)（＜0）。使用Spearman相關(guān)檢驗||＞0.35，繪制腸道菌群豐度與影響ALD生化指標之間的可視化網(wǎng)絡圖，如圖11所示，、、基因轉(zhuǎn)錄水平、MDA含量與豐度呈正相關(guān)（＞0）。

圖10 腸道菌群豐度與影響ALD生化指標水平之間的統(tǒng)計學Spearman相關(guān)性Fig. 10 Statistical Spearman’s correlations between intestinal microbiota abundance and parameter affecting alcoholic liver disease

圖11 腸道菌群豐度與影響ALD生化指標之間的可視化網(wǎng)絡圖Fig. 11 Visual network between intestinal flora and parameters influencing chronic alcoholic liver injury

3 討 論

牡蠣中含有豐富的生物活性物質(zhì)，以牡蠣為原料，對其中活性成分依次進行提取和制備，通過動物實驗研究牡蠣酶解物對ALD的保護作用，并結(jié)合腸道菌群分析其保肝的作用機制。肝臟是酒精代謝的主要器官，機體攝入的酒精過多會導致不同程度的肝損傷。ALD的發(fā)病機制與乙醇及其代謝物對肝臟的毒性、氧化應激、脂質(zhì)過氧化、炎性細胞因子、免疫、機體穩(wěn)態(tài)失調(diào)以及環(huán)境和個體因素有關(guān)。目前，常用血清中ALT、AST活力作為判斷肝損傷程度的指標，在正常機體內(nèi)，血清中ALT、AST含量不高，但當肝功能異常或者肝細胞結(jié)構(gòu)破壞時，ALT、AST就會由破損處釋放進入血液，導致血液中兩者的含量升高，肝中含量降低。在本研究中，模型組的ALT、AST活力顯著高于正常組（＜0.01、＜0.05），經(jīng)牡蠣酶解物干預后，血液中的ALT、AST活力顯著低于模型組（＜0.01、＜0.05），減輕了肝損傷程度。此外，體質(zhì)量和臟器指數(shù)是反映機體健康與否的重要指標，酒精的攝入使小鼠體質(zhì)量與肝臟指數(shù)發(fā)生變化。機體攝入過量酒精易造成脂肪酸代謝紊亂，積累大量TG，酒精到達肝組織后，能導致肝細胞膜上的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量升高，在本研究中，用OYEH干預可明顯降低血清中TG和MDA含量，這表明OYEH可明顯改善脂肪酸代謝紊亂和肝細胞脂肪變性。過量的酒精攝入使肝細胞中的抗氧化酶GSH活性降低，破壞機體氧化平衡，進而導致肝組織受損引起炎癥反應，本研究中的肝臟組織形態(tài)分析結(jié)果表明，相較于模型組，OYEH的干預顯著改善了肝細胞溶血情況，說明牡蠣酶解物能緩解小鼠酒精性肝損傷。Zhao Xiaoyan等通過給予青蒿素治療嚴重ALD小鼠，其中模型組小鼠肝細胞中度壞死并出現(xiàn)炎性浸潤現(xiàn)象，而青蒿素高劑量組小鼠肝細胞只有輕度壞死和炎性浸潤，結(jié)果表明青蒿素可預防ALD。腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor α，TNF-α）、Toll樣受體4（toll-like recepror 4，TLR4）、核轉(zhuǎn)錄因子（nuclear factor-kappa B，NF-κB）是引起酒精性肝損傷的3 種重要炎癥因子，酒精的攝入會誘導炎癥因子的表達，在本研究中，與模型組比較，OYEL組與OYEH組的、、的mRNA轉(zhuǎn)錄水平均顯著下調(diào)（＜0.05），進一步說明牡蠣對ALD有保護作用。

基于16S rRNA高通量測序技術(shù)研究牡蠣酶解物對ALD小鼠腸道菌群的影響。研究發(fā)現(xiàn)，在酒精作用下，F(xiàn)irmicutes豐度減少，變形菌門豐度增加，本研究中，與模型組對比，牡蠣酶解物干預使Firmicutes豐度增加。在屬水平上，OYEH干預使、和的豐度增加。研究證實，能減輕小鼠結(jié)腸炎癥狀，本研究中牡蠣酶解物干預ALD小鼠后，豐度增加，推測具有益生作用進而發(fā)揮抗炎效應。攝入酒精導致的豐度降低，屬于益生菌的一種，對維持腸道菌群穩(wěn)態(tài)起著至關(guān)重要的作用。研究表明，酒精性肝病會使腸道菌群穩(wěn)態(tài)發(fā)生變化，菌群穩(wěn)態(tài)發(fā)生改變會激活某些通路，促進炎性因子如TLR4的產(chǎn)生。本研究中，豐度與、、基因的表達水平呈正相關(guān)，Wu Minna等研究表明豐度與甘露糖凝集素缺陷小鼠中的S24-7呈顯著正相關(guān)，但是的具體功能仍不清楚，的豐度與體質(zhì)量呈反比關(guān)系。Luo Xinming等研究狼瘡小鼠的腸道菌群，發(fā)現(xiàn)豐度隨著疾病的嚴重程度顯著增加，推測與某些免疫疾病的發(fā)生有很大關(guān)系。此外，Miranda-Ribera等發(fā)現(xiàn)是促炎菌株，本研究結(jié)果也證實了這一點。Du Haiyang等研究黃連解毒湯對小鼠腸道菌群的影響，結(jié)果表明服黃連解毒湯能降低豐度，證實了屬于有害菌。由此可知，牡蠣酶解物能夠通過維持菌群結(jié)構(gòu)的穩(wěn)態(tài)，預防ALD引起的腸道菌群結(jié)構(gòu)失衡。

綜上所述，牡蠣酶解物能夠抑制ALD小鼠肝臟內(nèi)脂質(zhì)過氧化，提高肝臟內(nèi)抗氧化酶活力，減輕小鼠肝臟細胞的損傷程度，并可以提高小鼠益生腸道菌群豐度，表明其對ALD具有保護作用。