斜紋夜蛾“葉粉因子”人工飼料的優(yōu)化篩選

杜娟，于洪春

（1.內(nèi)蒙古牙克石市鄉(xiāng)村振興促進(jìn)中心，內(nèi)蒙古 牙克石 022150；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，哈爾濱 150030）

斜紋夜蛾（Spodoptera litura）屬鱗翅目（Lepidoptera）夜蛾科（Noctuidae），具有分布范圍廣、食性雜、產(chǎn)卵量大、繁殖速度快、易暴發(fā)等特點(diǎn)，對(duì)農(nóng)作物構(gòu)成嚴(yán)重威脅，是亞洲乃至全世界重要的農(nóng)業(yè)害蟲［1］。目前除了研究斜紋夜蛾的生物學(xué)特性及防治方法之外，還將其作為寄主昆蟲和生物靶標(biāo)物種，繁育核型多角體病毒、細(xì)菌，研究害蟲抗藥性、探索害蟲生物防治技術(shù)［2-6］。為了在實(shí)驗(yàn)室獲得和保持蟲源，可飼喂天然飼料和人工飼料，但斜紋夜蛾幼蟲取食量較大，在室內(nèi)飼養(yǎng)需要大量的蔬菜或作物葉片，植株的健康、新鮮度和農(nóng)藥殘留都會(huì)對(duì)斜紋夜蛾的飼養(yǎng)及成活造成較大影響。通常會(huì)用人工飼料繼代飼養(yǎng)和繁殖斜紋夜蛾，根據(jù)試驗(yàn)需求提供豐富生長(zhǎng)健康、發(fā)育整齊的蟲源。本試驗(yàn)通過(guò)在人工飼料中添加常見的十字花科、禾本科、豆科和藜科雜草植株的葉粉，連續(xù)飼養(yǎng)多代，以篩選出飼養(yǎng)和配制方法簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉且有利于斜紋夜蛾生長(zhǎng)發(fā)育的“葉粉因子”人工飼料。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器設(shè)備及器具儀器設(shè)備主要有人工氣候箱、中藥粉碎機(jī)、微波爐、烘干箱、高壓滅菌鍋、電子天平。器具主要有六孔養(yǎng)蟲板、燒杯、玻璃棒、量筒、培養(yǎng)皿、研缽。

1.1.2 供試蟲源供試的斜紋夜蛾來(lái)源于東北農(nóng)業(yè)大學(xué)香坊農(nóng)場(chǎng)試驗(yàn)基地誘蟲燈下誘集的成蟲，放入養(yǎng)蟲箱中，并用脫脂棉蘸取10%的蜂蜜水置于玻璃培養(yǎng)皿上供成蟲補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)，待其交尾產(chǎn)卵后，作為試驗(yàn)蟲源。

1.1.3 試驗(yàn)試劑蜂蜜，由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)國(guó)家科技園生產(chǎn)；蔗糖，由天津市瑞金特化學(xué)品有限公司生產(chǎn)；干酪素、酵母浸粉，由北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)；抗壞血酸，由天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所生產(chǎn)；復(fù)合維生素，由湖北百科亨迪藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；紅霉素，由西安利君制藥股份有限公司生產(chǎn)；山梨酸，由天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；瓊脂、膽固醇均為市售。

1.2 方法

1.2.1 人工飼料的配制采集新鮮無(wú)公害的甘藍(lán)、白菜、玉米、大豆和野生藜（灰菜）（Chenopodium album）等植物的葉片，清水沖洗干凈，晾放在通風(fēng)處，待葉片表面水分蒸發(fā)后均勻攤放在50～60℃的烘箱內(nèi)，烘干后用粉碎機(jī)磨成粉狀。挑選長(zhǎng)勢(shì)飽滿的玉米粒和大豆粒，自然晾干后磨成粉末，分別放入玻璃罐中，用封口膜封住，放入陰涼干燥處保存。將復(fù)合維生素和紅霉素藥粒用研缽磨成粉狀。具體用量如表1所示，方法如下。

表1 不同“葉粉因子”成分的人工飼料配方

1）滅菌。將各配方中的葉粉、麥麩粉、玉米粉、大豆粉稱量后倒入耐高溫塑料方盒中，混合均勻后蓋好蓋子，與放有無(wú)菌水的玻璃瓶，一起放入120℃高壓蒸汽滅菌鍋中，滅菌20 min。

2）溶解。將各配方中稱量好的干酪素、酵母浸粉、膽固醇、抗壞血酸、復(fù)合維生素、山梨酸、葡萄糖、韋氏鹽等試劑倒入小燒杯中混合，倒入20 mL無(wú)菌水，將其攪拌均勻。

3）混合。將瓊脂倒入燒杯中，加入90 mL無(wú)菌水，放入微波爐中加熱使其完全溶解，溶解后立即與步驟1的粉劑混合，并用玻璃棒攪拌均勻，待混合物稍許冷卻后，將步驟2的溶液緩慢倒入，繼續(xù)用玻璃棒攪拌直至混合物混合均勻，放入4℃冰箱中保存待用。

1.2.2 斜紋夜蛾的飼養(yǎng)與生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)查收集同一天所產(chǎn)的新鮮卵塊，放入溫度為（26±1）℃、濕度為（70±5）%、光周期控制為L(zhǎng)∶D=14 h∶10 h的人工氣候箱中，待有幼蟲孵化后，將配好的含有不同葉粉成分的人工飼料切割成塊狀，均勻攤放在養(yǎng)蟲盒底部，將初孵幼蟲用柔軟毛筆輕挑置于養(yǎng)蟲盒內(nèi)的飼料上，每盒接入20頭幼蟲，每組處理重復(fù)3次，以飼喂新鮮白菜葉為對(duì)照（CK）。統(tǒng)計(jì)斜紋夜蛾幼蟲存活率，待化蛹完成后稱量蛹重，將其轉(zhuǎn)入覆有濕潤(rùn)滅菌細(xì)土的養(yǎng)蟲盒中。羽化后將成蟲成對(duì)放入塑料產(chǎn)卵罐中，用10%蜂蜜水補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)。用此飼養(yǎng)和調(diào)查方法在實(shí)驗(yàn)室連續(xù)飼養(yǎng)5代。

1.3 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析

本試驗(yàn)所得各組數(shù)據(jù)間的差異性比較，采用DPS V 7.05軟件進(jìn)行Duncan’s新復(fù)極差法差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)斜紋夜蛾幼蟲存活率的影響

在室內(nèi)用不同飼料繼代飼養(yǎng)斜紋夜蛾，世代間幼蟲存活率的變化如表2所示。飼養(yǎng)第二代斜紋夜蛾時(shí)，其幼蟲存活率與第一代均無(wú)顯著差異；飼養(yǎng)第三代時(shí)，幼蟲存活率出現(xiàn)明顯下降，均顯著低于第一代幼蟲存活率；第三代至第五代幼蟲存活率之間無(wú)顯著差異。添加白菜葉粉（A3）的人工飼料第五代幼蟲存活率較第一代下降15.08個(gè)百分點(diǎn)，添加灰菜葉粉（A4）的人工飼料第五代幼蟲存活率較第一代下降17.06個(gè)百分點(diǎn)，其余組均下降18個(gè)百分點(diǎn)以上。

表2 斜紋夜蛾的幼蟲存活率 （單位：%）

如表3所示，取食添加不同“葉粉因子”成分人工飼料的斜紋夜蛾幼蟲的存活率5代均值均顯著高于對(duì)照。其中，添加白菜葉粉（A3）的人工飼料均值最高，為85.35%，較對(duì)照高15.02個(gè)百分點(diǎn)，添加灰菜葉粉（A4）的人工飼料5代幼蟲平均存活率為81.75%，與A3人工飼料無(wú)顯著差異，其余人工飼料5代幼蟲平均存活率均顯著低于A3。

表3 取食不同飼料的斜紋夜蛾5代幼蟲存活率均值

2.2 對(duì)斜紋夜蛾化蛹率及蛹重的影響

在室內(nèi)用不同人工飼料繼代飼養(yǎng)斜紋夜蛾，各世代化蛹率的變化如表4所示，隨著飼養(yǎng)代數(shù)的增加，化蛹率均有所下降，飼養(yǎng)第五代時(shí)，化蛹率與第一代均呈顯著差異；添加白菜葉粉（A3）的人工飼料下降幅度最小，為7.70個(gè)百分點(diǎn)，其余處理組均下降15個(gè)百分點(diǎn)以上。用不同人工飼料飼養(yǎng)第四代和第五代斜紋夜蛾，2代間化蛹率均無(wú)顯著差異。

表4 斜紋夜蛾的化蛹率 （單位：%）

如表5所示，添加白菜葉粉（A3）的人工飼料斜紋夜蛾5代化蛹率均值最高，為79.99%，與取食其他人工飼料和對(duì)照的5代化蛹率均值均呈顯著差異。添加甘藍(lán)葉粉（A2）、灰菜葉粉（A4）、玉米葉粉（A5）、大豆葉粉（A6）和未添加葉粉（A1）的人工飼料5代化蛹率均值分別為74.69%、74.88%、72.74%、72.95%、70.68%，均與對(duì)照無(wú)顯著差異。

表5 取食不同人工飼料的斜紋夜蛾5代化蛹率均值 （單位：%）

5代蛹重均值如表6所示，添加白菜葉粉（A3）的人工飼料5代蛹重均值最高，為0.33 g，與其他處理均呈顯著差異。添加灰菜葉粉（A4）的人工飼料5代蛹重均值為0.32 g，與其他處理均呈顯著差異。添加甘藍(lán)葉粉（A2）、添加玉米葉粉（A5）和添加大豆葉粉（A6）的人工飼料與未添加葉粉（A1）和對(duì)照均無(wú)顯著性差異。說(shuō)明在人工飼料中添加白菜葉粉，更有利于斜紋夜蛾蛹的發(fā)育。

表6 不同人工飼料的斜紋夜蛾5代蛹重均值 （單位：g）

2.3 對(duì)斜紋夜蛾羽化率的影響

隨著飼養(yǎng)代數(shù)的增加，飼喂不同人工飼料斜紋夜蛾的羽化率如表7所示，其中只有添加白菜葉粉（A3）的人工飼料斜紋夜蛾羽化率各世代間無(wú)顯著差異，其余飼料飼養(yǎng)到第五代時(shí)羽化率均與第一代呈顯著差異。如表8所示，A3的人工飼料斜紋夜蛾羽化率均值最高，為80.39%。添加灰菜葉粉（A4）的人工飼料斜紋夜蛾羽化率均值為79.49%，與A3無(wú)顯著差異，顯著高于其他處理。添加白菜葉粉的人工飼料各世代的羽化率最高，5代斜紋夜蛾羽化率均值也顯著高于其他處理，且隨著飼養(yǎng)代數(shù)的增加，羽化率無(wú)顯著變化，無(wú)退化現(xiàn)象。

表7 斜紋夜蛾的羽化率 （單位：%）

表8 取食不同人工飼料的斜紋夜蛾5代羽化率均值 （單位：%）

3 討論

人工飼料的配制必須得滿足昆蟲正常生長(zhǎng)發(fā)育所需要的所有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和保持代謝所需要的量的比例。研究表明，人工飼料的配比和成分會(huì)對(duì)昆蟲飼養(yǎng)產(chǎn)生影響，并且飼料的含水量、物理性狀、飼養(yǎng)密度、添加飼料次數(shù)、飼料pH等會(huì)對(duì)昆蟲的生長(zhǎng)發(fā)育造成影響［7，8］，同樣，在人工飼料中添加植株的種類和植株葉片的干燥法，也會(huì)對(duì)昆蟲的生長(zhǎng)發(fā)育起到不同程度的影響［9］。本試驗(yàn)添加了山梨酸和具有廣譜抗菌效果的抗生素藥物［10］，研究發(fā)現(xiàn)，在室溫下，試驗(yàn)用飼料無(wú)霉菌滋生，可以長(zhǎng)時(shí)間保存，保障了人工飼料的新鮮度。幼蟲孵化后可直接接種在飼料上，解決了楊江福等［11］提出的人工飼料不適合飼養(yǎng)低齡斜紋夜蛾幼蟲的問(wèn)題。在室內(nèi)連續(xù)飼養(yǎng)昆蟲，無(wú)論是用天然食料還是人工飼料，昆蟲種群的生命活力都會(huì)因?yàn)檫z傳因素出現(xiàn)不同程度的衰退現(xiàn)象。本研究所采用斜紋夜蛾人工飼料的配方中與孫庚等［12］的研究相比，大大減少了玉米粉、麥麩粉、大豆粉和酵母浸粉的含量，去除了乙酸和氫氧化鉀的添加，增加了膽固醇和抗壞血酸，添加了不同含量的天然植株葉粉，大大降低了飼料的合成成本。研究結(jié)果中添加白菜葉粉的人工飼料，斜紋夜蛾的化蛹率和羽化率均優(yōu)于曹利軍等［13］通過(guò)正交試驗(yàn)篩選出添加氯化膽堿和肌醇的最優(yōu)配方。本試驗(yàn)所得到斜紋夜蛾蛹的平均重量最高為0.33 g，較黃艷君等［14］所配制的人工飼料低0.14 g，這可能與飼料中添加蛋白源和糖分的含量有關(guān)。在今后的研究中可以針對(duì)飼料所含成分的比例開展進(jìn)一步篩選與優(yōu)化，以獲得更好的飼育效果。對(duì)于人工飼料配方的篩選，本試驗(yàn)結(jié)果與張英春等［15］的飼料成分相近，可以適度推廣或在飼料中添加復(fù)合“葉因子”成分，以配制出可同時(shí)飼育多種昆蟲的人工飼料。