唐惠娟,江紅櫻,李霞,向紹錦,曾慶宇,劉俊,2,3,4,5,*,楊飛,吳順
1.南華大學(xué)衡陽醫(yī)學(xué)院,基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)教研室,衡陽 421001
2.南華大學(xué)衡陽醫(yī)學(xué)院,基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,生態(tài)健康與人類重要疾病防控湖南省高校重點實驗室,衡陽 421001
3.南華大學(xué)衡陽醫(yī)學(xué)院,基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,有色金屬礦區(qū)耕地重金屬污染生態(tài)阻抗技術(shù)研究衡陽市重點實驗室,衡陽 421001
4.南華大學(xué)衡陽醫(yī)學(xué)院,基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,生物毒理與生態(tài)修復(fù)衡陽市重點實驗室,衡陽 421001
5.南華大學(xué)衡陽醫(yī)學(xué)院,公共衛(wèi)生學(xué)院,典型環(huán)境污染與健康危害湖南省重點實驗室,衡陽 421001
6.中南林業(yè)科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,長沙 410018
礦產(chǎn)資源的開發(fā)和利用在人類社會生產(chǎn)生活中發(fā)揮了重要作用,同時也導(dǎo)致了礦區(qū)周邊的農(nóng)田土壤重金屬污染嚴(yán)重[1-2]。我國耕地重金屬污染嚴(yán)重,Cd、Ni、Cu、Zn、Hg和As是主要的污染元素[3]。洞庭湖濕地周圍土壤表層中As和Cd的濃度均超過《土壤環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(GB 15618—2018)中農(nóng)用地土壤篩選值,近年Cd的濃度處于持續(xù)增長狀態(tài)[4]。Ca為植物的必需元素之一,有適量的Ca可減輕Cd、Pb和Zn等重金屬對植株的毒害作用[5]。重金屬在土壤中不能被微生物分解,可長期存在于土壤中,并通過食物鏈的富集作用嚴(yán)重危害人類健康[6]。因此重金屬污染土壤的修復(fù)與利用是人類可持續(xù)發(fā)展中的重要課題。植物修復(fù)技術(shù)可原位減小或消除重金屬對農(nóng)作物的危害,且不會導(dǎo)致二次污染的發(fā)生。從常規(guī)作物中篩選出可適用于不同土壤條件且能大面積種植的修復(fù)品種已成為一種趨勢[7]。
大豆具有生長迅速、高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)、可吸收累積重金屬等特點,在世界各地廣泛種植,因此其重金屬污染問題嚴(yán)重影響人類社會的食品安全[8-9]。適合在礦區(qū)生長的植物主要為草本植物,草本植物具有強的吸收土壤水分和肥料的能力,這有利于草本植株吸收重金屬[10]。大豆也屬于草本植物,其根系對土壤中的礦質(zhì)元素具有較強的吸收能力。有研究表明,生物炭能促進(jìn)大豆的生長以及對鎘的富集能力[11]。
我國有大面積的荔枝果園,每年果農(nóng)疏剪的荔枝樹枝大量被廢棄,或者被直接焚燒,造成大量的資源浪費和環(huán)境污染。如何合理開發(fā)、利用廢棄的荔枝樹枝,以減少碳排放,成了一個重要的科學(xué)問題。生物炭是一些生物質(zhì)資源通過高溫裂解所形成的富碳材料,在結(jié)構(gòu)上部分高度芳香化,具有豐富的羧基等含氧官能團,有著極好的吸附性能[12],能夠加強土壤的保水保肥能力[13],被作為土壤改良劑廣泛應(yīng)用于修復(fù)受污染的土壤[14]。有研究表明,生物炭經(jīng)過生物、物理或化學(xué)改性后,在利用效能、修復(fù)重金屬污染土壤性能等方面有提高[15]。利用硫酸、磷酸、草酸和硝酸等對生物炭進(jìn)行改性處理后,生物炭中的酸性官能團數(shù)目有所提高,且其比表面積也有不同程度的改變[16-17]。Wibowo等[18]利用HNO3對生物炭進(jìn)行改性后,生物炭表面的酸性官能團數(shù)目顯著增加且比表面積增大。
迄今為止,未見有關(guān)經(jīng)HNO3改性生物炭對大豆累積與分配Cu、Ca、As和Cd影響的研究。本項目通過盆栽試驗,研究了向重金屬污染土壤添加HNO3改性的荔枝木生物炭后,大豆生物量、植株及器官累積Cu、Ca、As和Cd的變化,探討了HNO3改性生物炭對大豆累積與分配Cu、Ca、As和Cd的影響,以期為重金屬污染土壤的修復(fù)和大豆食品安全提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。
供試大豆品種為興隆一號,種子由湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提供。供試生物炭原材料為荔枝木,供試土壤取自衡陽市雨母山鄉(xiāng)稻田土壤。供試土壤重金屬Cu、Ca、As和Cd的含量分別為16.188、1 680.525、6.855和0.310 mg·kg-1。
用去離子水將荔枝木洗凈,在80 ℃烘干12 h。然后將荔枝木切成5 cm長的切片,放入坩堝,在馬弗爐中500 ℃炭化6 h。待自然冷卻至25 ℃,將它通過一個0.28 mm的篩子。最后用去離子水沖洗至中性pH值,制得荔枝木生物炭(BC)。
將濃硝酸優(yōu)級純(9.07×10-5mg·L-1)稀釋至1.26×10-5mg·L-1,按每100 g生物炭添加1 L 1.26×10-5mg·L-1HNO3,然后在30 ℃下振蕩8 h,用自來水和去離子水漂洗,最后干燥,制備成HNO3改性荔枝生物炭(HNO3-BC),將制成的HNO3改性荔枝木生物炭樣品保存于干燥器中。
供試土壤自然風(fēng)干、錘碎、過5 mm篩,保存?zhèn)溆?。按每kg土加0.10 g N、0.15 g P2O5、0.10 g K2O計算,以尿素、磷酸二氫銨和氯化鉀為肥源,溶于水后混勻等量噴灑在土壤中拌勻后裝盆。每盆裝風(fēng)干土4 kg,HNO3改性生物炭添加量為0.125%、0.250%、0.500%和1.000%(改性生物炭在土壤中的質(zhì)量占比);以不添加HNO3改性生物炭為對照。每處理重復(fù)3次。選取籽粒飽滿的種子,0.5%次氯酸鈉浸泡消毒30 min,用去離子水沖洗。將沖洗后的種子播于盆栽土壤中,每盆4粒種子。
盆栽不定期澆灌蒸餾水,以保持土壤持水量在70%左右,且需定期除草等。在大豆植株表現(xiàn)為兩葉一心時,各盆保留長勢相近的2棵健壯植株,待大豆成熟,收獲成熟大豆植株地上部分和地下部分。
將收獲的大豆植株分為根、莖、葉、籽粒和豆莢5個部分,先后用自來水和去離子水洗凈,置于105 ℃烘箱內(nèi)殺青1 h,再調(diào)至80 ℃烘至恒重。稱量每株大豆各器官的生物量(干質(zhì)量)后,使用非金屬器械將烘干的植物樣品粉碎、混勻后分別裝入密封袋保存。植株各部位重金屬含量采用HNO3-HClO4體系消化[19]。供試土壤重金屬含量采用HNO3-HCl-HClO3消解[20]。
消解液中Cu濃度用火焰原子吸收光譜法測定,As采用原子熒光光譜儀測定,Ca和Cd濃度用原子吸收分光光度法測定[21-22]。各元素含量測定過程以國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)土壤和植物進(jìn)行質(zhì)量控制,Cu、Ca、As和Cd這幾個元素的回收率在97.1%~103.0%范圍內(nèi),符合元素分析質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
大豆植株重金屬總量的計算公式:植株重金屬總量=根生物量×根重金屬濃度+莖生物量×莖重金屬濃度+葉生物量×葉重金屬濃度+豆莢生物量× 豆莢重金屬濃度+籽粒生物量×籽粒重金屬濃度。大豆植株生物量=根生物量+莖生物量+葉生物量+豆莢生物量+籽粒生物量。
采用Excel 2016和SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析,實驗數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。
由圖1可知,改性前,BC表面呈蜂窩狀,窩孔結(jié)構(gòu)較多、長度不一,表面灰分較少。改性后的HNO3-BC表面孔網(wǎng)結(jié)構(gòu)更加規(guī)整,呈更加清晰的長條狀凹槽結(jié)構(gòu);同時表面微孔結(jié)構(gòu)增多,孔內(nèi)有較多微小顆粒堆積。
圖1 荔枝木生物炭(BC)的掃描電鏡圖注:(a) BC;(b) HNO3-BC。Fig.1 SEM analysis of lychee biochar (BC)Note:(a) BC;(b) HNO3-BC.
由圖2可知,向重金屬污染土壤施加HNO3改性生物炭對大豆植株的生物量影響顯著(P<0.05)。在一定生物炭施用范圍內(nèi),隨著HNO3改性生物炭施用量的增加,大豆植株生物量明顯降低,但達(dá)到一定施用量時大豆植株的生物量顯著增加(P<0.05)。在HNO3改性生物炭施用量為0.500%時,大豆植株的生物量達(dá)到最低值,比對照組降低了9.140%;在HNO3改性生物炭施用量為1.000%時,大豆植株的生物量達(dá)到最大值,比對照組增加了5.376%。由圖2可知,向復(fù)合重金屬污染土壤施加HNO3改性生物炭后,大豆籽粒的生物量顯著增加(P<0.05)。在HNO3改性生物炭施用量為1.000%時,大豆籽粒的生物量達(dá)到最大值,與對照組相比增加了25.000%。
圖2 HNO3改性生物炭對大豆植株和大豆籽粒生物量的影響注:不同小寫字母表示不同生物炭用量間差異顯著(P<0.05)。Fig.2 Effect of HNO3 modified biochar on the biomass of soybean plant and soybean seedsNote:The different lowercase letters indicate significant difference among different biochar dosage (P<0.05).
由表1可知,向重金屬污染土壤中施加HNO3改性生物炭后,大豆植株累積Cu、As、Cd和Ca的總量顯著增加(P<0.05)。在HNO3改性生物炭施用量為0.125%時,大豆植株累積的As總量達(dá)到最大值,比對照組增加了47.059%;在HNO3改性生物炭施用量為0.250%時,大豆植株累積的Cu和Cd總量達(dá)到最大值,分別比對照組增加了25.506%和44.048%;在HNO3改性生物炭施用量為1.000%時,大豆植株累積的Ca總量達(dá)到最大值,比對照組增加了65.778%。
表1 施用HNO3改性生物炭對大豆植株累積重金屬總量的影響Table 1 Effect of applying HNO3 modified biochar on the total heavy metals accumulated in soybean plants
2.4.1 大豆植株各部位Cu含量
由表2可知,向重金屬污染土壤施用HNO3改性生物炭后,大豆植株根、豆莢和籽粒中Cu含量顯著增加(P<0.05)。在HNO3改性生物炭施用量為0.250%時,大豆植株根、豆莢和籽粒中的Cu含量達(dá)到最大值,比對照組分別增加了174.777%、46.518%和33.574%。HNO3改性生物炭施用量為0.500%時,大豆植株莖和葉中的Cu含量達(dá)到最大值,比對照組分別增加了18.693%和22.882%。
2.4.2 大豆植株各部位As含量
由表2可知,向重金屬污染土壤施用HNO3改性生物炭后,大豆植株根、莖、豆莢和籽粒中As的含量顯著增加(P<0.05)。在HNO3改性生物炭施用量為1.000%時,大豆植株根、莖和籽粒中的As含量達(dá)到最大值,比對照組分別增加了88.870%、11.111%和23.611%。在HNO3改性生物炭施用量為0.125%時,大豆植株豆莢中As含量達(dá)到最大值,比對照組增加了42.424%。
2.4.3 大豆植株各部位Cd含量
由表2可知,向重金屬污染土壤施用HNO3改性生物炭后,對大豆植株各器官中Cd的含量影響顯著(P<0.05)。大豆植株根和豆莢中Cd含量較對照組顯著增加,分別在施用量為0.250%、1.000%時達(dá)到最大值,比對照組分別增加了176.002%、28.732%。在施用量為0.125%時,大豆植株莖和葉中Cd含量顯著降低(P<0.05);隨著施用量的增加,莖和葉中Cd的含量顯著增加(P<0.05),分別在施用量為0.500%、1.000%時達(dá)到最大值,比對照組分別增加了8.141%、59.407%。施加HNO3改性生物炭后,大豆植株籽粒中Cd的含量顯著降低,在施用量為1.000%時,籽粒中Cd的含量達(dá)到最小值,比對照組降低了69.620%。
2.4.4 大豆植株各部位Ca含量
由表2可知,向重金屬污染土壤施用HNO3改性生物炭后,大豆植株各器官Ca的含量顯著增加(P<0.05)。在HNO3改性生物炭施用量為0.125%時,大豆根中Ca含量達(dá)到最大值,比對照組增加了100.706%。在HNO3改性生物炭施用量為1.000%時,大豆莖、葉、豆莢和籽粒中Ca含量達(dá)到最大值,比對照組分別增加了30.995%、72.871%、33.853%和20.093%。
表2 施用HNO3改性生物炭對大豆植株各器官重金屬含量的影響Table 2 Effect of applying HNO3 modified biochar on the accumulated heavy metals in the organs of soybean plants
As-Cd復(fù)合污染對大豆植株的生長具有抑制作用,且As-Cd復(fù)合污染比單元素As污染對大豆植株生長的抑制作用更強[23]。Cu是植物生長必需的微量元素,但是植物組織中過量的Cu會產(chǎn)生毒害作用,如降低植物的光合作用及對礦物質(zhì)元素的吸收能力等[24]。Ca能促進(jìn)大豆植株某些酶的活化,改善大豆根瘤的固氮能力,從而促進(jìn)大豆植株的生長發(fā)育[25]。有研究表明,Ca能有效緩解重金屬對植物的毒害作用[26-27],氯化鈣的施加可促進(jìn)大豆的生長[28]。有研究發(fā)現(xiàn),向土壤中施用100 t·hm-2的生物炭,并配施氮肥,可使蘿卜的干物質(zhì)質(zhì)量增加95%~266%[29]。在不同類型和不同利用方式的土壤中添加生物炭后,土壤中pH增加、有機碳、全氮和速效鉀等含量均顯著提高[30-33]。施用生物炭可改善土壤板結(jié)、通氣性和含水率等,其中含水率隨生物炭施用量的增加而增加[34-35]。
研究表明,重金屬在植物體內(nèi)的累積會影響植株生物量的增長及其在各器官中的分配格局[36-37]。在本研究中,HNO3改性生物炭的施用促進(jìn)了大豆植株對Cu、Ca、As和Cd的吸收,因此大豆植株會受到Cu、As和Cd的毒害作用;同時HNO3改性生物炭對土壤性質(zhì)的改善可促進(jìn)大豆植株的生長,大豆植株各器官累積Ca含量的增加可拮抗Cu、As和Cd對大豆植株的毒害作用。本研究結(jié)果表明,在低濃度生物炭施用量范圍內(nèi),HNO3改性生物炭對大豆植株的生長有一定的抑制作用??赡苁怯捎贖NO3改性生物炭促進(jìn)了Cu、As和Cd的累積,Cu、As和Cd對大豆植株的毒害作用占優(yōu)勢,從而抑制了大豆植株的生長;高濃度的HNO3改性生物炭促進(jìn)了大豆植株的生長,可能由于隨著HNO3改性生物炭濃度的增加,大豆植株累積Ca的含量逐漸增加,Ca對大豆植株的解毒作用及土壤理化性質(zhì)改善促進(jìn)大豆植株生長協(xié)同作用的結(jié)果。在本研究中,施用HNO3改性生物炭后,大豆籽粒的生物量顯著增加。這可能是由于As、Cd主要分布于大豆植株的營養(yǎng)器官,籽粒中Cd含量顯著降低;同時大豆植株各器官Ca含量增加、土壤理化性質(zhì)改善。因此在低濃度生物炭施用范圍內(nèi),大豆植株其他各器官的生長受到了Cu、As和Cd抑制,但大豆籽粒的生長受到了促進(jìn)作用。本研究發(fā)現(xiàn),大豆植株各器官中累積的Cu、Ca、As和Cd等重金屬含量隨HNO3改性生物炭的施用量不同而改變,進(jìn)而導(dǎo)致大豆植株各器官的生物量分配格局發(fā)生改變;但其機制尚不明確,值得進(jìn)一步探究。
土壤中可經(jīng)遷移被植物吸收的重金屬為有效態(tài)重金屬,重金屬的有效性決定了其在土壤中的毒害作用[38]。土壤pH值是重金屬形態(tài)和遷移的關(guān)鍵控制因素,有研究表明,土壤中有效態(tài)Pb和有效態(tài)Cd的含量與有機質(zhì)含量和pH值存在負(fù)相關(guān)關(guān)系,通過提高土壤的pH值并施用有機鈍化劑可有效降低重金屬的有效態(tài)[39-40]。采用不同的處理方法對生物炭進(jìn)行處理后,生物炭的各種表面理化性質(zhì)將發(fā)生改變,包括生物炭的表面官能團、表面積和表面電荷等的改變[41-43]。如經(jīng)酸堿處理、磁化處理等改性處理的生物炭一般其比表面積增大、表面官能團增多,因此其吸附能力得到提高[44]。有學(xué)者利用HNO3對松木屑生物炭進(jìn)行改性處理,經(jīng)改性后的生物炭比表面積、總孔容積及表面的酸性基團羧基、酚羥基顯著增加[45]。楊蘭等[46]利用HNO3對油菜秸稈制備的生物炭進(jìn)行改性,結(jié)果表明HNO3改性生物炭可降低土壤中的pH值,提高了土壤中Cd的有效態(tài)含量。
本研究中生物炭經(jīng)HNO3改性后,呈現(xiàn)清晰的條狀凹槽結(jié)構(gòu),微孔結(jié)構(gòu)增多,孔內(nèi)有較多微小顆粒堆積,使孔隙空間減小,增加了生物炭的比表面積。這是由于HNO3具有強氧化性,生物炭表面發(fā)生氧化作用,打通了表面封閉的細(xì)小微孔結(jié)構(gòu),同時使孔壁坍塌成較大孔徑[47]。本研究結(jié)果表明,向重金屬污染土壤中施加HNO3改性生物炭后,大豆植株對Cu、Ca、As和Cd的累積作用均顯著提高。這可能是由于經(jīng)HNO3改性的生物炭比表面積及總孔容積增加,對大豆植株根際周圍土壤的持水作用增強,促進(jìn)了Cu、Ca、As和Cd隨著水分向大豆植株的遷移和積累;同時由于HNO3改性的生物炭酸性基團顯著增加,施用HNO3改性生物炭降低了土壤中的pH值,增加了土壤中有機質(zhì)含量,促進(jìn)重金屬在土壤中的水解,大豆根際土壤對Cu、Ca、As和Cd的吸附作用減弱。
由表2可知,Cu在大豆植株中含量分布為根>籽粒>葉>莖>豆莢,As在大豆植株中含量分布為根>葉>豆莢≈莖>籽粒,Cd在大豆植株中含量分布為根>葉>莖>豆莢>籽粒,Ca在大豆植株中的含量分布為葉>莖>豆莢>根>籽粒。由此可見,Cu、As、Cd和Ca在大豆植株各器官的分布具有差異性。重金屬在植物中的分布規(guī)律一般為地下部分>地上部分,即根>莖葉>籽粒。本研究中Cu在籽粒中的含量高于在莖葉中的含量,有研究表明,大豆豆莢和籽粒中的Cu含量高于莖葉,Cu為植物必需元素之一,易于向籽粒轉(zhuǎn)移[48],本研究結(jié)果與其一致;Ca主要分布在葉中,這是因為Ca參與植物的光合作用、氧化磷酸化,因此Ca易向葉片遷移[49]。
本研究中向土壤施加HNO3改性生物炭,大豆植株對Cu、Ca、As和Cd的累積總量增加。各HNO3改性生物炭施用水平均顯著增加了Cu、Ca和As在根、豆莢和籽粒的累積量,且大豆籽粒的生物量明顯增加。因此可能是由于籽粒的生長及HNO3改性生物炭促進(jìn)了大豆植株水分的吸收,從而促進(jìn)了Cu、Ca和As隨著營養(yǎng)物質(zhì)及水分由根部向籽粒的遷移。大豆植株各器官中根部是大豆植株累積Cd的主要器官,將Cd從根部運往地上部的能力弱[50]。研究表明,大豆植株受到Cd脅迫時,大豆植株可以將吸收的Cd大部分保留在營養(yǎng)器官中,進(jìn)而減少籽粒中的Cd含量[51],與本試驗研究的結(jié)果一致。大豆植株葉片和豆莢對Cd的累積影響Cd在大豆植株其他各器官中的分布,特別是影響Cd在籽粒中的累積[51]。有研究表明,Cd是易溶于水的金屬元素,Cd和水分易受水稻葉片蒸騰作用的影響而向葉片轉(zhuǎn)移,生物炭的施用可以加強這一影響[52]。另有研究表明,施用生物炭可以相對增加水稻籽粒Cd庫的相對容量,使水稻籽粒的Cd含量降低[53]。本研究中Cd在豆莢、葉片中的含量明顯增加,但在籽粒中的含量明顯降低。可能是由于HNO3改性生物炭的施用提高了大豆根際土壤的持水率,大豆植株葉片的蒸騰作用增強,從而促進(jìn)了Cd和水分子向葉片的轉(zhuǎn)移;HNO3改性生物炭還可通過增加大豆籽粒Cd庫的相對容量,繼而使大豆籽粒Cd含量降低。
素有“魚米之鄉(xiāng)”美稱的湖南省土壤重金屬污染嚴(yán)重,并已影響農(nóng)產(chǎn)品食品安全與人類健康[4,22]。研究表明,湖南省湘潭市、株洲市和衡陽市等地抽檢的稻米Cd、As嚴(yán)重超標(biāo)[54-55]。因此,有必要對湖南省耕地土壤進(jìn)行重金屬修復(fù)和阻控[56]。本研究中,向重金屬污染土壤施加HNO3改性生物炭后,大豆植株對Cu、As、Cd和Ca的累積能力明顯增強。在HNO3改性生物炭用量為0.25%時,每株大豆可有效去除重金屬污染土壤中Cu(0.310 mg)、As(0.020 mg)和Cd(0.121 mg),按一般農(nóng)田種植密度,預(yù)計種植20萬株·hm-2(添加HNO3改性生物炭改良土壤),可去除重金屬污染土壤Cu 62 020 mg、As 3 920 mg和Cd 24 140 mg。HNO3改性生物炭可降低籽粒中Cd含量,增加籽粒中As的含量,同時大豆籽粒的生物量明顯增加。參照谷類的標(biāo)準(zhǔn),籽粒的As與Cd含量均未超出《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中污染物限量》(GB 2762—2017)食品安全限量值。Cd在大豆籽粒中主要存在于粗蛋白和淀粉中,只有極少量分布于粗脂肪中,因此可以利用Cd脅迫下生產(chǎn)的大豆籽粒提煉植物油,進(jìn)一步降低大豆籽粒中Cd的健康風(fēng)險[57]。近年來,生物能源材料因具有可再生性、安全性好等特點,正在被逐步開發(fā)利用[58],大豆油可作為生物柴油的原料,利用大豆油制備生物柴油的相關(guān)研究越來越多[59-61]。因此,HNO3改性生物炭可提高大豆植株修復(fù)重金屬污染土壤的能力,同時可促進(jìn)大豆植株可食用部分籽粒的生物量的增長,且大豆籽粒中As與Cd的含量未超出《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中污染物限量》(GB 2762—2017)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的食品限量值。