基于中醫(yī)辨證保健理論探索輔助降血糖功能評(píng)價(jià)方法

孟 靚 王景霞 孟智睿 魏益謙 邵紫萱 李 麗 高學(xué)敏 張建軍

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京，100029)

糖尿病前期是一種糖代謝異常的狀態(tài)，介于糖代謝正常狀態(tài)和糖尿病之間[1]。如果不采取有效干預(yù)措施，處于糖尿病前期狀態(tài)的人群會(huì)有很大概率發(fā)展成為糖尿病患者[2]。目前我國(guó)糖尿病前期人群約為4.934億，且呈逐年高速增長(zhǎng)態(tài)勢(shì)[3]。我國(guó)糖尿病患者中，2型糖尿病占90%以上[4]。2型糖尿病絕大多數(shù)是可以預(yù)防的，對(duì)于處在糖尿病前期的亞健康人群來(lái)說(shuō)，通過(guò)早期干預(yù)，控制血糖和糖耐量的進(jìn)一步受損，降低患病風(fēng)險(xiǎn)，減少治療花費(fèi)的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

保健食品是指具有特定保健功能的食品，適宜于特定人群食用，可以調(diào)節(jié)機(jī)體功能，不以治療疾病為目的[5]。我國(guó)保健食品特定的27個(gè)功能中就有“輔助降血糖”，在降低疾病風(fēng)險(xiǎn)、預(yù)防糖尿病方面發(fā)揮著重要的作用[6]。中藥保健食品是以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，結(jié)合現(xiàn)代藥理學(xué)、藥劑學(xué)、營(yíng)養(yǎng)學(xué)、食品學(xué)等各學(xué)科的最新研究進(jìn)展，以含有中藥、中藥提取物、藥食兩用等原料為主，研制而成的功能類(lèi)保健食品[7]。中藥保健食品可依托中醫(yī)辨證理論的指導(dǎo)，精細(xì)劃分保健食品適宜人群的范圍，使其更加有針對(duì)性發(fā)揮保健效能，充分體現(xiàn)“辨證”特色[8]。但是在目前的保健食品研發(fā)過(guò)程中，保健功能的評(píng)價(jià)卻不能體現(xiàn)中醫(yī)的辨證特點(diǎn)，國(guó)家2012年發(fā)布的《輔助降血糖保健功能評(píng)價(jià)方法》中，輔助降血糖功能評(píng)價(jià)方法有2種，一種是損傷胰島高血糖模型，另一種是胰島素抵抗糖脂代謝紊亂模型[9]。這2種方法雖然建立了高血糖模型，但是均不能體現(xiàn)中醫(yī)證候特點(diǎn)，只能評(píng)價(jià)某一中藥保健品的降血糖功能，這就使因人制宜的精準(zhǔn)化及個(gè)性化保健無(wú)法實(shí)施，如果使用不對(duì)癥的保健食品盲目保健，則還可能適得其反危害機(jī)體健康[10]。

糖尿病前期屬于中醫(yī)“脾癉”范疇，屬未病階段，如不及時(shí)干預(yù)則可轉(zhuǎn)為“消渴”，脾癉可認(rèn)為是消渴前期，根據(jù)中醫(yī)辨證可分為濕熱蘊(yùn)脾、肝郁氣滯、脾虛濕盛和氣陰兩虛4個(gè)證型，不同證型的人群臨床表現(xiàn)是不同的，所選擇的中藥必然不同[11]。本研究以輔助降血糖保健功能為切入點(diǎn)，依據(jù)中醫(yī)對(duì)糖尿病前期的認(rèn)識(shí)，通過(guò)建立“氣陰兩虛型高血糖動(dòng)物模型”，探索符合中醫(yī)辨證特點(diǎn)的保健食品功能評(píng)價(jià)體系，為研發(fā)輔助降血糖辨證保健產(chǎn)品提供方法學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 選取45只雄性SD大鼠(北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK(京)2016-0006)，體質(zhì)量(160±20)g，飼養(yǎng)于無(wú)特定病原體(Specific Pathogen Free,SPF)級(jí)屏障環(huán)境中，大鼠維持飼料由北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供。特殊高脂飼料(豬油10%、蔗糖15%、蛋黃粉%、酪蛋白5%、膽固醇1.2%、膽酸鈉0.2%、碳酸氫鈣0.6%、石粉0.4%、鼠維持飼料52.6%)由斯貝福(北京)生物技術(shù)有限公司提供。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中大鼠自由飲水，室溫20～22 ℃，相對(duì)濕度為60%～70%，燈照周期為12 h，7：00至19：00燈照，19：00至第2天7：00黑暗。本研究通過(guò)北京中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審批(倫理審批號(hào)：BUCM-4-2019110201-4032)。

1.1.2 藥物 十味消渴膠囊(天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：09950063)。

1.1.3 試劑與儀器 試劑：血清總膽固醇(Total Cholesterol,TC)試劑盒(長(zhǎng)春匯力生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：2019009)、三酰甘油(Triacylglycerol，TG)試劑盒(長(zhǎng)春匯力生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：2019008)、高密度脂蛋白(High-Density Lipoprotein，HDL)試劑盒(長(zhǎng)春匯力生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：2019007)、低密度脂蛋白(Low-Density Lipoprotein，LDL)試劑盒(長(zhǎng)春匯力生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：2019011)、空腹胰島素(Fasting Insulin，F(xiàn)INS)試劑盒(優(yōu)爾生生物科技有限公司，批號(hào)：L191102001)、三碘甲狀腺原氨酸(Triiodothyronine，T3)試劑盒(優(yōu)爾生生物科技有限公司，批號(hào)：L191114551)、甲狀腺素(Thyroxine，T4)試劑盒(優(yōu)爾生生物科技有限公司，批號(hào)：L191104072)、環(huán)磷酸腺苷(Cyclic Adenosine Monophosphate，cAMP)試劑盒(優(yōu)爾生生物科技有限公司，批號(hào)：L191114614)、環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(Cyclic Guanosine Monophosphate，cGMP)試劑盒(優(yōu)爾生生物科技有限公司，批號(hào)：L191008130)、L-甲狀腺素鈉試劑盒(BioRuler，美國(guó)，批號(hào)：r5703)，D(+)-無(wú)水葡萄糖試劑盒(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20181205)。儀器：電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司，型號(hào)：PL-203)、超聲細(xì)胞粉碎機(jī)(寧波新芝生物，型號(hào)：JY92-IIn)、臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(力康，中國(guó)香港，型號(hào)：Neofuge 15R)、渦旋混合器(武漢賽維爾生物科技有限公司，型號(hào)：MX-F)、全自動(dòng)研磨儀(武漢賽維爾生物科技有限公司，型號(hào)：KH-Ⅲ)、自動(dòng)洗板機(jī)(深圳雷杜生命科技，型號(hào):RT3100)、酶標(biāo)檢測(cè)儀(BioTeK，德國(guó)，型號(hào)：EPoch)、全自動(dòng)生化分析儀(深圳雷杜生命科技，型號(hào)：Chemray240)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 藥品制備 十味消渴膠囊灌胃藥制備：拆去膠囊外殼，稱(chēng)取適量藥物粉末，放入燒杯中，根據(jù)大鼠灌胃量(1 mL/100 g)加入適量蒸餾水，攪拌至完全溶解均勻。灌胃用葡萄糖溶液制備：取適量葡萄糖，放于燒杯中，根據(jù)大鼠灌胃量(2.5 g/kg)加入適量無(wú)菌水，攪拌混合均勻，直至葡萄糖完全溶解。注射用T4混懸液制備：取適量L-甲狀腺素鈉，放于燒杯中，根據(jù)大鼠注射劑量(0.2 mg/kg)加入蒸餾水，搖晃均勻即得。

1.2.2 分組及給藥 雄性SD大鼠45只，體質(zhì)量(160±20)g，適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d后，禁食過(guò)12 h后，使用便攜式血糖測(cè)定儀取尾靜脈血測(cè)量血糖值，測(cè)定灌胃葡萄糖前(即0 h)血糖值，再測(cè)定灌胃2.5 g/kg BW葡萄糖后0.5 h、2 h血糖值，作為該批次動(dòng)物基礎(chǔ)值[9]。以0 h、0.5 h血糖水平分為3個(gè)組，即空白組、模型組、陽(yáng)性組(十味消渴膠囊1.32 g/(kg·d)，相當(dāng)于人7.92 g/d)、每籠飼養(yǎng)6只。從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始第一天給每組動(dòng)物進(jìn)行預(yù)防給藥，灌胃時(shí)間連續(xù)33 d(給藥體積：1 mL/100 g)。空白組不做處理，模型組給予同體積溶劑，陽(yáng)性組予以灌胃十味消渴膠囊溶液。

1.2.3 造模方法 參考《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范2003》輔助降血糖功能評(píng)價(jià)方法中的胰島素抵抗糖脂代謝紊亂模型，建立由高脂飼料喂養(yǎng)、勞倦傷脾、T4皮下注射、聯(lián)合鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)注射造成氣陰兩虛型胰島素抵抗糖脂代謝紊亂大鼠模型[9]。適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d后，開(kāi)始造模，造模周期維持33 d：1)各組給予維持料飼養(yǎng)，1周后模型組、陽(yáng)性組更換高熱能飼料，喂飼3周。2)負(fù)重游泳力竭運(yùn)動(dòng)：在實(shí)驗(yàn)8～21 d灌胃給藥結(jié)束1 h后進(jìn)行負(fù)重力竭游泳，在大鼠尾根部負(fù)荷其體質(zhì)量10%的鉛塊，放入0.8 m×0.8 m×1 m的游泳桶內(nèi)，水深0.7 m，水溫(20±5)℃，使大鼠在水中不能用尾巴接觸桶底，每桶放置2只。力竭標(biāo)準(zhǔn)：游泳動(dòng)作明顯失調(diào)，不能再堅(jiān)持；大鼠鼻尖沒(méi)入水里超過(guò)3 s不能回到水面，停止游泳，及時(shí)撈出，吹干毛發(fā)。3)T4皮下注射：在實(shí)驗(yàn)22～28 d下午14：00進(jìn)行上頸部皮下注射T4混懸液(0.2 mg/kg)。4)在實(shí)驗(yàn)第28天T4注射結(jié)束后，模型組、陽(yáng)性組禁食24 h(不禁水)，在實(shí)驗(yàn)第29天給予2% STZ溶液(30 mg/kg)一次性腹腔注射(現(xiàn)用現(xiàn)配，取適量STZ，錫紙避光于冰塊中保存，用0.1 mol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液在冰浴中配置溶液，pH=4.5)，以1 mL/100 g體質(zhì)量的劑量進(jìn)行注射。注射后繼續(xù)給予高熱量飼料喂飼5 d。

1.2.4 模型判定 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，各組動(dòng)物禁食12 h，檢測(cè)空腹血糖(Fasting Blood Glucose，F(xiàn)BG)、糖耐量、血清胰島素及TC、TG水平。測(cè)定FBG即給葡萄糖前(0 h)血糖值，陽(yáng)性組給予十味消渴藥液，模型組給予同體積溶劑，空白組不做處理，15 min后各組灌胃葡萄糖2.5 g/kgBW，測(cè)定給葡萄糖后0.5 h、2 h的血糖值，模型組FBG值≥10 mmol/L或0.5 h、2 h任一時(shí)間點(diǎn)血糖升高或血糖曲線(xiàn)下面積(Area Under The Curve，AUC)升高，與空白組比較有顯著性差異，判定糖代謝紊亂模型成立[9]。模型組血清TC或TG明顯升高，與空白組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，判定脂代謝紊亂模型成立[9]。

1.2.5 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.5.1 大鼠證候表征的觀察 大鼠造模前和造模后證候表征比較，即大鼠毛色、尿量、排便情況、自主活動(dòng)的表現(xiàn)。運(yùn)用電子稱(chēng)，在實(shí)驗(yàn)第33天給各組大鼠稱(chēng)體質(zhì)量。每日觀察記錄各組大鼠的肛溫、攝食量、飲水量、排尿量、排便量。

1.2.5.2 血糖測(cè)定及相關(guān)指數(shù)計(jì)算 用血糖試紙，按說(shuō)明書(shū)操作，尾尖靜脈取血測(cè)FBG值。AUC=(0 h血糖+0.5 h血糖)×0.5/2+(2 h血糖+0.5 h血糖)×1.5/2；胰島素抵抗指數(shù)(Homeostasis Model Assessment of Insulin Resistance，HOMA-IR)=(FBG×FINS)/22.5；胰島B細(xì)胞功能指數(shù)(HOMA-β)=20×FINS/(FBG-3.5)；胰島素敏感指數(shù)(Insulin Sensitivity Index，ISI)=Ln(l/FINS×FBG)。

1.2.5.3 大鼠負(fù)重游泳力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間 實(shí)驗(yàn)第34天早晨進(jìn)行最后1次負(fù)重游泳力竭運(yùn)動(dòng)，記錄負(fù)重游泳時(shí)間。

1.2.5.4 臟器指數(shù)、血脂、環(huán)核苷酸等指標(biāo)的檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)第33晚灌胃結(jié)束后禁食不禁水，于第34天早晨進(jìn)行最后1次負(fù)重游泳力竭運(yùn)動(dòng)，30 min后處死動(dòng)物并取材。巴比妥鈉麻醉，腹主動(dòng)脈取血，3 000 r/min、離心半徑2 cm環(huán)境下離心10 min，取上清液，4 ℃保存待測(cè)，取胸腺、脾臟并稱(chēng)重，計(jì)算各組大鼠胸腺、脾臟指數(shù)，臟器指數(shù)=臟器重(g)/體質(zhì)量(g)。采用比色法在全自動(dòng)生化儀上測(cè)各組血清TC、TG、LDL、HDL。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)血清T3、T4、FINS、cAMP和cGMP的含量，并計(jì)算cAMP/cGMP比值。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠一般狀況比較 實(shí)驗(yàn)期間觀察大鼠的狀態(tài)，力竭游泳結(jié)束后，大鼠懶動(dòng)無(wú)力，便溏，爪色青紫。注射T4后，大鼠情緒出現(xiàn)躁動(dòng)，毛發(fā)枯黃，易脫落，飲水量、進(jìn)食量增加，舌紅，小便黃，大便稍變干。注射STZ后，毛發(fā)枯黃無(wú)光澤，易脫落，飲水量、進(jìn)食量顯著增加，舌色鮮紅，小便多，大便干，色黑，呈現(xiàn)出氣陰兩虛的證候表征。給藥后，陽(yáng)性組大鼠毛發(fā)光澤度增強(qiáng)，脫落減少，自主活動(dòng)正常，舌色紅，爪色淡紅，大便干，色黑。

2.2 各組大鼠體質(zhì)量比較 對(duì)實(shí)驗(yàn)第1天和實(shí)驗(yàn)第33天的大鼠體質(zhì)量進(jìn)行比較，實(shí)驗(yàn)第33天，與空白組比較，模型組大鼠體質(zhì)量顯著降低(P<0.01)。陽(yáng)性組與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠體質(zhì)量比較

2.3 各組大鼠FBG比較 給藥33 d后，與空白組比較，模型組大鼠FBG顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與模型組比較，陽(yáng)性組大鼠FBG顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠FBG比較

2.4 各組大鼠飲水量、進(jìn)食量、排尿量、排便量、肛溫比較 與空白組比較，模型組大鼠飲水量、進(jìn)食量、排尿量、排便量、肛溫顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與模型組比較，陽(yáng)性組能使大鼠飲水量、進(jìn)食量、排尿量、排便量、肛溫降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠飲水量、進(jìn)食量、排尿量、排便量、肛溫比較

2.5 各組大鼠糖耐量比較 與空白組比較，模型組大鼠AUC顯著升高(P<0.01)。與模型組比較，陽(yáng)性組大鼠AUC顯著降低(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表4。

表4 各組大鼠糖耐量及AUC比較

2.6 各組大鼠FINS比較 與空白組比較，模型組大鼠FINS顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。陽(yáng)性組大鼠FINS顯著升高，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表5。

表5 各組大鼠FINS比較

2.7 各組大鼠HOMA-IR、HOMA-β、ISI比較 與空白組比較，模型組大鼠HOMA-IR顯著升高，HOMA-β、ISI顯著降低(P<0.01)。與模型組比較，陽(yáng)性組大鼠HOMA-IR顯著降低，HOMA-β、ISI顯著升高(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表6。

表6 各組大鼠HOMA-IR、HOMA-β、ISI比較

2.8 各組大鼠血脂四項(xiàng)比較 與空白組比較，模型組大鼠TC、TG、LDL顯著升高，HDL顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與模型組比較，陽(yáng)性組大鼠TC、TG、LDL顯著降低(P<0.01)，HDL顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表7。

表7 各組大鼠血脂四項(xiàng)比較

2.9 各組大鼠T3、T4比較 與空白組比較，模型組大鼠T3、T4顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與模型組比較，陽(yáng)性組大鼠T3有下降趨勢(shì)，T4顯著降低(P<0.01)。見(jiàn)表8。

表8 各組大鼠T3、T4比較

2.10 各組大鼠cAMP、cGMP的影響 與空白組比較，模型組大鼠cAMP顯著升高、cGMP顯著降低、cAMP/cGMP顯著升高(P<0.01)。與模型組比較，陽(yáng)性組大鼠cAMP顯著降低、cGMP顯著升高、cAMP/cGMP顯著降低(P<0.01，P<0.05)。見(jiàn)表9。

表9 各組大鼠cAMP、cGMP、cAMP/cGMP的影響

2.11 各組大鼠脾臟、胸腺指數(shù)比較 與空白組比較，模型組大鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)顯著降低(P<0.01)。與模型組比較，陽(yáng)性組大鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表10。

表10 各組大鼠脾臟、胸腺指數(shù)比較

2.12 各組大鼠力竭游泳時(shí)間比較 與空白組比較，模型組大鼠力竭游泳時(shí)間顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。陽(yáng)性組能延長(zhǎng)大鼠力竭游泳時(shí)間，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表11。

表11 各組大鼠力竭游泳時(shí)間比較

3 討論

針對(duì)目前保健食品功能評(píng)價(jià)方法缺少中醫(yī)功效評(píng)價(jià)，不能體現(xiàn)證候特點(diǎn)的問(wèn)題，要實(shí)現(xiàn)辨證保健，就要先建立高血糖的證候模型。而糖尿病中醫(yī)證候動(dòng)物模型的建立周期較長(zhǎng)，6～10周才能造成氣陰兩虛證，且模型的動(dòng)物狀態(tài)損傷較重，并不適合保健食品的功能評(píng)價(jià)，所以建立合適的中藥類(lèi)保健食品的降血糖功能評(píng)價(jià)方法至關(guān)重要[12]。本研究基于此，擬在2012年版輔助降血糖功能評(píng)價(jià)方法的基礎(chǔ)上，結(jié)合中醫(yī)對(duì)消渴癥前期未病階段的認(rèn)識(shí)，建立氣陰兩虛型胰島素抵抗糖脂代謝紊亂動(dòng)物模型，探索適合中藥保健食品辨證保健的輔助降血糖的評(píng)價(jià)方法[9]。

3.1 氣陰兩虛型胰島素抵抗糖脂代謝紊亂模型造模方法的依據(jù) 糖尿病前期歸于中醫(yī)“脾癉”范疇，主要由肺、脾、腎臟腑功能失調(diào)所致，但其根源在于脾胃功能受損。中醫(yī)干預(yù)治療時(shí)應(yīng)注重辨證，首先應(yīng)辨虛實(shí)：實(shí)證以濕熱蘊(yùn)脾、肝郁氣滯為主，虛證以脾虛濕盛、氣陰兩虛為主。氣陰兩虛證是一種介于氣虛和陰虛之間的復(fù)合證候，即氣虛與陰虛的表現(xiàn)同時(shí)并見(jiàn)[13]。氣虛，則體力下降，倦怠懶動(dòng)，乏力懶言；陰虛，則五心煩熱，咽干顴紅，形體消瘦[14]。本實(shí)驗(yàn)采用比較經(jīng)典的中醫(yī)氣虛證和陰虛證的造模方法，即強(qiáng)迫大鼠進(jìn)行負(fù)重力竭游泳2周模擬中醫(yī)勞倦傷脾所致氣虛，并甲狀腺素注射1周造成甲亢型陰虛，同時(shí)參考國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局2012年發(fā)布的《輔助降血糖功能評(píng)價(jià)方法》中糖脂代謝紊亂模型造模方法，即高脂喂養(yǎng)結(jié)合STZ注射，造模周期共33 d，建立多因素復(fù)合、病證結(jié)合、適合辨證保健的“氣陰兩虛型高血糖動(dòng)物模型”[9，15-16]。

3.2 氣陰兩虛型胰島素抵抗糖脂代謝紊亂模型大鼠血糖、血脂、胰島素比較 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組大鼠FBG平均值為15.68 mmol/L，且0.5 h、2 h的血糖升高、血糖曲線(xiàn)下面積與空白組比較，均有顯著性差異，判定糖代謝紊亂模型成立。模型組大鼠血清TC、TG、LDL顯著升高，HDL顯著降低，與空白組比較有顯著性差異，判定脂代謝紊亂模型成立。同時(shí)，與空白組比較，模型組大鼠血清FINS顯著降低，HOMA-IR顯著升高，ISI、HOMA-β顯著下降，說(shuō)明模型組大鼠處于胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)。根據(jù)以上結(jié)果判斷胰島素抵抗糖脂代謝紊亂模型復(fù)制成功。

3.3 氣陰兩虛型胰島素抵抗糖脂代謝紊亂模型大鼠中醫(yī)證候表征比較 在本實(shí)驗(yàn)中，與空白組比較，模型組大鼠出現(xiàn)多飲、多食、多尿的“三多一少”癥狀，飲食量、飲水量、排尿量都顯著升高，肛溫也明顯升高，能食，精神不振，毛發(fā)枯黃，無(wú)光澤，易脫落，體質(zhì)量下降，舌色淡紅等癥狀，與臨床上氣陰兩虛證的癥狀相符，說(shuō)明模型大鼠表現(xiàn)出氣陰兩虛證的證候表證。

cAMP與cGMP對(duì)細(xì)胞反應(yīng)具有拮抗性的調(diào)節(jié)作用，與中醫(yī)“陰”和“陽(yáng)”的特點(diǎn)相似。測(cè)定血漿cAMP、cGMP水平及其比值，可以作為幫助判斷臨床辨證陰虛、陽(yáng)虛的客觀指標(biāo)[17]。研究認(rèn)為cAMP/cGMP升高說(shuō)明機(jī)體處于一種陰虛狀態(tài)[18]。T3、T4作為下甲狀旁腺功能亢進(jìn)軸中甲狀腺分泌的關(guān)鍵激素，具有調(diào)節(jié)機(jī)體產(chǎn)熱和能量代謝的作用，研究顯示陰虛患者血清中T3、T4明顯升高，T3、T4可能是陰虛證的證候指標(biāo)之一[19]。有研究認(rèn)為T(mén)3、T4可作為陰虛內(nèi)熱型糖尿病的證候指標(biāo)[20-21]。在本實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠cAMP升高而cGMP降低，cAMP/cGMP比值顯著升高，T3、T4顯著升高，表明本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠出現(xiàn)陰虛證候。

脾氣虛則機(jī)體運(yùn)化失常，線(xiàn)粒體能量代謝損傷，氧化磷酸化產(chǎn)生的ATP減少，產(chǎn)能減少，推動(dòng)機(jī)體生命活動(dòng)的能力下降，引起免疫器官萎縮，導(dǎo)致免疫功能低下，血清細(xì)胞因子水平降低[22-23]。在本實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均顯著降低，且模型組大鼠力竭游泳時(shí)間明顯縮短，顯示其耐力也明顯下降，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠處于氣虛證的狀態(tài)。

3.4 以方測(cè)證 “以方測(cè)證”是依據(jù)“方證相應(yīng)”理論，根據(jù)方劑的藥物組成及效用，來(lái)推測(cè)其所治療對(duì)象的病機(jī)或癥狀的方法[24]。以方測(cè)證作為一種中醫(yī)認(rèn)識(shí)病證的手段，一直是中醫(yī)臨床和基礎(chǔ)研究中的重要方法之一[25]。以相應(yīng)的方劑干預(yù)不同階段的證，可使疾病的治療更為精確，證和方是密不可分的[26]。在中醫(yī)“證”的實(shí)驗(yàn)研究中，建立穩(wěn)定的某一證候模型，再用相對(duì)應(yīng)的基本方藥進(jìn)行干預(yù)，如果能改善或消除模型的癥狀和某些檢測(cè)指標(biāo)，則可佐證此模型成立[27-29]。

由于目前已上市的中藥保健產(chǎn)品只有保健功能，沒(méi)有證候的概念，不能作為陽(yáng)性藥物。故本實(shí)驗(yàn)以治療消渴病氣陰兩虛證的十味消渴膠囊為陽(yáng)性藥物。十味消渴膠囊是已經(jīng)上市的降糖中藥復(fù)方制劑，由人參、黃芪、白術(shù)、山藥、玉竹、熟地黃、麥冬、牛膝、茯苓、澤瀉等藥味組成，功能是益氣養(yǎng)陰，生津止渴，主治消渴病氣陰兩虛證[30]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，十味消渴膠囊能顯著增加氣陰兩虛型高血糖大鼠體質(zhì)量，降低FBG，改善糖耐量，延長(zhǎng)力竭游泳時(shí)間，提高機(jī)體耐力，降低血清中T3、T4的水平，降低環(huán)核苷酸系統(tǒng)cAMP、cAMP/cGMP比值，升高HDL含量，降低LDL、TG、TC的水平，提高血清中胰島素含量，改善胰島素抵抗，以及改善大鼠的氣陰兩虛證候的狀態(tài)。十味消渴膠囊對(duì)模型大鼠各個(gè)指標(biāo)都具有改善作用，以方測(cè)證，也佐證了本研究建立的氣陰兩虛型高血糖大鼠模型符合中醫(yī)理論，與相應(yīng)的中醫(yī)證候一致，說(shuō)明該造模方法是切實(shí)可行的。

本研究基于辨證保健的理念，根據(jù)中醫(yī)對(duì)糖尿病前期氣陰兩虛證的認(rèn)識(shí)，在保健食品《輔助降血糖功能評(píng)價(jià)方法》(2012年)的基礎(chǔ)上，即高脂喂養(yǎng)結(jié)合STZ注射，造模周期共33 d，疊加力竭游泳和T4注射，建立多因素復(fù)合的病證結(jié)合“氣陰兩虛型高血糖動(dòng)物模型”，造模設(shè)計(jì)在思路和方法上符合中醫(yī)基本理論，且造模周期較短。判定指標(biāo)在《輔助降血糖功能評(píng)價(jià)方法》(2012年)的基礎(chǔ)上增加了中醫(yī)氣陰兩虛證候的表證和指標(biāo)，既能評(píng)價(jià)輔助降血糖的功能，又能評(píng)價(jià)益氣養(yǎng)陰的中醫(yī)功效，體現(xiàn)了中藥保健食品辨證保健的特點(diǎn)。希望能在此模型的基礎(chǔ)上，研究相應(yīng)保健產(chǎn)品的干預(yù)作用，進(jìn)一步驗(yàn)證輔助降血糖功能評(píng)價(jià)方法的可行性，為建立具有中醫(yī)辨證特點(diǎn)的保健食品功能評(píng)價(jià)方法提供科學(xué)依據(jù)，以期在科學(xué)的評(píng)價(jià)方法基礎(chǔ)上研發(fā)辨證保健食品，真正實(shí)現(xiàn)辨證保健，精準(zhǔn)保健。