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    黃曲霉毒素在畜禽養(yǎng)殖中的危害及生物降解的探討

    2024-07-12 05:32:10梁樹錦
    新農(nóng)民 2024年17期
    關(guān)鍵詞:生物降解生物酶危害

    梁樹錦

    摘要:目前,已知的霉菌毒素有400多種,對(duì)家畜危害較大的毒素包含嘔吐毒素(DON)、赭曲霉毒素(OTA)等等。黃曲霉毒素(AF)主要是黃曲霉菌、寄生曲霉菌等多種真菌在生長(zhǎng)過程中產(chǎn)生并分泌的一類次生代謝產(chǎn)物。黃曲霉毒素主要污染玉米、花生、大米、棉籽、高粱等農(nóng)作物,給飼料產(chǎn)業(yè)、食品產(chǎn)業(yè)、畜牧業(yè)帶來巨大的影響。使飼養(yǎng)畜禽的生產(chǎn)性能及人類健康受到嚴(yán)重威脅。目前,黃曲霉毒素的脫毒方法包括物理去毒法、化學(xué)去毒法、生物去毒法,其中,生物去毒法近年來得到了人們廣泛的關(guān)注。文章對(duì)黃曲霉毒素的危害及生物降解的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

    關(guān)鍵詞:黃曲霉毒素;危害;生物酶;生物降解

    黃曲霉毒素主要是黃曲霉菌、寄生曲霉菌、赭曲霉菌、特異曲霉菌等多種真菌生長(zhǎng)過程中產(chǎn)生并分泌的一類結(jié)構(gòu)相似的代謝產(chǎn)物。到目前發(fā)現(xiàn)并能確定結(jié)構(gòu)的種類有B1、B2、G1、G2、M1、M2等近20種。其中,黃曲霉毒素B1是目前發(fā)現(xiàn)的毒性最強(qiáng)的真菌毒素之一,且具有致癌、致畸和致突變性。黃曲霉毒素是二呋喃氧雜萘鄰?fù)难苌?,分子結(jié)構(gòu)由一個(gè)二呋喃環(huán)和一個(gè)氧雜萘鄰?fù)ㄏ愣顾丨h(huán))組成,M1是黃曲霉毒素B1在體內(nèi)經(jīng)過羥化而衍生成的代謝產(chǎn)物。黃曲霉毒素的主要分子型式含 B1,B2,G1,G2,M1,M2等,前者是毒素的毒性結(jié)構(gòu),后者與致癌有關(guān)。來自美國(guó)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)的統(tǒng)計(jì)顯示,黃曲霉毒素每年至少給美國(guó)畜牧業(yè)帶來10%的經(jīng)濟(jì)損失,主要是由于食用黃曲霉毒素污染的飼料造成的。而生物降解法作為一種安全、高效、環(huán)保的方法,近年來受到人們的廣泛關(guān)注。

    1 黃曲霉毒素的危害

    黃曲霉毒素對(duì)豬的危害性很大,它主要損害免疫系統(tǒng)。對(duì)肝臟也有損害,主要引起豬肝壞死,導(dǎo)致豬胚胎死亡、豬先天性缺陷、腫瘤,亦可導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。另有研究表明,豬飼料中黃曲霉毒素污染與亞臨床蹄葉炎、卵巢囊腫有直接正相關(guān)。黃曲霉毒素能夠使細(xì)胞周期紊亂,其通過抑制蛋白質(zhì)、脫氧核糖核酸(簡(jiǎn)稱DNA)和核糖核酸(簡(jiǎn)稱RNA)的合成實(shí)現(xiàn)的。黃曲霉毒素還能直接作用于核酸合成酶,抑制信使核糖核酸(mRNA)的合成,進(jìn)一步抑制DNA的合成。研究表明,黃曲霉毒素B1(簡(jiǎn)稱為AFB1)被細(xì)胞色素P450酶氧化成代謝物AFB1-8、9-環(huán)氧化合物,其與鳥嘌呤N7共價(jià)結(jié)合,在目標(biāo)細(xì)胞中形成AFB1-N7-鳥嘌呤化合物,從而使核苷酸上的G 被 T 取代,DNA被修復(fù)、損傷、突變,最后導(dǎo)致癌變。黃曲霉毒素作用的靶器官主要是肝臟。

    動(dòng)物采食量、體質(zhì)、發(fā)病率以及繁殖機(jī)能都會(huì)受到黃曲霉毒素的影響,而動(dòng)物食用被黃曲霉污染的飼料或農(nóng)作物發(fā)生中毒的事件時(shí)有發(fā)生。早在1960年英國(guó)發(fā)生的10萬多只火雞死亡的“火雞黃曲霉毒素病”,就是因?yàn)槭秤煤S曲霉毒素的食物引起的。不同的動(dòng)物對(duì)黃曲霉毒素敏感度不同。黃曲霉毒素對(duì)幾乎所有的家禽都有影響,高水平攝入時(shí)可導(dǎo)致死亡,低水平有害。如雞食用黃曲霉毒素能降低其抗應(yīng)激能力,使蛋重減輕,蛋殼不堅(jiān)硬,產(chǎn)蛋量降低。鴨比雞更敏感,特別是雛鴨。霉菌毒素對(duì)豬影響也比較大,若母豬誤食含黃曲霉毒素的食物,會(huì)引起胎兒畸形,降低產(chǎn)仔數(shù)或產(chǎn)死胎等,嚴(yán)重時(shí)還會(huì)導(dǎo)致母豬流產(chǎn),而公豬誤食含黃曲霉毒素的飼料會(huì)出現(xiàn)性欲下降,影響精液質(zhì)量。若是奶牛食用黃曲霉毒素其生產(chǎn)性能和體質(zhì)都會(huì)降低,而且牛奶中的代謝產(chǎn)物黃曲霉毒素M1,直接危害人體健康。雖然肉牛對(duì)黃曲霉毒素的耐受力較豬和家禽高,但采食黃曲霉毒素污染嚴(yán)重的飼料或農(nóng)作物也可導(dǎo)致生長(zhǎng)速度下降,料肉比增高,而犢牛在某些情況下可引起嚴(yán)重的直腸痙攣,脫肛。黃牛急性中毒可導(dǎo)致死亡。

    人食用含有黃曲霉毒素的食物或者食用在飼料到動(dòng)物傳遞并不斷濃縮的含黃曲霉毒素的畜產(chǎn)品會(huì)對(duì)健康造成嚴(yán)重的危害。人如果長(zhǎng)期食用含有低水平黃曲霉毒素的食物,會(huì)不同程度的損傷其肝臟,肝臟、腎形礦脈和心臟脂肪過多和嘔吐、腹痛、肺水腫、驚厥痙攣、昏迷、大腦水腫而死亡是黃曲霉毒素中毒綜合病癥的特征。人的年齡、性別、營(yíng)養(yǎng)狀況以及肝炎會(huì)影響對(duì)黃曲霉毒素的敏感度。

    2 常見黃曲霉毒素的脫毒方法

    目前,市場(chǎng)上常用的降解黃曲霉毒素的方法主要有物理方法、化學(xué)方法和生物方法。

    (1)物理去毒法包括水洗法、挑除法、吸附法、加熱法、輻射法等。水洗法是一種經(jīng)濟(jì)安全的方法,黃曲霉毒素不溶于水,所以水洗法不理想,且干燥成本高,而黃曲霉毒素在農(nóng)作物中分布不均勻挑除法作用不明顯,電離輻射技術(shù)是一種有效降解黃曲霉毒素的方法,但強(qiáng)射線會(huì)破壞物質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu),吸附法在物理法中應(yīng)用最廣泛,較為成熟的一種霉菌毒素去除方法,黃曲霉毒素是剛性共面結(jié)構(gòu),易被吸附。目前,使用較多的吸附劑主要有礦物吸附劑(水合硅鋁酸鈣鈉鹽、蒙脫石、膨潤(rùn)土、黏土、沸石、活性炭)和酵母細(xì)胞壁提取物。吸附法具有不破壞物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu),且毒素在動(dòng)物體內(nèi)不被吸收直接排出體內(nèi)的優(yōu)點(diǎn),但效果不穩(wěn)定不徹底,受環(huán)境影響大。

    (2)化學(xué)去毒法包括氫氧化鈣、次氯酸、二氧化氯氧化和氨破壞等,可使黃曲霉毒素遭到破壞或鈍化其化學(xué)結(jié)構(gòu)。常用的化學(xué)去毒方法有氨處理、堿處理等。其脫毒效果較好,但化學(xué)物質(zhì)具有一定的腐蝕性會(huì)破壞營(yíng)養(yǎng)成分,成本較高。

    (3)生物去毒法包括吸附去毒和降解去毒兩方面。對(duì)毒素具有吸附作用的微生物主要有細(xì)菌和酵母菌,其活性部位都是細(xì)胞壁。較物理化學(xué)方法而言避免了對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分的大量損失,又具有解毒效率高,特異性強(qiáng)等,由于吸附過程是可逆的,菌體培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)時(shí)還會(huì)向基質(zhì)中釋放一部分毒素,所以去毒效果不穩(wěn)定。生物降解法的優(yōu)點(diǎn)是高度專一性,不影響食品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和口感,而且還能有效避免毒素重生。生物降解法的缺點(diǎn)是在實(shí)際使用中存在一定的局限性,酶的濃度和作用環(huán)境不易控制等。

    3 黃曲霉毒素生物降解的研究進(jìn)展

    黃曲霉毒素降解菌包括真菌和細(xì)菌兩大類。真菌包括樹狀指孢霉、少根根霉、莖點(diǎn)霉、糙皮側(cè)耳、黑曲霉、假蜜環(huán)菌、綠色木霉、不明毛霉、栓菌屬、米曲霉菌等對(duì)黃曲霉毒素有一定的降解作用,但降解時(shí)間較長(zhǎng)且不完全。能降解黃曲霉毒素的細(xì)菌有類棒菌狀諾卡氏菌、分枝桿菌、紅串紅球菌、嗜麥芽窄食單孢菌、橙紅色黏球菌、施氏假單胞菌、紅色棒狀桿菌屬和枯草芽孢桿菌、克雷伯菌、短波單孢菌、霍氏腸桿菌、短狀桿菌、纖維菌、炭疽芽孢桿菌、蔬菜芽孢桿菌、萎縮芽孢桿菌、彎曲乳桿菌等。

    真菌降解黃曲霉毒素的研究國(guó)外較多。劉大嶺等從真菌假密環(huán)菌中提取的粗酶液可使AFB1降解率達(dá)到 80%[3]。李冰篩出一株降解率達(dá)93.28%的黑曲霉[4],并對(duì)降解條件進(jìn)行了優(yōu)化:5%接種量,發(fā)酵溫度為40℃,pH5.0,轉(zhuǎn)速150 r/min,發(fā)酵時(shí)間72 h且研究證明了活性物質(zhì)主要是來自黑曲霉胞外的代謝產(chǎn)物,說明黑曲霉對(duì)AFB1的降解是降解酶的作用。陳儀本等研究發(fā)現(xiàn)[5],黑曲霉菌絲體提取物也能夠降解黃曲霉毒素,而且進(jìn)一步研究表明降解過程是酶促反應(yīng)。真菌降解在實(shí)際應(yīng)用較少因其有降解時(shí)間較長(zhǎng)且不完全等缺點(diǎn)。

    細(xì)菌解毒作用研究認(rèn)為多源于胞外代謝產(chǎn)物,有報(bào)道黃曲霉毒素被橙色黃桿菌的粗蛋白質(zhì)降解的降解機(jī)理可能是酶促反應(yīng)[2]。國(guó)內(nèi)的對(duì)細(xì)菌降解研究主要是側(cè)重于降解菌株的篩選和菌株的降解能力及條件優(yōu)化。中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室2006年首先創(chuàng)建了香豆素培養(yǎng)基初步篩選微生物的方法,利用香豆素與黃曲霉毒素化學(xué)結(jié)構(gòu)上的相似性,假設(shè)能夠降解香豆素的菌有可能降解黃曲霉毒素。關(guān)舒、李俊霞等通過以香豆素為唯一碳源及能源初篩、黃曲霉毒素復(fù)篩,從動(dòng)物糞便、發(fā)霉食物、飼料和土壤中分離得到降解活性高于75%的9株菌株:嗜麥芽窄食單孢菌、橙紅色黏球菌、克雷伯氏菌、短波單孢菌、霍氏腸桿菌、短狀桿菌、纖維菌、枯草芽孢桿菌、炭疽芽孢桿菌[6-7],其中來源馬來貘糞便嗜麥芽窄食單胞菌降解率為82.5%,降解率受溫度和pH的影響,蛋白激酶能抑制毒素降解反應(yīng),推測(cè)該菌降A(chǔ)FB1成分為酶;陳曉飛等從土壤中篩選出高活性AFB1降解菌[8],其中,臭假單胞菌和鏈霉菌對(duì)AFB1降解率可達(dá)到65%,厚壁菌對(duì)AFB1的降解率達(dá)到45%以上;張志敏等從秦川牛內(nèi)容物中分離到一株巨大芽孢桿菌降解黃曲霉毒素降解率為79%[9];李超波從金毛羚牛糞便中篩選出施氏假單胞菌[10],其降解率高達(dá)90.03%,其活性物質(zhì)主要存在于菌體細(xì)胞,其作用受到溫度、pH值等的影響可能是一種細(xì)胞內(nèi)酶;王燕等從豬腸道內(nèi)容物中用香豆素篩出甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌[11],其降解率達(dá)75.25%;崔玉琦從非洲象糞便里篩出芽孢桿菌其降解率達(dá)89.55%。王寧等對(duì)橙紅色黏球菌所產(chǎn)降解黃曲霉毒素的胞外酶進(jìn)行了初步分離純化[12],研究解毒作用的是一種胞內(nèi)酶。孫玲玉從泰山土壤中分離出高效降解率的泰山枯草芽孢桿菌[13]。計(jì)成等報(bào)道,橙色黃桿菌、分枝桿菌、紅串紅球菌、芽孢桿菌和小諾卡氏菌能降解黃曲霉毒素[1]。

    4 黃曲霉毒素降解菌株

    許多研究證明了黃曲霉毒素是可以通過酶降解的,能篩選出可有效降解黃曲霉毒素的酶菌株并且能實(shí)現(xiàn)在生產(chǎn)中的應(yīng)用是一個(gè)研究方向(詳見表1)。

    5 結(jié)語

    黃曲霉毒素污染范圍廣,對(duì)動(dòng)物及人類健康威脅很大,如何有效防控和降低危害是亟待解決的問題。物理法化學(xué)法本身有一些缺陷,而生物降解法有專一性、高效性、安全性的特點(diǎn)而受到廣泛關(guān)注。篩選出能產(chǎn)高活性解毒酶的菌株,用生物化學(xué)、分子生物學(xué)及基因工程等手段獲得活性蛋白單一組分,同時(shí),對(duì)活性組分進(jìn)行基因克隆及序列測(cè)定,并轉(zhuǎn)化到載體中進(jìn)行高效表達(dá)以提高黃曲霉毒素解毒酶產(chǎn)量,開發(fā)出高純度、高活性的新型解毒酶,以及應(yīng)用到實(shí)際生產(chǎn)是今后的主要方向。

    參考文獻(xiàn)

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