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      術(shù)前外周血微小RNA-21、血管內(nèi)皮生長因子、糖類抗原19-9水平與結(jié)直腸癌病人臨床分期和術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

      2022-09-23 09:21:10吳永力方漢剛陳靜閆瑞承
      臨床外科雜志 2022年8期
      關(guān)鍵詞:外周血病人評估

      吳永力 方漢剛 陳靜 閆瑞承

      結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)是結(jié)直腸黏膜上皮起源的消化道惡性腫瘤,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高,術(shù)后易復發(fā),預后較差[1]。CRC根據(jù)TNM分期采用相應方法進行治療,但仍有部分病人出現(xiàn)術(shù)后腫瘤復發(fā)轉(zhuǎn)移,對其生存期造成嚴重威脅[2-3]。尋求有效的CRC臨床分期診斷和術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移評估指標,有助于CRC治療方案的制定和臨床篩查術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移高危人群。有研究報道了血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、糖類抗原19-9(cancer antigen 19-9,CA19-9)在食管癌病人診斷及預后判斷中的作用,微小RNA-21(miR-21)、VEGF等是影響CRC病人預后的因素[4-5]。本研究探討外周血miR-21、VEGF、CA19-9水平與CRC臨床分期和術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

      對象與方法

      一、對象

      2019年10月~2020年10月本院行手術(shù)治療的CRC病人62例,為CRC組。納入標準:符合CRC診斷標準[6],經(jīng)臨床病理檢查證實;無放療、化療史,符合CRC手術(shù)指征[7],行結(jié)腸癌根治手術(shù);未使用糖皮質(zhì)激素治療;病人及家屬了解并知情同意。排除標準:合并嚴重心、肝、腎等臟器功能不全及其它免疫性相關(guān)性疾??;合并免疫相關(guān)性疾病或凝血功能障礙。另選取62例同期于本院體檢并經(jīng)檢查排除CRC的健康志愿者(healthy controls,HC)為HC組。CRC組年齡35~75歲,平均年齡(47.19±5.32)歲,男38例,女24例,其中TNM臨床分期I~II期35例,Ⅲ~Ⅳ期27例。HC組年齡33~75歲,平均年齡(47.62±5.45)歲,男41例,女21例。兩組年齡、性別等比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

      二、方法

      1.外周血miR-21相對表達量檢測:分別于術(shù)前1周和體檢當日清晨,采集所有入組被試空腹靜脈血3 ml,離心后取上清,采用Trizol試劑盒提取總RNA并檢測其純度和濃度,采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,反應產(chǎn)物稀釋后作為實時熒光定量PCR(qRT-PCR)模板。使用實時熒光定量PCR儀進行引物擴增,每個樣品設3個復孔。以U6為內(nèi)參,引物序列見表1。用2-△△CT方法計算miR-21的相對表達量。

      表1 引物序列

      2.血清CA19-9、VEGF水平檢測:分別于術(shù)前1周和體檢當日清晨,采集所有入組被試空腹靜脈血3 ml,離心后取上清,采用酶聯(lián)免疫法檢測VEGF水平,采用化學發(fā)光分析儀檢測CA19-9水平。CA19-9陽性診斷標準以CA19-9>27 U/L判定為陽性。

      3.隨訪及術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移:62例CRC病人術(shù)后均通過門診進行隨訪,隨訪截至2021年10月31日,隨訪12個月,直至病人死亡或隨訪結(jié)束。根據(jù)術(shù)后隨訪期間病史、癥狀體征、實驗室、影像學和病理學檢查結(jié)果,記錄其術(shù)后腫瘤復發(fā)轉(zhuǎn)移發(fā)生情況。

      4.觀察指標:比較CRC組和HC組外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平;比較TNM臨床分期Ⅰ~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期CRC病人外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平;比較術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移與無復發(fā)轉(zhuǎn)移的CRC病人外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平。

      三、統(tǒng)計學處理

      結(jié)果

      1.兩組術(shù)前外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平比較見表2。結(jié)果表明,CRC組術(shù)前外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平高于HC組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

      表2 兩組術(shù)前外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平比較

      2.不同TNM臨床分期CRC病人術(shù)前外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平比較見表3。結(jié)果表明,Ⅲ~Ⅳ期CRC病人術(shù)前外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平均高于Ⅰ~Ⅱ期,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

      表3 不同TNM臨床分期CRC病人術(shù)前外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平比較

      3.CRC組病人術(shù)前外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平與TNM臨床分期的Spearman相關(guān)性分析:CRC組病人術(shù)前外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平與TNM臨床分期呈正相關(guān)(r=0.451、0.339和0.307,P<0.05)。

      4.CRC組術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移與無復發(fā)轉(zhuǎn)移病人術(shù)前外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平比較見表4。CRC組術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移病人術(shù)前外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平高于無復發(fā)轉(zhuǎn)移病人,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

      表4 CRC組復發(fā)轉(zhuǎn)移與無復發(fā)轉(zhuǎn)移病人術(shù)前外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平比較

      5.術(shù)前外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平對CRC術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的預測價值:術(shù)前外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平檢測評估CRC術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的ROC曲線下面積(Area Under Curve,AUC)分別為0.779、0.722和0.702,術(shù)前外周血miR-21、VEGF、CA19-9聯(lián)合檢測評估CRC術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的AUC為0.843,具有最高的預測效能(P<0.05)。見圖1、表5。

      圖1 術(shù)前外周血miR-21、VEGF、CA19-9水平評估CRC術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的ROC曲線

      表5 術(shù)前外周血miR-21、VEGF、CA19-9水平評估CRC術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的ROC特征

      討論

      腫瘤分期可描述疾病的嚴重程度,早期發(fā)現(xiàn)和治療可延長生存期,提高生存質(zhì)量[8]。CRC病人早期通常缺乏典型病理表現(xiàn),且腫瘤分期越晚,其預后越差[9]。CA19-9是腫瘤分期診斷和術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移評估常用標志物, 具有促進腫瘤血管生成的作用,miR-21與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān),在腫瘤的臨床診治中應用廣泛[10-11]。

      本研究結(jié)果顯示,CRC組術(shù)前外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平高于HC組,說明CRC病人術(shù)前外周血miR-21、VEGF、CA19-9呈現(xiàn)顯著升高趨勢。miR-21是一種具有調(diào)控功能的內(nèi)源性小分子非編碼RNA,參與腫瘤細胞的增殖、分化及凋亡過程,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用[12]。CA19-9是人體糖類抗原類血清腫瘤標志物,臨床中常應用于腫瘤臨床分期的輔助診斷[13]。腫瘤細胞在多種血管刺激生成因子誘導下,可合成釋放大量血管生成因子,促進腫瘤血管生成,VEGF是其中誘導效應較強的血管生成因子,可導致腫瘤血管異常生長[14]。本研究結(jié)果顯示,Ⅲ~Ⅳ期CRC病人術(shù)前外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平均明顯高于Ⅰ~Ⅱ期。采用Spearman相關(guān)性分析外周血miR-21、VEGF、CA19-9與CRC臨床分期的關(guān)系,結(jié)果顯示,術(shù)前外周血miR-21、VEGF、CA19-9與臨床分期呈正相關(guān),說明隨著腫瘤惡性程度的增高,CRC病人術(shù)前外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平明顯升高。miR-21表達與腫瘤細胞浸、潤侵襲能力有關(guān),其高表達通常預示腫瘤浸潤深度增加,病情嚴重[12]。VEGF在腫瘤細胞團向?qū)嶓w腫瘤轉(zhuǎn)化過程中含量異常升高,對惡性腫瘤的早期篩查及臨床分期判斷具有重要的意義[14]。付蕾等[15]研究發(fā)現(xiàn),CRC病人血清CA19-9水平與腫瘤分期及預后相關(guān),說明術(shù)前外周血miR-21、VEGF、CA19-9檢測對CRC病人TNM臨床分期具有較好的診斷價值。

      本研究結(jié)果顯示,CRC組術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移病人術(shù)前外周血miR-21相對表達量和VEGF、CA19-9水平高于無復發(fā)轉(zhuǎn)移病人,說明術(shù)前外周血miR-21、VEGF、CA19-9與CRC病人術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān)。術(shù)后腫瘤復發(fā)轉(zhuǎn)移的CRC病人體內(nèi)腫瘤細胞再次呈現(xiàn)異常增殖,并向其他組織、器官侵襲轉(zhuǎn)移,導致結(jié)直腸上皮組織及其他正常細胞破壞,刺激新生血管生成,使CA19-9等腫瘤標志物和VEGF水平升高。術(shù)后腫瘤細胞復發(fā)轉(zhuǎn)移常由多種miRNA調(diào)控,miR-21可通過調(diào)節(jié)血管形成等靶基因的表達使微環(huán)境改變,達到促進腫瘤復發(fā)轉(zhuǎn)移的作用。ROC分析術(shù)前外周血miR-21、VEGF、CA19-9對CRC術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的預測價值,結(jié)果顯示,術(shù)前外周血miR-21、VEGF、CA19-9聯(lián)合檢測的AUC為0.834,說明術(shù)前外周血miR-21、VEGF、CA19-9聯(lián)合檢測對CRC術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移評估具有較好評估價值。有研究發(fā)現(xiàn),VEGF、CA19-9水平與結(jié)腸癌術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移發(fā)生相關(guān),聯(lián)合檢測有助于評估腫瘤轉(zhuǎn)移情況,提示臨床可將術(shù)前外周血miR-21、VEGF、CA19-9作為CRC術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的動態(tài)監(jiān)測指標。

      綜上所述,CRC病人術(shù)前外周血miR-21、VEGF、CA19-9水平明顯升高,且與其臨床分期呈正相關(guān),術(shù)前外周血miR-21、VEGF、CA19-9聯(lián)合檢測對CRC術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移具有較好的預測價值,可作為CRC病人臨床分期及術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的可靠的監(jiān)測指標。本研究的不足之處在于樣本數(shù)量有限,未對術(shù)前外周血miR-21、VEGF、CA19-9水平對CRC病人預后影響進行具體分析。

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