2021年湖南省血吸蟲病監(jiān)測點實驗室檢測能力評估結果分析

趙和欽豪，夏蒙，周杰，喻鑫玲，李廣平，鄧奕，羅振華，李勝明，王慧嵐

湖南省血吸蟲病防治所，WHO湖區(qū)血吸蟲病防治合作中心，血吸蟲病免疫與傳播控制湖南省重點實驗室，國家臨床重點?？?，湖南 岳陽 414000

湖南省曾是全國血吸蟲病重度流行區(qū)之一，隨著血吸蟲病消除進程的推進，居民血吸蟲感染率和感染度逐漸降低，目前已達歷史最低水平[1-2]。為適應新時期、新形勢血吸蟲病防控工作需求，血吸蟲病監(jiān)測方案和行業(yè)標準也不斷更新和出臺，對質控體系建設和實驗室檢測技能的要求也越來越高[3-4]。及時、準確地發(fā)現(xiàn)和診斷血吸蟲病，已成為精準防控血吸蟲病的關鍵因素[5-7]。

我國從2009年開始建立“國家級-省級-縣級”三級血吸蟲病診斷網(wǎng)絡平臺。湖南省通過積極開展“血防技術人員專業(yè)技能競賽”“省級血吸蟲病診斷網(wǎng)絡實驗室準入資質授牌”等監(jiān)測能力建設措施[8]，穩(wěn)步推進血防“四大工程”[9]，網(wǎng)絡實驗室實驗條件、人員素質和檢測能力等方面有了顯著提升。2021年湖南省血吸蟲病國家級監(jiān)測點數(shù)量由41 個增加到97 個，覆蓋了全部41 個血吸蟲病流行縣的57 個基層血防機構，其設置的網(wǎng)絡實驗室均具備縣級監(jiān)測職能與資質，承擔監(jiān)測點血吸蟲病診斷項目的檢測工作，至此，湖南省已初步建成血吸蟲病監(jiān)測診斷網(wǎng)絡實驗室體系，并有效運行[10]。根據(jù)《全國血吸蟲病監(jiān)測方案（2020 年版）》和《湖南省2021 年血吸蟲病防治工作計劃》的要求，湖南省于2021 年9 月啟動了血吸蟲病監(jiān)測點實驗室檢測能力評估工作，旨在為完善全省血吸蟲病監(jiān)測體系提供參考。

1 內(nèi)容與方法

1.1 調(diào)查點的確定 根據(jù)全省血吸蟲病疫情監(jiān)測等級和地區(qū)分布比例[2-3]，在湖南省41個血吸蟲病流行縣的57 個監(jiān)測點實驗室中分層抽取12 個診斷網(wǎng)絡實驗室為調(diào)查對象，其中Ⅰ類監(jiān)測縣診斷網(wǎng)絡實驗室必檢，Ⅱ、Ⅲ類監(jiān)測縣各抽取20%。考核單位及對應的監(jiān)測等級分別為：常德市安鄉(xiāng)縣黃山頭血防站（Ⅱ類）、澧縣澧陽血防站（Ⅰ類）、臨澧縣新安鎮(zhèn)血防院（Ⅱ類）、桃源縣盤塘鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院（Ⅱ類）；益陽市南縣武圣宮鎮(zhèn)血防站（Ⅱ類）、大通湖區(qū)北洲子鎮(zhèn)衛(wèi)生院（Ⅱ類）；岳陽市汨羅市白塘鎮(zhèn)磊石血防站（Ⅱ類）、岳陽縣麻塘鎮(zhèn)血防站（Ⅱ類）、臨湘市黃蓋湖鎮(zhèn)血防站（Ⅱ類）、南湖新區(qū)管委會血防站（Ⅲ類）；長沙市岳麓區(qū)公共衛(wèi)生中心（Ⅱ類）；株洲市石峰區(qū)公共衛(wèi)生中心（Ⅲ類）。

1.2 質控品制備 質控品包含血清、糞樣加藤厚涂片和蟲卵懸液三類。血清陽性和陰性質控品分別來源于湖南省血吸蟲病防治所附屬湘岳醫(yī)院血吸蟲病重點?？票４娴穆匝x病患者和正常人群的血清，每份質控樣品50 μL。蟲卵懸液來源于人工感染血吸蟲7 周的家兔肝，蟲卵收集后保存于1.2% NaCl 溶液中作陽性質控品，部分蟲卵懸液煮沸滅活5 min 后用作陰性質控品，每份2 mL。糞樣加藤厚涂片陽性質控品采用正常人新鮮糞便加入兔肝中收集的蟲卵，攪拌混勻制作而成，蟲卵計數(shù)為3~18 個/片；陰性質控品不加蟲卵。三類質控品均由血吸蟲病免疫與傳播控制湖南省重點實驗室2名專業(yè)技術人員制作，再由2 名實驗室檢驗技術人員對上述質控品進行3次重復檢測，并標定結果。

1.3 檢測能力評價

1.3.1 間接紅細胞凝集試驗（IHA） 待測樣本由5份血清組成，包含1 個強陽性、1 個弱陽性和3 個陰性血清樣本。血清樣本按1∶5、1∶10、1∶20、1∶40 四個稀釋度進行檢測，判斷陰性、陽性，并記錄效價。檢測用V 孔玻璃板與IHA 檢測試劑由湖南省血吸蟲病防治所統(tǒng)一提供。試劑盒由安徽安吉醫(yī)藥科技有限公司生產(chǎn)（批號：20200303）。

1.3.2 改良加藤厚涂片法 待測樣本包含5張加藤厚涂片，有陰性和陽性，每張陽性片血吸蟲蟲卵數(shù)量在30 個以內(nèi)，無其他蠕蟲蟲卵；鏡檢結果要求定性并定量（蟲卵計數(shù)）。

1.3.3 尼龍絹集卵孵化法 待測樣本包含1個陽性質控品和2個陰性質控品。樣本4 ℃保存，并于72 h內(nèi)完成檢測，結果只定性，不定量。

1.4 評價指標與統(tǒng)計分析

1.4.1 評價指標 將縣級實驗室檢測結果與湖南省血吸蟲病免疫與傳播控制重點實驗室標定結果進行比對。定性鑒定結果相同為符合，反之為不符合，其評價指標包括陽性符合率、陰性符合率、總符合率[11]。計算公式：①陽性符合率=A/（A+C）×100%；②陰性符合率=D/（B+D）×100%；③總符合率=（A+D）/（A+B+C+D）×100%，其中A 為真陽性數(shù)，B 為假陽性數(shù)，C 為假陰性數(shù)，D 為真陰性數(shù)。定量

鑒定（效價和蟲卵計數(shù)）結果用合格率計算，IHA 法抗體效價檢測與標定結果一致，改良加藤厚涂片法血吸蟲卵鏡檢計數(shù)與標定結果的誤差在30%以內(nèi)，判為合格，合格率=合格樣本量/總樣本量×100%。

1.4.2 結果評分 總分10 分，9 分及以上為優(yōu)秀，8分及以上為良好，6 分及以上為合格，6 分以下為不合格。量化分值為：間接紅細胞凝集試驗考核總分3 分，定性錯誤每個扣0.6 分，效價每誤差一個滴度扣0.1 分/樣本；改良加藤厚涂片法考核總分4 分，定性錯誤每個扣0.8分，蟲卵計數(shù)每偏離標定結果1倍扣除0.1 分/樣本；尼龍絹集卵孵化法考核總分3 分，定性錯誤每個扣1分。

1.4.3 統(tǒng)計分析 采用Excel 2013 建立數(shù)據(jù)庫，并進行統(tǒng)計分析。

2 結 果

2.1 間接紅細胞凝集試驗 12個實驗室中11個實驗室定性檢測結果完全正確，僅桃源縣盤塘鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院漏檢（將2 個陽性質控品錯判為陰性）。IHA檢測陽性符合率為91.67%（22/24），陰性符合率為100.00%（36/36），總符合率為96.67%（58/60）。

6 個實驗室效價檢測與標定結果完全符合，其余6 個實驗室效價檢測出現(xiàn)錯誤，其中安鄉(xiāng)縣黃山頭血防站、澧縣澧陽血防站和岳麓區(qū)公共衛(wèi)生中心血清滴度標記偏高；臨澧縣新安鎮(zhèn)血防院血清滴度標記偏低；桃源縣盤塘鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院和大通湖區(qū)北洲子鎮(zhèn)衛(wèi)生院的檢測結果未填寫效價（按不符合計算）。間接紅細胞凝集試驗陽性質控品效價檢測總合格率為54.17%（13/24）。見表1。

2.2 改良加藤厚涂片法 12 個檢測實驗室中有8個實驗室定性檢測結果完全正確，4 個實驗室出現(xiàn)錯誤，其中臨湘市黃蓋湖鎮(zhèn)血防站和南湖新區(qū)管委會血防站各有1 張陽性加藤片誤判為陰性（假陰性），大通湖區(qū)北洲子鎮(zhèn)衛(wèi)生院、南湖新區(qū)管委會血防站和石峰區(qū)公共衛(wèi)生中心共有8張陰性加藤片誤判為陽性（假陽性）。改良加藤厚涂片法鑒定血吸蟲卵陽性符合率為90.00%（18/20），陰性符合率為80.00%（32/40），總符合率為83.33%（50/60）。

12 個實驗室共檢測20 張陽性加藤片，其中6 張陽性加藤片血吸蟲卵計數(shù)在允許誤差范圍內(nèi)，改良加藤厚涂片法血吸蟲卵計數(shù)合格率為30.00%。見表1。

2.3 尼龍絹集卵孵化法 12 個實驗室中有9 個實驗室定性檢測結果完全正確，其余3個實驗室各有1個質控品檢測錯誤，其中大通湖區(qū)北洲子鎮(zhèn)衛(wèi)生院和石峰區(qū)公共衛(wèi)生中心將陽性質控品誤判為陰性（假陰性），汨羅市白塘鎮(zhèn)磊石血防站將陰性質控品誤判為陽性（假陽性）。尼龍絹集卵孵化法陽性符合率為83.33%（10/12），陰性符合率為95.63%（23/24），總符合率為91.67%（33/36）。見表1。

2.4 結果量化得分 根據(jù)質控考核結果量化標準評分，12 個被抽樣實驗室中有7 個實驗室得分在9以上，考核結果為“優(yōu)秀”，優(yōu)秀率58.33%；2 個實驗室考核結果為“良好”；3 個實驗室考核結果為“合格”。見表1。

表1 湖南省血吸蟲病監(jiān)測點實驗室質控考核結果

3 討 論

2013 年以來，監(jiān)測點網(wǎng)絡實驗室室間比對與質控考核已成為湖南省血吸蟲病診斷網(wǎng)絡平臺運行和質量控制的常規(guī)工作。通過常態(tài)化開展監(jiān)測點網(wǎng)絡實驗室質控考核能及時發(fā)現(xiàn)問題，提升湖南省監(jiān)測點實驗室監(jiān)測能力。2021 年度的評估考核采用血清、加藤厚涂片和蟲卵懸液三類質控品，檢驗了湖南省5 個流行市、12個流行縣的12個監(jiān)測點的實驗室檢測水平。各實驗室全部在1 周內(nèi)完成檢測，結果反饋率100%。間接紅細胞凝集試驗、改良加藤片厚涂片法和尼龍絹集卵孵化法的檢測結果總符合率分別為96.67%、83.33%和91.67%，達到了質控要求，表明基層血吸蟲病監(jiān)測點實驗室具備開展免疫學、病原學診斷血吸蟲病的能力。

本次抽樣考核發(fā)現(xiàn)，湖南省血吸蟲病監(jiān)測點實驗室檢測能力基本滿足監(jiān)測工作需要，但對于定量、精準化的檢測項目，實驗室檢測水平有待提高，如間接紅細胞凝集試驗的陽性質控品效價檢測合格率僅54.17%，加藤片蟲卵計數(shù)合格率僅30.00%。此外，部分實驗室還存在報告格式不規(guī)范、陽性質控品忘填效價、質控品保存和運輸不當導致的假陰性等問題。通過結果量化得分比較發(fā)現(xiàn)，得分與所在地區(qū)疫情水平有一定的關系。7 個檢測能力評估為優(yōu)秀的實驗室中，6 個來自常德、岳陽、益陽三個“老疫區(qū)”，疫情監(jiān)測等級全部為Ⅰ類（傳播控制縣）和Ⅱ類（傳播阻斷的有螺縣）；而疫情監(jiān)測等級為Ⅲ類（傳播阻斷或消除的無螺縣）的石峰區(qū)和南湖新區(qū)得分分別位于第10 名和12 名。血吸蟲病低流行區(qū)的監(jiān)測點實驗室診斷能力相對較低，這可能與日常監(jiān)測工作中較少接觸陽性樣本有關。

目前，全國血吸蟲病邁入消除攻堅階段。為適應新時期、新形勢下血吸蟲病防控工作的需求，在大力發(fā)展新技術、推廣核酸檢測技術的同時，仍不能忽視血清學和病原學等傳統(tǒng)診斷技術的能力提升[12]。建議各級實驗室繼續(xù)維持和提高病原學和血清學檢測能力，對于已達到傳播阻斷的無螺地區(qū)和達到消除標準的地區(qū)，可通過開展培訓和組織地區(qū)間學習交流等方式，提高血吸蟲病診斷水平。此外，應重視和加強實驗室質量控制，以維持和鞏固敏感有效的監(jiān)測體系。