海洋曲霉Aspergillus ruber TX-M4-1的次級(jí)代謝產(chǎn)物研究

王 聰，王玉妃，孫 建，王詩(shī)怡，藍(lán)坤燕，杜為勝，孔凡棟，周麗曼

海洋曲霉TX-M4-1的次級(jí)代謝產(chǎn)物研究

王 聰，王玉妃，孫 建，王詩(shī)怡，藍(lán)坤燕，杜為勝，孔凡棟，周麗曼*

廣西民族大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，林產(chǎn)化學(xué)與工程國(guó)家民委重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西林產(chǎn)化學(xué)與工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西林產(chǎn)化學(xué)與工程協(xié)同創(chuàng)新中心，廣西 南寧 530006

對(duì)來(lái)自潿洲島火山口的海洋曲霉TX-M4-1的次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行研究。利用硅膠、凝膠和高效液相等柱色譜方法進(jìn)行分離純化，運(yùn)用紫外、紅外、質(zhì)譜和核磁共振波譜等分析方法對(duì)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，分別采用96孔板微量法、CCK-8法和DPPH法對(duì)化合物的抗菌活性、腫瘤細(xì)胞毒活性及抗氧化活性進(jìn)行測(cè)試。從海洋曲霉TX-M4-1的發(fā)酵產(chǎn)物中分離鑒定了1個(gè)新的苯甲醛類化合物及10個(gè)已知結(jié)構(gòu)的化合物，分別鑒定為5′-順式-四氫金色灰綠曲霉素（1）、2-(1′,5′-庚二烯基)-3,6-二羥基-5-(3-甲基-2-丁烯基)苯甲醛（2）、異二氫金色灰綠曲霉素（3）、二氫金色灰綠曲霉素（4）、四氫金色灰綠曲霉素（5）、灰綠曲霉黃色素（6）、谷甾醇（7）、膽固醇（8）、鏈蠕孢素（9）、脫氫海膽靈（10）和新海膽靈A（11）?；衔?、5和6具有清除自由基活性，20 μmol/L濃度下其DPPH自由基清除率分別為61.9%、88.0%和91.9%?；衔?為新的苯甲醛類化合物?；衔?、5和6具有強(qiáng)的抗氧化活性。

海洋曲霉TX-M4-1；苯甲醛類化合物；抗氧化活性；5′-順式-四氫金色灰綠曲霉素；灰綠曲霉黃色素

海洋環(huán)境相較于陸地環(huán)境有高壓、高鹽、高滲、低溫、營(yíng)養(yǎng)少等特點(diǎn)。海洋微生物在長(zhǎng)期適應(yīng)這種特殊生存環(huán)境的過(guò)程中進(jìn)化出了有別于陸生生物的新陳代謝途徑和適應(yīng)機(jī)制，進(jìn)而產(chǎn)生了大量結(jié)構(gòu)新穎、活性顯著的次級(jí)代謝產(chǎn)物，是發(fā)現(xiàn)藥物先導(dǎo)化合物的主要途徑[1]。海洋曲霉來(lái)源新化合物的研究始于1992年，截至2014年8月，已報(bào)道了512個(gè)海洋曲霉來(lái)源的新化合物，36%海洋曲霉來(lái)源的新化合物具有生物活性，海洋曲霉已成為海洋藥物研究的熱點(diǎn)來(lái)源[2-3]。

潿洲島地處北部灣海域，是我國(guó)最大、最年輕的火山噴發(fā)堆積形成的島嶼，其具有獨(dú)特的火山兼海洋地貌，生態(tài)環(huán)境特殊。特殊環(huán)境中的微生物為適應(yīng)外部特殊環(huán)境演變出獨(dú)特的次生代謝途徑，產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新穎的活性化合物。因此對(duì)特境微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究及天然產(chǎn)物的擴(kuò)充及藥源分子的發(fā)現(xiàn)具有十分重要的意義[4-5]。

本研究通過(guò)梯度稀釋法，從采自潿洲島火山口的苔蘚樣品中分離得到了一株海洋真菌TX-M4-1，對(duì)其進(jìn)行固態(tài)培養(yǎng)后從發(fā)酵提取物中分離得到了1個(gè)新的苯甲醛類化合物5′-順式-四氫金色灰綠曲霉素（5′--isotetrahydro- auroglaucin，1）和10個(gè)已知化合物2-(1′,5′-庚二烯基)-3,6-二羥基-5-(3-甲基-2-丁烯基)苯甲醛[2-(1′,5′-heptadienyl)-3,6-dihydroxy-5-(3-methyl-2-butenyl)benzaldehyde，2]、異二氫金色灰綠曲霉素（isodihydroauroglaucin，3）、二氫金色灰綠曲霉素（dihydroauroglaucin，4）、四氫金色灰綠曲霉素（tetrahydroauroglaucin，5）、灰綠曲霉黃色素（flavoglaucin，6）、β-谷甾醇（β-sitosterol，7）、膽固醇（cholesterol，8）、鏈蠕孢素（catenarin，9）、脫氫海膽靈（dehydroechinulin，10）和新海膽靈A（neoechinulin A，11）。結(jié)構(gòu)見圖1。對(duì)以上分離得到的化合物進(jìn)行了抗菌、腫瘤細(xì)胞毒活性以及自由基清除能力活性測(cè)試，結(jié)果顯示化合物1、5和6具有清除自由基活性，20 μmol/L濃度下的DPPH自由基清除率分別為61.9%、88.0%和91.9%。

圖1 化合物1～11的結(jié)構(gòu)

1 儀器與材料

HCB-1300V型潔凈工作臺(tái)（青島海爾特種電器有限公司）、LRH-500A型生化培養(yǎng)箱（廣東泰宏君科學(xué)儀器股份有限公司）、核磁共振波譜儀（布魯克400 MHz）、CR-080R型春霖超聲波清洗機(jī)（深圳市春霖清洗設(shè)備有限公司）、YXQ-LS-75SII型高壓滅菌鍋（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）、TD4N離心機(jī)（長(zhǎng)沙英泰儀器有限公司）、Mariner API-TOF型質(zhì)譜儀（美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司）、K3 TOUCH酶標(biāo)儀（飛世爾實(shí)驗(yàn)器材有限公司）、Agilent 1260高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）、SCI-VS混勻儀（美國(guó)塞洛捷克公司）、AL104型分析天平（瑞士梅特勒公司）、200～300目正相硅膠（青島海洋化工集團(tuán)公司）、YMC*GEL ODS-A-HG反相硅膠（日本YMC Group）。提取分離用醋酸乙酯、甲醇、二氯甲烷等均為工業(yè)用化學(xué)純產(chǎn)品。

一株海洋真菌分離于廣西潿洲島來(lái)源的苔蘚（N21°1′42.97′′，E109°7′46.29′′）。綜合菌株的生長(zhǎng)形態(tài)與序列比對(duì)（GenBank accession No. OL989330），此菌株鑒定為TX-M4-1。

2 方法

2.1 菌株發(fā)酵

將菌株TX-M4-1接種于PDA平板培養(yǎng)基中，在28 ℃培養(yǎng)3 d，將此菌株接種于大米培養(yǎng)基（大米80 g、海水120 mL）的錐形瓶（1000 mL）中，室溫靜置培養(yǎng)32 d，發(fā)酵規(guī)模為100瓶。

2.2 菌株分子鑒定

海洋真菌基因組DNA的提取、擴(kuò)增以及測(cè)序純化3部分是由上海生工生物工程股份有限公司測(cè)試[6]。

2.3 產(chǎn)物的提取分離

2.3.1 菌株提取物制備 采用醋酸乙酯對(duì)菌株TX-M4-1發(fā)酵物萃取3次，濾過(guò)和減壓濃縮后得到83.47 g粗提物。

2.3.2 產(chǎn)物的提取 采用石油醚、90%甲醇-水各2 L萃取上述粗提物，得到石油醚萃取物25.1 g，甲醇-水萃取物90.16 g（未完全蒸干水分）。

2.3.3 化合物的分離 對(duì)石油醚萃取物進(jìn)行減壓硅膠柱色譜，采用石油醚-醋酸乙酯（1∶0、10∶1、9∶1、8∶1、6∶1、4∶1、2∶1、1∶1、0∶1）梯度洗脫，共9個(gè)梯度（Fr. 1～9），每個(gè)梯度分4次收集。以Fr. 2為例，編號(hào)依次為Fr. 2.1～2.4。Fr. 2.1（100mg）通過(guò)HPLC制備（C18半制備柱，甲醇-水85∶15，體積流量4 mL/min），得到化合物1（R＝17.1 min，16.6 mg）、2（R＝16.3 min，31.3 mg）、3（R＝13.6 min，2.5 mg）、4（R＝18.1 min，12 mg）、5（R＝20.2 min，13 mg）和6（R＝22.2 min，18 mg）。Fr. 2.4（640 mg）通過(guò)凝膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，TLC檢測(cè)合并、濃縮后得到5個(gè)流分Fr. 2.4.1～2.4.5。Fr. 2.4.1（350 mg）通過(guò)硅膠柱色譜（石油醚-醋酸乙酯50∶1洗脫），TLC檢測(cè)、合并得到化合物7（R＝7.1 min，7.1 mg）和8（R＝10.4 min，65.1 mg）。Fr. 3.2（100 mg）通過(guò)凝膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，TLC檢測(cè)濃縮后得到6個(gè)流分Fr. 3.2.1～3.2.6。Fr. 3.2.5（63 mg）通過(guò)HPLC制備（C18半制備柱，乙腈-水80∶20，流量4 mL/min），得到化合物9（R＝6.8 min，25 mg）。Fr.7.2（164 mg）通過(guò)凝膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇（1:1）洗脫，TLC檢測(cè)合并濃縮后得到3個(gè)流分Fr. 7.2.1～7.2.3。Fr. 7.2.2（127 mg）通過(guò)HPLC制備（C18半制備柱，乙腈-水80∶20，流量4 mL/min），得到化合物10（R＝17.2 min，62.7 mg）。Fr. 7.2.2（127 mg）通過(guò)HPLC制備（5PFP半制備柱，乙腈-水70∶30，體積流量4 mL/min），得到化合物11（R＝10.4 min，4.8 mg）。

3 結(jié)果與分析

3.1 菌株鑒定結(jié)果

菌株TX-M4-1的PCR擴(kuò)增序列的長(zhǎng)度為502 bp，與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的菌株[(OL989330)]的ITS序列同源性為100%，親緣關(guān)系在系統(tǒng)發(fā)育樹上處于同一分支。初步鑒定該海洋真菌TX-M4-1（GenBank OL989330）為曲霉屬sp.（圖2）。菌株生長(zhǎng)一段時(shí)間后進(jìn)一步觀察其形態(tài)特征，菌落呈黃綠色、絨狀，與赤曲霉的形態(tài)特征一致，故鑒定菌株TX-M4-1為赤曲霉[7]。

圖2 TX-M4-1菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹狀關(guān)系圖

3.2 化合物結(jié)構(gòu)鑒定

化合物2：無(wú)色粉末，ESI-MS/301.2 [M＋H]+，分子式C19H24O3；1H-NMR (400 MHz, CDCl3):11.70 (1H, s, 6-OH), 10.08 (1H, s, H-7), 7.02 (1H, s, H-4), 6.44 (1H, d,= 16.3 Hz, H-1′), 5.90 (1H, dt,= 16.2, 6.9 Hz, H-2′), 5.50 (1H, m, H-6′), 5.43 (1H, m, H-5′), 5.29 (1H, m, H-2′′), 3.31 (2H, d,= 7.6 Hz, H-1′′), 2.40 (2H, q,= 6.8 Hz, H-3′), 2.22 (2H, q,= 6.8 Hz, H-4′), 1.76 (3H, s, H-4′′), 1.70 (3H, m, H-5′′), 1.69 (3H, m, H-7′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 196.5 (CH, C-7), 154.7 (C，C-6), 145.0 (C, C-3), 142.1(CH, C-2′), 134.1 (C, C-3′′), 130.6 (C, C-5), 130.4 (CH, C-5′), 126.9 (CH, C-6′), 125.2 (CH, C-4), 123.9 (C, C-2), 121.1 (CH, C-2′′), 121.0 (CH, C-1′), 117.2 (C, C-1), 33.3 (CH2, C-3′), 32.1 (CH2, C-4′), 27.3 (CH2, C-1′′), 25.9 (CH3, C-4′′), 18.0 (CH3, C-5′′), 17.9 (CH3, C-7′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[9]，故鑒定化合物2為2-(1′,5′-庚二烯基)-3,6-二羥基-5-(3-甲基- 2-丁烯基)苯甲醛。

圖3 化合物1的重要1H-1H COSY、HMBC和NOESY相關(guān)

表1 化合物1的1H- (400 MHz, CDCl3) 和13C- (100 MHz, CDCl3) NMR數(shù)據(jù)

Table 1 1H- (400 MHz, CDCl3) and 13C- (100 MHz, CDCl3) NMR data of compound 1

碳位δHδC 1 117.4, C 2 156.0, C 3 128.8, C 46.89 (1H, s)125.8, C 5 145.1, C 6 128.5, C 710.24 (1H, s)195.7, CH 1′2.88 (2H, t, J = 7.7 Hz)23.8, CH2 2′1.60 (2H, m)31.4, CH2 3′1.46 (2H, m)29.4, CH2 4′2.03 (2H, m)32.4, CH2 5′5.40 (1H, overlapped)131.1, CH 6′5.41 (1H, overlapped)125.5, CH 7′1.64 (3H, d, J = 7.2 Hz)18.1, CH3 1′′3.29 (2H, d, J = 7.4 Hz)27.1, CH2 2′′5.28 (1H, m)121.3, CH 3′′ 134.0, C 4′′1.69 (3H, s)17.9, CH3 5′′1.76 (3H, s)26.0, CH3 2-OH11.92 (1H, s)

化合物3：橙紅色固體，ESI-MS/301.2 [M＋H]+，分子式C19H24O3；1H-NMR (400 MHz, CDCl3):11.93 (1H, s, 2-OH), 10.23 (1H, s, 1-CHO), 6.90 (1H, s, H-4), 6.02 (1H, m, H-3′), 5.99 (1H, m, H-4′), 5.59 (1H, m, H-5′), 5.58 (1H, m, H-6′), 5.28 (1H, m, H-2′′), 4.51 (1H, brs, 5-OH), 3.29 (2H, d,= 7.4 Hz, H-1′′), 2.98 (2H, t,= 7.6 Hz, H-1′), 2.34 (2H, q,= 7.7 Hz, H-2′), 1.76 (3H, d,= 1.3 Hz, H-5′′), 1.73 (3H, d,= 6.9 Hz, H-7′), 1.69 (3H, s, H-4′′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3):195.5 (C, 1-CHO), 156.0 (C, C-2), 145.2 (C, C-5), 134.1 (C, C-3′′), 132.2 (CH, C-3′), 131.3 (CH, C-4′), 129.5 (CH, C-6′), 129.1 (C, C-3), 128.5 (CH, C-5′), 127.5 (C, C-6), 126.0 (CH, C-4), 121.3 (CH, C-2′′), 117.4 (C, C-1), 34.4 (CH2, C-2′), 27.2 (CH2, C-1′′), 26.0 (CH3, C-5′′), 24.3 (CH2, C-1′), 18.2 (CH3, C-7′), 17.9 (CH3, C-4′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[10]，故鑒定化合物3為異二氫金色灰綠曲霉素。

化合物4：棕色油狀物；ESI-MS/301.2 [M＋H]+，分子式C19H24O3；1H-NMR (400 MHz, CDCl3):11.78 (1H, s, 2-OH), 10.09 (1H, s, 1-CHO), 7.00 (1H, s, H-4), 6.56 (1H, dd,= 15.9 Hz, H-1′), 6.43 (1H, dd,= 15.6, 10.3 Hz, H-2′), 6.27 (1H, dd,= 10.3, 15.1 Hz, H-3′) , 5.89 (1H, dt,= 15.1, 7.2 Hz, H-4′) , 5.30 (1H, m, H-2′′), 3.32 (2H, d,= 7.2 Hz, H-1′′), 2.15 (2H, q,= 7.3 Hz, H-5′), 1.76 (3H, s, H-5′′), 1.70 (3H, s, H-4′′), 1.47 (2H, sextex,= 7.4 Hz, H-6′), 0.94 (3H, t,= 7.3 Hz, H-7′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3):196.4 (C, 1-CHO), 155.4 (C, C-2), 145.2 (C, C-5), 140.1 (CH, C-2′′), 139.1 (CH, C-4′), 134.2 (C, C-3′′), 130.7 (C, C-3), 129.7 (CH, C-3′), 125.3 (CH, C-4), 124.2 (C, C-6), 121.1 (CH, C-2′′), 119.5 (CH2, C-1′′), 117.2 (C, C-1), 35.0 (CH2, C-5′), 27.4 (CH2, C-1′′), 26.0 (CH3, C-5′′), 22.4 (CH2, C-6′), 17.9 (CH3, C-4), 13.9 (CH3, C-7′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[10]，故鑒定化合物4為二氫金色灰綠曲霉素。

化合物5：紅色固體；ESI-MS/341.3 [M＋K]+，分子式C19H26O3；1H-NMR (400 MHz, CDCl3):11.72 (1H, s, 2-OH), 10.09 (1H, s, 1-CHO), 7.01 (1H, s, H-4), 6.48 (1H, d,= 16.1 Hz, H-1′), 5.98 (1H, dt,= 16.2, 6.8 Hz, H-2′), 5.29 (1H, m, H-2′′), 4.98 (1H, s, 5-OH), 3.31 (2H, d,= 7.2 Hz, H-1), 2.32 (2H, q,= 7.3 Hz, H-3′), 1.75 (3H, s, H-5), 1.69 (3H, s, H-4), 1.51 (2H, quintet,= 7.2 Hz, H-4′), 1.35 (4H, m, H-5′, 6′), 0.91 (3H, t,= 6.6 Hz, H-7′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3):196.5 (C, 1-CHO), 155.2 (C, C-2), 145.0 (C, C-5), 142.8 (CH, C-2′), 134.0 (C, C-3′′), 130.4 (C, C-3), 125.2 (CH, C-4), 124.2 (C, C-6), 121.1 (CH, C-2′′), 120.2 (CH, C-1′), 117.3(C, C-1), 33.6 (CH2, C-3′), 31.6 (CH2, C-5′), 28.9 (CH2, C-4′), 27.4 (CH2, C-1′′), 25.9 (CH3, C-5′′), 22.6 (CH2, C-6′), 17.9 (CH3, C-4′′), 14.1 (CH3, C-7′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[10]，故鑒定化合物5為四氫金色灰綠曲霉素。

化合物6：棕黃色固體；ESI-MS/327.3 [M＋Na]+，分子式C19H28O3；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 11.92 (1H, s, 2-OH), 10.25 (1H, s, 1-CHO), 6.89 (1H, s, H-4), 5.28 (1H, m, H-2), 4.44 (1H, m, 5-OH), 3.29 (2H, d,= 7.4 Hz, H-1′′), 2.88 (2H, t,= 7.7 Hz, H-1′), 1.76 (3H, s, H-5), 1.70 (3H, s, H-4′′), 1.57 (2H, m, H-2′), 1.39 (2H, m, H-3′), 1.30 (2H, m, H-4′), 1.28 (4H, m, H-5′, 6′), 0.88 (3H, t,= 6.8 Hz, H-7′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3):196.5 (C, 1-CHO), 155.2 (C, C-2), 145.0 (C, C-5), 134.0 (CH, C-3′′), 130.4 (C, C-3, 6), 125.2 (CH, C-4), 121.1 (CH, C-2′′), 117.3 (C, C-1), 33.6 (CH2, C-2′), 31.6 (CH2, C-5′), 29.8 (CH2, C-3′), 28.9(CH2, C-4′), 27.4 (CH2, C-1′′), 25.9 (CH3, C-5′′), 24.1 (CH2, C-1′), 22.6 (CH2, C-6′), 17.9 (CH2, C-4′′), 14.1 (CH3, C-7′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[10]，故鑒定化合物6為灰綠曲霉黃色素。

化合物7：白色粉末；ESI-MS414.3 [M＋H]+，分子式C29H50O；1H-NMR (400 MHz, CDCl3):5.35 (1H, brd,= 5.5 Hz, H-6), 3.52 (1H, m, H-3) , 1.01 (3H, s, H-19), 0.92 (3H, m, H-21), 0.86 (3H, m, H-29), 0.84 (3H, m, H-26), 0.82 (3H, m, H-27), 0.68 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3):140.9 (C, C-5), 121.9 (CH, C-6), 72.0 (CH, C-3), 56.9 (CH, C-14), 56.2 (CH, C-17), 50.3 (CH, C-9), 46.0 (CH, C-24), 42.5 (CH2, C-4), 42.5 (C, C-13), 39.9 (CH2, C-12), 37.4 (CH2, C-1), 36.7 (C, C-10), 36.3 (CH, C-20), 34.1 (CH2, C-22), 32.1 (CH2, C-7), 31.8 (CH, C-8), 31.8 (CH2, C-2), 29.3 (CH, C-25), 28.4 (CH2, C-23), 26.2 (CH2, C-16), 24.5 (CH2, C-15), 22.8 (CH2, C-28), 21.2 (CH2, C-11), 20.0 (CH3, C-19), 19.5 (CH3, C-27), 19.2 (CH3, C-26), 18.9 (CH3, C-21), 12.1 (CH3, C-29), 12.0 (CH3, C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[11]，故鑒定化合物7為β-谷甾醇。

化合物8：白色粉末；ESI-MS/409.3[M＋Na]+，分子式C27H46O；1H-NMR (400 MHz, CDCl3):5.35 (1H, m, H-6), 3.52 (1H, m, H-3), 1.01 (3H, s, H-19), 0.92 (3H, m, H-21), 0.86 (3H, m, H-29), 0.84 (3H, m, H-26), 0.82 (3H, m, H-27), 0.68 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3):140.8 (C, C-5), 121.8 (CH, C-6), 71.9 (CH, C-3), 56.9 (CH, C-14), 56.2 (CH, C-17), 50.3 (CH, C-9), 46.0 (C, C-13), 42.3 (CH2, C-4), 39.9 (CH2, C-12), 39.8 (CH2, C-24), 37.4 (CH2, C-1), 36.6 (C, C-10), 36.3 (CH2, C-22), 35.9 (CH, C-20), 34.1 (CH, C-8), 32.0 (CH2, C-2), 31.6 (CH2, C-7), 29.3 (CH, C-25), 28.4 (CH2, C-16), 24.4 (CH2, C-15), 23.2 (CH2, C-23), 22.8 (CH3, C-27), 22.7 (CH3, C-26), 21.2 (CH2, C-11), 19.2 (CH3, C-21), 18.9 (CH3, C-19), 12.0 (CH3, C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[12-14]，故鑒定化合物8為膽固醇。

化合物9：橙紅色粉末；ESI-MS/309.2 [M＋Na]+，分子式C15H10O6；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6):13.13 (1H, s, 4-OH), 12.15 (2H, s, 1, 8-OH), 11.41 (1H, s, 6-OH), 7.11 (1H, brs, H-2), 7.00 (1H, d,= 2.24 Hz, H-5), 6.41 (1H, d,= 2.18 Hz, H-7)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6):186.7 (C, C-9), 186.3 (C, C-10), 167.7 (C, C-6), 164.7 (C, C-8), 156.6 (C, C-1), 155.9 (CH, C-4), 153.6 (C, C-3), 134.4 (C, C-11), 129.0 (C, C-14), 111.5 (CH, C-2), 110.2 (C, C-13), 109.7 (C, C-12), 108.2 (C, C-5), 107.9 (CH, C-7), 15.8 (CH3, C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[15]，故鑒定化合物9為鏈蠕孢素。

化合物10：白色固體；ESI-MS/492.3 [M＋Na]+，分子式C29H37N3O2，1H-NMR (400 MHz, CDCl3):8.38 (1H, brs, NH-1), 7.53 (1H, brs, NH-14), 7.19 (1H, m, H-8), 6.98 (1H, brs, H-4), 6.90 (1H, brs, H-6), 6.05 (1H, dd,= 17.4, 10.6 Hz, H-16), 5.50 (1H, t,= 7.4 Hz, H-26), 5.41 (1H, t,= 7.2 Hz, H-21), 5.28 (1H, d,= 10.6 Hz, H-17a), 5.25 (1H, d,= 17.4 Hz, H-17b), 4.37 (1H, dq,= 7.1, 1.9 Hz, H-12), 3.62 (2H, d,= 7.4 Hz, H-25), 3.46 (2H, d,= 7.3 Hz, H-20), 1.94 (3H, s, H-29), 1.87 (3H, s, H-28), 1.80 (3H, s, H-23), 1.79 (3H, s, H-24), 1.68 (3H, d,= 7.0 Hz, H-30), 1.57 (6H, s, H-18, 19)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3):165.8 (C, C-13), 160.4 (C, C-10), 144.6 (CH, C-16), 143.4 (C, C-2), 135.0 (C, C-5), 133.3 (C, C-27), 132.3 (C, C-7a), 132.0 (C, C-22), 126.6 (C, C-3a), 124.4 (C, C-9), 124.3 (CH, C-21), 123.9 (C, C-7), 123.3 (CH, C-6), 122.9 (CH, C-26), 116.0 (CH, C-4), 113.2 (CH2, C-17), 112.3 (CH, C-8), 103.0 (C, C-3), 51.8 (CH, C-12), 39.3 (C, C-15), 34.6 (CH2, C-20), 31.4 (CH2, C-25), 27.5 (CH3, C-18), 27.4 (CH3, C-19), 25.9 (CH3, C-23), 25.8 (CH3, C-28), 21.0 (CH3, C-30), 18.1 (CH3, C-29), 17.9 (CH3, C-24)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[16]，故鑒定化合物10為脫氫海膽靈。

化合物11：淡黃色粉末；ESI-MS346.2 [M＋Na]+，分子式C19H21N3O2；1H-NMR (400 MHz, CD3OD):7.42 (1H, d,= 7.9 Hz, H-7)，7.24 (1H, d,= 7.8 Hz, H-4), 7.21 (1H, s, H-8), 7.12 (1H, m, H-6), 7.06 (1H, m, H-5), 6.11 (1H, dd,= 17.3, 10.8 Hz, H-17), 5.11 (1H, d,= 10.7 Hz, H-18a ), 5.09 (1H, d,= 17.4 Hz, H-18b), 4.22 (1H, q,= 7.1 Hz, H-12), 1.55 (3H, s, H-19 ), 1.54 (3H, s, H-20 ), 1.53 (3H, d,= 7.0 Hz, H-15)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD):168.7 (C, C-13), 162.2 (C, C-10), 146.2 (CH, C-17), 146.0 (C, C-2), 136.8 (C, C-3a), 127.3 (C, C-7a), 124.7 (C, C-3), 122.6 (CH, C-6), 121.2 (CH, C-5), 119.8 (CH, C-7), 114.4 (CH2, C-18), 112.7 (CH, C-8), 112.6 (CH, C-4), 104.3 (C, C-9), 52.6 (CH, C-12), 40.4 (C, C-16), 28.2 (CH3, C-20), 28.1 (CH3, C-19), 20.7 (CH3, C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[17-18]，故鑒定化合物11為新海膽靈A。

3.3 抗氧化活性測(cè)試

對(duì)化合物進(jìn)行抗氧化活性測(cè)試[19]，樣品濃度為20 μmol/L下化合物1、5和6顯示出較強(qiáng)的抗氧化活性；DPPH自由基清除率分別為61.9%、88.0%和91.9%。陽(yáng)性對(duì)照維生素C的DPPH自由基清除率為76.1%。

3.4 抑菌和腫瘤細(xì)胞毒活性測(cè)試

對(duì)化合物進(jìn)行抗菌活性測(cè)試[20]，結(jié)果顯示化合物對(duì)金黃色葡萄球菌、MRSA、白色念珠菌和香蕉枯萎病菌沒有活性。對(duì)化合物進(jìn)行腫瘤細(xì)胞株HepG2和A549細(xì)胞毒活性測(cè)試，結(jié)果未顯示細(xì)胞毒活性。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)海洋真菌TX-M4-1的次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行了研究，該菌在大米培養(yǎng)基條件下代謝產(chǎn)生11個(gè)化合物（1～11），其中化合物1為新化合物?；衔?、5和6的DPPH自由基清除率分別為61.9%、88.0%和91.9%，具有一定生物活性。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Secondary metabolites from marine-derivedTX-M4-1

WANG Cong, WANG Yu-fei, SUN Jian, WANG Shi-yi, LAN Kun-yan, DU Wei-sheng, KONG Fan-dong, ZHOU Li-man

Key Laboratory of Chemistry and Engineering of Forest Products, State Ethnic Affairs Commission, Guangxi Key Laboratory of Chemistry and Engineering of Forest Products, Guangxi Collaborative Innovation Center for Chemistry and Engineering of Forest Products, Guangxi Minzu University, Nanning 530006, China

To study the secondary metabolites of marine-derivedTX-M4-1.The secondary metabolites were isolated and purified by silica gel column chromatography, gel column chromatography and HPLC methods. The structures of the compounds were identified by UV, IR, MS and NMR. The antimicrobial, antitumor and antioxidant activities of compounds were evaluated by 96-well microtiter plate method, CCK-8 method and DPPH method, respectively.One new benzaldehyde compound and 10 compounds with known structures were isolated from the fermentation products of marine-derivedTX-M4-1. 5′--isotetrahydroauroglaucin (1), 2-(1′,5′-heptadienyl)-3,6-dihydroxy-5-(3-methyl-2-butenyl) benzaldehyde (2), isodihydroauroglaucin (3), dihydroauroglaucin (4), tetrahydroauroglaucin (5), flavoglaucin (6), β-sitosterol (7), cholesterol (8), catenarin (9), dehydroechinulin (10) and neoechinulin A (11), respectively. Compounds 1, 5 and 6 exhibited radical scavenging activity against DPPH with inhibition rates of 61.9%, 88.0% and 91.9% at a DPPH concentration of 20 μmol/L, respectively.Compound 1 is a new benzaldehyde. Compounds 1, 5 and 6 exhibited strong antioxidant activity.

marine-derivedTX-M4-1; benzaldehyde; antioxidant activity; 5′--isotetrahydroauroglaucin; flavoglaucin

R284.1

A

0253 - 2670(2022)18 - 5600 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.18.002

2022-07-17

廣西科技基地和人才專項(xiàng)（桂科AD20297036）；廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2021GXNSFBA220040，2021GXNSFBA075036）；國(guó)家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目（82104034）；廣西民族大學(xué)校級(jí)引進(jìn)人才科研啟動(dòng)項(xiàng)目（2020KJQD09，2021KJQD09）；廣西民族大學(xué)相思湖青年創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（2021RSCXSHQN01）

王 聰，副教授，研究方向?yàn)楹Ｑ笏幬锘瘜W(xué)。E-mail: wangcong123206@163.com

周麗曼，博士，講師，研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物化學(xué)。Tel: 15621369181 E-mail: zhouliman88@126.com

[責(zé)任編輯 王文倩]