血漿微小RNA-126與微小RNA-130對(duì)急性心肌梗死急診經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療術(shù)后的預(yù)后評(píng)估價(jià)值

梁麗艷, 若扎·包拉特江, 劉順民, 王盛芳

(新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院 心血管內(nèi)科, 新疆 烏魯木齊, 830028)

急性心肌梗死是臨床常見的危急重癥，經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療(PCI)是治療該病的有效方法，能夠有效降低病死率及致殘率，但仍有部分患者近期內(nèi)手術(shù)治療效果不佳，出現(xiàn)主要不良心血管事件(MACE)或死亡病例[1]。因此，需要為PCI術(shù)后急性心肌梗死患者探尋一種影響預(yù)后的有效因子，以改善患者預(yù)后。心電圖改變、心肌標(biāo)志物、N端腦鈉肽前體(NT-ProBNP)等能夠評(píng)估急性心肌梗死患者的預(yù)后，但其受飲食、檢測(cè)時(shí)間、運(yùn)動(dòng)等因素的影響[2-3]。血漿微小核糖核酸(miRNA)是一種新發(fā)現(xiàn)的非編碼RNA，對(duì)蛋白質(zhì)無編碼作用，但結(jié)合目的信使調(diào)節(jié)相關(guān)基因表達(dá)在細(xì)胞增殖、分化、凋亡等過程中占據(jù)著重要作用，并能調(diào)控機(jī)體多種生物學(xué)功能[4], 其中miR-126與miR-130是miRNA的重要類型。研究[5-6]表明, miR-126與miR-130參與了腫瘤、炎癥反應(yīng)等疾病的發(fā)生發(fā)展過程。因此，本研究初步分析血漿miR-126與miR-130對(duì)急性心肌梗死急診PCI術(shù)后的預(yù)后診斷價(jià)值，旨為以后臨床預(yù)后評(píng)估提供參考，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月—2021年1月收治的170例急性心肌梗死患者作為研究對(duì)象，其中男102例，女68例; 年齡45～76歲，平均(62.38±3.98)歲; 抬高型急性心肌梗死100例，非抬高型70例; 高血壓88例，糖尿病50例，高脂血癥32例; PCI術(shù)后心功能Killip分級(jí)為Ⅰ級(jí)74例, Ⅱ級(jí)58例, Ⅲ級(jí)38例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，患者自愿參與本研究，并簽署知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn): ① 經(jīng)心電圖、心臟超聲等綜合檢查，符合急性心肌梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]者; ② 無其他心臟病史者; ③ 急性胸痛時(shí)間<12 h, 且自愿行PCI者; ④臨床資料及隨訪資料完整，無脫落、失訪者; ⑤ 患者對(duì)本研究知情，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 合并心力衰竭、心律失常、冠心病等其他心臟病史者; ② 伴腦、肝、腎等重要臟器疾病者; ③ 惡性腫瘤者; ④ 伴免疫系統(tǒng)疾病、結(jié)締組織疾病、血液疾病、急慢性感染者; ⑤ 曾有心臟外科手術(shù)史者。將170例急性心肌梗死患者設(shè)為病例組，將60例無心肌梗死、高血壓、糖尿病等基礎(chǔ)疾病的身體健康體檢者納入對(duì)照組。將術(shù)后30 d發(fā)生MACE的患者納入近期預(yù)后不良組，將未發(fā)生MACE的患者納入近期預(yù)后良好組。出院后患者均通過電話隨訪或到門診復(fù)查，統(tǒng)計(jì)術(shù)后12個(gè)月MACE的發(fā)生情況，將術(shù)后12個(gè)月發(fā)生MACE的患者作為遠(yuǎn)期預(yù)后不良組，未發(fā)生MACE的患者作為遠(yuǎn)期預(yù)后良好組。

1.2 方法

2組受檢者均在入院即刻采集靜脈血5 mL, 置入抗凝分離膠管內(nèi)，離心5 min, 3 000轉(zhuǎn)/min, 采用湘儀TDZ5-W5離心機(jī)，離心半徑為8 cm, 分離后采集血漿，置入無RNA酶離心管，置入-80 ℃冰箱內(nèi)保存待檢。取凍存的血漿，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)血漿miR-126與miR-130水平。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增儀器(Series 4′A2型，賽默飛)，總RNA提取試劑盒(美國(guó)Invitrogen公司)、miRNeasy Mini KiU試劑盒(德國(guó)Qiagen公司)，提取樣本中miRNA，采用紫外分光光度計(jì)測(cè)定miRNA純度，合格樣品A260/A280≥1.80樣品，采用PCR法測(cè)定血漿miR-126與miR-130水平。引物及內(nèi)參引物為U6, miR-126上游引物序列: 5′-GGCTTCGTACCGTGAGTAAT-3′, 下游引物序列: 5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′; miR-130上游引物序列: 5′-GCTTCGGGAGGACATATACTAAAAT-3′, 下游引物序列: 5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′。反應(yīng)體系為95 ℃, 15 s; 退火為60 ℃, 20 s; 延伸70 ℃, 60 s, 連續(xù)40個(gè)循環(huán)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)樣本均設(shè)置復(fù)孔。采用ABI7000 System Software分析研究數(shù)據(jù), Ct值作為樣本表達(dá)量，以2-△△Ct計(jì)算血漿miR-126與miR-130的相對(duì)表達(dá)水平。

1.3 觀察指標(biāo)

① 比較病例組與對(duì)照組患者血漿miR-126與miR-130的相對(duì)表達(dá)水平。② 比較近期預(yù)后不良組與近期預(yù)后良好組患者血漿miR-126與miR-130的相對(duì)表達(dá)水平; 比較遠(yuǎn)期預(yù)后不良組與遠(yuǎn)期預(yù)后良好組患者血漿miR-126與miR-130的相對(duì)表達(dá)水平。③ 記錄急性心肌梗死患者PCI術(shù)后30 d MACE的發(fā)生率，MACE定義為住院或隨訪期間再發(fā)心肌梗死、支架內(nèi)再血栓、靶血管血運(yùn)重建、支架內(nèi)再狹窄、死亡等。④ 急性心肌梗死患者術(shù)后均經(jīng)心臟超聲檢查，記錄左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)。在室內(nèi)質(zhì)控下檢測(cè)血清NT-ProBNP、肌鈣蛋白T(CTnT)水平，分析血漿miR-126與miR-130的相對(duì)表達(dá)水平與LVEF、NT-ProBNP、CTnT的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 2組血漿miR-126與miR-130的相對(duì)表達(dá)水平比較

病例組血漿miR-126相對(duì)表達(dá)水平低于對(duì)照組, miR-130相對(duì)表達(dá)水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見表1。

表1 病例組與對(duì)照組相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)水平比較

2.2 近期不同預(yù)后組和對(duì)照組實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)水平比較

170例急性心肌梗死患者術(shù)后30 d, 無死亡病例，術(shù)后心肌梗死復(fù)發(fā)6例，支架內(nèi)再血栓10例，靶血管血運(yùn)重建4例，支架內(nèi)再狹窄6例，總發(fā)生率為15.29%; 近期預(yù)后不良組患者LVEF低于近期預(yù)后良好組, NT-ProBNP、cTnT表達(dá)水平高于近期預(yù)后良好組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。近期預(yù)后不良組和近期預(yù)后良好組LVEF、NT-ProBNP、cTnT表達(dá)水平與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見表2。

表2 不同組別LVEF、NT-ProBNP、cTnT表達(dá)水平比較

2.3 近期不同預(yù)后組和對(duì)照組血漿miR-126與miR-130的相對(duì)表達(dá)水平比較

近期預(yù)后不良組患者血漿miR-126相對(duì)表達(dá)水平低于近期預(yù)后良好組, miR-130的相對(duì)表達(dá)水平高于近期預(yù)后良好組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。近期預(yù)后不良組和近期預(yù)后良好組血漿miR-126和miR-130相對(duì)表達(dá)水平與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見表3。

表3 不同組別血漿miR-126與miR-130的相對(duì)表達(dá)水平比較

2.4 遠(yuǎn)期不同預(yù)后組和對(duì)照組血漿miR-126與miR-130的相對(duì)表達(dá)水平比較

170例急性心肌梗死患者術(shù)后隨訪1年, 2例術(shù)后因心力衰竭死亡，心肌梗死復(fù)發(fā)10例，支架內(nèi)再血栓12例，靶血管血運(yùn)重建6例，支架內(nèi)再狹窄10例，總發(fā)生率23.53%; 遠(yuǎn)期預(yù)后不良組和遠(yuǎn)期預(yù)后良好組血漿miR-126、miR-130的相對(duì)表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 但2組血漿miR-126、miR-130的相對(duì)表達(dá)水平與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見表4。

表4 遠(yuǎn)期不同預(yù)后患者和對(duì)照組血漿miR-126和miR-130的相對(duì)表達(dá)水平比較

2.5 血漿miR-126和miR-130相對(duì)表達(dá)水平與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析法結(jié)果顯示, miR-126相對(duì)表達(dá)水平與LVEF呈正相關(guān)(r=0.635,P=0.010), 與NT-ProBNP、cTnT呈負(fù)相關(guān)(r=-0.710, -0.495,P=0.004, 0.012); miR-130的相對(duì)表達(dá)水平與LVEF呈負(fù)相關(guān)(r=-0.682,P=0.010), 與NT-ProBNP、cTnT呈正相關(guān)(r=0.672, 0.512,P=0.010, 0.016)。

2.6 血漿miR-126與miR-130的相對(duì)表達(dá)水平對(duì)患者近期、遠(yuǎn)期預(yù)后的診斷效能

血漿miR-126與miR-130的相對(duì)表達(dá)水平對(duì)患者近期預(yù)后有一定診斷效能，血漿miR-126 的曲線下面積(AUC)為0.966, 敏感度為95.8%, 特異度為92.3%, 最佳截?cái)嘀禐?.47; miR-130的AUC為0.764, 敏感度為88.9%, 特異度為61.5%, 最佳截?cái)嘀禐?.86, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=3.128，P=0.018)。血漿miR-126預(yù)測(cè)術(shù)后12個(gè)月MACE預(yù)后的AUC為0.528, 敏感度為85.0%, 特異度為29.2%, 最佳截?cái)嘀禐?.57; miR-130預(yù)測(cè)術(shù)后12個(gè)月MACE預(yù)后的AUC為0.543, 敏感度為70.8%, 特異度為45.0%, 最佳截?cái)嘀禐?.64。術(shù)后12個(gè)月，血漿miR-126和miR-130預(yù)測(cè)MACE預(yù)后的敏感度、特異度低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=0.167,P=0.867), 見圖1、圖2。

3 討 論

PCI是治療急性心肌梗死的主要手段，但患者術(shù)后仍會(huì)出現(xiàn)MACE事件，影響術(shù)后生存質(zhì)量。研究[8]表明，急性心肌梗死與感染密切相關(guān)，降鈣素原(PCT)、NT-ProBNP、cTnT的表達(dá)可有效預(yù)測(cè)患者預(yù)后?；颊哐装Y水平上升，心肌細(xì)胞損傷嚴(yán)重，心室舒縮功能越差，發(fā)生MACE的概率越高。但PCT、cTnT等相關(guān)表達(dá)受諸多因素影響，因此急性心肌梗死的診斷受到一定限制。因此，需探尋一種合理、有效的診斷指標(biāo)以預(yù)測(cè)患者PCI術(shù)后預(yù)后價(jià)值，為以后臨床治療提供參考。

miRNA參與各種基因的表達(dá)、蛋白質(zhì)翻譯及靶RNA調(diào)控過程，并與細(xì)胞增殖、分化及轉(zhuǎn)移等過程有關(guān)，因此miRNA相對(duì)表達(dá)水平對(duì)診斷疾病類型及預(yù)后價(jià)值有一定意義[9-10]。本研究結(jié)果顯示，病例組血漿miR-126相對(duì)表達(dá)水平低于對(duì)照組, miR-130相對(duì)表達(dá)水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); Spearman相關(guān)法分析顯示, miR-126相對(duì)表達(dá)水平與LVEF呈正相關(guān)，與NT-ProBNP、cTnT呈負(fù)相關(guān); miR-130的相對(duì)表達(dá)水平與LVEF呈負(fù)相關(guān)，與NT-ProBNP、cTnT呈正相關(guān)(P<0.05)。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，急性心肌梗死患者血漿miR-126相對(duì)水平降低，miR-130相對(duì)表達(dá)水平增加，且與患者心肌損傷有一定關(guān)系，原因?yàn)閙iR-126是一種內(nèi)皮細(xì)胞特異度miRNA，參與內(nèi)皮細(xì)胞增殖、血管因子生成等過程，并對(duì)血管發(fā)育、血管炎癥反應(yīng)等血管病理、生理等過程起調(diào)節(jié)作用[11]。miR-130通過抑制特異度靶基因的表達(dá)有效調(diào)控血管生成過程，上調(diào)miR-130基因表達(dá)，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的增殖與遷移[12]。心肌梗死患者通常存在的血管內(nèi)皮受損、內(nèi)皮細(xì)胞增殖等情況會(huì)導(dǎo)致血漿miR-126、miR-130相對(duì)表達(dá)異常。浩日瓦等[13]研究指出, miR-126診斷心衰的靈敏度為55%, 特異度為85%, 準(zhǔn)確度為87%, 但對(duì)患者1年預(yù)后的預(yù)測(cè)無重要意義。張海濤等[14]研究指出，冠心病、急性心肌梗死患者miR130a-3p上調(diào)表達(dá)差異顯著，且與心血管疾病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，證實(shí)了血漿miR-126與miR-130可作為診斷心肌梗死新的生物學(xué)標(biāo)志物。

血漿miR-126與miR-130的相對(duì)表達(dá)水平對(duì)患者近期預(yù)后有一定診斷效能，兩者的敏感度、特異度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 但對(duì)患者術(shù)后12個(gè)月MACE預(yù)后評(píng)估的敏感度、特異度低(P>0.05)。因此，血漿miR-126與miR-130相對(duì)表達(dá)水平預(yù)測(cè)患者近期預(yù)后有一定效果，但無法預(yù)測(cè)患者遠(yuǎn)期預(yù)后，原因?yàn)閙iR-126可調(diào)節(jié)機(jī)體血管炎癥反應(yīng)及內(nèi)皮細(xì)胞增殖、分化，若其含量下降，白細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞在血管壁的黏附性加強(qiáng)，導(dǎo)致術(shù)后血栓形成、支架內(nèi)狹窄等現(xiàn)象; 體內(nèi)血管炎癥反應(yīng)加重、平滑肌細(xì)胞顯著增殖會(huì)使miR-130表達(dá)水平升高，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的形成[15-19]。但miR-130、miR-126表達(dá)水平有一定波動(dòng)性，此時(shí)術(shù)后時(shí)間延長(zhǎng)可能使其表達(dá)水平不同，無法作為遠(yuǎn)期預(yù)后的預(yù)測(cè)因子。

綜上所述，血漿miR-126與miR-130對(duì)急性心肌梗死急診PCI術(shù)后近期預(yù)后有一定的評(píng)估價(jià)值，并可作為早期診斷急性心肌梗死的有效指標(biāo)，但血漿miR-126與miR-130不能作為患者遠(yuǎn)期預(yù)后評(píng)估的生物學(xué)標(biāo)志物，具體機(jī)制有待進(jìn)一步探討。此外，本研究病例數(shù)較少，且患者術(shù)后隨訪時(shí)間僅為1年，因此存在一定局限性。另外，患者術(shù)后康復(fù)活動(dòng)、飲食及基礎(chǔ)病癥等是否會(huì)影響血漿miR-126與miR-130的表達(dá)也未進(jìn)行評(píng)價(jià)。因此，需要增加樣本量，探討血漿miR-126與miR-130參與急性心肌梗死發(fā)病及術(shù)后預(yù)后的具體機(jī)制。