• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    核糖體工程技術(shù)選育優(yōu)質(zhì)菌株的研究進(jìn)展

    2022-09-17 14:30:58陳驍昱雷佳樂李佳柯孫文艷章華偉
    發(fā)酵科技通訊 2022年3期
    關(guān)鍵詞:鏈霉素核糖體突變體

    陳驍昱,吳 憂,雷佳樂,李佳柯,孫文艷,章華偉

    (浙江工業(yè)大學(xué) 藥學(xué)院,浙江 杭州 310014)

    微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)豐富且生物活性多樣,在醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用廣泛,是天然藥物先導(dǎo)物的重要來源[1-2],然而野生菌株來源的先導(dǎo)物含量低、組分雜,嚴(yán)重影響其產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。核糖體工程是一種通過靶向核糖體的抗生素引入耐藥性突變來調(diào)節(jié)核糖體成分(核糖體蛋白或rRNA),從而增加微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量的技術(shù),主要以核糖體和RNA聚合酶為靶目標(biāo)進(jìn)行修飾和改造,通過產(chǎn)生抗生素抗性突變誘導(dǎo)微生物核糖體結(jié)構(gòu)的改變,從而引起胞內(nèi)基因表達(dá)以及蛋白合成能力的改變,進(jìn)而影響其次級(jí)代謝產(chǎn)物的生物合成能力。該技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)菌株的選育,如放線菌[3]、桿菌[4-5]和真菌[6]等,不僅能有效提高目標(biāo)先導(dǎo)物的生產(chǎn)效價(jià),而且能高效挖掘新型次級(jí)代謝產(chǎn)物。

    筆者系統(tǒng)梳理了核糖體工程技術(shù)用于選育優(yōu)質(zhì)菌株的相關(guān)研究報(bào)道,綜述了不同誘變方式包括單抗生素誘變、多抗生素誘變和復(fù)合誘變的研究進(jìn)展,為核糖體工程的發(fā)展以及微生物優(yōu)質(zhì)菌株的選育提供參考。

    1 單抗生素誘變

    微生物通常在進(jìn)入生長穩(wěn)定期后開始合成次級(jí)代謝產(chǎn)物,其次級(jí)代謝產(chǎn)物生物合成相關(guān)基因的表達(dá)決定于核糖體,核糖體除表達(dá)基因合成蛋白外,還存在多種調(diào)節(jié)生長代謝的重要位點(diǎn)和多種抗生素結(jié)合位點(diǎn)??股乜剐詸C(jī)制研究表明:如利福平(Rifampicin,Rif)、鏈霉素(Streptomycin,Str)、慶大霉素(Gentamicin,Gen)、巴龍霉素(Paromomycin,Par)、夫西地酸(Fusidicacid,Fus)、新霉素(Neomycin,Neo)、氯霉素(Chloramphenicol,Chl)、四環(huán)素(Tetracycline,Tel)、林可霉素(Lincomycin,Lin)、紅霉素(Erythromycin,Ery)和卡那霉素(Kanamycin,Kan)等抗生素能使微生物產(chǎn)生類似應(yīng)急反應(yīng)的現(xiàn)象,從而改變核糖體結(jié)構(gòu),影響微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物的調(diào)控途徑,并能定向提高目標(biāo)產(chǎn)物合成能力[7-8]。在單抗誘變中,氨基糖苷類和大環(huán)內(nèi)酰胺類抗生素不僅誘變效果好,而且應(yīng)用廣泛。

    1.1 氨基糖苷類

    1.1.1 鏈 霉 素

    鏈霉素是核糖體工程中最常用的抗生素之一,其作用位點(diǎn)通常是30S核糖體(核糖體小亞基)上的rpsL基因,該基因編碼核糖體蛋白S12。Shima等[9]發(fā)現(xiàn)rpsL基因突變導(dǎo)致S12蛋白的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,從而使鏈霉素不能與S12結(jié)合,最終讓突變菌株表現(xiàn)為對(duì)鏈霉素抗性。這種突變機(jī)制同時(shí)會(huì)使核糖體結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定,翻譯的保真度更高[10]。rpsL基因突變不僅激活了變鉛青鏈霉菌(S.lividans)產(chǎn)生放線菌素的基因,而且規(guī)避了天藍(lán)色鏈霉菌(S.coelicolor)中relA和brgA突變以及灰色鏈霉菌(S.griseus)中relC突變的影響。因?yàn)橥ㄟ^研究發(fā)現(xiàn)鏈霉素引起核糖體改變的機(jī)制其實(shí)與其濃度存在一定的關(guān)聯(lián),所以目前鏈霉素引起核糖體改變的機(jī)制主要分為2種:高水平耐藥性是由rpsL突變引起的;而低水平耐藥性是由rsmG突變引起的,rsmG編碼1個(gè)包含SAM結(jié)合基序的16S rRNA甲基轉(zhuǎn)移酶[7]。大量研究表明鏈霉素引起的突變會(huì)提高一些菌株的次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量。Zhuang等[11]采用鏈霉素對(duì)CB03234菌株(Streptomycessp.CB03234)進(jìn)行改良,成功篩選出1株30S核糖體蛋白S12發(fā)生K43N突變的天賜霉素(TNMs)高產(chǎn)鏈霉菌CB03234-S(Streptomycessp.CB03234-S)。在放大發(fā)酵過程中,TNM-A和TNM-A/D的效價(jià)分別提高了45倍和100倍,使TNM-A和TNM-D的制備量超過200 mg;劉華華等[12]采用鏈霉素對(duì)綠色產(chǎn)色鏈霉菌(S.viridochromogenesgs 77)進(jìn)行抗性選育,獲得了1株阿維拉霉素高產(chǎn)突變菌株S.viridochromogenesgs 77-54,其阿維拉霉素的產(chǎn)量為原始菌株的1.8倍,且突變菌株的氣生菌絲呈長直形,較為粗壯,孢子為直徑約1.1 μm×0.6 μm的橢圓形,與出發(fā)菌株區(qū)別明顯;李芹等[13]通過逐步引入高濃度鏈霉素的方法篩選到了1株高產(chǎn)ε-聚賴氨酸(ε-Poly-L-lysine,ε-PL)突變株SS-19(S.albulusSS-19),產(chǎn)量達(dá)(3.13±0.04) g/L,比原始菌株提高了95.63%;韓曉等[14]以海洋來源無活性放線菌野生株HLF-39和HLF-43為出發(fā)菌,分離純化鏈霉素抗性突變株,通過抗腫瘤活性篩選獲得抗腫瘤活性突變株,從HLF-43突變株CHS-21101發(fā)酵物中分離得到2個(gè)該突變株新產(chǎn)抗腫瘤活性產(chǎn)物,并分別鑒定為環(huán)(4-羥脯-亮)二肽和phencomycin,從而拓展藥源放線菌活性菌株新資源。

    1.1.2 慶大霉素

    慶大霉素是一種氨基糖苷類抗生素,其抗性通常是通過菌體的rplF基因發(fā)生突變產(chǎn)生的,rplF基因負(fù)責(zé)編碼30S核糖體中的L6蛋白。L6蛋白位于肽基轉(zhuǎn)移酶中心的氨酰-tRNA結(jié)合位點(diǎn),直接與23S rRNA結(jié)合。當(dāng)微生物菌株的relA基因發(fā)生突變時(shí),雖然菌體不能合成ppGpp,其次級(jí)代謝產(chǎn)物也不能生產(chǎn),但是在relA突變株中引入rplF基因突變,獲得慶大霉素抗性后,發(fā)現(xiàn)突變株在ppGpp合成能力沒有恢復(fù)的情況下也恢復(fù)了產(chǎn)生次級(jí)代謝產(chǎn)物的能力,這說明L6蛋白的突變可不依賴ppGpp啟動(dòng)次級(jí)代謝產(chǎn)物的合成?;谠撛?慶大霉素也逐漸被用于提高微生物菌株的次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量[10]。Wang等[15]通過核糖體工程技術(shù)獲得了具有慶大霉素抗性的楊浦分枝桿菌DSM 45577菌株(MY-G-1),突變菌株顯示出較高的YPMs產(chǎn)量(7.4 mg/L),成功解決了野生型楊浦分枝桿菌因YPMs產(chǎn)量低(1 mg/L)而阻礙進(jìn)一步藥物開發(fā)的問題。

    1.1.3 巴龍霉素

    巴龍霉素的抗性是通過編碼30S核糖體S12蛋白的rpsL基因保守區(qū)域的突變,將其第314位的C突變?yōu)锳,由脯氨酸突變?yōu)楣劝滨0?第320位的C突變?yōu)門,由丙氨酸突變?yōu)槔i氨酸來產(chǎn)生的。鄔洋等[16]在10×MIC(最小抑菌濃度)巴龍霉素濃度下,分離得到糖多孢菌的巴龍霉素抗性突變株54株,其中突變體P-7(S.pogonaP-7)的丁烯基多殺菌素產(chǎn)量提高幅度最大,相比原始菌株提高2.2倍;Liu等[17]使鏈霉菌M-Z18(S.albulusM-Z18)獲得巴龍霉素的抗性,抗性突變體的次級(jí)代謝產(chǎn)物(ε-聚L-賴氨酸)產(chǎn)量達(dá)到了2.59 g/L,較原始菌株產(chǎn)量提高了1.45倍。

    1.2 大環(huán)內(nèi)酰胺類

    利福平是一種大環(huán)內(nèi)酰胺類抗生素,作用于菌體RNA聚合酶的β亞基,能抑制細(xì)菌DNA轉(zhuǎn)錄合成RNA,干擾脫氧核糖核酸及蛋白質(zhì)的合成,從而達(dá)到滅菌的目的。利福平的作用機(jī)制通常是誘導(dǎo)菌體的rpoB基因發(fā)生突變,該突變除了能提高抗生素產(chǎn)量外,還會(huì)使RNA聚合酶(RNAP)亞單位中產(chǎn)生某些RPOBM突變(以及核糖體蛋白S12中產(chǎn)生的某些RPSLS突變),這對(duì)激活“沉默”次級(jí)代謝物生物合成基因有效,最終可能會(huì)導(dǎo)致新抗生素的產(chǎn)生。rpoB突變在促進(jìn)各種放線菌產(chǎn)生抗生素方面廣泛有效,并且其激活了次級(jí)代謝產(chǎn)物生物合成基因簇,這些基因簇是“沉默的”或在普通培養(yǎng)條件下表達(dá)差。rpoB突變在增強(qiáng)抗生素鏈球菌(S.antibiocus)中的放線菌素產(chǎn)量方面有效,但在微小鏈球菌中無效,這表明rpoB突變效應(yīng)的菌株依賴性。該利福平耐藥突變方法的特點(diǎn)是其具有可行性,不僅有助于激活和提高代謝物的產(chǎn)量,而且可用于發(fā)掘代謝物的生物化學(xué)活性[18]。劉正強(qiáng)[19]研究發(fā)現(xiàn)在革蘭氏陰性細(xì)菌熒光假單胞Pf-5(P.protegensPf-5)中引入rpoB基因突變,會(huì)導(dǎo)致突變株的代謝水平與原始菌相比有較大差異,突變株R55(P.protegensR-55)的多個(gè)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量都有一定提高。對(duì)出發(fā)菌株P(guān)f-5和利福平突變菌株進(jìn)行DNA序列分析,發(fā)現(xiàn)7個(gè)抗真菌活性提高的突變菌株都發(fā)生了相同的位點(diǎn)突變,在rpoB基因的保守區(qū)(rif-clusterI)存在點(diǎn)突變(H53IN)。Thong等[20]從11株放線菌出發(fā),共篩選出164個(gè)Rif突變體,并鑒定出1株具有rpoBH437Y突變的TW-R50-13,在TW-R50-13中分離出大量的次級(jí)代謝產(chǎn)物,經(jīng)過結(jié)構(gòu)分析確定其主要成分為3種含甲苯的線性聚酮。使用相同的方法在9種放線菌中共篩選出114Rif突變體,并鑒定出1個(gè)鏈霉菌序列S55-50-5,具有相同的rpoBH437Y突變,經(jīng)鑒定該菌株產(chǎn)生了一種新型的對(duì)受試腫瘤細(xì)胞系具有細(xì)胞毒性和對(duì)金黃色葡萄球菌有抗菌活性的四環(huán)聚酮異吲哚霉素。徐祖?zhèn)サ萚21]采用利福平對(duì)S.albulusFMME-545進(jìn)行改良,最終獲得了次級(jí)代謝產(chǎn)物(ε-聚賴氨酸)產(chǎn)量可達(dá)2.42 g/L的突變菌株,較原始菌株產(chǎn)量提高了1.73倍。核糖體工程常用的抗生素如圖1所示。

    圖1 核糖體工程常用抗生素Fig.1 The most common antibiotics used in ribosome engineering

    2 多抗生素誘變

    近年來,復(fù)合抗生素的使用也成為運(yùn)用核糖體技術(shù)提高菌株的次級(jí)代謝產(chǎn)物的常用方法之一?;诮?jīng)典的核糖體工程研究方法,在菌株中依次引入不同類型的抗生素突變能夠非常有效地提高其抗生素產(chǎn)量,該方法在提高某些菌株的次級(jí)代謝產(chǎn)物方面較使用單一抗生素有著更加顯著的效果,并且在產(chǎn)量的提升作用上具有“疊加效應(yīng)”。此外,誘導(dǎo)聯(lián)合耐藥突變還可能會(huì)產(chǎn)生高頻率的陽性突變。

    2.1 雙抗生素

    為提高野生菌株的代謝產(chǎn)物產(chǎn)量,研究者們基于核糖體工程菌株選育理念,利用2種抗生素抗性篩選的方法獲得高產(chǎn)突變株。Hu等[22]在鏈霉菌突變體中引入慶大霉素和利福平抗性構(gòu)建雙突變體(str-gen和str-rif),進(jìn)一步提高了天藍(lán)色放線菌合成放線菌素的產(chǎn)量(約1.7~2.5倍),并通過Western印跡分析,確定在這些雙突變體中通路特異性調(diào)控蛋白ActII-ORF4的產(chǎn)量顯著增加;吳光耀等[23]以1株經(jīng)過多輪原生質(zhì)體融合和常壓等離子體誘變改造菌S.albulusAS3-14為出發(fā)菌,通過相繼使用鏈霉素和利福平進(jìn)行抗性篩選,獲得了雙重抗性高產(chǎn)突變株S.albulusWG-608,其ε-聚賴氨酸搖瓶產(chǎn)量達(dá)到3.7 g/L,5 L發(fā)酵罐補(bǔ)料分批發(fā)酵ε-聚賴氨酸產(chǎn)量達(dá)到53.0 g/L,較出發(fā)菌株分別提高了42.3%和32.5%;王耀耀等[24]采用鏈霉素和利福平對(duì)東方擬無枝酸菌(Amycolatopsisorientails)進(jìn)行二輪組合誘變,得到一系列具有多樣代謝特點(diǎn)的菌株,其中04-102發(fā)酵水平較原出發(fā)菌株提高45.8%,發(fā)酵水平達(dá)到145.8 ug/mL,且代謝速度和遺傳穩(wěn)定性都得到顯著改善;Campbell等[25]采用利福平和慶大霉素對(duì)多黏擬桿菌OSY-DF(PaenibacilluspolymyxaOSY-DF)進(jìn)行2輪抗性篩選,獲得了效價(jià)比野生型高出5倍的芽孢桿菌素高產(chǎn)菌株OSY-EC,該菌株具有良好的穩(wěn)定性和自發(fā)性。

    2.2 多抗生素

    在雙重抗生素抗性篩選的基礎(chǔ)上,多重抗生素抗性誘變篩選被廣泛使用。Hu等[22]在發(fā)現(xiàn)了天藍(lán)色放線菌雙突變體(Str-Gen和Str-Rif)的高產(chǎn)量后構(gòu)建了三重突變體(Str-Gen-Rif),發(fā)現(xiàn)其具有更高的抗生素生產(chǎn)能力(3.5倍),能夠生產(chǎn)比野生型菌株多48倍的放線菌素,且三重突變體產(chǎn)生的放線菌素持續(xù)時(shí)間(4 d)比單一或雙突變體(2 d)長;Wang等[26]通過對(duì)藍(lán)鏈霉菌A3(S.coelicolorA3)連續(xù)引入多個(gè)耐藥突變來獲得抗生素高產(chǎn)的菌株,并篩選出分別對(duì)7種和8種藥物具有耐藥性的突變體C7和C8,其聚酮類抗生素放線菌素的產(chǎn)量比野生型高出180倍,證明七元和八元耐藥突變能顯著激活抗生素生產(chǎn);湯谷[27]在獲得高產(chǎn)突變菌株T3-145(S.diastatochromogenesT3-145)后,使用鏈霉素、利福平和巴龍霉素對(duì)其進(jìn)行5輪高產(chǎn)四烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素抗性突變株的篩選,得到1株高產(chǎn)突變株G5-59(S.diastatochromogenesG5-59),其四霉素P的產(chǎn)量為3 131 mg/L,是野生型菌株的40倍,四烯菌素B的產(chǎn)量為1 033 mg/L,是野生型菌株的29倍,四霉素A的產(chǎn)量為768.9 mg/L,是野生型菌株的13倍;Shentu等[28]對(duì)S.diastatochromogenes1628引入多重抗性獲得三重抗性突變株SD3145(Str Str Par),發(fā)酵優(yōu)化后其豐加霉素的產(chǎn)量最高達(dá)2 664 mg/L,可用于改善豐加霉素的工業(yè)化生產(chǎn)。

    3 復(fù)合誘變

    單因子誘變雖然有一定的效果,但是往往不夠理想。多因子復(fù)合誘變能從不同角度引起菌株遺傳物質(zhì)的改變,具有“疊加效應(yīng)”[16],將核糖體工程與基因編輯技術(shù)[29]和發(fā)酵優(yōu)化[30]方法相結(jié)合可以更高效地提高誘變效率和菌株產(chǎn)量。

    3.1 雙重復(fù)合法

    將傳統(tǒng)的理化因子誘變育種方法與抗性基因突變篩選結(jié)合,通過大幅度淘汰野生型并濃縮突變型來提高篩選效率,可以在很大程度上克服誘變隨機(jī)篩選的盲目性和不定向性,具有廣譜性、正突變率和增產(chǎn)百分率高等特點(diǎn)[31]。鄭根成等[32]借助基因組重排和核糖體工程兩種育種手段強(qiáng)化ε-PL產(chǎn)生菌的合成能力,最終經(jīng)過4輪基因組重排和4輪核糖體工程連續(xù)選育,獲得1株高產(chǎn)突變株S.albulusGS114,其搖瓶ε-PL產(chǎn)量達(dá)到3.0 g/L,較出發(fā)菌提高了1.7倍;劉娟娟等[33]通過CRISPR-Cas9系統(tǒng)成功構(gòu)建了沒有任何抗性標(biāo)記的新型CAM工程菌株54IA-1(S.spiramyceticus54IA-1)和54IA-2(S.spiramyceticus54IA-2),并進(jìn)一步通過核糖體工程技術(shù)對(duì)構(gòu)建成功的CAM工程菌株進(jìn)行菌種誘變,篩選獲得新型可利霉素(Carrimycin,CAM)高產(chǎn)菌株,為CAM工程菌株的優(yōu)化奠定了基礎(chǔ);喬長晟等[34]以刺糖多孢菌GYLZ 88912為出發(fā)菌,采用常壓室溫等離子體(ARTP)誘變,并通過核糖體工程篩選出1株具有磺胺胍、利福平、鏈霉素和紅霉素多重抗性的高產(chǎn)菌,其多殺菌素的產(chǎn)量為2 361.81 mg/L,較出發(fā)菌株提高了286.71%;Li等[35]采用基因重組與多種抗生素耐藥性相結(jié)合的育種方法,從小單胞桿菌LS-1(BacilluspumilusLS-1)出發(fā),在第三輪重組中獲得了高產(chǎn)菌株GS3-M7,并在后續(xù)發(fā)酵中測得其聚-L-二氨基丁酸產(chǎn)量達(dá)2 316.4 mg/L;鄭明坤等[36]首先通過鏈霉素抗性篩選,獲得1株產(chǎn)抗能較高菌株,以等離子體處理40 s,借助巴龍霉素抗性篩選后,重復(fù)誘變篩選最終獲得1株MicromonosporainyoensisSAAP22,其西索米星合成能力比出發(fā)菌株效價(jià)提高了38.18%,且具有穩(wěn)定的遺傳性能。

    3.2 多重復(fù)合法

    多重復(fù)合法可更有效地進(jìn)行誘變并獲得目標(biāo)菌株。石漫漫等[37]以通過常壓室溫等離子體誘變篩選出的高產(chǎn)游動(dòng)放線菌為出發(fā)菌株,首先進(jìn)行紫外誘變并聯(lián)合核糖體工程進(jìn)行誘變;然后進(jìn)行發(fā)酵復(fù)篩;最后得到的游動(dòng)放線菌的雷帕霉素產(chǎn)量可達(dá)到589.79 mg/L,較出發(fā)菌株的產(chǎn)量256.86 mg/L提高了129.61%,且遺傳穩(wěn)定性良好。Tong等[38]通過對(duì)維吉尼亞鏈霉菌進(jìn)行紫外線照射和微波照射產(chǎn)生起始突變體群體,再通過連續(xù)5輪基因組重組聯(lián)合鏈霉素耐藥性篩選,獲得了基因表達(dá)穩(wěn)定的菌株G5-103(S.virginiaeG5-103),其鏈霉菌維吉霉素(VGM)產(chǎn)量達(dá)251 mg/L,是野生型菌株CICC11013(S.virginiaeCICC11013)的11.6倍。王欣榮等[39]以游動(dòng)放線菌SIIA-1602(ActinoplanesSIIA-1602)作為出發(fā)菌株,將NTG誘變、核糖體工程育種和常壓室溫等離子體方法結(jié)合,篩選得到突變株ASN-256(ActinoplanesASN-256),發(fā)酵效價(jià)達(dá)到615 μg/mL,比出發(fā)菌株提高了55.7%。Li等[40]結(jié)合紫外線誘變、核糖體工程以及發(fā)酵優(yōu)化等,從鏈霉菌DengpaensisXZHG99T出發(fā)獲得了4個(gè)鏈霉素突變體,并通過基因篩選、HPLC/LC-MS分析后獲得高產(chǎn)菌株,其拉貝霉素和沙奎霉素B1的最大效價(jià)分別達(dá)到15.7,39.9 mg/L,比XZHG99T的初始效價(jià)分別高出約8倍(拉貝霉素)和11倍(沙奎霉素B1)。近5年來利用核糖體工程技術(shù)提高目標(biāo)產(chǎn)物效價(jià)的研究情況如表1所示。

    表1 利用核糖體工程技術(shù)提高目標(biāo)產(chǎn)物效價(jià)情況表(2017—2021年)

    4 結(jié)論與展望

    核糖體工程技術(shù)操作雖然簡單且應(yīng)用廣泛,但仍然存在許多不足,主要表現(xiàn)為2個(gè)方面:一是相較于傳統(tǒng)的物理和化學(xué)誘變方法,核糖體工程作用靶點(diǎn)雖然更加明確,但仍然存在著一定的隨機(jī)性,相同的突變對(duì)不同的產(chǎn)物也可能有相反的影響,因此,不可避免地需要進(jìn)行繁雜且冗長的抗性誘變以及篩選等;二是目前大多數(shù)抗生素的作用靶點(diǎn)和具體改變微生物次級(jí)代謝能力的機(jī)制仍比較模糊,缺少系統(tǒng)的相關(guān)研究和機(jī)理模型,導(dǎo)致核糖體工程效率較低。因此,核糖體工程技術(shù)仍有待進(jìn)一步的發(fā)展完善,可通過發(fā)掘更多可用抗生素、深入解析抗生素的作用機(jī)制及確定對(duì)應(yīng)的作用靶點(diǎn)、利用菌株基因組信息為指導(dǎo)快速篩選目標(biāo)突變菌株等方法來實(shí)現(xiàn)。在后基因組時(shí)代,分析技術(shù)得到了廣泛應(yīng)用,越來越多微生物合成次級(jí)代謝物的巨大潛力被發(fā)現(xiàn),綜合運(yùn)用核糖體工程、基因工程和生物信息學(xué)等技術(shù)必將促進(jìn)優(yōu)質(zhì)菌株的高效選育,并提高其次級(jí)代謝產(chǎn)物的合成能力。

    猜你喜歡
    鏈霉素核糖體突變體
    核糖體成熟因子RimP、Era和RimJ的研究進(jìn)展
    液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定葡萄中鏈霉素和雙氫鏈霉素
    色譜(2020年12期)2020-11-02 01:39:34
    核糖體生物合成與腫瘤的研究進(jìn)展
    例析翻譯過程中核糖體移動(dòng)方向的判斷
    CLIC1及其點(diǎn)突變體與Sedlin蛋白的共定位研究
    擬南芥干旱敏感突變體篩選及其干旱脅迫響應(yīng)機(jī)制探究
    以CdTe量子點(diǎn)為熒光探針測定黃瓜中鏈霉素的殘留量
    Survivin D53A突變體對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響
    磷酸三酯酶突變體H23A的真核表達(dá)及性質(zhì)表征
    鏈霉素人工抗原及多克隆抗體的制備與鑒定
    大陆偷拍与自拍| 精品无人区乱码1区二区| 桃色一区二区三区在线观看| 一级毛片精品| 国产精品电影一区二区三区| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久草成人影院| 精品一区二区三区四区五区乱码| 操美女的视频在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 欧美黄色淫秽网站| 中出人妻视频一区二区| 免费av中文字幕在线| 国产成人av激情在线播放| 一级毛片高清免费大全| 亚洲av成人一区二区三| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 久久婷婷成人综合色麻豆| 日本 av在线| 日韩视频一区二区在线观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 精品一区二区三区av网在线观看| 一区二区三区激情视频| av欧美777| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 一级片'在线观看视频| 免费av中文字幕在线| 少妇的丰满在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 三级毛片av免费| 在线观看免费午夜福利视频| 国产精品一区二区免费欧美| 欧美亚洲日本最大视频资源| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产区一区二久久| 国产成+人综合+亚洲专区| 好男人电影高清在线观看| 宅男免费午夜| 国产精华一区二区三区| 日本免费a在线| 久久久久国内视频| 久久伊人香网站| 色老头精品视频在线观看| 亚洲成人精品中文字幕电影 | 午夜亚洲福利在线播放| 精品日产1卡2卡| 国产成+人综合+亚洲专区| 免费看a级黄色片| 视频区欧美日本亚洲| 两性夫妻黄色片| 黄片播放在线免费| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 亚洲成av片中文字幕在线观看| a在线观看视频网站| 成人18禁在线播放| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 中文字幕色久视频| 一二三四在线观看免费中文在| 99re在线观看精品视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 欧美黄色片欧美黄色片| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 后天国语完整版免费观看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| xxx96com| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 激情视频va一区二区三区| 村上凉子中文字幕在线| 欧美黄色片欧美黄色片| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产有黄有色有爽视频| 美女高潮到喷水免费观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 亚洲人成电影免费在线| 国产激情久久老熟女| 一区二区三区国产精品乱码| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 少妇粗大呻吟视频| 色在线成人网| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲第一青青草原| 91成年电影在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 午夜老司机福利片| 超色免费av| 欧美日韩乱码在线| 一夜夜www| 久久这里只有精品19| 久久草成人影院| 99久久精品国产亚洲精品| 国产精品野战在线观看 | 99国产精品免费福利视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 51午夜福利影视在线观看| 久久精品亚洲av国产电影网| 免费不卡黄色视频| 热99re8久久精品国产| 黄色a级毛片大全视频| 男男h啪啪无遮挡| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲成人免费av在线播放| 午夜福利一区二区在线看| 成人免费观看视频高清| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 免费观看精品视频网站| 精品高清国产在线一区| 在线观看免费高清a一片| 久久精品91蜜桃| 亚洲成人精品中文字幕电影 | 18禁黄网站禁片午夜丰满| 首页视频小说图片口味搜索| 精品久久蜜臀av无| 亚洲精品久久午夜乱码| 热99国产精品久久久久久7| 激情视频va一区二区三区| 午夜免费成人在线视频| 国产一区二区在线av高清观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 欧美日韩视频精品一区| 欧美一级毛片孕妇| 91精品国产国语对白视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 日韩精品中文字幕看吧| 不卡av一区二区三区| 在线观看www视频免费| 日韩成人在线观看一区二区三区| 免费在线观看完整版高清| 国产伦人伦偷精品视频| tocl精华| 国产精品久久电影中文字幕| 精品高清国产在线一区| 成人特级黄色片久久久久久久| 在线视频色国产色| videosex国产| 国产精华一区二区三区| e午夜精品久久久久久久| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 久久久久久久久久久久大奶| 国产有黄有色有爽视频| 成人av一区二区三区在线看| 好男人电影高清在线观看| 国产高清激情床上av| 国产免费现黄频在线看| 国产成人精品在线电影| 日韩欧美免费精品| 一区二区三区精品91| 国产国语露脸激情在线看| 正在播放国产对白刺激| 老司机亚洲免费影院| 韩国精品一区二区三区| 国产91精品成人一区二区三区| 久久久久久久久久久久大奶| 桃色一区二区三区在线观看| 男男h啪啪无遮挡| 精品国产亚洲在线| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 女同久久另类99精品国产91| 久久中文字幕人妻熟女| 精品第一国产精品| 亚洲少妇的诱惑av| 超色免费av| 男男h啪啪无遮挡| 男女下面进入的视频免费午夜 | 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 电影成人av| 我的亚洲天堂| 亚洲国产精品999在线| 高清毛片免费观看视频网站 | 18禁国产床啪视频网站| 日本vs欧美在线观看视频| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲熟妇熟女久久| 最新在线观看一区二区三区| 成人特级黄色片久久久久久久| 91成年电影在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久久久久大精品| 欧美中文综合在线视频| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 成熟少妇高潮喷水视频| 18禁观看日本| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 又黄又爽又免费观看的视频| 91精品三级在线观看| 桃色一区二区三区在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 日本免费a在线| 两个人看的免费小视频| 国产又爽黄色视频| 精品无人区乱码1区二区| 在线观看66精品国产| 久久久国产精品麻豆| av网站在线播放免费| 动漫黄色视频在线观看| 极品教师在线免费播放| 久久人妻av系列| 欧美日本亚洲视频在线播放| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 成人永久免费在线观看视频| 一二三四社区在线视频社区8| 99久久综合精品五月天人人| 不卡一级毛片| 一夜夜www| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲精品一区av在线观看| 麻豆av在线久日| 精品卡一卡二卡四卡免费| 日本 av在线| 精品熟女少妇八av免费久了| 一级黄色大片毛片| 亚洲av熟女| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲激情在线av| 国产97色在线日韩免费| 丰满饥渴人妻一区二区三| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲伊人色综图| 满18在线观看网站| 最近最新中文字幕大全电影3 | 久久人妻av系列| 韩国精品一区二区三区| 成年人黄色毛片网站| 老司机深夜福利视频在线观看| 亚洲av美国av| 99久久综合精品五月天人人| 99久久人妻综合| 在线观看午夜福利视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产高清激情床上av| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 丰满饥渴人妻一区二区三| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 精品久久久久久,| 麻豆国产av国片精品| 757午夜福利合集在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看| 正在播放国产对白刺激| 一a级毛片在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 久久久久久久精品吃奶| 黑人操中国人逼视频| 99精品欧美一区二区三区四区| 少妇的丰满在线观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 老鸭窝网址在线观看| 在线国产一区二区在线| 91精品三级在线观看| 亚洲avbb在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 在线观看免费午夜福利视频| 超碰97精品在线观看| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 一级毛片精品| 免费高清视频大片| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲欧美日韩无卡精品| 女警被强在线播放| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 日本a在线网址| 看片在线看免费视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 性欧美人与动物交配| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 宅男免费午夜| 天堂影院成人在线观看| av在线播放免费不卡| 国产麻豆69| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲一区二区三区欧美精品| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 90打野战视频偷拍视频| 日韩大尺度精品在线看网址 | 成人永久免费在线观看视频| 国产91精品成人一区二区三区| 色综合欧美亚洲国产小说| 老熟妇仑乱视频hdxx| 一边摸一边抽搐一进一小说| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲黑人精品在线| 亚洲色图av天堂| 一个人免费在线观看的高清视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 又大又爽又粗| 日韩国内少妇激情av| 嫩草影院精品99| 啦啦啦在线免费观看视频4| 国产欧美日韩一区二区三| 中出人妻视频一区二区| 老司机靠b影院| 免费看十八禁软件| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 性色av乱码一区二区三区2| 国产成人免费无遮挡视频| 黄片小视频在线播放| 亚洲avbb在线观看| 午夜a级毛片| 夜夜夜夜夜久久久久| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 日韩成人在线观看一区二区三区| 最新在线观看一区二区三区| 国产野战对白在线观看| 欧美中文日本在线观看视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| e午夜精品久久久久久久| 一区二区三区激情视频| 两性夫妻黄色片| a级毛片黄视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 咕卡用的链子| 国产有黄有色有爽视频| 高清欧美精品videossex| 女性生殖器流出的白浆| 日韩大尺度精品在线看网址 | 大香蕉久久成人网| 女性被躁到高潮视频| 精品国产美女av久久久久小说| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 欧美在线一区亚洲| 一二三四在线观看免费中文在| 免费观看人在逋| 两个人看的免费小视频| 国产精品影院久久| 久久中文看片网| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲欧美激情综合另类| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲片人在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 大码成人一级视频| 97人妻天天添夜夜摸| 在线观看免费视频网站a站| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 亚洲色图综合在线观看| 波多野结衣av一区二区av| 国产精华一区二区三区| 国产精品久久久久成人av| 免费在线观看完整版高清| 国产精品亚洲av一区麻豆| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲中文av在线| 久久久久国产一级毛片高清牌| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲av电影在线进入| 级片在线观看| 午夜激情av网站| 99re在线观看精品视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产黄a三级三级三级人| 欧美久久黑人一区二区| 国产成年人精品一区二区 | 国产主播在线观看一区二区| 国产97色在线日韩免费| 欧美亚洲日本最大视频资源| 在线观看免费午夜福利视频| 99久久人妻综合| a在线观看视频网站| 欧美成人午夜精品| 男人的好看免费观看在线视频 | 亚洲一区二区三区欧美精品| 久久精品91蜜桃| 欧美精品一区二区免费开放| 老司机靠b影院| av福利片在线| 97碰自拍视频| 欧美黄色淫秽网站| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产精品 欧美亚洲| 另类亚洲欧美激情| 最新美女视频免费是黄的| 国产91精品成人一区二区三区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 欧美黄色淫秽网站| 午夜a级毛片| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 久热这里只有精品99| 高清在线国产一区| 欧美激情 高清一区二区三区| 9色porny在线观看| 国产精品日韩av在线免费观看 | 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 欧美激情 高清一区二区三区| 大码成人一级视频| 999久久久精品免费观看国产| 美女午夜性视频免费| 桃红色精品国产亚洲av| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产三级黄色录像| www.熟女人妻精品国产| 亚洲伊人色综图| 两性夫妻黄色片| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 99精国产麻豆久久婷婷| 级片在线观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 精品一区二区三卡| aaaaa片日本免费| 妹子高潮喷水视频| 中国美女看黄片| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 露出奶头的视频| xxx96com| 午夜福利一区二区在线看| 91成人精品电影| 国产成人av教育| 国产精品影院久久| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲精品一二三| 日韩大尺度精品在线看网址 | 国产国语露脸激情在线看| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 精品无人区乱码1区二区| 波多野结衣av一区二区av| 久久久国产一区二区| 久久天堂一区二区三区四区| 精品国产乱子伦一区二区三区| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 午夜91福利影院| 满18在线观看网站| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 亚洲五月色婷婷综合| 一区在线观看完整版| 大型黄色视频在线免费观看| 国产亚洲欧美98| 国产一区在线观看成人免费| 国产片内射在线| 国产精品二区激情视频| 在线观看舔阴道视频| 黄频高清免费视频| 午夜两性在线视频| 99久久国产精品久久久| 国产又色又爽无遮挡免费看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产精品日韩av在线免费观看 | 国产亚洲精品久久久久5区| 国产极品粉嫩免费观看在线| a级毛片黄视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 91老司机精品| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 两人在一起打扑克的视频| 999久久久国产精品视频| 91国产中文字幕| 又紧又爽又黄一区二区| 中文字幕人妻丝袜制服| 看片在线看免费视频| 亚洲久久久国产精品| 久久影院123| 少妇被粗大的猛进出69影院| 婷婷丁香在线五月| 久久国产乱子伦精品免费另类| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 大型黄色视频在线免费观看| 真人一进一出gif抽搐免费| 麻豆成人av在线观看| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 久久久久久久午夜电影 | 午夜福利在线观看吧| 国产精品国产高清国产av| 国产亚洲精品久久久久5区| 看黄色毛片网站| avwww免费| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 成年人免费黄色播放视频| 伦理电影免费视频| 美女高潮到喷水免费观看| 日韩国内少妇激情av| 高清毛片免费观看视频网站 | 午夜精品在线福利| 亚洲成人免费av在线播放| 在线播放国产精品三级| 亚洲精品粉嫩美女一区| 女性被躁到高潮视频| 国产精华一区二区三区| 男女午夜视频在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 五月开心婷婷网| 中文字幕精品免费在线观看视频| 桃红色精品国产亚洲av| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产亚洲欧美在线一区二区| 欧美不卡视频在线免费观看 | 国产xxxxx性猛交| 最新美女视频免费是黄的| 午夜福利在线免费观看网站| 欧美日韩av久久| 99香蕉大伊视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久久久久久久免费视频了| 久久人妻熟女aⅴ| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲人成伊人成综合网2020| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 亚洲一区二区三区色噜噜 | 12—13女人毛片做爰片一| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产欧美日韩一区二区三| 看黄色毛片网站| 日韩人妻精品一区2区三区| 12—13女人毛片做爰片一| 婷婷丁香在线五月| 亚洲av成人av| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 在线观看免费高清a一片| 日韩av在线大香蕉| 大型黄色视频在线免费观看| 夫妻午夜视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 激情在线观看视频在线高清| 精品熟女少妇八av免费久了| 午夜a级毛片| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 男女下面插进去视频免费观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| a级片在线免费高清观看视频| 黑人操中国人逼视频| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 香蕉久久夜色| 成人手机av| 国产精品久久久av美女十八| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 精品国产乱码久久久久久男人| 999久久久精品免费观看国产| 中文字幕色久视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 久久伊人香网站| 国产精品国产av在线观看| 日本三级黄在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 欧美中文综合在线视频| 午夜a级毛片| 国产激情久久老熟女| 亚洲国产精品sss在线观看 | 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久中文字幕一级| 99国产精品一区二区三区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 国产一区在线观看成人免费| 久久久久国产一级毛片高清牌| 日本 av在线| 91大片在线观看| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲av成人一区二区三| 黄频高清免费视频| av免费在线观看网站| 这个男人来自地球电影免费观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 热re99久久国产66热| 精品国产乱码久久久久久男人| 色老头精品视频在线观看| 久久性视频一级片| 99国产极品粉嫩在线观看| 成人亚洲精品av一区二区 | 久久国产亚洲av麻豆专区| 麻豆av在线久日| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲五月天丁香| 国产精品影院久久| 精品久久久久久久久久免费视频 | 9191精品国产免费久久| 91国产中文字幕| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产激情欧美一区二区| 麻豆av在线久日| 亚洲成人精品中文字幕电影 | 精品乱码久久久久久99久播| 国产伦一二天堂av在线观看| 久9热在线精品视频| 另类亚洲欧美激情| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 日韩有码中文字幕| 1024香蕉在线观看| 又黄又爽又免费观看的视频| 精品国产一区二区久久| 亚洲男人天堂网一区| 曰老女人黄片| 操美女的视频在线观看| 99国产精品免费福利视频| 97人妻天天添夜夜摸| 成人国语在线视频|