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    Ghrelin基因多態(tài)性與多囊卵巢綜合征的相關(guān)性

    2022-09-17 14:15王曉孟屈鳳祥王丹趙敏徐琳
    關(guān)鍵詞:等位基因多態(tài)性基因型

    王曉孟,屈鳳祥,王丹,趙敏,徐琳

    (青島大學(xué)附屬醫(yī)院,山東 青島 266003 1 產(chǎn)科; 2 兒科)

    多囊卵巢綜合征(PCOS)為一種常見內(nèi)分泌紊亂和代謝性疾病,其患病率為5%~10%[1]。PCOS臨床表現(xiàn)為高雄激素血癥、稀發(fā)排卵和無排卵、胰島素抵抗、肥胖、血脂紊亂等[2]。超過50%的PCOS病人表現(xiàn)為肥胖,肥胖可使胰島素抵抗進行性發(fā)展,從而加重高雄激素血癥。而肥胖型PCOS女性存在更為嚴(yán)重的內(nèi)分泌激素紊亂和代謝功能異常[3]。Ghrelin是從胃組織中分離出的生長素釋放肽,主要來自胃黏膜A或X/A樣細胞[4-6],在正常組織中表達,其作用除了促進生長激素釋放,還可調(diào)節(jié)能量代謝并影響胰腺的內(nèi)分泌功能和葡萄糖代謝。研究表明,Ghrelin基因多態(tài)性與PCOS病人代謝緊密相關(guān)[7]。目前關(guān)于PCOS的確切發(fā)病機制尚不清楚,但越來越多的證據(jù)表明多種遺傳和環(huán)境因素在其發(fā)病中發(fā)揮了重要作用[8]。本研究對Ghrelin基因多態(tài)性與PCOS的相關(guān)性進行探討,以期為PCOS的個性化治療提供理論依據(jù)。

    1 資料與方法

    1.1 研究對象

    2017年12月—2018年7月,選擇我院婦產(chǎn)科確診的PCOS病人230例作為研究對象(PCOS組),所有病人均符合2003年鹿特丹制定的PCOS診斷標(biāo)準(zhǔn)[9-10]。另選擇同期與PCOS組年齡匹配、因輸卵管因素就診的月經(jīng)規(guī)則、基礎(chǔ)體溫雙相不孕癥婦女163例作為對照組。所有參與者3個月內(nèi)無其他激素類藥物應(yīng)用史并排除糖尿病、高血壓以及內(nèi)分泌、肝腎、心腦血管等疾病。本研究由我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn),并取得研究對象知情同意。

    1.2 研究方法

    1.2.1標(biāo)本收集 采集受試對象月經(jīng)周期第3~6天外周靜脈血3 mL,月經(jīng)不規(guī)律者在B超檢查未見優(yōu)勢卵泡時采血,將血標(biāo)本置于EDTA抗凝管中,于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.2DNA的提取 使用血液基因組DNA提取試劑盒(天根生化科技(北京)有限公司)提取DNA。

    1.2.3引物設(shè)計與合成 應(yīng)用Primer 3軟件針對目的基因全長進行特異性多重引物設(shè)計,引物合成委托生工生物工程(上海)股份有限公司完成。

    1.2.4多重PCR擴增目的基因及測序 PCR反應(yīng)擴增條件:94 ℃預(yù)變性3 min,95 ℃變性30 s,58 ℃退火30 s,72 ℃延伸90 s,72 ℃延伸5 min,共30個循環(huán)。將PCR產(chǎn)物進行電泳檢測。根據(jù)多重PCR重數(shù)確定稀釋小試樣本數(shù),然后在Illumina HiSeq PE150(Pair end 150bp)平臺上進行雙末端測序(翼和生物有限公司,上海)。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

    2 結(jié) 果

    2.1 兩組一般資料比較

    兩組年齡和睪丸素(T)、催乳素(PRL)、雌二醇(E2)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、促黃體生成素(LH)、腰臀比(WHR)、促卵泡激素(FSH)水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.486~12.252,P<0.001)。 見表1。

    表1 兩組一般資料比較

    2.2 Ghrelin基因多態(tài)性分布

    PCOS組與對照組Ghrelin基因rs55821288位點基因型頻率分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.584,OR=1.439,95%CI=1.026~2.020,P<0.05)。兩組等位基因分布頻率比較差異亦有顯著意義(χ2=4.337,OR=1.420,95%CI=1.020~1.976,P<0.05)。Hardy-Weinberg遺傳平衡分析顯示,基因rs55821288位點等位基因頻率達到遺傳平衡,具有群體代表性。見表2。

    2.3 基因模型分析

    加性遺傳模型分析顯示,AA基因型者PCOS發(fā)病風(fēng)險明顯低于GG基因型者(χ2=6.920,OR=4.025,95%CI=1.331~12.178,P<0.05);隱性遺傳模型分析顯示,GG基因型者PCOS發(fā)病風(fēng)險高于GA+AA基因型者(χ2=6.481,OR=3.786,95%CI=1.269~11.295,P<0.05);而顯性遺傳模型分析顯示,GG+GA基因型與AA基因型PCOS的發(fā)病風(fēng)險比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

    表2 兩組rs55821288位點等位基因、基因型及遺傳模型分布比較(例(χ/%))

    3 討 論

    目前研究顯示,Ghrelin與多種疾病有關(guān)系,包括肥胖、胰島素抵抗、代謝綜合征和癌癥等[11-14]。此外,Ghrelin可能影響PCOS病人高雄激素分泌和顆粒細胞的增殖、分化和凋亡等[15]。目前,關(guān)于Gh-relin基因多態(tài)性與PCOS的關(guān)系尚不清楚。雖然尚未發(fā)現(xiàn)Ghrelin基因位點與PCOS發(fā)病機制直接相關(guān),但Ghrelin在PCOS病人代謝或PCOS發(fā)病機制中的作用不容忽視[16]。越來越多的研究表明,PCOS的風(fēng)險是由SNPs的協(xié)同和加性效應(yīng)引起的。Ghrelin基因具有異質(zhì)性,在不同的種族中具有不同的位點。眾所周知,環(huán)境和遺傳因素可以共同影響疾病的發(fā)展和發(fā)生。為了更好地闡明Ghrelin基因多態(tài)性與PCOS的相關(guān)性,研究Ghrelin基因在不同人群中的表達具有重要意義。

    Ghrelin基因rs55821288位點位于第4內(nèi)含子,有A和G兩種等位基因。目前關(guān)于rs55821288位點與PCOS關(guān)系的報道較少。本文研究了Ghrelin基因rs55821288位點多態(tài)性與PCOS的相關(guān)性,結(jié)果顯示,PCOS組和對照組rs55821288位點等位基因頻率符合Hardy-Weinberg平衡定律,樣本具有代表性;兩組Ghrelin基因rs55821288位點G和A基因頻率差異有統(tǒng)計學(xué)意義,等位基因G的PCOS發(fā)生風(fēng)險高于等位基因A,提示G等位基因可能是PCOS發(fā)病的風(fēng)險因素。

    綜上所述,Ghrelin基因rs55821288位點多態(tài)性與PCOS的發(fā)生有關(guān),等位基因G可能是PCOS的易感基因。本文研究局限性:①本研究樣本量較??;②研究只在中國漢族人群中進行,為了確定Ghrelin基因rs55821288位點與PCOS發(fā)病的相關(guān)性,還需要進一步研究內(nèi)含子區(qū)域各基因位點之間的相互關(guān)聯(lián)是否導(dǎo)致了不同種族PCOS的發(fā)生。本文結(jié)果可為PCOS的基因預(yù)測和靶向治療提供一定的理論依據(jù)。

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