歐李愈傷組織誘導(dǎo)與成苗研究※

●李月勝 陳申寬 牟玉杰 張赭苒

（1.扎蘭屯職業(yè)學(xué)院 內(nèi)蒙古 扎蘭屯 162650；2.呼倫貝爾科技特派員創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)協(xié)會 內(nèi)蒙古 呼倫貝爾 021000）

歐李果實有紅、紫、黃三種顏色，成熟果實色澤艷麗，味道獨特，酸甜適度，是近幾年城市高檔果品中的佼佼者。歐李富含大量天然活性鈣，易被人體吸收，鈣質(zhì)利用率高，是補鈣人群的最佳果品。歐李是傳統(tǒng)中藥歐李仁的主要原植物，每千克售價近百元。歐李仁是一種常用中藥，已有2000多年的使用歷史。歐李仁含苦杏仁苷、脂肪油、李苷等，性平，味辛、苦，對水腫、便秘、腸胃疾病有療效；歐李有利尿、緩瀉作用；歐李仁酊劑對于高血壓有顯著療效；李苷有明顯的瀉下作用。民間偏方采用歐李根來治療脈管炎和靜脈曲張疾病，有較好的治療作用[1]。

歐李在其適于生存的地區(qū)抗旱能力較強。生長季遇干旱少雨時，因其能儲蓄水分，所以能抵御旱情。歐李葉片含水量很高，自身保水力強，歐李葉片小，氣孔密度大，但是單個氣孔較小，不易散失水分。在干旱少雨季節(jié)，枝干頂端生長速度減緩，促使歐李根部產(chǎn)生大量的基部萌生芽，產(chǎn)生的萌生芽不萌發(fā)。當(dāng)雨量充沛時萌生芽形成地下萌條，在土壤中延伸，形成大量的根狀莖，或者在地表形成獨立的歐李小苗。這一特性使歐李的抗旱能力大大增強[2]。

1 歐李組織培養(yǎng)研究進展

歐李常見的繁殖方法主要有播種、扦插、分蘗和嫁接，但播種繁殖比較困難，分株繁殖系數(shù)又比較低，嫩枝扦插成活率也不高。

關(guān)于歐李組培繁殖的試驗研究的報道較少，特別是關(guān)于愈傷組織誘導(dǎo)的報道。歐李愈傷組織誘導(dǎo)的外植體一般可以選擇莖尖、莖段和葉片，并且是新生的莖葉效果較好；如選擇根段需是無菌苗的幼嫩根段。目前，查閱文獻歐李組培廣泛選用Anderson、MS、WPM、Anderson的改良MS和Read這5種培養(yǎng)基。這5種培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)含量均不相同，各元素配比差異很大。在歐李組培中具體選用哪種培養(yǎng)基，需考慮歐李的種、品種及外植體，可通過培養(yǎng)基篩選決定。關(guān)于植物生長調(diào)節(jié)劑的選用及比例，因品種差異，生長調(diào)節(jié)劑的效果也不相同，因此在組織培養(yǎng)中應(yīng)當(dāng)仔細觀察比較，ZT，6-BA和細胞分裂素在歐李組培植物生長調(diào)節(jié)劑中應(yīng)用較多，噻苯隆也被廣泛應(yīng)用于歐李的組織培養(yǎng)。由實踐可知，6-BA對誘導(dǎo)叢生芽有效，但不會使芽伸長。鑒于歐李組培苗生產(chǎn)成本較高 ，如何降低組培苗生產(chǎn)成本，是歐李大面積推廣生產(chǎn)組培苗的當(dāng)務(wù)之急。在植物生長調(diào)節(jié)劑的選擇上，ZT、6-BA和TDZ都可使用，但ZT的價格較高，所以多數(shù)實驗和生產(chǎn)都采用6-BA，以期降低成本[3]。

目前組織培養(yǎng)歐李芽誘導(dǎo)率不超過50%，生根率也較低，這些現(xiàn)狀很難滿足歐李大規(guī)模生產(chǎn)的要求。本試驗以歐李的腋芽和葉作為外植體，通過對比歐李的芽誘導(dǎo)率和生根率，篩選培養(yǎng)基及激素、種類，以期達到大面積推廣生產(chǎn)的要求，為歐李組培繁殖提供理論依據(jù)。

2 材料與方法

2.1 試驗材料

歐李苗來源于內(nèi)蒙古自治區(qū)呼倫貝爾市扎蘭屯市成吉思汗鎮(zhèn)五一村“晉歐2號”的一年生小苗。在5月1日左右選擇長勢優(yōu)良的歐李苗木，分別在大田和室內(nèi)花盆進行移植，當(dāng)萌芽后嫩枝長到10 cm左右時，從中挑選健壯且未木質(zhì)化的枝條作為外植體材料。

2.2 試驗方法

2.2.1 歐李外植體的選擇和消毒將全部剪掉葉片的枝條放入干凈的培養(yǎng)瓶中，再將剪下的葉片放入另一個培養(yǎng)瓶中，倒入清水并沒過枝條和葉片，滴入少量洗潔精，用紗布封口，然后放在振蕩器上振蕩清洗5～10 min，再用自來水沖洗30 min，然后移入用紫外燈和臭氧發(fā)生器滅菌的超凈工作臺上，先用70%～75%的乙醇消毒20～30 s，再用無菌水沖洗2次后，用0.1%的升汞消毒8 min，無菌水沖洗8次。接著將枝條剪成長約1.3 cm的小段，將葉片剪成長方形或正方形的塊狀，在酒精燈火焰10 cm無菌區(qū)范圍內(nèi)，直接接到事先制備好并滅完菌的培養(yǎng)基中。接種完畢，直接移入培養(yǎng)室中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度25℃左右，相對濕度70%左右，燈光照射時間每天12 h，每種培養(yǎng)基各接種50瓶，定期觀察、記錄，30 d后統(tǒng)計誘導(dǎo)數(shù)據(jù)并計算誘導(dǎo)率。通過這種方法來選擇最佳的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基[4]。

試驗中培養(yǎng)基配方方案均采用正交設(shè)計，數(shù)據(jù)采用極差和方差分析[5]。

2.2.2 基本培養(yǎng)基的選擇選用目前歐李組培常用的WPM、Anderson的改良MS、MS、 Anderson和Read這5種培養(yǎng)基，在其中加入瓊脂7 g/L，蔗 糖30 g/L，pH 5.8～6.5， 激 素 組 合 為TDZ 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L，見表1。

表1 基本培養(yǎng)基選擇試驗設(shè)計

2.2.3 最佳激素組合細胞分裂素選取TDZ和6-BA，生長素選取IBA和NAA，基本培養(yǎng)基采用MS培養(yǎng)基[6]，詳見表2。

表2 激素組合正交試驗設(shè)計表

3 結(jié)果與分析

3.1 基本培養(yǎng)基的選擇

由表3可知， 愈傷組織誘導(dǎo)率最高的是MS培養(yǎng)基，其次是Anderson的改良MS培養(yǎng)基，再次是Read培養(yǎng)基，這3種培養(yǎng)基對晉歐2號歐李的誘導(dǎo)率均超過60%，都適合作為歐李愈傷組織誘導(dǎo)的基本培養(yǎng)基。而WPM和Anderson培養(yǎng)基誘導(dǎo)率在10%以下，不適合作為歐李愈傷組織誘導(dǎo)的基本培養(yǎng)基。

表3 愈傷組織在基本培養(yǎng)基上的形成狀況

3.2 最佳激素組合

由表4和表5可知，愈傷組織誘導(dǎo)率最高的培養(yǎng)基是MS+6-BA 0.5 mg/L+TDZ 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+NAA 0.05 mg/L，其愈傷組織誘導(dǎo)率達到98%。因素主次CABD，最優(yōu)組為A1B2C2D2。經(jīng)極差分析同樣得出最佳培養(yǎng)基是MS+6-BA 0.5 mg/L+TDZ 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+NAA 0.05 mg/L培養(yǎng)基，通過對比試驗，可以得出此培養(yǎng)基優(yōu)于處理4，其誘導(dǎo)率達100%。

表4 愈傷組織在不同激素組合上的形成狀況

表5 激素組合正交試驗極差分析表

4 結(jié)論

本試驗結(jié)果表明，采用尚未木質(zhì)化的歐李枝條作為外植體來誘導(dǎo)形成愈傷組織，其愈傷組織的誘導(dǎo)率高，同時又能長出大量叢生芽，尤其是用帶有腋芽的嫩枝段作為外植體，愈傷組織的誘導(dǎo)率更高一些，而且還能形成一定數(shù)量的叢生芽。最佳培養(yǎng)基是MS+6-BA 0.5 mg/L+TDZ 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+NAA 0.05mg/L，此培養(yǎng)基比其他培養(yǎng)基誘導(dǎo)出的歐李愈傷組織數(shù)量多而且質(zhì)量好，形成叢生芽的時間更短。