生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑對新疆紅棗黑斑病抗性的影響

馬玉珊，范盈盈，劉 敏，欽巧眉，王 艷，王 成，張銳利

（1. 塔里木大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院，新疆 阿拉爾 843300；2. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院 農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所，新疆 烏魯木齊 830091；3. 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全與風(fēng)險評估實驗室（烏魯木齊）/新疆農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全重點實驗室，新疆 烏魯木齊 830091；4. 新疆大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830000）

紅棗（Ziziphus jujubaMill.）是我國特有的果品之一，占全球紅棗產(chǎn)量的90%以上[1]。隨著新疆紅棗產(chǎn)量的升高，由鏈格孢菌（Alternaria alternata）侵染引起的黑斑病發(fā)病率也逐漸升高，在紅棗黑斑病大面積暴發(fā)時期南疆和田和阿克蘇等地區(qū)的紅棗黑斑病發(fā)病率達30%[2]，病重棗園發(fā)病率高達70%[3]，黑斑病會造成紅棗減產(chǎn)達40%以上[4]，嚴(yán)重降低棗農(nóng)的經(jīng)濟收益。目前，紅棗黑斑病的防控主要集中在化學(xué)防控方面，例如噴施戊唑醇，該藥劑具有殺菌譜廣、活性高、持久長效等優(yōu)點[5]，但使用化學(xué)殺菌劑會導(dǎo)致病菌產(chǎn)生耐藥性和農(nóng)藥殘留的問題[6]。因此，開發(fā)更加安全、環(huán)保的病害防控方法成為當(dāng)務(wù)之急。

近幾年，生物防控技術(shù)成為控制植物病害的重要手段，其中利用生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑是熱點之一。生物誘導(dǎo)劑水楊酸（Salicylic acid，SA）是一種類似植物激素的內(nèi)源信號分子，能誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性，促使多種病程相關(guān)蛋白表達，防御病原體，在病原侵染誘導(dǎo)植物抗性的形成中起著重要作用[7]。已報道SA 能增強草莓[8]、杧果[9]、柑橘[10]等果實對病原菌侵染的抗性，減少產(chǎn)品在貯藏過程中的腐爛和采后損失。 外源噴施茉莉酸甲酯（Methyl jasmonate，MeJA）也可以刺激植物相關(guān)防御基因的表達，有效誘導(dǎo)植物抗病性。研究發(fā)現(xiàn)，MeJA 可以有效增強櫻桃[11]、草莓[12]和菠蘿[13]果實中過氧化物酶（Peroxidase，POD）、多 酚 氧 化 酶（Polyphenol oxidase，PPO）、超 氧 化 物 歧 化 酶（Superoxide dismutase，SOD）和過氧化氫酶（Catalase，CAT）等抗氧化酶的活性。HU 等[14]研發(fā)合成了源自哈茨木霉JF309 的納米硒溶液（Trichoderma harzianumselenium nanoparticle，TSNP），發(fā)現(xiàn)TSNP 處理顯著抑制了鏈格孢菌（Alternaria alternata）的生長和毒素的產(chǎn)生，具有較好的抗真菌特性。

目前，雖然在草莓、杧果、櫻桃等植物果實真菌病害上有使用生物源誘導(dǎo)劑、殺菌劑的報道，但是其用于紅棗黑斑病防控的研究還較少。因此，以生物誘導(dǎo)劑SA、MeJA 以及生物源殺菌劑TSNP為供試藥劑，戊唑醇（WZ）為化學(xué)殺菌劑對照，清水處理為空白對照（CK），接種鏈格孢菌，進行紅棗抗病性田間試驗，通過抗病相關(guān)酶活性及酶基因表達判斷不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑對紅棗抗病性的影響，并比較紅棗營養(yǎng)品質(zhì)的變化及不同處理的自然發(fā)病率，篩選防控紅棗抗黑斑病效果較好的誘導(dǎo)劑或者殺菌劑，為新疆紅棗黑斑病的生物防控提供技術(shù)支持。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

試驗于2021 年在新疆阿拉爾市十團6 連棗園（81.31°E、40.65°N）進行，供試紅棗品種為駿棗，樹齡10 a左右。

鏈格孢菌（Alternaria alternata）SH04，從阿克蘇病棗中分離得到。

木霉源納米硒溶液（TSNP）由中國科學(xué)院上海營養(yǎng)與健康研究所武愛波課題組提供。

主要試劑：MeJA、SA、WZ、氯化硝基四氮唑蘭、二硫蘇糖醇、牛血清蛋白質(zhì)、曲拉通-100、乙二胺四乙酸二鈉、聚乙烯聚吡咯烷酮、巰基還原劑（北京索萊寶公司）；醋酸鈉（美國Sigma-Aldrich 試劑公司）；Na2HPO4·12H2O（西隴化工股份有限公司）；NaH2PO4·2H2O、L-蛋氨酸、核黃素、硼酸、L-苯丙氨酸、愈創(chuàng)木酚（生工生物工程上海股份有限公司）；聚乙烯吡咯烷酮（源葉生物公司）；30%過氧化氫（成都市科隆化學(xué)品有限公司）；無水乙醇（天津市鑫鉑特化工有限公司）；乙二胺四乙酸、冰醋酸、聚乙二醇6000（天津市福晨化學(xué)試劑廠）；抗壞血酸（天津市天新精細化工開發(fā)中心）；硼砂、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉（天津市致遠化學(xué)試劑有限公司）；鄰苯二酚（天津市光復(fù)精細化工研究所）；果糖、葡萄糖、蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品（美國Sigma-Aldrich 試劑公司）；17種氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（德國賽卡姆公司）。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-2700 型紫外可見分光光度計（日本島津公司）、水浴恒溫振蕩器（金壇市宏華儀器廠）、渦旋混合儀（上海汗諾儀器有限公司）、電熱恒溫水浴鍋（ 上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）、Biofugerstratos 全能型高性能臺式冷凍離心機（德國賀利氏公司）、DW-HL508 型超低溫冷凍儲存箱（中科美菱低溫科技股份有限公司）、DW-86W100 型醫(yī)用低溫保存箱（海爾集團公司）、XSE204 型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）、E200 型生物顯微鏡（日本Nikon 株式會社）、SureCycle 8800 型PCR儀（安捷倫科技有限公司）、LightCycler?96 型實時熒光定量PCR 儀（德國羅氏診斷有限公司）、8400型全自動凱氏定氮儀（丹麥FOSS 公司）、S-433D 型氨基酸分析儀（德國SYLM公司）。

1.3 方法

1.3.1 鏈格孢菌孢子懸浮液的制備 將供試鏈格孢菌在PDA 培養(yǎng)基上25 ℃培養(yǎng)7 d，少量多次用無菌水沖洗平板，用接種環(huán)輕輕刮下平板上的孢子，全部收集于50 mL 三角瓶中，將孢子懸浮液在微型旋渦混合器上振蕩30 s 使孢子分散，然后用雙層紗布過濾。過濾后的孢子懸浮液用血球計數(shù)板記數(shù)，并調(diào)節(jié)使濾液中孢子濃度達到1×106cfu/mL。

1.3.2 試驗設(shè)計 以MeJA、SA 為供試誘導(dǎo)劑，TSNP 為供試生物殺菌劑，WZ 為對照化學(xué)殺菌劑，根據(jù)預(yù)試驗濃度篩選結(jié)果將以上藥劑依次配制為100、5 000、25、200 μmol/L，清水處理為空白對照（CK），分別在田間棗樹幼果期、膨大期和白熟期對棗果進行噴施，每個處理5 棵棗樹，共計25 棵樹，每棵樹噴2 L，每15 d 噴施1 次，在棗果成熟后測定自然發(fā)病率及棗果營養(yǎng)品質(zhì)。另在全紅期，每棵樹在4 個方位分別挑選大小均勻、健康棗果12 個，接種10 μL 鏈格孢菌菌懸液，分別采集CK 和不同處理接種后1、3、5、7 d 的紅棗，取病健交界處用錫箔紙包裹，液氮冷凍帶回實驗室，-80 ℃超低溫冰箱保存，測定不同處理棗果接種鏈格孢菌后不同時間的抗病酶活性及抗病酶基因相對表達量。

1.3.3 黑斑病自然發(fā)病率測定 各棗果成熟后，隨機采集各處理棗果，測定黑斑病自然發(fā)病率。記錄出現(xiàn)病害的棗果數(shù)量及總棗果數(shù)量，計算自然發(fā)病率。自然發(fā)病率=發(fā)病棗果數(shù)/總棗果數(shù)×100%。

1.3.4 紅棗采后營養(yǎng)品質(zhì)測定 各處理棗果成熟采收后，棗果中葡萄糖、果糖和蔗糖含量測定參考GB/T 5009.8—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的測定》；還原糖含量測定參考GB 5009.7—2016《食品中還原糖的測定》，采用直接滴定法測定；17種氨基酸含量測定參考GB/T 5009.124—2016《食品中氨基酸的測定》，采用氨基酸全自動分析儀測定；總酸含量測定參考GB/T 12456—2021《食品中總酸的測定》，采用酸堿指示劑滴定法測定；蛋白質(zhì)含量測定參考GB 5009.5—2016《食品中蛋白質(zhì)的測定》，采用凱氏定氮法測定。

1.3.5 抗病相關(guān)酶活性測定 POD、PPO、SOD、CAT、抗壞血酸過氧化物酶（Ascorbate peroxidase，APX）、苯丙氨酸解氨酶（Phenylalnine ammonialyase，PAL）活性測定參照曹建康等[15]的方法。酶液提?。悍Q取5.0 g 果蔬組織樣品，置于研缽中，加入5.0 mL緩沖液，在冰浴條件下研磨成勻漿，于4 ℃、12 000×g離心30 min，收集上清液即為酶提取液，低溫保存?zhèn)溆?。以每分鐘每克鮮質(zhì)量果蔬樣品吸光度分別在470、420 nm 波長處變化1 為1 個POD、PPO 活力單位（U），單位為U/g；以每分鐘每克鮮質(zhì)量果蔬組織的反應(yīng)體系對氮藍四唑（NBT）光化還原的抑制為50%時為1 個SOD 活力單位（U），單位為U/g；以每克鮮質(zhì)量樣品每分鐘吸光度分別在240、290 nm 波長處變化0.01 為1 個CAT、APX 活力單位（U），單位為U/g；以每小時每克鮮質(zhì)量果蔬組織反應(yīng)體系吸光度值增加0.01為1個PAL活力單位（U），單位為U/g。

1.3.6 抗病相關(guān)酶基因相對表達量測定 取1.3.2中冷凍的紅棗果實提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用TIAN GEN?Super Real PreMix Plus（SYBR Green）試劑盒進行測定。以ACT1為內(nèi)參基因，按照qPCR引物設(shè)計原則設(shè)計特異性引物（表1）。通過RTqPCR 檢測紅棗抗病酶相關(guān)基因POD、PPO、CAT、SOD、APX和PAL的相對表達量，每個處理設(shè)置3 個生物學(xué)重復(fù)，通過2-△△CT計算基因相對表達量[16]。

表1 RT-qPCR引物信息Tab.1 Primer information for RT-qPCR

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

采用Excel 2019 建立數(shù)據(jù)系統(tǒng)，用Origin 2018軟件進行營養(yǎng)品質(zhì)、抗病酶活性和抗病酶基因相對表達量分析，用SPSS 26.0軟件進行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理對紅棗果實黑斑病自然發(fā)病率的影響

如圖1 所示，不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理均能有效降低紅棗果實黑斑病的自然發(fā)病率，增強棗果對黑斑病的抗性。CK 自然發(fā)病率為19.17%，MeJA、SA、TSNP 和WZ 處理紅棗果實自然發(fā)病率分別 為4.57%、5.60%、2.78% 和6.29%，以MeJA 和TSNP 處理紅棗果實對黑斑病的防效較好，自然發(fā)病率分別比CK顯著降低76.16%和85.50%。

圖1 不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理棗果黑斑病的自然發(fā)病率Fig.1 Natural incidence rate of jujube black spot in different biological inducers and fungicides treatments

2.2 不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理對采后紅棗果實營養(yǎng)品質(zhì)的影響

由表2 可知，各處理紅棗果實總酸和蔗糖含量分別為11.20～12.48 g/kg 和253.38～279.68 g/kg。與清水對照（CK）相比，不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理紅棗果實中總酸和蔗糖含量無顯著差異。SA、WZ處理紅棗果實還原糖含量分別為246.10、247.77 g/kg，與CK 差異不顯著，但二者葡萄糖含量均顯著高于CK，分別提高18.27%、19.38%。SA 處理紅棗果實中果糖含量（157.68 g/kg）顯著高于CK 和其他處理，較CK 提高16.73%。WZ 處理紅棗果實蛋白質(zhì)含量顯著低于CK，比CK降低12.07%。MeJA、TSNP處理紅棗果實果糖、葡萄糖含量與CK 相比無顯著差異，僅還原糖含量顯著低于CK。

表2 不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理紅棗果實的營養(yǎng)品質(zhì)Tab.2 Nutritional quality of jujube fruits treated with different biological inducers and fungicides g/kg

不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理紅棗果實中均可檢測到17 種氨基酸（表3），其中包括人體必需的8 種氨基酸以及幼兒體內(nèi)不能自身合成的精氨酸（Arg）和組氨酸（His）[17]。由表3 可知，各處理紅棗果實中以TSNP處理氨基酸總量最高，為2.047%，比CK 提高0.59%，其次為CK、MeJA 處理、SA 處理，WZ處理作為化學(xué)殺菌劑對照，含量最低，為1.856%，比CK 降低8.80%。由此說明，與生物誘導(dǎo)劑和生物殺菌劑相比，化學(xué)殺菌劑對紅棗果實中氨基酸的形成影響較大，導(dǎo)致紅棗果實中氨基酸總量低于其他處理。不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理紅棗果實中天門冬氨酸（Asp）含量與CK 相比具有顯著差異（P<0.05），其中MeJA、TSNP 處理高于CK，比CK 分別提高13.81%、3.35%，SA、WZ 處理低于CK，比CK 分別降低16.17%、24.65%。SA 處理紅棗果實絲氨酸（Ser）、纈氨酸（Val）含量分別較CK 降低17.14%、11.11%。MeJA 處理紅棗果實His 含量比CK 顯著提高24.56%。

表3 不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理紅棗果實的17種氨基酸含量Tab.3 17 amino acids contents in jujube fruits treated with different biological inducers and fungicides %

2.3 不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理對紅棗果實抗病相關(guān)酶活性的影響

如圖2A 所示，接種鏈格孢菌后第1—3天，不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理紅棗POD 活性明顯高于CK；接種后第5 天，CK 與MeJA 處理POD 活性有所升高；接種后第7 天，所有處理POD 活性均有所升高，其中MeJA 處理和TSNP 處理急劇升高且顯著高于CK（P<0.05），分別是CK 的1.14、1.83 倍。表明MeJA 和TSNP 處理能夠在一定程度上提高紅棗果實的POD活性。

由圖2B 可知，接種鏈格孢菌后第3—5 天，CK、MeJA 處理、TSNP 處理和WZ 處理紅棗PPO 活 性 均急劇升高；接種后第7 天，除SA 處理PPO 活性急劇升高，其他處理均有所下降，但SA、MeJA、TSNP、WZ處理紅棗PPO 活性均高于CK，分別是CK 的9.75、13.75、14.00、7.75 倍。結(jié)果表明，不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理均可顯著提高紅棗果實PPO 活性，以MeJA和TSNP處理效果最佳。

如圖2C 所示，接種鏈格孢菌后第1—7 天，不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理紅棗SOD 活性均呈下降趨勢。接種后第3 天，SA 處理紅棗果實SOD 活性最高，是CK 的6.56 倍；接種后第5 天，TSNP 處理SOD活性有所升高，是CK 的2.51 倍；接種后第3—7 天，各生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理紅棗果實SOD 活性均高于CK?？梢姡煌镎T導(dǎo)劑和殺菌劑處理均可提高紅棗果實SOD活性。

如圖2D 所示，接種鏈格孢菌后第1 天，CK CAT活性高于4 個誘導(dǎo)劑處理；接種后第3—7 天，TSNP處理CAT活性持續(xù)升高，在第7天達到最高，且明顯高于CK，是CK 的1.37 倍，而其他處理均低于CK。結(jié)果表明，TSNP 處理可顯著提高紅棗果實的CAT活性。

如圖2E 所示，接種鏈格孢菌后第1—7 天，MeJA、TSNP處理和CK棗果APX活性均呈現(xiàn)先下降再升高的趨勢。接種后第5 天，不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理紅棗果實APX 活性均高于CK；接種后第7 天，MeJA、TSNP 處理紅棗果實APX 活性分別是CK的1.09、1.37倍。結(jié)果表明，不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理在接種鏈格孢菌后第5天均可提高紅棗果實APX活性，整體上以MeJA和TSNP處理效果最佳。

如圖2F 所示，接種鏈格孢菌后第1 天，MeJA、TSNP 處理紅棗果實PAL 活性均高于CK；接種后第3 天，MeJA 處理紅棗果實PAL 活性最高，是CK 的1.35倍；接種后第5天，不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理紅棗果實PAL活性均高于CK；接種后第7天，SA、TSNP處理紅棗果實PAL活性均高于CK，分別是CK的1.21、1.10 倍。結(jié)果表明，不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理在接種后第5天均可不同程度提高PAL活性。

圖2 不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理對紅棗果實POD、PPO、SOD、CAT、APX和PAL活性的影響Fig.2 Effects of different biological inducers and fungicide treatments on the activities of POD，PPO，SOD，CAT，APX and PAL in jujube fruit

2.4 不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理對紅棗果實抗病相關(guān)酶基因相對表達量的影響

如圖3A 所示，接種鏈格孢菌后第1、7 天，MeJA處理紅棗果實POD相對表達量比CK 分別提高了27.97%、49.06%，TSNP處理比CK分別提高38.42%、67.70%。結(jié)果表明，MeJA 處理和TSNP 處理不同程度提高了紅棗POD基因的表達量。

如圖3B 所示，接種鏈格孢菌后第1—5 天，MeJA、TSNP、WZ處理和CK的紅棗PPO基因表達均呈現(xiàn)上升趨勢，且MeJA 處理和TSNP 處理明顯高于CK。接種后第1、3、5 天，MeJA 處理比CK 分別提高23.10%、40.67%、35.40%，TSNP 處理比CK 分別提高31.32%、56.46%、49.22%；接種后第7 天，不同處理紅棗的PPO基因表達量均有所下降，但生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理均高于CK。

如圖3C 所示，接種鏈格孢菌后第1—5 天，不同處理紅棗SOD基因表達均呈下降趨勢。接種后第1、3 天，MeJA、TSNP、WZ 處理紅棗SOD基因表達量均高于CK，其中MeJA 處理比CK 分別提高11.81%、16.41%，TSNP處理比CK分別提高17.50%、26.88%，WZ 處理比CK 分別提高16.49%、24.91%；接種后第5 天，SA 處理紅棗SOD基因表達量明顯高于CK，比CK 提高36.96%；接種后第7 天，SA、MeJA、TSNP、WZ 處理均高于CK，比CK 分別提高14.80%、60.00%、76.79%、61.26%。結(jié)果表明，MeJA、TSNP、WZ處理能不同程度提高紅棗SOD基因的表達量。

如圖3D 所示，接種鏈格孢菌后第1—7 天，MeJA、TSNP 處理紅棗CAT基因表達量呈現(xiàn)上升趨勢。接種后第3、5、7 天，MeJA 和TSNP 處理紅棗CAT基因表達量均高于CK，比CK 分別提高41.05%、55.43%、26.87% 和 72.45%、58.60%、42.42%。表明MeJA、TSNP 處理不同程度提高了紅棗CAT基因的表達量。

如圖3E 所示，接種鏈格孢菌后第1 天，不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理紅棗APX基因相對表達量均高于CK；接種后第3、5、7 天，MeJA 處理和TSNP處理紅棗APX基因相對表達量保持上升趨勢，且均高于CK，比CK 分別提高16.25%、29.24%、17.60%和59.33%、34.70%、40.43%。結(jié)果表明，MeJA、TSNP處理不同程度提高了紅棗APX基因的表達量。

圖3 不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理對紅棗果實抗病相關(guān)酶基因相對表達量的影響Fig.3 Effects of different biological inducers and fungicide treatments on the relative expression of disease resistance related enzyme genes in jujube fruit

如圖3F所示，接種鏈格孢菌后第1—7天，SA處理和CK 紅棗果實PAL基因相對表達量均呈現(xiàn)下降趨勢；WZ 處理紅棗果實PAL基因相對表達量在接種后1—5 天呈下降趨勢，但在接種后第7 天有所上調(diào)；接種后第3、5、7天，MeJA 處理和TSNP 處理紅棗PAL基因相對表達量均高于CK，比CK 分別提高63.19%、47.78%、26.03% 和 12.31%、12.98%、79.06%。結(jié)果表明，MeJA、TSNP 處理在接種后第3、5、7天提高了紅棗PAL基因的表達量。

3 結(jié)論與討論

誘導(dǎo)抗病性是防治植物病害的重要策略之一，誘導(dǎo)劑處理可以激活紅棗中相關(guān)防御系統(tǒng)，提高果實的抗病性。本研究中生物誘導(dǎo)劑SA、MeJA 和殺菌劑TSNP、WZ 在田間試驗中對紅棗黑斑病的防治效果均較好，抗病性相關(guān)指標(biāo)均有不同程度的提高，且不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑處理對紅棗果實營養(yǎng)品質(zhì)的影響也不盡相同。

碳水化合物、氨基酸、脂肪酸和有機酸的初級代謝物很常見，在植物發(fā)育中發(fā)揮著重要作用[18]，它們是基礎(chǔ)營養(yǎng)素，有助于形成棗的獨特風(fēng)味[19]。包括葡萄糖、果糖和蔗糖在內(nèi)的糖類廣泛分布在大棗中，它們的甜味決定了紅棗的風(fēng)味品質(zhì)[20]。氨基酸是另一種關(guān)鍵營養(yǎng)素，是蛋白質(zhì)的組成部分，在人類健康中發(fā)揮著重要作用[21]。它們也是食品中重要的風(fēng)味物質(zhì)和香氣前體[22]。此外，一些氨基酸對食品的風(fēng)味品質(zhì)也起著重要作用。色氨酸（Trp）、異亮氨酸（Ile）和亮氨酸（Leu）會產(chǎn)生苦味[23]，而酪氨酸（Tyr）和苯丙氨酸（Phe）會產(chǎn)生鮮味[24]。本研究中，MeJA 和TSNP 處理紅棗果實與CK 相比，Ile 和Leu 2種苦味氨基酸含量無顯著差異，但均低于CK；Tyr 和Phe 含量與CK 相比無顯著差異。脯氨酸（Pro）和Asp 含量在紅棗氨基酸含量中占比最大，與張艷紅等[25]、GUO 等[26]、劉杰超等[27]的研究結(jié)果基本一致。

弓德強等[28]研究表明，采前SA處理提高了杧果貯藏期SOD、POD 和CAT 等抗氧化酶活性。本研究中，SA 處理在接種鏈格孢菌后第3 天不同程度提高了紅棗果實POD、SOD、APX 和PAL 活性，降低了CAT 活性，與XU 等[29]報道的櫻桃果實經(jīng)SA 處理后不僅提高了CAT 活性，而且刺激了CAT基因的表達結(jié)果不一致。大量研究[30?32]表明，SA 處理可以通過提高POD、PAL 等抗病相關(guān)酶活性，調(diào)節(jié)相應(yīng)酶基因的表達，在果實中建立誘導(dǎo)抗性，增強果實的抗病性。PAL 是苯丙烷途徑的關(guān)鍵酶，PAL 活性的增強與植物細胞壁的木質(zhì)化有關(guān)，可以直接抑制病原菌的侵染[33]。WZ 作為一種化學(xué)殺菌劑，在本研究中處理紅棗果實后，與CK 相比PPO、SOD 活性有所提高，相應(yīng)的酶基因表達量也有所上調(diào)。MeJA 被證明是一種參與植物防御機制的信號分子[34]，能夠有效誘導(dǎo)次生代謝物產(chǎn)生和寄主對病原體的抗性，并刺激植物抗逆蛋白和防御基因的表達[35]，抑制李子腐爛，提高李子儲存質(zhì)量[36]。在本研究中，接種鏈格孢菌后，MeJA、TSNP 處理不同程度增強了紅棗果實POD、PPO、SOD、APX、PAL 活性，并刺激了相應(yīng)酶基因的表達。POD、PPO、CAT、APX 與植物抗病性密切相關(guān)，其活性的增加及相應(yīng)基因表達的上調(diào)，提高了紅棗果實的防御系統(tǒng)活性，可有效誘導(dǎo)紅棗果實建立抗病性。SARACOUGLU 等[37]研究證明，20 μmol/L MeJA 處理更有利于誘導(dǎo)藍莓果實POD、PPO等抗病相關(guān)酶活性提高，增強果實的抗病性，降低病害的發(fā)生。姜璐璐[38]則發(fā)現(xiàn)，MeJA 能提高葡萄果實中的CAT、SOD、PAL 和POD 活性，與本研究的結(jié)論有一定差異。誘導(dǎo)果實抗病性是一個復(fù)雜的反應(yīng)過程，不同類型的果實、果實成熟度、誘導(dǎo)劑處理方式和果實感病程度等因素均會影響抗病相關(guān)酶活性的變化，造成即使同樣的誘導(dǎo)劑也會出現(xiàn)不同的反應(yīng)結(jié)果。

綜上所述，SA、MeJA、TSNP 和WZ 均可不同程度地降低紅棗黑斑病的自然發(fā)病率，提高紅棗果實抗黑斑病相關(guān)酶活性，刺激酶基因的表達，誘導(dǎo)紅棗果實產(chǎn)生抗病性，而不同生物誘導(dǎo)劑和殺菌劑對紅棗營養(yǎng)品質(zhì)的影響各不相同?？傮w來看，以MeJA 和TSNP 誘導(dǎo)效果最佳，可以作為有效的生物防控誘導(dǎo)劑和殺菌劑。