基于潛在類別分析的不同CD73多發(fā)性骨髓瘤患者預(yù)后復(fù)發(fā)的影響因素分布特征研究

徐娟 賁海祥 丁琳琳 蔡亞云 陳婷 姜銘

多發(fā)性骨髓瘤(Multiple myeloma，MM)是常見的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，發(fā)病率占血液腫瘤的10%[1-2]。由于MM患者多伴隨著惡性漿細胞過量分泌并沉積單克隆免疫球蛋白，使多克隆免疫球蛋白的生成受到抑制，導(dǎo)致患者出現(xiàn)組織器官損傷[3]。靶向藥物治療顯著提高了患者的整體生存率，但復(fù)發(fā)率仍較高[4]。MM患者骨髓漿細胞的惡性增殖與嚴(yán)重的免疫功能障礙有關(guān)[5]。CD73是將胞外腺苷酸轉(zhuǎn)化為腺苷的關(guān)鍵酶，在腫瘤的免疫逃逸中發(fā)揮著免疫抑制因子的作用[6]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，MM患者骨髓中的腺苷水平顯著升高，CD73在骨髓中的白細胞和基質(zhì)細胞上表達，可能成為MM治療的新靶點[7]。但目前關(guān)于CD73與MM關(guān)系的研究較少。本研究探討影響MM患者復(fù)發(fā)的因素，分析不同CD73+表達率患者復(fù)發(fā)影響因素的分布特征。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選擇2017年2月—2021年2月如皋市人民醫(yī)院收治的108例MM患者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合MM的診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]，術(shù)后均經(jīng)病理檢查證實；(2)原發(fā)性MM；(3)初治后完全緩解。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并嚴(yán)重心、肝、肺、腦疾??；(2)合并其他惡性腫瘤；(3)伴隨細菌、病毒感染的患者；(4)先天性血液系統(tǒng)疾病。本研究經(jīng)倫理委員會審查通過(倫理批號：40265)，患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 一般資料的收集 包括年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)(Body mass index，BMI)、糖尿病、高血壓、國際分期系統(tǒng)(International Staging System，ISS)分期、骨病分級、遺傳學(xué)風(fēng)險[9]和p53基因缺失情況。

1.2.2 治療方法 患者均采用誘導(dǎo)治療+鞏固治療。40例患者誘導(dǎo)治療方案為硼替佐米+地塞米松+多柔比星，治療4～6個療程，未完全緩解的患者繼續(xù)采用誘導(dǎo)方案鞏固治療2～4個療程，部分患者緩解后予硼替佐米+地塞米松維持治療。68例患者采用硼替佐米+地塞米松+沙利度胺誘導(dǎo)治療4～6個療程，部分患者緩解后予沙利度胺維持治療。

1.2.3 流式細胞術(shù)檢測骨髓細胞表型 患者治療前采集骨髓液標(biāo)本5 mL，離心收集骨髓單個核細胞，用100 μL的1%牛血清白蛋白(Albumin，ALB)重懸，加入鼠抗人直標(biāo)異硫氰酸熒光素單抗CD73(美國BD公司)20 μL，室溫避光孵育，PBS洗滌并重懸至濃度為1×105個/mL，流式細胞術(shù)檢測骨髓細胞CD73+表達水平。以PBS溶液為對照，檢測細胞熒光陽性細胞百分比，>20%為陽性表達。

1.2.4 觀察指標(biāo) 患者治療前采集外周血5 mL，3 000 rpm 離心10 min獲得血清，檢測骨髓漿細胞(Bone marrow plasma cell，BMPC)比例、血紅蛋白(Hemoglobin，Hb)、血小板(Platelet，PLT)、ALB、肌酐(Creatinine，Cr)、乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase，LDH)和β2-微球蛋白(β2-Microglobulin，β2-MG)水平。

1.3 隨訪

所有患者治療結(jié)束后1年進行隨訪，截止至2022年2月，統(tǒng)計患者的復(fù)發(fā)情況，并將患者分為復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組。MM患者的復(fù)發(fā)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《中國多發(fā)性骨髓瘤診治指南(2020年修訂)》[8]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0軟件，計數(shù)資料以率(%)的形式表示，組間比較采用χ2檢驗和連續(xù)性校正χ2檢驗。采用單因素及多因素logistic回歸分析影響MM患者治療后復(fù)發(fā)的因素。采用聚類分析和潛在類別分析方法分析不同CD73的MM患者復(fù)發(fā)影響因素的分布特征，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者臨床資料的比較

108例患者治療后1年復(fù)發(fā)25例(23.15%)，分為未復(fù)發(fā)組(83例)和復(fù)發(fā)組(25例)。復(fù)發(fā)組男性、BMI<20 kg/m2、ISS分期Ⅲ期、高危遺傳學(xué)風(fēng)險、β2-MG≥3.5 mg/L、p53基因缺失和CD73+比例明顯高于未復(fù)發(fā)組，維持治療比例明顯低于未復(fù)發(fā)組(P<0.05)(表1)。

表1 臨床資料的比較[n(%)]

2.2 MM患者復(fù)發(fā)的影響因素分析

單因素logistic回歸分析結(jié)果顯示，MM患者復(fù)發(fā)與男性、BMI<20 kg/m2、ISS分期Ⅲ期、高危遺傳學(xué)風(fēng)險、β2-MG≥3.5 mg/L、p53基因缺失和CD73+有關(guān)(P<0.05)；經(jīng)多因素logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，男性、BMI<20 kg/m2、ISS分期Ⅲ期、高危遺傳學(xué)風(fēng)險、β2-MG≥3.5 mg/L、p53基因缺失和CD73+是導(dǎo)致患者復(fù)發(fā)的危險因素(P<0.05)，維持治療是保護因素(P<0.05)(表2)。

表2 MM患者復(fù)發(fā)的影響因素分析

2.3 不同CD73+患者復(fù)發(fā)率的比較

不同CD73+表達率患者間的復(fù)發(fā)率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(表3)。

表3 不同CD73+表達率患者復(fù)發(fā)率的比較

2.4 不同CD73+表達率患者復(fù)發(fā)率聚類分析結(jié)果

根據(jù)聚類分析結(jié)果，將患者分為復(fù)發(fā)高風(fēng)險組(CD73+表達率>40%，40例)和復(fù)發(fā)低風(fēng)險組(CD73+表達率<40%，68例)，復(fù)發(fā)率分別為37.50%(15/40)和14.71%(10/68)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.556，P=0.018)(圖1)。

圖1 不同CD73+表達率患者復(fù)發(fā)率的聚類分析結(jié)果

2.5 MM患者復(fù)發(fā)影響因素分布特征

2.5.1 影響因素在復(fù)發(fā)高風(fēng)險組中的分布情況 3-cluster中的Entropy值最大，BCI值最小，分類準(zhǔn)確度較高，為最佳模型，即存在3種相互獨立的潛在類別分布模型(表4)。復(fù)發(fā)高危組影響因素在3種分布模式下的潛在類別概率分別為0.281、0.545和0.176，潛在類別1在ISS分期是否為Ⅲ期因素上傾向于“是”，且在維持治療因素上傾向于“否”，將其命名為“ISS分期Ⅲ期未維持治療分布”；潛在類別2在ISS分期是否為Ⅲ期及是否維持治療因素上均傾向于“是”，命名為“ISS分期Ⅲ期維持治療分布”；潛在類別3在是否為男性、BMI<20 kg/m2、高危遺傳學(xué)風(fēng)險、p53基因缺失因素上傾向于“否”，命名為“危險因素較少型分布”(圖2)。

圖2 復(fù)發(fā)高風(fēng)險組的3個潛在類別條件概率分布圖

表4 復(fù)發(fā)高風(fēng)險組影響因素潛在類別分析指標(biāo)的比較

2.5.2 影響因素在復(fù)發(fā)低風(fēng)險組中的分布情況 3-cluster中的Entropy值最大，BIC值和校正的BIC值均最小，分類準(zhǔn)確度較高，為最佳模型(表5)。影響因素在3種分布模式下的潛在類別概率分別為0.2559、0.4458和0.2981，將潛在類別1、類別2、類別3分別命名為“ISS分期Ⅲ期未維持治療分布”、“危險因素較少型分布”和“ISS分期Ⅲ期維持治療分布”(圖3)。

圖3 復(fù)發(fā)低風(fēng)險組的3個潛在類別條件概率分布圖

表5 復(fù)發(fā)低風(fēng)險組影響因素潛在類別分析指標(biāo)的比較

2.6 復(fù)發(fā)影響因素分布模式的差異

復(fù)發(fā)高風(fēng)險組“危險因素較少型分布”比例明顯低于復(fù)發(fā)低風(fēng)險組，“ISS分期Ⅲ期未維持治療分布”比例明顯高于復(fù)發(fā)低風(fēng)險組(P<0.01)，兩組“ISS分期Ⅲ期維持治療分布”比例差異無統(tǒng)計學(xué)意義(表6)。

表6 復(fù)發(fā)影響因素分布模式的差異分析[n(%)]

3 討論

MM被認為是一種無法治愈的疾病，大多數(shù)患者治療后最終會復(fù)發(fā)或發(fā)展為難治性疾病。目前關(guān)于影響MM患者預(yù)后生存因素的研究較多，但關(guān)于影響患者復(fù)發(fā)因素的研究較少。Pourmoussa等[10]研究表明，男性、ISS分期Ⅲ期、未維持治療與MM患者治療后早期復(fù)發(fā)有關(guān)，本研究也得出一致的結(jié)論。ISS分期高提示患者的病情加重，已錯過治療的最佳時機，增加了復(fù)發(fā)風(fēng)險；患者治療后體內(nèi)可能還存在殘留的微小病灶，維持治療可提高病灶的清除率，從而降低復(fù)發(fā)率。本研究中，BMI<20 kg/m2、β2-MG≥3.5 mg/L、p53基因缺失與患者復(fù)發(fā)有關(guān)，與暴江萍等[11]的研究結(jié)果相似。BMI較低的患者營養(yǎng)狀況及身體機能較差，治療過程中不良反應(yīng)發(fā)生風(fēng)險增加，無法忍受長期的藥物反應(yīng)，最終導(dǎo)致復(fù)發(fā)；β2-MG在MM患者的血和尿中的含量顯著增加，與患者的腎功能損傷、免疫功能及腫瘤負荷密切相關(guān)[12]，其水平升高增加了患者復(fù)發(fā)的風(fēng)險；p53屬于抑癌基因，p53基因缺失促進MM患者白細胞的增殖，使腫瘤細胞的增殖速度加快[13]，增加復(fù)發(fā)風(fēng)險。本研究中，高危遺傳學(xué)風(fēng)險是導(dǎo)致MM患者復(fù)發(fā)的危險因素，與李青等[14]的研究結(jié)果一致。遺傳學(xué)風(fēng)險分層能夠反映骨髓細胞的生物學(xué)特征，高危遺傳學(xué)風(fēng)險患者的預(yù)后較差。Yang等[7]研究證實，抑制CD73表達可減少MM患者骨髓細胞免疫抑制性腺苷的產(chǎn)生，減輕MM模型小鼠的免疫抑制和腫瘤負荷。本研究中，CD73+是MM患者復(fù)發(fā)的獨立危險因素，可能與CD73表達釋放大量腺苷于腫瘤微環(huán)境促進腫瘤的免疫逃逸有關(guān)。

CD73+作為MM患者復(fù)發(fā)的重要影響因素，與其他影響因素可能存在著復(fù)雜的關(guān)聯(lián)作用。潛在類別分析是通過對研究因素整體效應(yīng)的評估，反映出各研究因素間更高階的交互作用。本研究中，復(fù)發(fā)高危組患者“ISS分期Ⅲ期未維持治療分布”類型所占比重最多，復(fù)發(fā)低危組患者“危險因素較少型分布”類型所占比重最多，表明不同CD73+表達率的MM患者復(fù)發(fā)影響因素的共同分布情況不同，因此，針對不同CD73+表達率的MM患者采取個性化的預(yù)防措施對于降低復(fù)發(fā)率有重要意義。

綜上所述，男性、BMI<20 kg/m2、ISS分期Ⅲ期、高危遺傳學(xué)風(fēng)險、β2-MG≥3.5 mg/L、p53基因缺失和CD73+是導(dǎo)致患者復(fù)發(fā)的危險因素，維持治療是保護因素。不同CD73+表達率患者的影響因素分布特征存在差異。對于CD73+表達率較高且ISS分期為Ⅲ期的MM患者，建議其進行維持治療，未完成維持治療的患者應(yīng)進行密切隨訪，以降低復(fù)發(fā)率。