玉竹石斛護(hù)膚霜修復(fù)皮膚屏障的功效研究

皮膚屏障作為人體第一道防線，主要由角質(zhì)層、角質(zhì)細(xì)胞間的脂質(zhì)及天然保護(hù)因子等組成。皮膚屏障在抵御外界變應(yīng)原及微生物侵襲的過(guò)程中發(fā)揮重要作用

。多項(xiàng)研究表明，皮膚屏障障礙是導(dǎo)致特應(yīng)性皮炎

、食物過(guò)敏

、哮喘

和過(guò)敏性鼻炎

等疾病發(fā)生發(fā)展、反復(fù)發(fā)作的重要原因。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為皮膚屏障功能受損的病因病機(jī)主要與血燥、血熱、濕熱有關(guān)

。隨著中醫(yī)藥技術(shù)的不斷進(jìn)步，中醫(yī)藥在屏障功能受損皮膚的修復(fù)和治療過(guò)程中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。

石斛為我國(guó)傳統(tǒng)中藥，具有益胃生津、滋陰清熱之效，臨床上與玉竹相須為用，用以治療肺胃陰虛證

。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，石斛主要成分多糖具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、抗氧化等作用

，玉竹活性成分具有抗炎、降糖、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤作用

，但兩者合用于皮膚屏障功能修復(fù)研究未見報(bào)道。本研究構(gòu)建皮膚屏障功能受損小鼠模型，局部給予玉竹石斛護(hù)膚霜后檢測(cè)小鼠皮膚水分、油分比例、表皮厚度、神經(jīng)酰胺含量，驗(yàn)證玉竹石斛護(hù)膚霜對(duì)屏障功能受損皮膚的修復(fù)作用，并初步揭示其作用機(jī)制。

材料與方法

01 材料與儀器

SPF級(jí)KM小鼠，雄性，體質(zhì)量20-22g，購(gòu)自上海杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)碼：SCXK（滬）2018-0004，合格證編號(hào)20180004046312；鼓槌石斛（江蘇三才五妍醫(yī)療科技發(fā)展有限公司提供，產(chǎn)地：云南麻栗坡）；玉竹（吳江上海蔡同德堂中藥飲片有限公司，產(chǎn)地：湖南邵東）；神經(jīng)酰胺試劑盒（上海江萊實(shí)業(yè)股份有限公司）；RM2016病理切片機(jī)（上海徠卡儀器有限公司）；RBX-916智能數(shù)顯多功能皮膚檢測(cè)儀（寧波市瑞爾芭比醫(yī)療設(shè)備有限公司）； KZ-II高速組織研磨儀（Servicebio）；Epoch酶標(biāo)檢測(cè)儀（BioTeK）；Eclipse Ci-L正置白光拍照顯微鏡（Nikon，Japan）。

02 實(shí)驗(yàn)方法

經(jīng)上海市皮膚病醫(yī)院中藥學(xué)博士潘會(huì)君鑒定，所用石斛為蘭科植物鼓槌石斛Dendrobium chrysotoxum Lindl.的干燥莖，玉竹為百合科植物玉竹Polygonatum odoratum(Mill.) Druce的干燥根莖。按處方量稱取以上兩味藥材飲片并置10倍水中浸泡30min，第一次煎煮2h，第二次8倍水煎煮1h。合并濾液，低溫靜置過(guò)夜。取上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)進(jìn)行濃縮，得含生藥1.0g/ml的提取液。

按處方量稱取油相成分聚氧乙烯（21)硬脂醇醚、聚氧乙烯（2)硬脂醇醚、十六-十八醇、單硬脂酸甘油酯、液狀石蠟等加熱熔化，保溫70℃-80℃；另取水、甘油、玉竹石斛提取液置另一容器中加熱至70℃-80℃；置攪拌機(jī)上，邊攪拌邊將油相緩緩加入水相中，不斷攪拌至冷，按該工藝分別制備含中藥量10%、5%的玉竹石斛護(hù)膚霜及不含中藥的護(hù)膚霜基質(zhì)。

隨著造模次數(shù)增加，模型組皮膚呈紅腫狀態(tài)，具備明顯滲血點(diǎn)，部分皮損處出現(xiàn)結(jié)痂。各干預(yù)組均能夠不同程度改善癥狀，其中玉竹石斛護(hù)膚霜高劑量組效果最為明顯。

專欄小編：接下來(lái)我們談?wù)劷?jīng)濟(jì)方面的內(nèi)容。2018年11月中國(guó)制造業(yè)P MI為50.0，環(huán)比小幅回落0.2個(gè)百分點(diǎn)，處于臨界點(diǎn)；歐元區(qū)11月制造業(yè)P MI終值51.8，創(chuàng)2016年8月以來(lái)低點(diǎn)；美國(guó)11月I S M制造業(yè)指數(shù)59.3，好于預(yù)期的57.5。對(duì)此，三位專家怎樣看這些數(shù)據(jù)？

具有一定初速度的帶電粒子垂直于電場(chǎng)線射入電場(chǎng)時(shí)，由于所受到的電場(chǎng)力與初速度不同向，那么帶電粒子在電場(chǎng)中將做曲線運(yùn)動(dòng)，并且通過(guò)分析帶電粒子的受力情況，可以發(fā)現(xiàn)其在電場(chǎng)中做的是類平拋運(yùn)動(dòng)。其中在水平軸方向上做的是勻速直線運(yùn)動(dòng)，運(yùn)動(dòng)方程為：

本報(bào)訊 工業(yè)和信息化部日前對(duì)申請(qǐng)立項(xiàng)的410項(xiàng)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃項(xiàng)目和64項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃項(xiàng)目予以公示并征集意見，其中包括《化肥追溯體系規(guī)范》化工推薦性行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)制定項(xiàng)目。征集意見截止時(shí)間為11月28日。

50只小鼠隨機(jī)分為5組，即皮膚屏障功能正常組、屏障功能受損模型組、護(hù)膚霜基質(zhì)干預(yù)組以及玉竹石斛護(hù)膚霜高、低劑量干預(yù)組，每組各10只。實(shí)驗(yàn)前一天對(duì)小鼠背部剃毛、脫毛。參照文獻(xiàn)[10]造模方法，除正常組外，其余各組小鼠采用膠帶法建立皮膚屏障功能受損模型。具體方法如下：將醫(yī)用膠帶緊貼于剃去背毛的小鼠背部皮膚，隨即快速撕下。每只小鼠每天進(jìn)行 2 次造模刺激，每次刺激均重復(fù) 5 次“膠帶粘貼-撕下”操作，2次造模刺激的間隔時(shí)間約為 8h，造模過(guò)程連續(xù)3d。

造模后，各組小鼠給予相應(yīng)護(hù)膚霜涂抹在小鼠皮膚機(jī)械屏障功能損傷處，0.3g/只，輕輕按摩至吸收，連續(xù)5d。末次涂抹后24h，觀察玉竹石斛護(hù)膚霜對(duì)屏障功能受損模型小鼠皮膚組織的修復(fù)作用，檢測(cè)各組皮膚水分比例、油分比例、表皮厚度及神經(jīng)酰胺含量，并進(jìn)行皮膚組織形態(tài)學(xué)觀察。

在曲靖市陸良縣，食用菌產(chǎn)業(yè)一直都是地方經(jīng)濟(jì)發(fā)展的潤(rùn)滑劑。經(jīng)過(guò)多年的持續(xù)發(fā)力，2017年全縣生產(chǎn)面積已達(dá)204萬(wàn)平方米，產(chǎn)量15.9萬(wàn)噸，產(chǎn)值更是達(dá)到5.4億元，形成了以馬街、三岔河鎮(zhèn)為重點(diǎn)，其他鄉(xiāng)鎮(zhèn)零星種植的生產(chǎn)格局。

末次涂抹后24h，取各組背部皮膚，用福爾馬林固定，并將各組織固定、切片并染色，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。將切片置于正置顯微鏡下，隨機(jī)選取一個(gè)視野，平行測(cè)量表皮厚度5次取平均值。

采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S)表示。兩組數(shù)據(jù)若服從正態(tài)分布和方差齊性，采用成組t檢驗(yàn)；若不滿足方差齊性，可用t’檢驗(yàn),P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在正態(tài)性不滿足的條件下，采用非參數(shù)檢驗(yàn)。

末次涂抹后24h，采用RBX-916智能數(shù)顯多功能皮膚檢測(cè)儀測(cè)定小鼠背部皮膚的水分、油分比例（根據(jù)設(shè)備測(cè)試工作原理，其油份是根據(jù)水分油分比例換算出來(lái)的）。檢測(cè)環(huán)境：室溫22℃-25℃，空氣相對(duì)濕度50%-60%。檢測(cè)時(shí)使儀器與皮膚完全接觸，并保持垂直。同一測(cè)試部位重復(fù)3次取平均值。

末次涂抹后24h，取各組背部皮膚，制備勻漿。參照試劑盒說(shuō)明書的操作步驟，分別檢測(cè)各組小鼠受損皮膚組織的神經(jīng)酰胺含量。

開展全域旅游的地理基礎(chǔ)是擁有足夠的地域尺度和資源豐度。山西沿黃地區(qū)共包括19個(gè)縣（市），涉及國(guó)土面積28675平方千米，地域?qū)拸V，地貌類型多樣，峽谷、高原、山地、平原交相輝映，景點(diǎn)眾多（見表1），擁有拓展養(yǎng)生休閑、體育探險(xiǎn)等旅游產(chǎn)品的資源基礎(chǔ)。山西沿黃地區(qū)還富集人文旅游資源，如表1所示，歷史文化、紅色文化、民俗風(fēng)情[11]、工農(nóng)業(yè)等旅游資源類型豐富、特色鮮明且地域組合多樣。

首先,將對(duì)比組的所有病患進(jìn)行子宮按摩和注射藥物以進(jìn)行治療,并觀察其狀況,若病患的狀況沒有改善,將對(duì)照組的病患進(jìn)行宮腔填塞手術(shù)。手術(shù)前需要將治療所要用的紗布進(jìn)行消毒,并將紗布裁成長(zhǎng)度為2厘米,寬度為7厘米的條狀,再對(duì)病患進(jìn)行填塞處理,手術(shù)者在治療過(guò)程中,應(yīng)該將子宮在腹部做好固定處理,然后再實(shí)施填塞操作,填塞時(shí)應(yīng)注意不能出現(xiàn)死腔,填塞需要使用卵圓鉗。手術(shù)者應(yīng)該將紗布條壓住,并將其均勻的填入,手術(shù)者要時(shí)刻關(guān)注病患是否出現(xiàn)大出血狀況,如果大出血?jiǎng)t需要及時(shí)采取急救措施,以防病患在手術(shù)過(guò)程中危及生命。

結(jié)果

01 對(duì)小鼠背部皮膚狀態(tài)影響

02 對(duì)皮膚水分及油分比例的影響

與模型組相比，高、低劑量組的皮膚油分比例顯著升高（P＜0.001）。

如圖1所示，泳道2、5、8、11分別是4種芋螺毒腺的DNA，其條帶清晰、完整和無(wú)拖尾現(xiàn)象；其A260/A280值在1.80～2.00，表明芋螺的基因組DNA純度符合PCR擴(kuò)增要求，且能夠從200 mg毒腺中提取約9.2 μg DNA；泳道1、4、7、10分別是4種芋螺毒管的DNA，其條帶部分明亮，存在降解現(xiàn)象，有少量的RNA片段存在；泳道3、6、9、12分別是4種芋螺的肌肉組織，其條帶也是部分明亮，但蛋白含量較多。根據(jù)上述結(jié)果，毒腺基因組DNA含量最高，其次為毒管，肌肉組織最少。因此，提取芋螺毒腺基因組DNA的純度和產(chǎn)率均能夠符合ITS-PCR擴(kuò)增的基本要求。

與正常組相比，模型組小鼠皮膚油分比例明顯降低（P＜0.05）。

與正常組相比，模型組小鼠皮膚水分比例明顯上升（P＜0.001）。與模型組相比，高劑量組、低劑量組水分比例均顯著降低（P＜0.01; P＜0.05），皮膚組織液滲出減少。

03 對(duì)皮膚組織形態(tài)學(xué)的影響

正常組小鼠表皮組織結(jié)構(gòu)完整，無(wú)明顯異常。模型組小鼠角質(zhì)層出現(xiàn)破壞脫落，表皮層增厚明顯，棘層肥厚向下突起；真皮層膠原纖維排列紊亂、疏密分布不均，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

高劑量組角質(zhì)層完整，表皮厚度較模型組減小，真皮層膠原纖維排列接近正常，無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；低劑量組角質(zhì)層少量破壞，較完整，表皮厚度與模型組接近，真皮層膠原纖維排列接近正常，有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

04 表皮厚度

與正常組相比，模型組表皮增厚明顯（P＜0.01）。與模型組相比，高低劑量組可減少表皮厚度(P＜0.05),而基質(zhì)組雖然能夠減少表皮厚度，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

05 神經(jīng)酰胺含量

與正常組相比，模型組神經(jīng)酰胺含量明顯降低（P＜0.001）。與模型組相比，各干預(yù)組小鼠表皮神經(jīng)酰胺含量均有升高，其中以高劑量干預(yù)組呈顯著性差異（P＜0.001）。

討論

角質(zhì)層作為皮膚最外層結(jié)構(gòu)，主要由角質(zhì)形成細(xì)胞及細(xì)胞間脂質(zhì)組成，在皮膚屏障中起主要作用

。其中細(xì)胞間脂質(zhì)主要組成是神經(jīng)酰胺。神經(jīng)酰胺在屏障功能受損相關(guān)疾病中表達(dá)失衡，是評(píng)價(jià)皮膚屏障功能的一個(gè)重要指標(biāo)

。表皮屏障結(jié)構(gòu)及功能受損可使外界刺激物及過(guò)敏原進(jìn)入人體，從而引發(fā)各種皮膚病

。

1)圈定防沖重點(diǎn)區(qū)域。某礦在2個(gè)時(shí)間段內(nèi)高能微震事件的平面分布結(jié)果如圖6所示，圖6a為307和409工作面同時(shí)開采的情況，此時(shí)高能微震事件主要集中在307和409工作面之間的20 m區(qū)段煤柱區(qū)，超前工作面越200 m。這個(gè)區(qū)域也是需要重點(diǎn)防范的區(qū)域，需要開展卸壓工程和人員管理。圖6b為307工作面單獨(dú)開采時(shí)的情況，此時(shí)高能微震事件發(fā)生明顯轉(zhuǎn)移到307回風(fēng)巷超前工作面300 m范圍內(nèi)，防范重點(diǎn)也應(yīng)及時(shí)調(diào)整。

玉竹、石斛是我國(guó)常見中藥，近年來(lái)在功效性護(hù)膚領(lǐng)域的應(yīng)用受到廣泛關(guān)注。有研究表明，石斛發(fā)酵液具有抗氧化、抑制酪氨酸酶活性

，水提液具有防止光老化作用

，極具開發(fā)成功能性化妝品的潛力

。為了進(jìn)一步探究其他可能的功效，本研究采用膠帶法制備小鼠機(jī)械屏障障礙模型，用于評(píng)價(jià)玉竹石斛護(hù)膚霜屏障修復(fù)作用。實(shí)驗(yàn)表明，與正常組相比，模型組小鼠皮損處具有明顯滲血點(diǎn)，受損皮膚出現(xiàn)組織液滲出現(xiàn)象，檢測(cè)結(jié)果顯示水分比例提高、油分比例減少、表皮厚度增加、神經(jīng)酰胺含量降低。玉竹石斛護(hù)膚霜能夠改善小鼠皮損癥狀，減輕皮膚組織液滲出而降低水分比例，提高油分比例，減少表皮厚度，提高神經(jīng)酰胺水平，促進(jìn)皮膚屏障恢復(fù)。

綜上所述，玉竹石斛護(hù)膚霜對(duì)受損皮膚屏障具有修復(fù)作用，其機(jī)制可能與增加角質(zhì)層中的神經(jīng)酰胺含量有關(guān)。本研究將傳統(tǒng)口服中藥進(jìn)一步開發(fā)成外用制劑，為中醫(yī)藥在功效性護(hù)膚品領(lǐng)域的應(yīng)用提供新的思路。

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