老年非小細(xì)胞肺癌表皮生長(zhǎng)因子受體突變的影響因素與分子靶向治療的效果研究

瞿明奎 姜賽賽 陳裕民

438000 黃州區(qū)人民醫(yī)院呼吸科，湖北黃岡

非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)是臨床常見的惡性腫瘤疾病，類型主要包括大細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌及腺癌等。相對(duì)于小細(xì)胞肺癌，NSCLC 的生長(zhǎng)分裂速度較緩慢，擴(kuò)散時(shí)間也偏晚。臨床肺癌患者中約80%為NSCLC，因肺癌早期無典型臨床癥狀，患者到院就診時(shí)多已進(jìn)入了中晚期階段，錯(cuò)過手術(shù)治療最佳時(shí)機(jī)，5年生存率較低，嚴(yán)重影響患者的生命健康和正常生活[1]。近年來，隨著放療及化療技術(shù)的不斷發(fā)展，根據(jù)驅(qū)動(dòng)基因選擇靶向治療方案已成為臨床研究的熱點(diǎn)。研究表明，有40%～80%的NSCLC 患者中表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)呈高表達(dá)狀態(tài)，EGFR 及其天然配體在NSCLC 啟動(dòng)和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[2]。本研究旨在探討老年NSCLC患者EGFR突變的影響因素與分子靶向治療的效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

選取2017年1月-2019年6月在黃州區(qū)人民醫(yī)院經(jīng)病理檢查確診為NSCLC的268例老年患者作為研究對(duì)象。其中男142 例，女126 例；年齡65～84 歲，平均(74.16±3.23)歲；吸煙者112 例，不吸煙者156 例；病理類型：腺癌144例，鱗癌78例，其他(大細(xì)胞癌、腺鱗癌、肺泡癌)46 例；腫瘤T 分期：T1～T2期108例，T3～T4期160例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者經(jīng)病理診斷確診為NSCLC；②初始治療的NSCLC患者；③心電圖、血常規(guī)、肝腎功能等各項(xiàng)檢查結(jié)果正常者；④患者自愿參與本研究，有良好的依從性，可接受定期隨訪；⑤患者預(yù)期生存期＞3個(gè)月。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①以WHO 關(guān)于化療藥物相關(guān)毒性反應(yīng)分級(jí)為準(zhǔn)，患者存在嚴(yán)重(3級(jí)、4級(jí))不良反應(yīng)，難以耐受選擇退出研究；②研究中途失訪者；③臨床資料缺失者；④存在認(rèn)知障礙、精神疾病或溝通障礙者；⑤處于妊娠期的女性。

方法：①EGFR 突變檢測(cè)：a.DNA 提?。夯颊呓M織蠟塊連續(xù)切片5～10 張，經(jīng)4%中性甲醛固定，進(jìn)行HE 染色與組織學(xué)分型，篩選出腫瘤成分≥70%的腫瘤組織蠟塊，置于1.5 mL 的EP 管內(nèi)，應(yīng)用蛋白酶將石蠟融化，采用石蠟包埋組織的DNA 抽提試劑盒，按照試劑盒操作說明提取、純化石蠟組織DNA。提取樣本基因組DNA，采用分光光度儀進(jìn)行產(chǎn)物濃度及純度檢測(cè)，A260/A280=1.8±0.2，A260/A230≥1.7。將DNA 最終濃度稀釋至2 mg/L，-20℃下保存，待測(cè)。b.EGFR 突變基因檢測(cè)：采用優(yōu)化寡核苷酸探針法對(duì)EGFR 基因進(jìn)行檢測(cè)，設(shè)計(jì)EGFR 基因探針，通過熒光定量PCR 平臺(tái)探針?biāo)疅晒?，判定基因突變狀態(tài)，采用人EGFR 基因突變定性檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)廠家：北京博奧龍免疫技術(shù)有限公司)，根據(jù)試劑盒操作說明對(duì)EGFR 基 因19-del、 G719A、 L858R、G719C、G719X、T790M、L861Q、S768I、20-ins 外顯子突變進(jìn)行檢測(cè)，每次反應(yīng)設(shè)立陰性及陽(yáng)性對(duì)照，利用熒光定量PCR 儀根據(jù)反應(yīng)孔擴(kuò)增曲線記錄結(jié)果。c.DNA測(cè)序：對(duì)腫瘤組織標(biāo)本DNA，應(yīng)用巢式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法擴(kuò)增EGFR 基因外顯子，采用水平式瓊脂糖凝膠電泳法檢測(cè)PCR 產(chǎn)物，純化PCR 產(chǎn)物用Big Dye v3.1 試劑盒(生產(chǎn)廠家：北京博奧龍免疫技術(shù)有限公司)進(jìn)行測(cè)序PCR 擴(kuò)增，純化產(chǎn)物用ABI 3500xl 試劑盒(生產(chǎn)廠家：北京博奧龍免疫技術(shù)有限公司)進(jìn)行測(cè)序分析，標(biāo)本均進(jìn)行雙向測(cè)序檢測(cè)。②酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKIs)治療：入組患者均給予厄洛替尼(生產(chǎn)廠家：上海羅氏制藥有限公司；批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20170143)口服治療，150 mg/次，1 次/d?；蚪o予埃克替尼(生產(chǎn)廠家：浙江貝達(dá)藥業(yè)有限公司；批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20110061)治療，125 mg/次，3 次/d，連續(xù)服用至出現(xiàn)不可耐受的不良反應(yīng)。

觀察指標(biāo)：①觀察NSCLC患者EGFR基因突變情況。②分析影響NSCLC患者EGFR基因突變的相關(guān)因素。③根據(jù)WHO 實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)兩組治療效果，比較兩組疾病控制率(DCR)[3]。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：數(shù)據(jù)均用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件予以處理；計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

NSCLC 患者EGFR 基因突變情況：納入的268 例NSCLC 患者中，EGFR 基因突變陽(yáng)性136 例，突變率為50.75%，其中19del 突變66 例(48.53%)，L858R 突變54(39.71%)例，G719X 突變6 例(4.41%)，20-ins 突變4 例(2.94%)，19del 和L858R雙突變2 例(1.47%)，19del 和T790M雙突變2 例(1.47%)，L858R 和T790M雙突變2例(1.47%)。

影響NSCLC患者EGFR基因突變的相關(guān)因素：年齡＞70歲與≤70歲患者的突變率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；女性患者突變率高于男性，無吸煙史患者突變率高于有吸煙史患者，腺癌患者突變率高于黏液腺癌及其他類型NSCLC 患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 影響NSCLC患者EGFR基因突變的相關(guān)因素[n(%)]

EGFR 基因突變陽(yáng)性、陰性患者療效比較：EGFR 基因突變陽(yáng)性患者的DCR 高于EGFR 基因突變陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 EGFR基因突變陽(yáng)性、陰性患者療效比較[n(%)]

討 論

NSCLC 是臨床發(fā)病率較高的惡性腫瘤疾病，也是導(dǎo)致患者死亡的主要原因，危及患者生命安全。NSCLC 的誘因較多，較為典型的有遺傳、輻射、吸煙以及職業(yè)接觸等，早期階段患者主要表現(xiàn)為胸部輕微的悶痛或隱痛，并無典型臨床癥狀，因此，極易被患者忽視。大部分患者到院確診時(shí)已進(jìn)入中晚期，主要表現(xiàn)為體重異常下降、容易疲乏等，部分合并呼吸障礙、咯血等局部癥狀[4]。準(zhǔn)確的臨床檢測(cè)及診斷是保障NSCLC 患者治療效果的關(guān)鍵，臨床應(yīng)根據(jù)相關(guān)檢測(cè)結(jié)果制定對(duì)應(yīng)的治療措施，以控制患者病情惡化，延長(zhǎng)生存期，提高生活質(zhì)量[5]。

EGFR基因突變是NSCLC中第一代驅(qū)動(dòng)基因，表現(xiàn)為一個(gè)或一段堿基缺失，插入及堿基替換的錯(cuò)義突變，主要集中在第19號(hào)外顯子缺失和第21號(hào)外顯子L858R突變?yōu)橹?，約占EGFR 基因總突變率的85%～91%，EGFR 基因突變可引起EGFR 酪氨酸激酶活性增強(qiáng)。本研究結(jié)果顯示，NSCLC 患者EGFR 基因突變率為50.75%，女性、無吸煙史及腺癌患者突變率高，與相關(guān)研究結(jié)果一致[6-7]。

EGFR-TKIs 是目前治療晚期NSCLC 的有效方法，其治療效果突出，且安全性高。在晚期NSCLC 患者中，腫瘤樣本的可獲得性較差，且EGFR 基因突變的NSCLC 患者對(duì)EGFR-TKIs 會(huì)產(chǎn)生耐藥性。本研究結(jié)果顯示，接受EGFR-TKIs 治療后，EGFR 基因突變陽(yáng)性患者DCR(90.44%)高于EGFR 基因突變陰性患者(59.09%)，說明EGFR-TKIs 靶向治療EGFR 基因突變患者的有效率更高。

綜上所述，NSCLC 患者EGFR 基因突變率較高，以女性、無吸煙史和腺癌患者多見，EGFR 基因突變陽(yáng)性患者應(yīng)用EGFR-TKIs治療的效果更好。