聚花過路黃對動物胃蛋白酶等消化功能相關因素的影響研究

李飛艷 劉群群 黃 丹 羅曉云 劉園園

湖南中醫(yī)藥高等專科學校，湖南 株洲 412012

聚花過路黃為報春花科植物聚花過路黃Lysi-machiaecongestifloraeHemsl的干燥全草，2006年版《中藥大辭典》, 2010年版《四川省中藥材標準》均以“風寒草”收載[1-2]，有祛風散寒、化痰止咳、解毒利濕、消積排石的功效。

金錢草為2020年版《中國藥典》收錄品種，為報春花科植物過路黃LysimachiachristinaeHance的干燥全草[3]。聚花過路黃作為湖南常見，野外資源豐富、易繁殖的一種植被，曾作為理脾消積、清熱解毒的草藥收載于《湖南藥物志》[4]，藥名“胡氏排草”，如今臨床卻已罕見將其用于理脾消積，清熱解毒的用途。因其植株與金錢草的原植物過路黃形態(tài)相似而被誤用，根據(jù)藥品管理法的規(guī)定，聚花過路黃作金錢草使用則為偽品，因此，聚花過路黃常被作為金錢草的偽品而被中藥人士關注[5-8]。

現(xiàn)關于聚花過路黃的研究主要集中在藥材鑒定、化學成分提取及研究方面[5-10]，對其藥效、藥理研究甚少，已有報道亦僅限于聚花過路黃對動物腦缺血的保護作用及機制研究，聚花過路黃不同部位提取物的體外抗炎作用，聚花過路黃對動物膽汁、尿液排出作用的研究[11-13]，尚未見關于聚花過路黃對動物消化功能相關因素影響方面的研究報道。研究就聚花過路黃對大鼠、小鼠胃腸運動、胃液中胃酸及胃蛋白酶的影響做探究，旨在探討其在“消積”方面的功效，挖掘其傳統(tǒng)藥用價值。

1 材料

1.1 藥材 聚花過路黃(風寒草)飲片(批號：202105，瑞豐成中藥材公司)經中藥鑒定專家鑒定為正品；健脾消食丸(批號：18015002，北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠)。

1.2 實驗動物 KM小鼠，SPF級，50只，雌雄各半，體重18～22 g，質量合格證號430727211101224718；SD大鼠，SPF級，50只，雌雄各半，體重180～220 g，質量合格證號430727211101225912，均由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，許可證號SCXK(湘)2019-0004，飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學實驗動物中心，許可證號SYXK(湘)2013-0009。

1.3 試劑 胃蛋白酶(Pepsin) ELISA試劑盒(批號：2107R31，江蘇酶免實業(yè)有限公司)；酚酞指示劑(批號：20200618)、甲基黃指示劑(批號：20180822)均由天津市化學試劑研究所提供；墨汁(批號：DZ0039，北京索萊寶科技有限公司)。

1.4 儀器 IF50酶標儀(瑞士帝肯)；759系列紫外可見分光光度計(上海菁華)；DK-8D電熱恒溫水浴鍋；TDZ4-WS低速離心機；100-1000μl TopPette手動單道可調式移液器(北京大龍)。

2 方法

2.1 受試藥物的制備

2.1.1 聚花過路黃藥液 聚花過路黃置于不銹鋼鍋內，加冷水浸泡30 min，煎煮2次，加水量以液面超過藥面約3 cm，第一、二次煎煮時間分別為30 min、20 min，趁熱過濾，合并兩次濾液，旋轉蒸發(fā)儀濃縮至1 g/mL的藥液，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.2 健脾消食丸藥液 健脾消食丸加純凈水，使溶解成均勻的混懸液，臨用前配制。

2.2 分組及劑量 KM小鼠、SD大鼠分別隨機分為5組，即空白組(KB)、聚花過路黃高劑量組(GLH-G)、聚花過路黃中劑量組(GLH-Z)、聚花過路黃低劑量組(GLH-D)、陽性藥物(健脾消食丸)對照組(JPXS)。健脾消食丸臨床用量為6 g/次，2次/d，本實驗以臨床等效劑量給藥，采用劑量小鼠為1.6 g/kg、大鼠為1.1 g/kg給藥。《中藥大辭典》中聚花過路黃煎湯內服用量為15～50 g，根據(jù)人與動物體表面積等效劑量換算，以等效劑量為低劑量，高、中、低劑量差之比為2進行給藥，大鼠的高、中、低劑量分別為 10 g/kg、6 g/kg、4 g/kg，小鼠的高、中、低劑量分別為 20 g/kg、10 g/kg、5g/kg。

2.3 小鼠胃腸推進實驗 小鼠40只，每組8只，適應性飼養(yǎng) 5 d 后灌胃給藥，每10 g體重給藥體積為0.2 mL。空白組以飲用水灌胃，GLH-G組、GLH-Z組、GLH-D組分別以聚花過路黃藥液 20 g/kg、10 g/kg、5 g/kg的劑量灌胃，JPXS組以健脾消食丸藥液1.6 g/kg的劑量灌胃，連續(xù)用藥 7 d，最后1 d灌胃后禁食不禁水24 h，第8天，空白組用純凈水灌胃，GLH-G組、GLH-Z組、GLH-D組以及JPXS組分別以相應藥物的相應劑量灌胃，1 h后每只小鼠以10 mL/kg(體重)的量灌服墨汁，15 min 后脫頸椎處死，打開腹腔，剪取幽門下端至回盲部的腸管，測量總長度(L)，再測量幽門至炭末被推至的最前端之間的長度(D)，以炭末推進的長度與腸管總長度的比值(D/L)的百分率做為胃腸推進率的指標[14]。

2.4 大鼠胃游離酸、總酸及胃蛋白酶活性實驗 SD大鼠，40只，每組8只，適應性飼養(yǎng)5 d后灌胃給藥，每100 g體重給藥體積為1 mL?？瞻捉M以飲用水灌胃，GLH-G組、GLH-Z組、GLH-D組分別以聚花過路黃藥液10 g/kg、6 g/kg、4 g/kg的劑量灌胃，JPXS組以健脾消食丸藥液1.1 g/kg的劑量灌胃，連續(xù)用藥7 d，末次給藥后禁食不禁水24 h，第8天以水合氯醛麻醉動物，行剖腹手術，找到胃，結扎幽門，再由十二指腸給藥1次，縫合切口，2 h后再次打開切口，結扎賁門，摘取胃，剪開并收集胃內容物，離心，吸取上清液，得胃液，用于測胃液游離酸、總酸度及胃蛋白酶濃度。

每樣本取胃液0.1～0.5 mL，加蒸餾水至 1 mL，加甲基黃、酚酞指示劑各2滴，混勻，用0.02 moL/L的氫氧化鈉滴定，溶液顏色由紅色至出現(xiàn)橘黃色時，記錄氫氧化鈉用量，此時為游離酸滴定終點消耗量；繼續(xù)滴加堿液至出現(xiàn)紅色，搖勻后不褪去為止，此時的氫氧化鈉用量為總酸終點。計算公式為：1000×0.02×氫氧化鈉消耗量/胃液量。

胃蛋白酶濃度檢測按照胃蛋白酶 ELISA 試劑盒說明書步驟操作。反應結束后，將酶標板放在酶標儀450 nm波長處測定OD值，代入回歸方程(以胃蛋白酶標準品OD值對質量濃度進行回歸分析)，計算胃蛋白酶含量。

3 結果

3.1 聚花過路黃對小鼠腸推進運動的影響 與空白組比較，聚花過路黃高、中、低劑量組、健脾消食丸組的腸推進率有增加的趨勢，但無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。與空白組比較，各藥物組動物的小腸總長度及小腸推進長度均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結果見表1。

表1 聚花過路黃對小鼠小腸推進運動的影響

3.2 聚花過路黃對大鼠胃酸、胃蛋白酶濃度的影響 與空白組比較，各藥物組胃液中胃蛋白酶含量均顯著增加，有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；各藥物組胃液中游離酸濃度顯著增加，有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；各藥物組胃液中總酸濃度顯著增加(P<0.05或P<0.01)。與陽性藥物對照組比較，聚花過路黃高、中、低劑量組胃液中胃蛋白酶濃度顯著降低(P<0.05或P<0.01)，且隨著劑量的增加胃蛋白酶含量降低趨勢加大；各藥物組胃液總酸濃度無明顯差異；聚花過路黃低劑量組的胃液游離酸濃度顯著增高，有顯著性差異(P<0.05)，聚花過路黃高、中劑量組無明顯差異。結果見表2。

表2 聚花過路黃對大鼠胃酸及胃蛋白酶含量的影響

4 討論

現(xiàn)代醫(yī)學認為飲食積滯多與胃腸動力不足或消化酶活性降低有關，胃酸和胃蛋白酶的分泌量反映了胃對食物的消化功能[15]，同時胃蛋白酶的活性受pH影響，其最適pH值為1.8[16]。聚花過路黃作為一味具有理脾消積等功效的中藥，其“消積”的作用機制可能是多途徑、多靶點、多方面的綜合作用，本項目主要就其對動物小腸推進運動、胃酸分泌量、胃液中胃蛋白酶的濃度影響做了初步探討。

結果顯示，聚花過路黃主要通過增加動物胃液中胃酸、胃游離酸的濃度，從而相應的增加胃蛋白酶的排出，且各藥物組胃游離酸的平均濃度換算為pH值后，均在1.76～1.83之間，為胃蛋白酶發(fā)揮最強活性提供了最佳pH環(huán)境[16]，加之聚花過路黃高、中、低劑量組對動物小腸推進運動的增加并不明顯，認為聚花過路黃能促進胃內食物消化，不影響食物在小腸中的停留時間。

健脾消食丸為北京同仁堂生產的中成藥，具有健脾、消食、化積的功效，金鑫等研究了其藥效，得出該藥可有效地促進飲食失節(jié)致脾胃受損的大鼠體重的增長，并可增加胃液中總酸度、總酸排出量，提高胃蛋白酶活性及胃蛋白酶排出量[17]。實驗結果顯示，健脾消食丸有促進正常大鼠胃液中總酸、游離酸排出，促胃蛋白酶的形成的作用，聚花過路黃相比健脾消食丸，促胃蛋白酶形成的作用較弱。

綜上所述，聚花過路黃通過促進胃酸的排出、增加胃蛋白酶的含量，達到促進胃內食物消化的作用，為聚花過路黃“理脾消積”提供了部分理論依據(jù)。

研究[10，18-19]報道，聚花過路黃中主要含黃酮類、三萜苷類和甾體類(主為β-谷甾醇等)等化合物，黃酮類主要為槲皮素、楊梅樹皮素、檉柳素、山柰素、鼠李素等。有學者[12]研究報道了聚花過路黃不同部位提取物體外抑菌活性，尚未發(fā)現(xiàn)關于聚花過路黃不同成分的相關藥理作用的報道，聚花過路黃中究竟是何成分在發(fā)揮促進胃酸排出、增加胃蛋白酶含量的作用，尚有待進一步研究。