血清學(xué)檢驗(yàn)聯(lián)合細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)應(yīng)用于布魯氏菌感染臨床診斷的效果分析

何麗萍

（河西學(xué)院附屬?gòu)堃慈嗣襻t(yī)院，甘肅 張掖 734000）

布魯氏菌感染所致的布氏菌病是一種于世界范圍內(nèi)流行的人畜共患病，亦是包括中國(guó)在內(nèi)的眾多國(guó)家面臨的重大公共衛(wèi)生難題。近年來(lái)，隨著人們生活方式，尤其是飲食習(xí)慣的改變，此病在人類中的發(fā)生率不斷攀升，且有從內(nèi)蒙古等牧區(qū)蔓延至非牧區(qū)的趨勢(shì)[1]。布魯氏菌為一種革蘭氏陰性的短小桿菌，可于牛、羊等諸多家畜體內(nèi)存活。當(dāng)人類受到此菌感染后急性期可出現(xiàn)發(fā)熱、關(guān)節(jié)痛等癥狀，導(dǎo)致全身器官組織發(fā)炎、肉芽腫形成，隨病情發(fā)展，其可演化成慢性，進(jìn)而會(huì)增加治療難度，并顯著損害患者軀體健康[2]。因此，應(yīng)及早對(duì)此病做出診斷，以便使患者及時(shí)接受規(guī)范治療，控制病情發(fā)展，從而使其獲得理想預(yù)后。目前，臨床用于布魯氏菌感染檢驗(yàn)的方法頗多，其中以血清學(xué)檢驗(yàn)、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)較為常用。但研究發(fā)現(xiàn)，上述檢驗(yàn)方法單一應(yīng)用于布魯氏菌感染診斷中，漏誤診率較高[3]。為此，本研究選取2018年3月—2020年7月本院接收的疑似布魯氏菌感染患者104例，分析了血清學(xué)、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)單一應(yīng)用及聯(lián)合應(yīng)用于此病診斷中的效能，以期為此病今后診斷工作的開(kāi)展提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 資料

研究對(duì)象為河西學(xué)院附屬?gòu)堃慈嗣襻t(yī)院2018年3月—2020年7月接收的高度懷疑為布魯氏菌感染的104例患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）不明原因發(fā)熱，夜間癥狀加重，疑似布魯氏菌感染；（2）均行血清學(xué)及細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)；（3）患者對(duì)本研究均知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）存在其他嚴(yán)重疾患；（2）感冒、血液病等其他原因引起的發(fā)熱；（3）患有精神疾病；（4）臨床資料缺失?；颊咧心?5例，女49例；年齡最小21歲，最大65歲，平均（43.06±6.94）歲；病程最短1 d，最長(zhǎng)19 d，平均（9.74±2.57）d；從事行業(yè)：家畜飼養(yǎng)員41例，獸醫(yī)14例，屠夫22例，皮毛加工工人27例。

1.2 方法

取受檢者晨起空腹肘靜脈血3 mL進(jìn)行檢驗(yàn)。血清學(xué)檢驗(yàn)方法：將靜脈血在離心機(jī)下進(jìn)行離心處理（3 000 r/min，10 min），取上清液。于事先備好的6支試管內(nèi)均滴入0.5 mL生理鹽水，隨后將0.5 mL抗體滴入第1支試管內(nèi)，并混合均勻。從第1支試管內(nèi)吸取0.5 mL液體滴入第2支試管內(nèi)，混均后從中吸取0.5 mL液體滴入第3支試管內(nèi)，如法炮制，直至第5支試管。然后從第5支試管內(nèi)吸取0.5 mL并去除，于1～5支試管內(nèi)均加入0.5 mL布魯氏菌抗體，第6支試管作為對(duì)照組，不滴加抗體。將6支試管放入37℃環(huán)境中，培養(yǎng)12 h，觀察有無(wú)抗原凝集情況出現(xiàn)。細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)：將血液標(biāo)本接種于干瓊脂培養(yǎng)基上，置于35℃孵育箱內(nèi)培育18～24 h，培養(yǎng)基內(nèi)見(jiàn)到菌落時(shí)，做分離鑒定。

此次檢驗(yàn)需由2名或以上工作人員進(jìn)行操作，操作過(guò)程需嚴(yán)格依照相應(yīng)規(guī)程，如檢驗(yàn)結(jié)果存在出入，應(yīng)繼續(xù)檢驗(yàn)，以確保檢驗(yàn)真實(shí)可信。

1.3 觀察指標(biāo)

參照《布魯氏菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)》（WS269-2007）[4]對(duì)疑似患者做最后確診。當(dāng)在試管內(nèi)發(fā)現(xiàn)1∶100 的抗原滴度、凝集現(xiàn)象等級(jí)在（+）（+）以上即可確定為陽(yáng)性。了解血清學(xué)、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)及二者聯(lián)合對(duì)陽(yáng)性檢出情況，然后以最后確診結(jié)果為依據(jù)，計(jì)算各自的診斷靈敏度、特異度及準(zhǔn)確度，并分析其和最終診斷結(jié)果是否具有一致性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS22.0軟件處理數(shù)據(jù)，用“百分比”描述計(jì)數(shù)資料，采用χ2檢驗(yàn)，當(dāng)P＜0.05時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。一致性檢驗(yàn)采用Kappa，Kappa≥0.75、0.4＜Kappa＜0.75、Kappa≤0.4分別表示一致性較好、中等、較差。

2 結(jié)果

2.1 比較血清學(xué)、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)及二者聯(lián)合檢驗(yàn)對(duì)布魯氏菌感染的陽(yáng)性檢出率

104例疑似患者中，最終確診73例，血清學(xué)檢驗(yàn)檢出陽(yáng)性74例，陰性30例；細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)檢出陽(yáng)性71例，陰性33例；二者聯(lián)合檢驗(yàn)檢出陽(yáng)性73例，陰性31例，詳見(jiàn)表1。

表1 血清學(xué)、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)及二者聯(lián)合的陽(yáng)性檢出率比較 例（n）

2.2 比較血清學(xué)、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)及二者聯(lián)合檢驗(yàn)的診斷效能

以最終確診結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，得出血清學(xué)聯(lián)合細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)診斷的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度均明顯高于單一方法檢驗(yàn)（P均＜0.05），詳見(jiàn)表2。

表2 血清學(xué)、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)及二者聯(lián)合檢驗(yàn)的診斷效能比較 例（%）

2.3 診斷結(jié)果一致性分析

對(duì)血清學(xué)、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)及二者聯(lián)合和最終確診結(jié)果一致性進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，Kappa分別為0.559、0.549、0.908，提示兩種檢驗(yàn)方法和最終確診結(jié)果一致性中等，而二者聯(lián)合檢驗(yàn)和最終確診結(jié)果一致性較好。

3 討論

布氏菌病是一種具有較大危害性的傳染病，一般是由動(dòng)物先感染布魯氏菌，然后人和其直接接觸，或食用此動(dòng)物的乳制品及肉制品而患此病。人類受到布魯氏菌感染患病后如未能及時(shí)治療，可引起腦膜炎、脊髓炎等并發(fā)癥，嚴(yán)重時(shí)可致殘，故及早發(fā)現(xiàn)此病并做出明確診斷，有利于患者在最佳治療時(shí)間內(nèi)得到治療，有效根治疾病，亦可避免布氏菌病區(qū)域性傳播[5]。

目前，臨床檢驗(yàn)布魯氏菌感染的方法多種多樣，其中操作簡(jiǎn)便、費(fèi)用相對(duì)低廉的方法有血清學(xué)、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)等兩種，前者主要是通過(guò)肉眼觀察布魯氏桿菌抗體在血清中是否存在凝集情況，凝集情況產(chǎn)生的原因是布魯氏桿菌被人體免疫細(xì)胞吞噬后發(fā)生聚集。隨著人體內(nèi)此菌數(shù)量增多，人體免疫系統(tǒng)將不能有效阻止其繁殖，出現(xiàn)逃逸現(xiàn)象，從而導(dǎo)致病癥發(fā)生[6-7]。有關(guān)研究表明，血清學(xué)檢驗(yàn)對(duì)布魯氏菌感染的診斷準(zhǔn)確度較高，但亦會(huì)出現(xiàn)漏診的可能[8]。因?yàn)?，此病由急性期向慢性期或發(fā)作間期轉(zhuǎn)變后，人體內(nèi)攜帶有病菌的免疫細(xì)胞會(huì)由血液向骨髓、內(nèi)臟轉(zhuǎn)移，血清內(nèi)含有的病菌明顯變少，患者發(fā)熱癥狀改善。故在慢性期或發(fā)作間期對(duì)患者實(shí)施血清學(xué)檢驗(yàn)，漏診的可能性較高。而當(dāng)病菌由骨髓、內(nèi)臟轉(zhuǎn)移至血液中時(shí)，發(fā)熱癥狀再次出現(xiàn)，才可于血清中檢測(cè)到此病菌[9]。細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)是通過(guò)留取血標(biāo)本，接種于培養(yǎng)基上進(jìn)行24 h培養(yǎng)，對(duì)分離獲得的菌株進(jìn)行鑒別，以了解有無(wú)感染布魯氏菌。有關(guān)研究表明，對(duì)布魯氏菌感染進(jìn)行診斷時(shí)，不能將血清學(xué)檢驗(yàn)作為唯一診斷依據(jù)，當(dāng)其檢驗(yàn)結(jié)果呈陰性時(shí)，可進(jìn)一步做細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)，以減少漏誤診情況的發(fā)生，提高診斷準(zhǔn)確度[10]。本研究對(duì)上述兩種檢驗(yàn)方法及二者聯(lián)合檢驗(yàn)對(duì)布魯氏菌感染的陽(yáng)性檢出率及診斷效能進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)血清學(xué)檢驗(yàn)陽(yáng)性74例，細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)陽(yáng)性為71例，二者聯(lián)合檢驗(yàn)的陽(yáng)性為73例。以最終確診結(jié)果為依據(jù)，得知聯(lián)合檢驗(yàn)的診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度與各自單一檢驗(yàn)相比均明顯較高。此外，Kappa檢驗(yàn)顯示，二者聯(lián)合檢驗(yàn)和最終確診結(jié)果一致性較好（Kappa=0.908），而各自單一檢驗(yàn)和最終確診結(jié)果一致性中等（Kappa=0.559、0.549）?？梢?jiàn)血清學(xué)聯(lián)合細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)可提高對(duì)布魯氏菌感染診斷的效能。

為確保檢驗(yàn)質(zhì)量，使檢驗(yàn)結(jié)果真實(shí)、可靠，需在檢驗(yàn)過(guò)程中注意以下事項(xiàng)：受檢標(biāo)本采集完成后應(yīng)做好標(biāo)記，避免出現(xiàn)標(biāo)本和患者信息不匹配等情況；采集的標(biāo)本需及時(shí)送檢，不能及時(shí)送檢時(shí)應(yīng)按要求進(jìn)行保存，同時(shí)注意避免標(biāo)本受到污染而使檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差；對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)需嚴(yán)格遵照相應(yīng)規(guī)程，避免因人為操作失誤導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果錯(cuò)誤。必要時(shí)可由2名工作人員分別進(jìn)行檢驗(yàn)操作，當(dāng)兩者檢驗(yàn)結(jié)果截然不同時(shí)需再次檢驗(yàn)，以免出現(xiàn)誤判情況[11]。

綜上所述，血清學(xué)聯(lián)合細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)可大大提高診斷布魯氏菌感染的效能，從而為此病的診療提供重要依據(jù)。