雄激素受體在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義分析

張欣

乳腺癌作為當(dāng)前導(dǎo)致女性癌癥患者死亡的第二大主要原因，其治療主要傾向于靶向精準(zhǔn)治療[1]。乳腺癌是一種高度異質(zhì)性的激素依賴性惡性腫瘤。大部分乳腺癌患者經(jīng)綜合治療后，能獲得較長(zhǎng)的無(wú)病生存期和總生存期，甚至痊愈，但仍有一些患者因化療耐藥、不表達(dá)激素受體及缺乏特異性的治療靶點(diǎn)等原因在治療后出現(xiàn)短期復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，最終導(dǎo)致患者死亡。乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展與體內(nèi)雌激素和孕激素水平密切相關(guān)，雌激素、孕激素通過(guò)與相應(yīng)的雌激素受體（estrogen receptor，ER）和孕激素受體（progesterone receptor，PR）結(jié)合后發(fā)揮作用，ER和PR的檢測(cè)已成為乳腺癌患者判斷預(yù)后及指導(dǎo)治療的重要參數(shù)。然而難以用傳統(tǒng)組織學(xué)特征及雌孕激素受體的表達(dá)對(duì)所有乳腺癌進(jìn)行評(píng)估，因此探討新的生物學(xué)標(biāo)記物表達(dá)對(duì)該部分患者的治療具有重要的臨床意義[2]。雄激素受體（androgen receptor，AR）在人體組織中廣泛表達(dá)，報(bào)道顯示，接近80%～90%的乳腺癌組織中檢測(cè)出AR表達(dá)，明顯高于雌孕激素受體[3]。目前關(guān)于乳腺癌組織中AR的表達(dá)與患者臨床特征及預(yù)后間的關(guān)系已成為一個(gè)新的研究熱點(diǎn)[4]。研究進(jìn)一步分析AR的表達(dá)與乳腺癌組織病理特征、分子分型間的關(guān)系，探討其臨床意義。為將來(lái)乳腺癌的進(jìn)一步精準(zhǔn)治療積累資料，提供有價(jià)值的參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇福州市第一醫(yī)院乳腺外科2017年5月—2020年5月收治的女性乳腺癌患者113例，年齡36～74歲，平均（47.86±10.61）歲，其中絕經(jīng)前患者65例，絕經(jīng)后患者48例，所有患者均行手術(shù)治療，包括64例（56.6%）乳腺癌改良根治術(shù)、26例（23.0%）乳腺單純切除術(shù)、23例（20.4%）乳腺象限切除術(shù)，術(shù)后均經(jīng)病理學(xué)確診。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）患者經(jīng)術(shù)前穿刺及術(shù)后病理均提示為原發(fā)性乳腺癌；（2）單側(cè)發(fā)?。唬?）術(shù)前未行放化療、內(nèi)分泌治療；（4）臨床資料完整；（5）患者精神狀態(tài)正常，能配合治療，定期接受隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；（2）炎性乳癌、雙側(cè)發(fā)??；（3）合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤；（4）合并明顯手術(shù)禁忌證，無(wú)法行手術(shù)治療。研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均知情同意。

1.2 方法

將切下的腫瘤組織制成切片，厚度約4 μm，經(jīng)烤片、脫水、脫蠟后，放入0.3% H2O2溶液內(nèi)，抑制過(guò)氧化物酶活性。使用pH約6.0的酸性緩沖液修復(fù)抗原（溫度約95℃，時(shí)間約15～20 min），于室溫下冷卻至常溫之后，滴加一抗AR單克隆抗體（sino biological公司，100 μL/支，100273-T32），于4℃條件下過(guò)夜。滴加經(jīng)生物素標(biāo)記的二抗（美國(guó)BOSTER公司， 100 mL/盒，SV0002），于37℃條件下反應(yīng)20 min。使用二氨基聯(lián)苯胺（DAB）（Solarbio公司， 2×10 mL/盒，DA1010）對(duì)標(biāo)本染色，采用蘇木精與染色細(xì)胞核對(duì)比。以強(qiáng)陽(yáng)性腫瘤組織為陽(yáng)性對(duì)照，采用PBS緩沖液（meilunbio公司，500 mL/瓶，MA0015）替代一抗為陰性對(duì)照，在光學(xué)顯微鏡下（日本NIKON公司，Ts2-FL）對(duì)染色標(biāo)本進(jìn)行觀察，在每張切片上選擇5～8個(gè)視野觀察，由兩位以上病理科副主任醫(yī)師對(duì)結(jié)果進(jìn)行判斷。AR陽(yáng)性標(biāo)本染色位于細(xì)胞核，結(jié)果呈深棕色顆粒，AR陽(yáng)性指陽(yáng)性細(xì)胞占比超過(guò)1%。其中低表達(dá)為陽(yáng)性細(xì)胞比例范圍為1%～10%，中表達(dá)為11%～50%，高表達(dá)為大于50%。超過(guò)1%腫瘤細(xì)胞核染色陽(yáng)性顯示雌孕激素受體陽(yáng)性。

1.3 觀察指標(biāo)

采用免疫組化法對(duì)乳腺癌組織進(jìn)行染色，結(jié)果為陰性或（1+）提示HER-2陰性，結(jié)果為（2+）及以上提示HER-2陽(yáng)性。Ki-67指標(biāo)增加定義為超過(guò)14%的腫瘤細(xì)胞核染色結(jié)果為陽(yáng)性，使用國(guó)際上2013年St. Gallen會(huì)議上達(dá)成的共識(shí)對(duì)乳腺癌亞組進(jìn)行分型，主要包括管腔A（Luminal A）型、管腔B（Luminal B）、三陰性乳腺癌（triple negative breast cancer，TNBC）和人表皮生長(zhǎng)因子受體-2（human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）過(guò)表達(dá)型乳腺癌，乳腺癌組織臨床病理分期根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)（American joint committee on cancer，AJCC）提出的腫瘤病變范圍分類方法（tumor node metastasis classification，TNM）分期標(biāo)準(zhǔn)，腫瘤組織病理組織學(xué)分級(jí)主要根據(jù)卡夫綻放-理查森（scarff-bloom-richardson，SBR）分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷[5-7]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料采用（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌組織標(biāo)本結(jié)果

113例乳腺癌組織經(jīng)免疫組化分析顯示，AR陽(yáng)性52例（46.02%），陰性61例（53.98%）。AR陰性乳腺癌組織胞核未見著色（見圖A），AR陽(yáng)性乳腺癌組織胞核可見黃褐色顆粒，同時(shí)表達(dá)程度越高，染色細(xì)胞越多（見圖B、C、D）。術(shù)后腫瘤組織根據(jù)病理類型包括浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌92例（81.4%）、導(dǎo)管內(nèi)原位癌7例（6.2%）、浸潤(rùn)性小葉癌5例（4.4%）、黏液性癌5例（4.4%）、髓樣癌4例（3.5%）。根據(jù)組織學(xué)分級(jí)包括高分化組2例，中分化組75例，低分化組36例。根據(jù)TNM分期包括0期3例，Ⅰ期44例，Ⅱ期52例，Ⅲ期14例。根據(jù)腫瘤大小包括Tis 3例，T158例，T245例，T37例。無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移69例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移44例，其中N122例、N212例、N310例。

2.2 AR表達(dá)與患者臨床特征的關(guān)系

AR表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER、PR顯著相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER和PR陽(yáng)性患者中AR陽(yáng)性率顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 AR表達(dá)與患者臨床特征的關(guān)系

2.3 AR表達(dá)與乳腺癌組織分子分型間的關(guān)系

113例乳腺癌患者中，Luminal A型患者16例，Luminal B型患者62例，HER-2過(guò)表達(dá)型患者15例，TNBC患者20例。Luminal A型患者AR陽(yáng)性率為87.5%、Luminal B型為38.7%、Her-2過(guò)表達(dá)型為53.3%、TNBC為30.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 AR表達(dá)與乳腺癌組織分子分型間的關(guān)系 [例（%）]

2.4 三陰性及非三陰性乳腺癌組織中AR的表達(dá)差異

三陰性乳腺癌組織中AR陽(yáng)性率為30.0%（6/20），非三陰性乳腺癌組織中AR陽(yáng)性率為49.5%（46/93），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

表3 三陰性及非三陰性乳腺癌組織中AR的表達(dá)差異性分析[例（%）]

3 討論

AR是細(xì)胞核受體超家族成員之一，細(xì)胞核受體都具有配體誘導(dǎo)型轉(zhuǎn)錄因子的作用，它們可以調(diào)節(jié)自身相關(guān)特異性配體對(duì)靶基因的表達(dá)。AR本質(zhì)是一種磷蛋白，它與睪酮和雙氫睪酮結(jié)合后起轉(zhuǎn)錄因子的作用。AR基因位于X染色體的長(zhǎng)臂上，為單拷貝基因，長(zhǎng)度約90 kb。AR主要由配體結(jié)合域、鉸鏈區(qū)、DNA結(jié)合域和氨基末端結(jié)構(gòu)域組成。氨基末端結(jié)構(gòu)域包含1～556個(gè)殘基，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄和共軛因子間相互作用，結(jié)構(gòu)依賴于氨基末端結(jié)構(gòu)域結(jié)合的蛋白或DNA引起的構(gòu)象改變而決定。DNA結(jié)合域包含557～627個(gè)殘基，該區(qū)最保守，調(diào)節(jié)核受體結(jié)合到特異的基因。DNA結(jié)合域是有兩個(gè)富含半胱氨酸的鋅指結(jié)構(gòu)組成。第一個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)包含高度保守的P盒，決定序列的特異性。第二個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)包含了D盒，主要參與二聚體作用。鉸鏈區(qū)連接DNA結(jié)合域和配體結(jié)合域，包含628～669個(gè)殘基，包含有一個(gè)核定位信號(hào)。C末端的配體結(jié)合域，包含670～919殘基，由外顯子4～8編碼，該區(qū)是由12個(gè)α螺旋狀結(jié)構(gòu)組成，包繞一個(gè)中央?yún)^(qū)，該區(qū)為配體結(jié)合域，天然的配體結(jié)合位置，雙氫睪酮在此與AR結(jié)合，而發(fā)揮生物活性作用。AR有8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子，外顯子1編碼N末端轉(zhuǎn)錄激活域，外顯子2，3編碼DNA結(jié)合域，外顯子4～8編碼激素結(jié)合域。雄激素刺激下AR被激活，通過(guò)不同的機(jī)制調(diào)控相關(guān)分子的表達(dá)，影響乳腺癌細(xì)胞增殖。作為核受體家族，AR與雄激素結(jié)合后形成激素受體復(fù)合物，作用于靶基因的雄激素應(yīng)答元件，影響相關(guān)蛋白的表達(dá)。AR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在乳腺癌演進(jìn)過(guò)程中起重要作用[8]。

圖1 AR在乳腺癌組織中的表達(dá)（×100）

報(bào)道顯示，AR在良惡性乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)均能表達(dá)，顯示乳腺上皮細(xì)胞對(duì)雄激素的應(yīng)答[9]。近年來(lái)關(guān)于乳腺癌組織與AR間的關(guān)系研究結(jié)果不盡相同，因此AR作為乳腺癌患者的預(yù)后標(biāo)志物目前仍缺乏高質(zhì)量的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，乳腺癌的治療傾向于靶向干預(yù)，故探討乳腺癌組織中AR的表達(dá)率及其與患者臨床病理特征間的關(guān)系對(duì)指導(dǎo)臨床實(shí)踐具有重要的意義。

研究結(jié)果顯示，113例乳腺癌患者中AR的陽(yáng)性表達(dá)率為46.02%，這一點(diǎn)與費(fèi)曉春等[9]的報(bào)道一致，這表明在乳腺癌組織中AR的陽(yáng)性率較高，值得臨床醫(yī)生關(guān)注。祝志川等[10]的研究結(jié)果顯示乳腺癌組織中AR表達(dá)陽(yáng)性率與雌孕激素受體陽(yáng)性率表達(dá)呈顯著正相關(guān)，根據(jù)腫瘤TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ、Ⅱ期患者AR表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于Ⅲ、Ⅳ期患者。任曉燕等[11]報(bào)道635例乳腺癌患者中AR表達(dá)陽(yáng)性率與雌孕激素受體陽(yáng)性率呈顯著正相關(guān)，同時(shí)與Ki-67表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，AR表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER、PR顯著相關(guān)，同時(shí)無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER和PR陽(yáng)性患者中AR陽(yáng)性率顯著增加。因此對(duì)于AR陽(yáng)性患者，ER/PR陽(yáng)性率更高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率更低，其可作為乳腺癌患者的治療靶點(diǎn)及預(yù)后評(píng)估指標(biāo)，對(duì)于AR陽(yáng)性表達(dá)者，患者預(yù)后更好。

陳艷宇等[12]研究了123例患者中AR的表達(dá)情況，其中Luminal A型 患 者AR陽(yáng) 性 率 為12.75%、Luminal B型 為52.94%、HER-2過(guò)表達(dá)型為19.61%，同時(shí)三陰性乳腺癌中AR為14.71%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明在不同分子亞型乳腺癌患者中，AR的陽(yáng)性率差異性較大。本研究結(jié)果也證明了這一點(diǎn)，對(duì)于TNBC型患者，腫瘤直徑更大、淋巴結(jié)容易發(fā)生轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)更高，同時(shí)容易出現(xiàn)復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，患者預(yù)后更差。本研究中對(duì)于不同分型的乳腺癌患者，AR陽(yáng)性表達(dá)率差異顯著，進(jìn)一步說(shuō)明AR能夠作為判斷乳腺癌患者預(yù)后及惡性程度的關(guān)鍵指標(biāo)。

綜上所述，本研究證實(shí)對(duì)于乳腺癌組織，AR陽(yáng)性率較高，其中無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER和PR陽(yáng)性患者中AR陽(yáng)性率顯著增加，同時(shí)不同分型乳腺癌患者AR陽(yáng)性率差異顯著，AR陽(yáng)性乳腺癌組織惡性程度更低，預(yù)后相對(duì)更好，未來(lái)AR可能成為治療乳腺癌的新靶點(diǎn)。