1，25-二羥維生素D3通過NLRP3/caspase-1/GSDMD信號軸干預(yù)中性粒細(xì)胞性哮喘

張景鴻，韋麗瑩，陳一平

(1.廣西醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院急診科，廣西 南寧 530007；2.廣西醫(yī)科大學(xué)附屬民族醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)科，廣西 南寧 530001)

支氣管哮喘是呼吸道常見的慢性疾病，近年來其發(fā)病率有上升趨勢。哮喘也是一種異質(zhì)性疾病，具有復(fù)雜的病理生理機制和不同的表型。根據(jù)支氣管哮喘氣道炎癥特征的不同將支氣管哮喘分為嗜酸性粒細(xì)胞性哮喘和非嗜酸性粒細(xì)胞性哮喘，非嗜酸性粒細(xì)胞性哮喘中以中性粒細(xì)胞氣道浸潤為主的稱為中性粒細(xì)胞性哮喘(neutrophilic asthma，NA)。中性粒細(xì)胞性哮喘對糖皮質(zhì)激素治療不敏感，是非嗜酸性粒細(xì)胞性哮喘中最主要的類型，需要進一步探索其機制并尋找針對性的治療方案。

維生素D3是一種脂溶性維生素，可調(diào)節(jié)鈣磷代謝。研究發(fā)現(xiàn)，維生素D3具有免疫調(diào)節(jié)作用。流行病學(xué)方面的調(diào)查已觀察到維生素D缺乏與哮喘發(fā)作之間的相關(guān)性，我們的實驗也發(fā)現(xiàn)血清維生素D3濃度降低和肥胖哮喘的癥狀表現(xiàn)相關(guān)，和NLRP3炎性小體的活性也有相關(guān)性[1]。炎性小體是一種細(xì)胞內(nèi)多聚體蛋白復(fù)合物，可以識別應(yīng)激相關(guān)的內(nèi)源性信號分子并參與先天免疫系統(tǒng)的激活。已證明NLRP3炎性小體在中性粒細(xì)胞哮喘的發(fā)病機制中起重要作用。NLRP3炎性小體活化過程中，促進細(xì)胞因子IL-18和IL-1β分泌，同時誘導(dǎo)caspase-1依賴的細(xì)胞焦亡。細(xì)胞焦亡主要由casepase-1、gasdermin D (GSDMD)介導(dǎo)。GSDMD是casepase-1的底物，經(jīng)切割形成的GSDMD-N端通過寡聚化在細(xì)胞膜上形成孔洞，導(dǎo)致細(xì)胞裂解死亡，并釋放炎癥因子，級聯(lián)放大炎癥反應(yīng)。維生素D3具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)作用，可用于哮喘控制，但其作用機理尚不清楚。本研究通過制作中性粒細(xì)胞性哮喘小鼠模型，使用1，25-二羥維生素D3[1，25-(OH)2D3]進行干預(yù)，觀察NLRP3、caspase-1、GSDMD蛋白表達(dá)、炎性細(xì)胞因子分泌及哮喘氣道炎癥表現(xiàn)，探討1，25-(OH)2D3治療中性粒細(xì)胞性哮喘的效果及作用機制。

1 材料與方法

1.1 試劑雞卵清蛋白(OVA，Grade V，美國Sigma公司，# A5503)，氫氧化鋁凝膠(美國Sigma公司，# 1017502)，小鼠IL-17、IL-1β、IL-18酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測試劑盒(美國R&D公司，# MHS170、#MLB00C、#DY7625-05)，蘇木精-伊紅染液試劑盒(江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司KGA224)，瑞氏染色液，小鼠抗Ly6G抗體(美國Thermo Fisher scientific公司，Thermo 14-5931-82)，Western blot檢測試劑盒(江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司，# KGP1201)，Anti-GAPDH(江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司，# KGAA002)，Anti-cleaved caspase-1、Anti-GSDMD、Anti-NLRP3抗體(美國Cell Signaling Technology公司，#89332S、#93709S、#15101S)

1.2 儀器多功能酶標(biāo)儀(美國 MD Spectramac M3)，電泳儀(美國Bio-Rad Power Supplies Basic)，Trans-Blot Turbo全能型蛋白轉(zhuǎn)印系統(tǒng)(美國Bio-Rad 170-4150)，凝膠成像系統(tǒng)(英國SYNGENE G，BOXChemiXR5)，病理圖像分析系統(tǒng)(德國Leica公司)，5810R高速低溫離心機(德國Eppendorf 5810R)，超聲霧化器及自制霧化吸入箱等。

1.3 方法

1.3.1實驗動物和分組 BALB/c♀小鼠，無特定病原體(SPF)級，4～6周齡，體質(zhì)量(20～25)g。由廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供并飼養(yǎng)于SPF級屏障系統(tǒng)內(nèi)。動物飼養(yǎng)及實驗方案均嚴(yán)格按照廣西醫(yī)科大學(xué)動物倫理委員會動物實驗規(guī)范執(zhí)行。許可證號：SCXK(桂)2020-0003。動物分組與模型制備：將24只BALB/c雌鼠隨機(隨機數(shù)字表法)分為3組：正常對照組(A)、模型組(B)、VD3治療組(C)，每組8只。B組和C組采取卵清蛋白結(jié)合脂多糖的方法制作小鼠中性粒細(xì)胞性哮喘模型。適應(yīng)性喂養(yǎng)后，每只小鼠分別于d 0、d 7和d 14給予雞卵清蛋白(OVA)混懸液(25 μg OVA和1 mg氫氧化鋁混合于0.2 mL的PBS液中)腹腔注射致敏。正常對照組以等量PBS代替致敏原腹腔注射。OVA致敏后，d 21開始行激發(fā)。將小鼠置于密閉容器中，給予2%OVA磷酸鹽緩沖液20 mL霧化刺激，每天1次，連續(xù)7 d，每次20 min。正常對照組以PBS代替行霧化刺激。用LPS誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞性炎癥，每只小鼠于d 21、22、23、25、27在OVA激發(fā)之前30 min予以LPS 10 μg鼻腔滴入給藥。C組另予以0.1%的1，25-(OH)2D3，按4 μg·kg-1在每次氣道給予LPS激發(fā)前1 h腹腔注射。

1.3.2氣道反應(yīng)性測定 使用美國BUXCO公司TBL3999雙腔體積描記系統(tǒng)進行無創(chuàng)氣道反應(yīng)性測定，于末次激發(fā)24 h后測定小鼠氣道阻力，以乙酰甲膽堿相應(yīng)濃度激發(fā)下的特殊氣道阻力(sRaw)平均值與PBS激發(fā)下的特殊氣道阻力平均值來反映，公式為：sRaw值=Mch sRaw值-PBS sRaw值，單位為：cmH2O。將小鼠放入密閉艙內(nèi)適應(yīng)時間為5 min，以PBS4和12.5、25、50 g·L-13個乙酰甲膽堿的濃度進行激發(fā)霧化，記錄數(shù)據(jù)，分析小鼠氣道反應(yīng)性。

1.3.3標(biāo)本收集 小鼠于最后1次氣道激發(fā)后24 h，處死收集標(biāo)本，使用500 μL冰PBS灌洗肺3次，收集支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)。將BALF的上清液保存在-20 ℃供檢測細(xì)胞因子。收取肺組織，右肺組織福爾馬林固定，以進行病理檢查；左肺葉保存在-80 ℃低溫冰箱，用于Western blot分析。

1.3.4炎癥細(xì)胞計數(shù) 將BALF懸浮液的上清液用于檢測細(xì)胞因子。剩余的細(xì)胞沉淀重懸于200 μL PBS中。用血細(xì)胞計數(shù)器測定50 μL細(xì)胞懸液，計數(shù)細(xì)胞總數(shù)。另一部分懸液進行離心重懸，行瑞氏染色，每張玻片至少計數(shù)200個炎癥細(xì)胞，根據(jù)形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)和染色特性，按嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞進行細(xì)胞分類；由3位病理科醫(yī)師進行盲法閱片，取平均值。

1.3.5肺組織病理 肺組織用4%多聚甲醛固定并進行石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，脫蠟后分別進行用蘇木精伊紅(HE)和阿辛藍(lán)-過碘酸雪夫(AB-PAS)染色，觀察小鼠肺部炎癥細(xì)胞浸潤、氣道黏膜上皮中杯狀細(xì)胞增生和黏液分泌情況，用于評估肺組織的病理變化。

1.3.6細(xì)胞因子IL-1β、IL-18、IL-17水平 ELISA法檢測BALF中IL-1β、IL-18、IL-17細(xì)胞因子濃度，根據(jù)說明書提供的方法嚴(yán)格操作。終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀檢測450 nm波長吸光度值(OD值)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出細(xì)胞因子IL-1β、IL-18、IL-17濃度。

1.3.7肺組織切片免疫組化染色測定中性粒細(xì)胞浸潤情況 免疫組化法檢測中性粒細(xì)胞表面抗原Ly6G表達(dá)。常規(guī)脫蠟至水,pH 9.0的抗原修復(fù)緩沖液覆蓋切片，微波加熱10 min修復(fù)抗原。用配制好的3%過氧化氫(H2O2)溶液浸泡10 min以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。5%牛血清蛋白(BSA)室溫封閉切片1 h進行血清封閉。小鼠Ly6G抗體(1 ∶50)4 ℃下孵育過夜(15 h)。加HRP標(biāo)記的山羊抗兔二抗，室溫孵育1 h。DAB顯色試劑盒顯色，然后蘇木素復(fù)染2 min，水洗返藍(lán)。常規(guī)脫水、二甲苯透明、中性樹膠進行封固。在顯微鏡下鏡檢觀察染色結(jié)果并采集圖像。

1.3.8Western blot檢測NLRP3、caspase-1和GSDMD蛋白 Western blot檢測肺組織NLRP3、caspase-1和GSDMD蛋白水平的表達(dá)變化。肺組織加入含蛋白酶抑制劑的cocktails裂解細(xì)胞。胞質(zhì)蛋白的提取按照試劑盒的操作步驟進行。采用Bradford法測定蛋白濃度。并獲取20 μL蛋白用于SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，隨后采用半干轉(zhuǎn)印方法將其轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜上。纖維素膜用5%牛血清白蛋白室溫封閉2 h，隨后分別用相應(yīng)的一抗和二抗孵育，ECL顯影、拍照。用圖像分析系統(tǒng)分析蛋白條帶灰度值，以目的蛋白條帶灰度值與內(nèi)參蛋白GAPDH條帶灰度值的比值反映蛋白表達(dá)水平。

2 結(jié)果

2.1 小鼠氣道反應(yīng)性測定結(jié)果3組小鼠經(jīng)無創(chuàng)肺功能檢測，中性粒細(xì)胞性哮喘模型組在不同濃度Mch激發(fā)時(12.5、25、50 g·L-1)，氣道反應(yīng)性均高于對照組小鼠，其sRaw增長值與對照組小鼠差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；1，25-(OH)2D3治療組小鼠在25 g·L-1和50 g·L-1Mch的濃度激發(fā)下，其氣道反應(yīng)性較模型組小鼠有明顯下降，sRaw增長值差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見Fig 1。

Fig 1 Airway hyper-responsiveness test results

2.2 BALF中細(xì)胞分類計數(shù)中性粒細(xì)胞性模型組BALF中細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞細(xì)胞比例明顯增高，與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；1，25-(OH)2D3治療組細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞比例較模型組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見Fig 2。

Fig 2 Bronchoalveolar lavage fluid cell counts

2.3 支氣管肺組織病理觀察小鼠肺組織經(jīng)HE染色以及阿辛藍(lán)-過碘酸雪夫(AB-PAS)染色：對照組可見肺泡壁及支氣管結(jié)構(gòu)完整，上皮黏膜完整，杯狀細(xì)胞少見，管腔內(nèi)無粘性分泌物，肺泡壁無明顯增厚，肺小血管壁無增厚，肺泡間、氣道周圍無炎癥細(xì)胞浸潤。中性粒細(xì)胞性哮喘模型組可見肺臟結(jié)構(gòu)破壞，肺泡壁明顯增厚和肺泡大小不一致，支氣管管腔內(nèi)充滿分泌物，可見支氣管上皮出現(xiàn)脫落；血管和支氣管周圍有較多炎性細(xì)胞浸潤，肺泡及間質(zhì)充血明顯，有出血和分泌物。PAS著色細(xì)胞明顯增加，氣道上皮杯狀細(xì)胞增生，氣道管腔內(nèi)黏液滲出明顯。治療組炎癥浸潤減輕，支氣管管腔通暢，黏膜層完整，肺泡及間質(zhì)有輕度充血，對比模型組肺泡壁增厚減輕，PAS染色見杯狀細(xì)胞增生及管腔內(nèi)黏液分泌減輕，見Fig 3。

Fig 3 Histologic changes in lung tissues by HE and AB-PAS staining (×200)

2.4 BALF中細(xì)胞因子IL-17、IL-18、IL-1β濃度比較ELISA檢測BALF中細(xì)胞因子，結(jié)果提示，中性粒細(xì)胞性哮喘模型組BALF中IL-17、IL-18、IL-1β水平較正常對照組增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，治療組BALF中IL-17、IL-18、IL-1β濃度水平較模型組下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見Fig 4。

Fig 4 Cytokine levels in bronchoalveolar lavage fluid

2.5 中性粒細(xì)胞Ly6G免疫組織化學(xué)染色各組小鼠肺組織免疫組化染色顯示，對照組小鼠肺組織未見明顯中性粒細(xì)胞浸潤；與對照組相比，中性粒細(xì)胞性哮喘模型組肺組織可見中性粒細(xì)胞浸潤數(shù)量明顯增加；而1，25-(OH)2D3治療組小鼠肺組織Ly6G陽性染色降低，提示中性粒細(xì)胞浸潤減少，見Fig 5。

Fig 5 Immunohistochemical staining for Ly6G+ neutrophils in lung tissues (×400)

2.6 肺組織NLRP3、caspase-1和GSDMD蛋白表達(dá)通過Western blot方法檢測各組小鼠肺組織NLRP3、caspase-1、GSDMD蛋白的表達(dá)水平，中性粒細(xì)胞性哮喘模型組小鼠肺組織NLRP3、caspase-1、GSDMD蛋白水平與對照組相比均明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；1，25-(OH)2D3治療組NLRP3、caspase-1、GSDMD的蛋白表達(dá)明顯降低，較模型組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見Fig 6。

Fig 6 Detection of NLRP3，caspase-1，GSDMD protein in lung tissues by Western blot and relative expression of protein

3 討論

NA是一種重要的支氣管哮喘炎癥表型，與疾病嚴(yán)重程度、糖皮質(zhì)激素耐藥相關(guān)，其機制尚不明確。因其具有自身特殊的免疫病理學(xué)機理和表征特點，且占非嗜酸性粒細(xì)胞性哮喘的半數(shù)以上，已成為當(dāng)前哮喘研究中關(guān)注的焦點。NA對糖皮質(zhì)激素治療抵抗，而且臨床癥狀相比于其它類型的哮喘嚴(yán)重，因此需要對NA的發(fā)病機制加深探討，以期獲得新的治療靶點或干預(yù)藥物[2]。Th17細(xì)胞通過分泌IL-17A、IL-17F等細(xì)胞因子促進中性粒細(xì)胞氣道炎癥，與對糖皮質(zhì)激素治療的不敏感有關(guān)。目前研究表明，炎性小體活化是機體各種炎性反應(yīng)的中心環(huán)節(jié)。Simpson等[3]證明，在中性粒細(xì)胞性哮喘中NLRP3炎性小體相關(guān)基因表達(dá)增加，并且在患者誘導(dǎo)痰巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞中檢測到NLRP3、caspase-1蛋白。中性粒細(xì)胞性哮喘的氣道炎癥程度及糖皮質(zhì)激素抵抗都和NLRP3炎性小體、IL-1β水平明顯相關(guān)。Kim等[4]研究提示，阻斷NLRP3炎性小體能有效改善合并衣原體和嗜血桿菌呼吸道感染的卵清蛋白誘導(dǎo)的小鼠動物模型的中性粒細(xì)胞性氣道炎癥。牛蒡子苷元可以通過SIRT1/NLRP3通路有效減輕哮喘模型小鼠氣道炎癥細(xì)胞浸潤情況、降低組織炎癥細(xì)胞因子，改善哮喘的氣道炎癥[5]。在本實驗研究中，經(jīng)OVA及LPS誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞性哮喘模型小鼠出現(xiàn)氣道反應(yīng)性增高，支氣管肺組織炎癥反應(yīng)增強，BALF中中性粒細(xì)胞增多和肺組織中性粒細(xì)胞浸潤增加，IL-17增高；并檢測到NLRP3相關(guān)的細(xì)胞因子IL-18、IL-1β水平增加，肺組織NLRP3蛋白表達(dá)的增強，提示NLRP3炎性小體可能在哮喘的氣道中性粒細(xì)胞性炎癥形成中發(fā)揮重要作用。

維生素D3是一種脂溶性維生素，在體內(nèi)調(diào)節(jié)鈣磷的代謝，促進骨骼發(fā)育。攝入體內(nèi)的維生素D分別經(jīng)肝臟25-羥化酶、腎臟1-α羥化酶的作用轉(zhuǎn)化為生物活性最強的1，25-(OH)2D3。實驗證明維生素D3對固有免疫和特異性免疫功能都具有明顯的調(diào)節(jié)效應(yīng)。張路等[6]報道1，25-(OH)2D3可以減輕慢性哮喘小鼠的氣道重塑及氣道上皮細(xì)胞凋亡。Agrawal等[7]觀察到使用1，25-(OH)2D3減輕了哮喘小鼠氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性。這些研究顯示了維生素D3用于控制哮喘的作用。我們近期發(fā)表的研究觀察了維生素D3及NLRP3炎性小體表達(dá)和肥胖性哮喘的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)血清維生素D3濃度水平和哮喘小鼠的氣道反應(yīng)性、IL-1β mRNA表達(dá)水平成負(fù)相關(guān)，提示血清維生素D3濃度降低和肥胖哮喘的癥狀表現(xiàn)相關(guān)，和NLRP3炎性小體的活性也有相關(guān)性[1]。活性維生素D3在人體內(nèi)表現(xiàn)的抗炎作用與NLRP3炎性小體有關(guān)，有研究報道，1，25-(OH)2D3可以通過激活Nrf2從而抑制ROS-NLRP3-IL-1β信號軸，減輕高滲誘導(dǎo)的人角膜上皮細(xì)胞炎癥[8]。維生素D3運用于預(yù)防和治療糖尿病性視網(wǎng)膜病等炎癥，研究發(fā)現(xiàn)維生素D3可降低糖尿病誘導(dǎo)的活性氧上升并抑制ROS/TXNIP/NLRP3炎性小體途徑，減輕視網(wǎng)膜血管損傷和細(xì)胞凋亡[9]。本實驗中，我們研究發(fā)現(xiàn)，予以中性粒細(xì)胞性哮喘小鼠1，25-(OH)2D3治療降低了氣道AHR和BALF中性粒細(xì)胞量，抑制了肺組織中性粒細(xì)胞浸潤和杯狀細(xì)胞的增生，提示1，25-(OH)2D3對中性粒細(xì)胞性炎癥的抑制作用。IL-17是促進中性粒細(xì)胞浸潤的主要因子，IL-18和IL-1β是NLRP3炎性小體的下游因子。研究觀察到1，25-(OH)2D3治療降低了細(xì)胞因子IL-17、IL-18和IL-1β水平，結(jié)果表明1，25-(OH)2D3治療抑制哮喘氣道炎癥的作用和其調(diào)節(jié)IL-17和NLRP3炎性小體有關(guān)。

NLRP3炎性小體是由NOD樣受體NLRP3骨架蛋白、接頭蛋白ASC和caspase-1組成的寡聚復(fù)合物。NLRP3炎性小體活化caspase-1，促進IL-1β和IL-18的成熟和分泌，增強炎癥并介導(dǎo)細(xì)胞焦亡。炎性小體-焦亡途徑激活過程中，IL-1β前體裂解成具有活性的IL-1β，以及GSDMD切割形成GSDMD-N端和GSDMD-C端，GSDMD-N端與胞膜磷脂酰肌醇磷酸酯結(jié)合形成孔洞，導(dǎo)致細(xì)胞裂解死亡，釋放成熟的IL-1β和IL-18，募集、激活其他免疫細(xì)胞，誘導(dǎo)其它炎癥因子、趨化因子、粘附分子等，引發(fā)級聯(lián)反應(yīng)，起到放大炎癥的作用。NLRP3/caspase-1/GSDMD信號軸介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡與相關(guān)疾病的密切關(guān)系受到了較大的關(guān)注。Jia等[10]在腸缺血/再灌注損傷研究中發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍通過抑制TXNIP-NLRP3-GSDMD途徑減輕了氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，防止腸道缺血/再灌注損傷。高糖誘導(dǎo)NLRP3-caspase-1-GSDMD活化和膜孔形成，導(dǎo)致視網(wǎng)膜周細(xì)胞焦亡和炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-18釋放，即高糖通過NLRP3-caspase-1-GSDMD介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡誘導(dǎo)糖尿病視網(wǎng)膜病變[11]。Jiang等[12]的研究揭示，維生素D/維生素D受體可以通過抑制NF-κB介導(dǎo)的NLRP3/caspase-1/GSDMD細(xì)胞焦亡來減輕順鉑誘導(dǎo)的急性腎損傷。GSDMD對促炎細(xì)胞因子IL-1β和IL-18的釋放以及細(xì)胞焦亡起到控制作用[13]。我們實驗中使用1，25-(OH)2D3治療使肺組織NLRP3、caspase-1、GSDMD表達(dá)水平降低，提示其可能通過抑制NLRP3/caspase-1/GSDMD信號軸而干預(yù)中性粒細(xì)胞哮喘炎癥反應(yīng)。

維生素D通過其對先天性免疫和適應(yīng)性免疫反應(yīng)的作用而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)和抗炎效力。已有較多的研究探討了1，25-(OH)2D3在支氣管哮喘中的治療作用，顯示1，25-(OH)2D3可以調(diào)節(jié)多種免疫細(xì)胞途徑，抑制過度的炎癥反應(yīng)，如淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞和結(jié)構(gòu)細(xì)胞等，干預(yù)哮喘發(fā)病機制的眾多方面。重癥哮喘具有糖皮質(zhì)激素治療抵抗和氣道中性粒細(xì)胞浸潤的特點，與細(xì)胞因子IL-17的作用有關(guān)，而1，25-(OH)2D3也能調(diào)節(jié)氣道中性粒細(xì)胞性炎癥，增強中性粒細(xì)胞性哮喘對類固醇的反應(yīng)[14]。我們的實驗結(jié)果顯示，1，25-(OH)2D3能減輕中性粒細(xì)胞性哮喘小鼠氣道炎癥和炎性細(xì)胞因子分泌，抑制NLRP3、caspase-1、GSDMD蛋白表達(dá)。1，25-(OH)2D3可能通過調(diào)節(jié)NLRP3/caspase-1/GSDMD信號軸改善中性粒細(xì)胞性哮喘。因此，本研究揭示了1，25-(OH)2D3干預(yù)中性粒細(xì)胞性哮喘的積極作用，為其臨床應(yīng)用于治療中性粒細(xì)胞性哮喘或難治性哮喘提供了研究基礎(chǔ)，但仍需更多的研究去探明1，25-(OH)2D3的作用機制及其臨床使用的效果。