不同廠家采血管對(duì)血栓前狀態(tài)分子標(biāo)志物及血凝檢測(cè)結(jié)果的影響

陳俊瑤 江秀娟 黃金晶 張正華 蘇海翔 王玉虹

甘肅省腫瘤醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050

一次性真空采血管是檢驗(yàn)前樣本儲(chǔ)存、轉(zhuǎn)運(yùn)、分析和保存的承載容器，品種繁多，因其中加入了促凝劑成分，縮短了血液凝固時(shí)間，加快了血液分離速度，且使用方便，減少了交叉污染和抽血時(shí)穿刺的次數(shù)，越來越受到醫(yī)務(wù)工作者的青睞。但其質(zhì)量和性能是采血標(biāo)準(zhǔn)化不可忽視的問題，這對(duì)保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性具有重要的意義。因此選擇高質(zhì)量的采血容器是檢驗(yàn)前質(zhì)量控制的重要環(huán)節(jié)[1］。我科在開展血栓分子標(biāo)志物項(xiàng)目時(shí)，選用三個(gè)不同生產(chǎn)廠家的一次性真空采血管比較其檢測(cè)結(jié)果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 研究對(duì)象。隨機(jī)自愿加入的27~66歲腫瘤患者、醫(yī)院工作人員及家屬36例。

1.1.2 試管選擇。試管1：國(guó)產(chǎn)試管；試管2：進(jìn)口試管；試管3：與試管1不同廠家的另一家國(guó)產(chǎn)試管。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)項(xiàng)目。血栓分子標(biāo)記物項(xiàng)目包括：凝血酶抗凝血酶復(fù)合物（TAT）；纖溶酶-α2纖溶酶抑制物（PIC）；血栓調(diào)節(jié)蛋白（TM）；組織纖溶酶原激活物抑制劑-1復(fù)合物（t-PAIC）。凝血系列項(xiàng)目包括：凝血酶原時(shí)間（PT）；活化部分凝血酶原時(shí)間（APTT）；纖維蛋白原（FIB）；D-二聚體（D-Dimer）；纖維蛋白原降解產(chǎn)物（FDP）；凝血酶原時(shí)間（TT）；抗凝血酶Ⅲ（AT3）。

1.2.2 儀器和試劑。血栓分子標(biāo)志物檢測(cè)為日本希森美康公司生產(chǎn)的HISCL-5000全自動(dòng)免疫分析儀及配套試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品；凝血系列指標(biāo)檢測(cè)為日本希森美康公司生產(chǎn)的CS-5100全自動(dòng)凝血分析儀及配套的試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，其中FDP試劑和校準(zhǔn)品購(gòu)自日本積水醫(yī)療科技（中國(guó)）有限公司。L600低速自動(dòng)平衡離心機(jī)為長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司生產(chǎn)。

1.2.3 標(biāo)本采集。研究對(duì)象采血前3天內(nèi)不允許飲酒，禁食過夜（8~18小時(shí)），次日上午8：00至10：00之間采集血液樣本。按照試劑說明書分別用試管1、試管2和試管3同時(shí)抽取肘部靜脈血各2mL，抽血由同一名護(hù)士完成，樣本采集后每管均輕柔顛倒混勻5~8次，且所采集樣本無溶血、脂血、黃疸等情況。采集的3管抗凝血樣本立即同時(shí)離心（3000r/min，10min），進(jìn)行血栓分子標(biāo)志物及凝血系列檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用Python SciPy（Version：1.8.1）統(tǒng)計(jì)軟件包分析數(shù)據(jù)，所有數(shù)據(jù)描述采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)比較的方差分析，兩兩比較采用LSD法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同試管血栓前分子標(biāo)記物檢測(cè)結(jié)果比較 結(jié)果顯示，不同試管TAT檢測(cè)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1；且試管1及試管2、試管1及試管3檢測(cè)結(jié)果兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其他血栓分子標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

表1 不同試管血栓前分子標(biāo)記物檢測(cè)結(jié)果比較（±s）

表1 不同試管血栓前分子標(biāo)記物檢測(cè)結(jié)果比較（±s）

注：組間兩兩比較，*P<0.05

組別 n TAT（ng/mL）PIC（μg/mL）TM（TU/mL）t-PAIC（ng/mL）試管1 36 33.95±34.65 0.95±0.49 9.39±4.31 8.37±3.95試管2 36 1.87±1.58* 0.89±0.48 10.11±3.65 10.00±5.2試管3 36 2.23±1.57 0.92±0.51 10.01±3.85 10.3±5.56 F 10.132 0.033 0.116 0.530 P 0 0.968 0.891 0.593

2.2 不同試管凝血七項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果比較 結(jié)果顯示，不同試管PT檢測(cè)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表3；且試管1及試管2、試管1及試管3檢測(cè)結(jié)果兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其他凝血系列檢測(cè)結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

表2 不同試管凝血七項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果比較（±s）

表2 不同試管凝血七項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果比較（±s）

注：組間兩兩比較，*P<0.05

PT（秒） APTT（秒） FIB（g/L） D-二聚體（mg/L） FDP（μg/mL） TT（秒） AT3（%）試管1 36 10.01±1.3 22.62±3.33 3.17±1.03 1.02±1.14 3.21±2.43 18.87±1.67 91.38±19.33試管2 36 11.72±1.23* 24.83±5.98 3.02±0.82 1.01±1.15 2.88±1.35 17.98±1.87 90.08±20.99試管3 36 11.7±1.33* 25.28±6.41 3.03±0.83 0.98±1.05 2.81±1.58 18.48±1.98 89.99±20.81 F 6.592 0.772 0.096 0.003 0.155 0.668 0.016 P 0.004 0.471 0.909 0.997 0.857 0.520 0.984組別 n

3 討論

血栓前狀態(tài)是指機(jī)體內(nèi)纖溶系統(tǒng)和抗凝系統(tǒng)功能失調(diào)，容易引起血栓的多種因素改變，有血栓形成傾向但尚未形成血栓，或者形成少量血栓正處于溶解狀態(tài)。它的分子標(biāo)志物有AT-Ⅲ、v WF、D-二聚體、FIB、TAT、P-選擇素、纖維蛋白降解產(chǎn)物（FDP）等[2］。這些分子標(biāo)志物和凝血功能檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化近年來得到了臨床的重視。少數(shù)有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)生在診治患者過程中意識(shí)到血栓存在的風(fēng)險(xiǎn)，提前給患者做抗凝治療，但經(jīng)常在抗凝和止血治療的程度上難以把握，臨床發(fā)現(xiàn)血栓或出血幾乎已經(jīng)是晚期。因此通過檢測(cè)這些分子標(biāo)志物的改變，早期識(shí)別血栓前狀態(tài)的存在，采取相關(guān)適當(dāng)?shù)目鼓胧┦欠浅Ｓ斜匾?。然而血栓前狀態(tài)分子標(biāo)志物和凝血功能檢測(cè)的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性與一次性真空采血管的質(zhì)量緊密相關(guān)，采血管質(zhì)量和性能是采血標(biāo)準(zhǔn)化不可忽視的問題[3］，2018年國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布的WS/T 224-2018《真空采血管的性能驗(yàn)證》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（簡(jiǎn)稱WS/T 224~2018），為一次性真空采血管質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)化評(píng)估提供了指南[4］。

一次性真空采血管多為普通玻璃管和塑料管，內(nèi)含的各種添加劑（如抗凝劑、促凝劑、分離膠、表面活性劑）、試管材質(zhì)等均會(huì)對(duì)部分檢驗(yàn)項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響[5］，本研究選用的三家不同生產(chǎn)廠家的一次性真空采血管抗凝劑均為枸櫞酸鈉，其原理是通過與血液中鈣離子形成不容易解離的枸櫞酸鈣螯合物而達(dá)到抗凝作用，適用于血栓分子標(biāo)志物和凝血試驗(yàn)。且三家一次性真空采血管均符合美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（national committee for clinical laboratory standards，NCCLS）推薦的血凝指標(biāo)測(cè)定要求的抗凝劑為枸櫞酸鈉，濃度是3.2%，相當(dāng)于109mmol/L，抗凝劑與血液的比例是1∶9[6］。理論上使用三個(gè)廠家生產(chǎn)的一次性真空采血管用同一臺(tái)儀器進(jìn)行同一項(xiàng)目檢測(cè)，不同生產(chǎn)廠家試管采集的標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果理應(yīng)一致。但是，本研究結(jié)果表明，用不同生產(chǎn)廠家的一次性真空采血管（枸櫞酸鈉與血液比例均為1∶9）采集血液檢測(cè)血栓分子標(biāo)志物和凝血系列指標(biāo)，三家不同生產(chǎn)廠家試管的TAT檢測(cè)結(jié)果分別為：（33.95±34.65）ng/mL，（1.87±1.58）ng/mL，（2.23±1.57）ng/mL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=10.13，P<0.05），且試管1及試管2、試管1及試管3檢測(cè)結(jié)果兩兩比較差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；三家不同生產(chǎn)廠家試管的PT檢測(cè)結(jié)果分別為：（10.01±1.3）秒，（11.72±1.23）秒，（11.7±1.33）秒，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=6.59，P<0.05），且試管1及試管2、試管1及試管3檢測(cè)結(jié)果兩兩比較差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其他血栓分子標(biāo)志物和凝血系列檢測(cè)結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這與王延群[7］用國(guó)內(nèi)兩家不同企業(yè)生產(chǎn)的一次性真空采血管（枸櫞酸鈉抗凝劑）檢測(cè)64例血樣，發(fā)現(xiàn)PT等4項(xiàng)指標(biāo)均有顯著性差異的結(jié)果相符。產(chǎn)生差異的原因可能與一次性真空采血管的材質(zhì)、生產(chǎn)過程中對(duì)試管內(nèi)壁的處理方式不同導(dǎo)致管壁不光滑或硅化不好[8］、試管本身的清潔度[9］以及試管的消毒方式有關(guān)，這些因素會(huì)激活血樣中的凝血因子，使得部分凝血因子在檢測(cè)前被消耗，改變了血樣的原始狀態(tài)和穩(wěn)定性[10］，在檢測(cè)過程中產(chǎn)生干擾，從而對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成了一定的影響。因此，更換不同品牌、不同材質(zhì)或不同批號(hào)的一次性真空采血管時(shí)應(yīng)嚴(yán)格檢查采血管質(zhì)量并做好批間對(duì)比實(shí)驗(yàn)，并記錄存檔[11］。

隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的進(jìn)步和人們對(duì)于健康重視程度不斷提高，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的應(yīng)用范圍越來越廣。尤其在當(dāng)今精準(zhǔn)醫(yī)療時(shí)代，臨床實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備有了極大的改變，從單臺(tái)儀器的測(cè)定到自動(dòng)化流水線系統(tǒng)，使得實(shí)驗(yàn)室管理模式也隨之發(fā)生了根本性的變化[6］。醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)貫穿于診療的全過程，在提高醫(yī)療水平的同時(shí)，加強(qiáng)檢驗(yàn)質(zhì)量管理是十分必要的。檢驗(yàn)質(zhì)量不僅僅局限于檢驗(yàn)結(jié)果本身，從管理的角度來講包括影響檢驗(yàn)結(jié)果全過程的各個(gè)方面：檢驗(yàn)前質(zhì)量控制、檢驗(yàn)中質(zhì)量控制和檢驗(yàn)后質(zhì)量控制?！夺t(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》要求實(shí)驗(yàn)室內(nèi)采用不同方法或儀器檢驗(yàn)同一項(xiàng)目時(shí)，應(yīng)進(jìn)行一致性的比較（儀器間比對(duì)）[6］，但是，臨床檢驗(yàn)的質(zhì)量過于重視檢驗(yàn)結(jié)果而忽視了檢驗(yàn)標(biāo)本的質(zhì)量控制。有統(tǒng)計(jì)分析表明，檢驗(yàn)前質(zhì)量控制保證體系是保證臨床檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的重要基礎(chǔ)[6］，檢驗(yàn)前標(biāo)本的質(zhì)量在整個(gè)檢驗(yàn)質(zhì)量控制程序中占比高達(dá)70%[12］，但其具有很大的不可控性，是檢驗(yàn)儀器、試劑、質(zhì)控品等無法解決的。從醫(yī)生申請(qǐng)檢驗(yàn)項(xiàng)目開始，包括選擇采集樣本容器、采集樣本、運(yùn)送樣本以及樣本運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室后進(jìn)行檢驗(yàn)前的處理，這些都屬于檢驗(yàn)前階段的質(zhì)量控制過程，這些因素對(duì)減少實(shí)驗(yàn)誤差、提高檢驗(yàn)質(zhì)量來說非常重要。認(rèn)識(shí)和控制檢驗(yàn)前質(zhì)量控制，不僅需要檢驗(yàn)科人員的努力，還有賴于醫(yī)院臨床醫(yī)生和護(hù)理人員的配合[13］。

綜上所述，一次性真空采血管質(zhì)量直接影響臨床檢驗(yàn)結(jié)果，對(duì)其進(jìn)行性能評(píng)估是保證其質(zhì)量的重要措施[14］。所以在檢測(cè)血栓前分子標(biāo)志物和凝血系列項(xiàng)目時(shí)，應(yīng)該注意不同生產(chǎn)廠家一次性真空采血管之間的比對(duì)，選擇合適的采血管，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，使選用的采血管對(duì)臨床檢測(cè)結(jié)果影響最小化，同時(shí)能最大程度提高檢驗(yàn)結(jié)果的可靠度[15-16］，為臨床診療工作提供有價(jià)值的參考依據(jù)。