HMMR通過MEK/ERK信號通路促進(jìn)肝細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移

李 遜，嚴(yán) 嬌，蔡順禮，陳華劍

400016 重慶，重慶市急救醫(yī)療中心：檢驗(yàn)科1，肝膽外科2

據(jù)最新全球癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)報(bào)告，肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)的發(fā)病率居所有惡性腫瘤第6位，但致死率高居第3位。侵襲與轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致肝癌高死亡率的主要原因，然而當(dāng)前關(guān)于肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制仍沒有完全闡明。透明質(zhì)酸介導(dǎo)的細(xì)胞游走受體(hyaluronan-mediated motility receptor，HMMR)作為細(xì)胞外基質(zhì)重要組成成分透明質(zhì)酸的相關(guān)膜受體之一，在膠質(zhì)瘤、乳腺癌、胃癌、結(jié)直腸癌、膀胱癌等多種人類惡性腫瘤中高表達(dá)，提示HMMR可能作為一個(gè)重要的腫瘤相關(guān)抗原參與并調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展。相關(guān)研究還發(fā)現(xiàn)HMMR在HCC中的表達(dá)水平也顯著增高，并且與HCC患者預(yù)后不良密切相關(guān)，進(jìn)一步還發(fā)現(xiàn)HMMR高表達(dá)與HCC患者的臨床分期和病理分級呈明顯的正相關(guān)關(guān)系，這些結(jié)果揭示了HMMR可能在HCC的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著作用。但截至目前，HMMR在HCC侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮的具體作用及其分子機(jī)制仍不明了。因此本文旨在探究HMMR對HCC侵襲轉(zhuǎn)移的作用及其可能的生物學(xué)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 肝癌及癌旁組織樣本 12例肝癌及對應(yīng)癌旁組織的凍存樣本用于檢測HMMR的表達(dá)水平。樣本來源于2013年8月至2015年8月于重慶市急救醫(yī)療中心肝膽外科接受肝癌肝切除術(shù)的患者。肝癌組織樣本經(jīng)病理診斷證實(shí)為肝細(xì)胞癌。癌旁肝組織的獲取參照《原發(fā)性肝癌規(guī)范化病理診斷指南》(2015年版)，取自距離腫瘤組織1 cm以上的肝臟組織。術(shù)后3年內(nèi)連續(xù)每年對患者進(jìn)行追蹤隨訪，經(jīng)B超、CT、MRI等影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移者即診斷為肝癌伴轉(zhuǎn)移。

1.1.2 細(xì)胞和動(dòng)物 肝癌細(xì)胞株MHCC97H購自復(fù)旦IBS細(xì)胞資源中心。細(xì)胞株L02、SK-Hep-1、Huh7和PLC/PRF/5由本實(shí)驗(yàn)室傳代及保存。12只6周齡健康雄性裸鼠，體質(zhì)量(20.6±1.2)g，購買并代養(yǎng)于重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.1.3 試劑 高糖DMEM培養(yǎng)液、胎牛血清購自Gibco公司。Lipofectamine 2000 轉(zhuǎn)染試劑購自Thermo Fisher公司。Transwell小室購自美國Corning。HMMR抗體、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和GAPDH抗體購自Proteintech公司。MEK、p-MEK、ERK、p-ERK抗體購自Bioworld公司。靶向HMMR的慢病毒購自吉?jiǎng)P基因公司。MEK抑制劑U1026購自MCE公司。靶向HMMR的siRNA由吉瑪基因公司設(shè)計(jì)并合成；相關(guān)引物均由上海生工合成。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染和感染 常規(guī)用高糖DMEM、10%胎牛血清和1%青鏈霉素雙抗于37 ℃，5%CO孵箱中培養(yǎng)細(xì)胞。參照吉瑪公司提供的說明書溶解siRNA,采用lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑將靶向HMMR的siRNA轉(zhuǎn)染至肝癌細(xì)胞構(gòu)建沉默HMMR的細(xì)胞模型(siHMMR-1組、siHMMR-2組)，同時(shí)轉(zhuǎn)染與HMMR的序列無同源性的siRNA作為陰性對照(siNC組)。利用lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑將攜帶HMMR的pcDNA3.1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至肝癌細(xì)胞構(gòu)建HMMR過表達(dá)細(xì)胞模型(HMMR組)，同時(shí)轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒作為陰性對照(pcDNA3.1組)。另一方面，穩(wěn)定敲減HMMR細(xì)胞株(shHMMR組)的構(gòu)建則根據(jù)吉?jiǎng)P基因提供的慢病毒感染手冊進(jìn)行操作，病毒感染后72 h在細(xì)胞中加入終濃度1.5 μg/mL的嘌呤霉素進(jìn)行篩選，篩選7 d后將嘌呤霉素濃度減至1/4繼續(xù)維持。同時(shí)構(gòu)建空白敲減的細(xì)胞株作為陰性對照(shNC組)。

1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測 適量TRIzol裂解細(xì)胞或組織樣本，利用天根公司RNA提取試劑盒提取總RNA。取1 μg所提RNA，通過逆轉(zhuǎn)錄試劑盒獲得相應(yīng)cDNA。利用TaKaRa公司的SYBR Green試劑盒檢測HMMR的mRNA水平。HMMR上游引物為：5′-AGCAACAGGAGGAAGACT-3′，下游引物為：5′-ATAGAGGAGACGCCACTT-3′。GAPDH上游引物為：5′-TATGACAACAGCCTCAAGAT-3′，下游引物為：5′-AGTCCTTCCACGATACCA-3′。PCR程度為：95 ℃，2 min；95 ℃，15 s，60 ℃，20 s，72 ℃，20 s，40個(gè)循環(huán)；72 ℃,5 min。相對定量PCR結(jié)果采用2法分析。關(guān)于組織樣本，以癌旁組織為對照，癌組織中HMMR的mRNA水平升高大于1.5倍的定義為HMMR高表達(dá)，而降低大于1.5倍的則定義為HMMR低表達(dá)。

1.2.3 Western blot檢測 取30 μg細(xì)胞或組織總蛋白經(jīng)10% SDS-PAGE凝膠電泳，后轉(zhuǎn)膜至PVDF膜，5%牛奶封閉2 h，TBST洗膜3次后加入一抗(抗HMMR 1∶2 000，抗E-cadherin 1∶1 000, 抗N-cadherin；1∶1 000, 抗Vimentin 1：2 000，抗p-MEK 1∶1 000, 抗MEK 1∶2 000，抗p-ERK 1∶1 000，抗ERK 1∶2 000，GAPDH 1∶5 000),4℃搖床孵育過夜。次日洗膜后室溫孵育抗兔或抗鼠二抗，ECL顯影。

1.2.4 免疫組化實(shí)驗(yàn) 石蠟包埋肝癌及癌旁組織切片，55 ℃烤箱過夜。次日，取出切片，再置于95 ℃烤箱，10 min。然后依次經(jīng)歷脫蠟、抗原修復(fù)、透膜，內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑室溫封閉10 min。接著山羊工作血清室溫封閉1 h。滴加一抗(1∶100，TBS 稀釋)后于4 ℃暗盒孵育過夜。次日，TBS清洗3次后滴加生物素標(biāo)記二抗孵育1 h。DAB 顯色后，蘇木精復(fù)染，梯度酒精、二甲苯脫水后中性樹脂封片。顯微鏡下觀察并拍照。

1.2.5 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn) 采用1 mg/mL絲裂霉素預(yù)處理細(xì)胞2 h，去除細(xì)胞增殖對遷移侵襲的影響。然后以30×10/孔接種至6孔板，次日細(xì)胞鋪滿整孔。10μL槍頭垂直并均勻的橫過細(xì)胞，造成“創(chuàng)口”。PBS清洗3次去除劃下的細(xì)胞，加入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，置于37 ℃，5%CO培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。按0、24 h取樣，隨機(jī)取5個(gè)視野拍照。根據(jù)公式計(jì)算：細(xì)胞遷移率 =(0 h 劃痕寬度-24 h劃痕寬度)/0 h 劃痕寬度×100%。

1.2.6 Transwell實(shí)驗(yàn) 沉默HMMR的MHCC97H細(xì)胞取8×10/小室，過表達(dá)HMMR以及10 μmol/L U1026處理48 h后的Huh7細(xì)胞分別取20×10/小室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。接種至小室前細(xì)胞經(jīng)絲裂霉素預(yù)處理，方法同前。①遷移：細(xì)胞用300 μL無血清培養(yǎng)基重懸后加入普通Transwell小室內(nèi)，小室外加入800 μL常規(guī)培養(yǎng)基，置于孵箱中孵育；②侵襲：提前從-20 ℃冰箱取出含基質(zhì)膠的Transwell小室置于24孔板中，小室內(nèi)外加入適量無血清培養(yǎng)基后于孵箱中預(yù)熱小室30 min。吸棄孔內(nèi)外培養(yǎng)基，按照細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)的操作步驟加入細(xì)胞。24 h后從孵箱中取出小室，PBS清洗2次，輕柔地用棉簽擦凈小室內(nèi)膜的細(xì)胞，然后小室置于4%多聚甲醛中固定15 min。雙蒸水清洗2次后，用0.1%結(jié)晶紫溶液染色30 min。雙蒸水沖洗、晾干后，顯微鏡下拍照并隨機(jī)選取5個(gè)視野計(jì)數(shù)穿過小室的細(xì)胞數(shù)。

1.2.7 裸鼠尾靜脈肝癌肺轉(zhuǎn)移模型 12只裸鼠隨機(jī)分為2組，每組6只。穩(wěn)定敲減HMMR的MHCC97H細(xì)胞和空白敲減細(xì)胞，分別以滅菌生理鹽水重懸后以2×10/300 μL經(jīng)尾靜脈注射入裸鼠體內(nèi)。每3～5天觀察小鼠存活情況。8周后處死裸鼠，取出肺組織，4%多聚甲醛固定，石蠟包埋、切片和HE染色。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用GraphPad Prism 8進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)以表示。兩組間比較采用Student-

t

檢驗(yàn)，兩組以上比較采用單因素方差分析。采用卡方檢驗(yàn)分析患者臨床病理特征與HMMR表達(dá)的相關(guān)性。

P

<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝癌患者不同臨床病理特征中HMMR的表達(dá)

采用卡方檢驗(yàn)分析12例肝癌患者臨床病理特征與HMMR表達(dá)水平的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)HMMR的表達(dá)水平與肝癌TNM分期存在顯著的相關(guān)性(表1)。雖然5例伴有肺轉(zhuǎn)移患者癌組織中HMMR的表達(dá)均增高，但數(shù)據(jù)分析并未檢測到HMMR表達(dá)水平與肝癌肺轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)性，考慮可能與樣本數(shù)偏少有關(guān)。

表1 12例肝癌患者不同臨床病理特征中HMMR的表達(dá)情況

HMMR的表達(dá)基本信息 數(shù)量P值高 (n=9)低 (n=3)性別 男8710.157 女422年齡/歲 ≤502110.371 >501082AFP/μg·mL-1 ≤4006420.505 >400651腫瘤大小/cm ≤55320.311 >5761肺轉(zhuǎn)移 有5500.091 無743TNM分期 Ⅰ+Ⅱ6330.046 Ⅲ+Ⅳ660

2.2 HMMR在肝癌細(xì)胞系和肝癌組織中高表達(dá)

采用qRT-PCR和Western blot法檢測正常人肝細(xì)胞L02和4種肝癌細(xì)胞系，以及12對肝癌和癌旁組織中HMMR的mRNA和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示肝癌細(xì)胞中HMMR的表達(dá)水平均明顯高于L02細(xì)胞(圖1A、B)，并且HMMR的mRNA水平在高侵襲性肝癌細(xì)胞系MHCC97H的表達(dá)量最高，在低侵襲性肝癌細(xì)胞Huh7中的表達(dá)最低。此外，臨床樣本檢測結(jié)果也發(fā)現(xiàn)肝癌組織中HMMR的相對表達(dá)水平高于癌旁組織(

P

<0.05，圖1C、D)，并且轉(zhuǎn)移組肝癌組織中HMMR的相對表達(dá)水平明顯高于非轉(zhuǎn)移組(

P

<0.05，圖1E、F)。以上結(jié)果提示HMMR可能在肝癌中發(fā)揮了促癌轉(zhuǎn)移的作用。

A：qRT-PCR檢測正常肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞中HMMR mRNA的表達(dá)；B：Western blot檢測正常肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞中HMMR蛋白表達(dá)及半定量分析；C：肝癌和癌旁組織中HMMR mRNA的表達(dá)；D：免疫組化觀測肝癌和癌旁組織中HMMR的蛋白表達(dá)和定位；E：肝癌和癌旁組織中HMMR蛋白的表達(dá) N：癌旁組織；T：癌組織；F：轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組肝癌組織中HMMR mRNA的表達(dá)(n=6)

2.3 HMMR的表達(dá)對肝癌細(xì)胞遷移侵襲能力的影響

利用siRNA沉默MHCC97H細(xì)胞中HMMR的表達(dá)(圖2A),劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，siHMMR-1組、siHMMR-2組沉默HMMR表達(dá)后，細(xì)胞的“愈合”能力明顯低于siNC組(

P

<0.01，圖2B),Transwell實(shí)驗(yàn)也顯示siHMMR-1組和siHMMR-2組細(xì)胞在有或無基質(zhì)膠小室底濾膜上的數(shù)量較siNC組減少(

P

<0.01，圖2C)。提示HMMR表達(dá)降低后細(xì)胞遷移和侵襲能力減弱。另一方面，過表達(dá)HMMR后(圖2D)，HMMR組 Huh7細(xì)胞的“愈合”率明顯高于pcDNA3.1組(

P

<0.01，圖2E)，Transwell實(shí)驗(yàn)也顯示HMMR組細(xì)胞穿透小室底膜的數(shù)量明顯多于pcDNA3.1組(

P

<0.01，圖2F)，提示HMMR過表達(dá)后細(xì)胞遷移及侵襲能力增強(qiáng)。

A、D: Western blot檢測沉默或過表達(dá)HMMR后細(xì)胞中HMMR的表達(dá)；B：沉默HMMR后劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果(100×)；C：沉默HMMR后Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果(200×)；E：HMMR過表達(dá)后劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果(100×)；F：HMMR過表達(dá)后Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果(200×)

2.4 HMMR的表達(dá)對肝癌細(xì)胞EMT的影響

采用Western blot檢測沉默/過表達(dá)HMMR之后細(xì)胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelialm-esencFhymal transition，EMT)相關(guān)蛋白E-cadherin、Vimentin和N-cadherin的表達(dá)變化。結(jié)果顯示，與對照組比較，沉默HMMR后N-cadherin和Vimentin的表達(dá)下調(diào)，E-cadherin表達(dá)上調(diào)；而過表達(dá)HMMR后N-cadherin和Vimentin的表達(dá)上調(diào)，E-cadherin表達(dá)下調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P

<0.05，圖3)。

A: Western blot檢測沉默/過表達(dá)HMMR后細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)；B：沉默HMMR后細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白表達(dá)的灰度值；C：過表達(dá)HMMR后細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白表達(dá)的灰度值

2.5 HMMR表達(dá)變化對肝癌肺轉(zhuǎn)移的影響

通過尾靜脈注射HMMR穩(wěn)定沉默的MHCC97H細(xì)胞和對照組細(xì)胞(圖4A)，結(jié)果顯示，穩(wěn)定沉默HMMR的肝癌細(xì)胞引起的小鼠肺轉(zhuǎn)移病灶的數(shù)量明顯低于shNC對照組(

P

<0.05，圖4B、C)。

A: Western blot檢測穩(wěn)定沉默HMMR的細(xì)胞株中HMMR的表達(dá)；B：HE染色觀察裸鼠肝癌細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移(200×)；C：肺轉(zhuǎn)移計(jì)數(shù)

2.6 HMMR表達(dá)變化對MEK/ERK信號通路的影響

通過Western blot檢測HMMR對細(xì)胞中MEK、ERK、p-MEK以及p-ERK的蛋白水平的影響，結(jié)果見圖5A，過表達(dá)HMMR后，細(xì)胞中p-MEK和p-ERK的表達(dá)水平顯著上調(diào)(

P

<0.01)，但MEK和ERK的蛋白表達(dá)水平無明顯變化(

P

>0.05)。采用MEK抑制劑U1026處理細(xì)胞48 h，結(jié)果發(fā)現(xiàn)處理后的細(xì)胞中上調(diào)的p-MEK和p-ERK的蛋白表達(dá)水平明顯下調(diào)(

P

<0.01)，但MEK和ERK的蛋白表達(dá)水平無明顯變化(

P

>0.05)。并且抑制劑處理后的細(xì)胞其遷移侵襲能力也顯著降低(

P

<0.01，圖5B)，證實(shí)MEK/ERK信號通路介導(dǎo)了HMMR對肝癌細(xì)胞遷移侵襲的促進(jìn)作用。

A: Western blot檢測MEK、p-MEK、ERK、p-ERK蛋白的表達(dá)及半定量分析；B：Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移侵襲能力的變化(×200)

3 討論

肝細(xì)胞癌是我國人民因癌癥死亡的主要病因之一，而導(dǎo)致HCC高致死率的最主要原因就是轉(zhuǎn)移和術(shù)后復(fù)發(fā)。現(xiàn)有的分子靶向藥物索拉菲尼等雖可一定程度延長晚期肝癌患者的生命，但仍無法防治肝癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。因此，深入研究HCC侵襲轉(zhuǎn)移的發(fā)生機(jī)制，探索能夠預(yù)測、監(jiān)測HCC轉(zhuǎn)移的潛在標(biāo)記物，甚至找到能夠有效延緩或終止肝癌轉(zhuǎn)移的方法，是解決目前肝癌治療難題的關(guān)鍵措施，對實(shí)現(xiàn)個(gè)體化治療，延長患者生存時(shí)間具有重要意義。

研究報(bào)道HMMR通過參與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)從而在多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。在HCC中，王敏等和黃晨陽等均報(bào)道HMMR在肝癌組織的表達(dá)水平顯著高于癌旁正常組織，并且高表達(dá)HMMR的肝癌患者預(yù)后較差。同時(shí)，細(xì)胞水平的研究還發(fā)現(xiàn)HMMR可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖。然而，HMMR在HCC轉(zhuǎn)移中的作用尚不清楚。本研究首先在細(xì)胞層面證實(shí)HMMR在肝癌細(xì)胞系中高表達(dá)，并且發(fā)現(xiàn)高侵襲性肝癌細(xì)胞中HMMR的表達(dá)量顯著高于低侵襲性肝癌細(xì)胞。接著，在臨床樣本中檢測發(fā)現(xiàn)HMMR與轉(zhuǎn)移性HCC之間的潛在關(guān)系，提示HMMR可能在HCC的侵襲轉(zhuǎn)移中具有重要作用。鑒于肝癌的侵襲深度和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者預(yù)后差的關(guān)鍵因素，為了明確HMMR在HCC侵襲轉(zhuǎn)移中的作用，本研究分別以MHCC97H和Hun7細(xì)胞為研究對象進(jìn)行一系列體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)沉默HMMR可以抑制肝癌細(xì)胞的遷移侵襲和肺轉(zhuǎn)移，而過表達(dá)HMMR可以增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的遷移侵襲能力。另有研究發(fā)現(xiàn)HMMR在傷口愈合過程中增加并促進(jìn)細(xì)胞遷移，這一過程可能與EMT密切相關(guān)。ZHANG等研究發(fā)現(xiàn)HMMR通過激活TGF-β/Smad2信號通路誘導(dǎo)EMT并增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的干細(xì)胞特性。LU等報(bào)道在頭頸癌中高表達(dá)HMMR后下游富集最顯著的通路依次是KRAS信號路徑、EMT相關(guān)通路等。然而，在肝細(xì)胞癌中HMMR與EMT的關(guān)系尚不明確。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)沉默HMMR可以上調(diào)E-cadherin的表達(dá)，同時(shí)下調(diào)N-cadherin和Vimentin的表達(dá)；而過表達(dá)HMMR后E-cadherin的表達(dá)卻下降，N-cadherin和Vimentin表達(dá)增高，提示HMMR表達(dá)變化可以調(diào)控EMT，HMMR可能通過EMT進(jìn)程參與調(diào)控HCC的侵襲轉(zhuǎn)移。

透明質(zhì)酸與其受體相互作用引發(fā)的細(xì)胞內(nèi)一系列復(fù)雜的信號通路是透明質(zhì)酸參與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)的主要機(jī)制。CD44和HMMR是細(xì)胞表面兩種主要的透明質(zhì)酸受體。既往研究圍繞CD44開展的比較多，已有報(bào)道透明質(zhì)酸結(jié)合CD44可以通過激活SRC/MEK/ERK，PI3K/AKT/mTOR，以及PI3K-4EBP1-SOX2等信號通路調(diào)控腫瘤細(xì)胞的干性、增殖、遷移和侵襲。而作為透明質(zhì)酸的主要受體之一的HMMR，現(xiàn)有研究對于其發(fā)揮生物學(xué)功能的分子機(jī)制卻報(bào)道極少。ASSMANN等發(fā)現(xiàn)HMMR可以與細(xì)胞內(nèi)的激酶、鈣調(diào)蛋白和細(xì)胞骨架微管蛋白結(jié)合，提示HMMR可能參與細(xì)胞骨架重組。MISSINATO等研究發(fā)現(xiàn)透明質(zhì)酸與HMMR結(jié)合后可通過激活SRC/FAK信號通路最終引起心外膜細(xì)胞EMT和遷移。以上這些研究提示HMMR被激活后可能也是通過細(xì)胞內(nèi)信號的級聯(lián)放大反應(yīng)來發(fā)揮生物學(xué)功能的。在前人研究的基礎(chǔ)上，本研究還發(fā)現(xiàn)在肝癌細(xì)胞內(nèi)HMMR的表達(dá)變化可以引起MEK/ERK信號通路活性的改變；且MEK抑制劑可以明顯減弱高表達(dá)HMMR所引起的細(xì)胞遷移侵襲能力的增加，以及MEK和ERK磷酸化水平的升高，證實(shí)HMMR可通過調(diào)控MEK/ERK信號通路參與調(diào)控肝癌細(xì)胞的遷移侵襲。MEK/ERK信號通路是絲裂原活化蛋白激酶級聯(lián)反應(yīng)的經(jīng)典通路，也是研究最多的激酶通路，其在腫瘤細(xì)胞的遷移和轉(zhuǎn)移過程中有著不可或缺的作用。本研究結(jié)果證實(shí)HMMR在肝癌侵襲轉(zhuǎn)移中的關(guān)鍵作用，同時(shí)也揭示HMMR促進(jìn)肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的潛在分子機(jī)制，為探索肝癌新型分子標(biāo)記物以及預(yù)防肝癌侵襲轉(zhuǎn)移新方法提供一定的理論依據(jù)。