2018年-2020年我國部分城市寵物犬布魯氏菌病血清學(xué)調(diào)查

吳洪超，丁航天，盧 旭，王 潔，廖均樂，霍寧寧，范 偉，張淵魁，習(xí)向鋒，劉玉秀*，田克恭,*

(1.國家獸用藥品工程技術(shù)研究中心，河南洛陽 471003；2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，河南鄭州 450002；3.洛陽惠中生物技術(shù)有限公司，河南洛陽 471003；4.鄭州寵康伴侶動物醫(yī)院，河南鄭州 450002；5.兆豐華生物科技(南京)有限公司，江蘇南京 211102)

布魯氏菌病(Brucellosis)是由布魯氏菌(Brucella)感染引起的在全球廣泛分布的一種動物源性人畜共患傳染病[1]，嚴(yán)重危害畜牧業(yè)發(fā)展和人類健康。全世界有170多個國家和地區(qū)報告了人和動物的布魯氏菌病[2]，并且每年都有新發(fā)地區(qū)和復(fù)發(fā)地區(qū)的病例報道，每年新發(fā)病例約50萬人[3-4]，受到世界動物衛(wèi)生組織(WOAH)和世界糧農(nóng)組織(FAO)的高度關(guān)注[5]。WOAH將布魯氏菌病列為法定報告的動物疫病，我國將該病列為二類動物疫病。

布魯氏菌是一種細(xì)胞內(nèi)寄生的小球桿狀、革蘭氏陰性菌，具有很強(qiáng)的傳染性，傳播途徑也較多，可通過消化道、呼吸道黏膜、皮膚黏膜、生殖道感染，給防疫帶來了很大的困難。WOAH根據(jù)布魯氏菌的抗原性差異和宿主的偏好性，將其分為9個種、21個生物型：羊種布魯氏菌(3個生物型：1、2、3)、牛種布魯氏菌(7個生物型：1、2、3、4、5、6、9)、豬種布魯氏菌(5個生物型：1、2、3、4、5)、綿羊附睪布魯氏菌、犬布魯氏菌、沙林鼠布魯氏菌、鯨布魯氏菌、鰭布魯氏菌和田鼠布魯氏菌[4-6]。我國主要流行羊種、牛種和豬種布魯氏菌[7]。牛種、羊種和豬種布魯氏菌為光滑型布魯氏菌，毒力強(qiáng)，除感染最適宿主外，還可以感染人、犬[3]和其他多種動物[8]。犬種布魯氏菌為粗糙型布魯氏菌，毒力較弱，主要引起犬科動物發(fā)病，也有感染人的報道。人主要通過與寵物犬親密接觸[3]或?qū)嶒炇医佑|活菌而感染，1986年對廣西省家養(yǎng)犬進(jìn)行犬種布魯氏菌感染調(diào)查，在人群中發(fā)現(xiàn)了犬種布魯氏菌[5]。有研究不僅分離到羊種布魯氏菌，同時也分離到犬種布魯氏菌[9]。隨著我國社會經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展和人民生活水平的提高，養(yǎng)犬的家庭越來越多，犬與人的關(guān)系也更加密切，犬的布魯氏菌病成為危害人類健康和公共衛(wèi)生安全的重要隱患，影響畜牧業(yè)、旅游業(yè)、國際貿(mào)易和社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，因此，急需加強(qiáng)犬布魯氏菌病的流行病學(xué)調(diào)查。本研究從我國16個城市的寵物醫(yī)院、犬場和農(nóng)戶收集1368份寵物犬血清樣品，進(jìn)行犬的布魯氏菌血清學(xué)調(diào)查，為犬布魯氏菌病的監(jiān)測和防控提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 待檢樣品 2018年-2020年，從我國16個城市的寵物醫(yī)院、農(nóng)戶、犬場共收集犬血1368份。

1.1.2 主要試劑 布魯氏菌病光滑型和粗糙型虎紅平板凝集試驗抗原、布魯氏菌病陰陽性血清，均購自青島中創(chuàng)匯科生物科技有限公司。

1.1.3 主要儀器 離心機(jī)，Eppendorf公司產(chǎn)品；水浴鍋(DK-8D)，上海一恒科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；冰柜(BCD-203-H)，澳柯瑪公司產(chǎn)品；潔凈工作臺(SW-CJ-2FD)，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 血清樣品制備 采集寵物犬的外周靜脈血0.5 mL～1.0 mL，2℃～8℃靜置析出血清，5 000 r/min離心5 min，取上清，56℃水浴30 min，置-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 虎紅平板凝集試驗(RBT) 參考《動物布魯氏菌病診斷技術(shù)》(GB/T18646-2018)方法進(jìn)行,取干凈的培養(yǎng)皿畫好方格，標(biāo)記待檢樣品編號，渦旋混勻待檢血清和抗原，取待檢血清和抗原各25 μL，加于培養(yǎng)皿方格內(nèi)，用滅菌的吸頭涂成2 cm直徑的圓形，混勻后4 min內(nèi)觀察結(jié)果，同時設(shè)置陰陽性血清作為對照。

1.2.3 結(jié)果判定 在陰陽性血清對照成立的條件下，對待檢血清進(jìn)行判定。待檢血清出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象時判為陽性，無凝集現(xiàn)象且反應(yīng)混合液呈均勻粉紅色時判為陰性。

2 結(jié)果

2.1 寵物犬布魯氏菌抗體檢測結(jié)果

用虎紅平板凝集試驗對1368份寵物犬血清進(jìn)行布魯氏菌抗體檢測，結(jié)果顯示，共14份血清RBT檢測為陽性，總陽性率為1.02%，其中粗糙型和光滑型陽性血清樣品數(shù)分別為5份和9份，陽性率分別為0.36%和0.66%。

2.2 不同城市寵物犬布魯氏菌抗體陽性率

對來自16個城市的寵物犬血清進(jìn)行布魯氏菌抗體檢測，其中來自北京市、洛陽市、常州市、成都市、重慶市和昆明市共6個城市的寵物犬血清檢測到布魯氏菌抗體，陽性率分別為0.79%、1.10%、2.56%、3.96%、3.57%和6.90%，而其余10個城市均未檢測到犬布魯氏菌抗體(表1)。

表1 不同城市犬布魯氏菌抗體檢測結(jié)果

2.3 不同月份寵物犬布魯氏菌抗體陽性率

根據(jù)2018年-2020年寵物犬血清的虎紅平板凝集試驗檢測結(jié)果，分析了不同月份光滑型和粗糙型布魯氏菌抗體陽性樣品數(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3月份和5月份的布魯氏菌抗體陽性樣品數(shù)量最多，分別檢測到8份和3份陽性血樣樣品，其次為8月～10月份，分別檢測到1份陽性血清樣品，其余月份均未檢測到布魯氏菌抗體陽性的樣品(圖1和表2)。

表2 2018-2020年不同月份收集寵物犬血清樣品數(shù)量(份)

圖1 不同月份犬布魯氏菌抗體陽性的樣品數(shù)量

2.4 飼養(yǎng)條件對寵物犬布魯氏菌感染率的影響

寵物犬血清樣品主要來自于寵物醫(yī)院、犬場和農(nóng)戶，飼養(yǎng)條件不同，布魯氏菌抗體檢測結(jié)果顯示，10份來自寵物醫(yī)院的寵物犬血清檢測到布魯氏菌抗體陽性，光滑型和粗糙型布魯氏菌抗體陽性率均為0.54%；1份來自犬場的血清RBT檢測為光滑型抗體陽性，陽性率為0.36%；3份來自農(nóng)戶的血清RBT檢測為光滑型抗體陽性，陽性率為1.82%(表3)。

表3 不同飼養(yǎng)條件的寵物犬布魯氏菌抗體陽性率

2.5 性別對寵物犬布魯氏菌感染率的影響

對已知性別的寵物犬血清進(jìn)行分類，RBT檢測結(jié)果顯示，112只母犬的血清中，僅1份血清樣品檢測到粗糙型布魯氏菌抗體，陽性率為0.89%，而20只公犬的血清中均未檢測到布魯氏菌抗體(表4)。

表4 不同性別寵物犬的布魯氏菌抗體檢測結(jié)果

3 討論

對人類有致病力的布魯氏菌主要有牛種、羊種、豬種和犬種[10-11]。近年來，我國對布魯氏菌病進(jìn)行的監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)羊、牛布魯氏菌病感染率上升較快，是法定報告?zhèn)魅静≈懈腥緮?shù)上升最快的疾病之一，動物布魯氏菌病疫情形勢較為嚴(yán)峻[12]，已引起國家衛(wèi)生部門和公眾的高度重視。國內(nèi)外學(xué)者重點關(guān)注了經(jīng)濟(jì)動物牛、羊、豬的布魯氏菌病，而忽視了伴侶動物寵物犬的布魯氏菌病對人類健康的潛在威脅。隨著寵物犬與人類生活的密切，通過排泄物、分泌物或親密接觸等多種途徑傳染給人類[13]。因此，寵物犬的布魯氏菌病的預(yù)防與控制也應(yīng)得到更加密切的關(guān)注。

本次調(diào)查顯示，來自全國16個城市的1 368份寵物犬血清中，僅5例光滑型虎紅平板凝集檢測呈陽性和9例粗糙型虎紅平板凝集檢測呈陽性，陽性率分別為0.36%和0.66%，與文獻(xiàn)[4,14,15]的調(diào)查結(jié)果接近。全國寵物犬的布魯氏菌抗體陽性率為4%～20%[16]，內(nèi)蒙古、四川、湖北、貴州、廣西等省犬布魯氏菌抗體陽性率約為8.16%[17]，均高于本次調(diào)查的結(jié)果，可能是由于近年來我國經(jīng)濟(jì)水平、寵物主防護(hù)意識、衛(wèi)生條件等較20世紀(jì)有明顯提高，使寵物犬感染布魯氏菌的幾率降低。

本次調(diào)查中，寵物犬布魯氏菌抗體陽性血清來自北京市、洛陽市、常州市、成都市、重慶市和昆明市。我國大多數(shù)省(區(qū)、市)都存在不同程度的犬感染犬布魯氏菌(0.3%～ 42.7%)[4]，從北京市寵物犬體內(nèi)分離到犬種布魯氏菌，從寵物犬血清中檢測到粗糙型布魯氏菌抗體[18]，并且北京地區(qū)報道過犬病的疫情[19]。本研究首次從常州市寵物犬中檢測到光滑型布魯氏菌抗體，為常州市布魯氏菌病的流行情況提供了參考。成都市、重慶市和昆明市寵物犬的布魯氏菌抗體陽性率較高，分別為3.96%、3.57%和6.90%，高于云貴川三省的調(diào)查結(jié)果[15]，可能是由于警犬作為工作犬，與外部病犬或病犬排泄物接觸的風(fēng)險較小。成都市、重慶市和昆明市寵物犬的布魯氏菌抗體陽性率高于其他城市，可能是由于該3個城市距離牧區(qū)較近，寵物犬可能與病犬或病犬的流產(chǎn)物、排泄物等污染物有過接觸，也可能與該地區(qū)附近的牛羊有過接觸史所致。

根據(jù)2018年-2020年寵物犬血清的虎紅平板凝集試驗檢測結(jié)果，發(fā)現(xiàn)3月份和5月份的布魯氏菌抗體陽性數(shù)量最多，其次為8月份～10月份，其余月份均未檢測到布魯氏菌抗體陽性的樣品，分析認(rèn)為在春秋季，環(huán)境氣候適宜，寵物犬外出活動頻繁，接觸患病犬或病犬排泄物的風(fēng)險更高，并且春季是牛羊的繁殖季節(jié)，產(chǎn)仔、羊水、胎衣等處理不及時，容易造成布魯氏菌病在牛羊和寵物犬之間傳播流行。

寵物犬血清樣品主要來自于寵物醫(yī)院、犬場和農(nóng)戶，飼養(yǎng)方式不同，調(diào)查結(jié)果顯示，來自寵物醫(yī)院的犬血清布魯氏菌抗體陽性數(shù)較多，其次為農(nóng)戶，最后是犬場。趙焜等研究也發(fā)現(xiàn)城區(qū)和農(nóng)區(qū)犬均有較高的布魯氏菌抗體陽性[5]。寵物醫(yī)院接診的城市犬需要經(jīng)常外出散步，接觸其他患病犬或病犬排泄物的風(fēng)險較高，農(nóng)戶的家養(yǎng)犬通常為散養(yǎng)的方式飼養(yǎng)，并且外出時會隨意吃東西，也容易被感染，而犬場采用封閉式管理，與外界接觸的機(jī)會較少，而引種或飼料帶菌時可能導(dǎo)致感染。

本次調(diào)查中，收集到112只母犬血清和20只公犬血清，經(jīng)虎紅平板凝集試驗檢測，僅1份母犬血清檢測到粗糙型布魯氏菌抗體，雖然本次調(diào)查收集的母犬和公犬?dāng)?shù)量較少，不能很好的反映不同性別寵物犬感染布魯氏菌的差異，但是在隨機(jī)收集寵物犬血清的情況下，該結(jié)果在一定程度上表明母犬感染布魯氏菌的幾率更高。

本研究調(diào)查了我國16個城市寵物犬的布魯氏菌感染情況，寵物犬的布魯氏菌抗體陽性率為1.02%，寵物犬血清中既可檢測到光滑型布魯氏菌抗體，也可檢測到粗糙型布魯氏菌抗體，距離牧區(qū)較近的成都市、重慶市和昆明市寵物犬血清抗體陽性率高于其他城市，不同月份和不同性別的寵物犬布魯氏菌感染率有所差異。本次調(diào)查研究為更好地了解寵物犬布魯氏菌感染情況提供實驗依據(jù)，為提高廣大養(yǎng)犬愛好者、獸醫(yī)從業(yè)人員和犬場的防疫意識敲響警鐘。