2017年-2019年陜西省部分豬場(chǎng)豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征和豬偽狂犬病免疫抗體檢測(cè)分析

周宏超賈 佩連 星張 琪郭抗抗許信剛吳晨晨

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，陜西楊凌 712100；2.陜西正能農(nóng)牧科技有限責(zé)任公司，陜西高陵 710201)

豬瘟(Classical swine fever,CSF)、豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)和豬偽狂犬病(Pseudorabies,PR)是當(dāng)前嚴(yán)重危害規(guī)?；i場(chǎng)的主要病毒性傳染性疾病[1]。豬群感染后可出現(xiàn)高熱、流產(chǎn)、死胎等臨床癥狀，豬繁殖與呼吸綜合征形成的免疫抑制能進(jìn)一步誘發(fā)其他疾病的混合感染和繼發(fā)感染，增加了豬病的防控難度[2]。應(yīng)對(duì)傳染病最直接有效的手段就是疫苗免疫接種，而疫苗免疫接種效果的好壞直接影響豬群生產(chǎn)效益[3]?？贵w檢測(cè)做為衡量免疫效果的主要方法應(yīng)定期開展[4]。本文對(duì)3種疫病在陜西地區(qū)部分豬群的不同年份、季節(jié)、區(qū)域、規(guī)模化豬場(chǎng)的抗體水平進(jìn)行了系統(tǒng)分析，找出疫病流行的主要風(fēng)險(xiǎn)因素，以期為陜西地區(qū)豬病的防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣品 2017年9月6日至2019年12月31日，分別采自陜西省陜南、陜北及關(guān)中地區(qū)不同中小型規(guī)?；i場(chǎng)及散養(yǎng)戶豬場(chǎng)健康母豬血清2 658份，3 500 r/min離心分離血清，剔除溶血血清，做好標(biāo)記，置-25℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 主要試劑 豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)試劑盒(99-18070)、豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒(99-43220)、偽狂犬病抗體檢測(cè)試劑盒(99-09836)，購(gòu)自北京愛德士元亨生物科技有限公司；所有樣品的檢測(cè)試劑為同批次試劑盒，試劑均在規(guī)定有效期內(nèi)使用，試劑盒置于4℃冰箱冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3 主要儀器 離心機(jī)(D3024)，大龍醫(yī)療設(shè)備有限公司產(chǎn)品；電熱恒溫箱(DHP-2)，上海一恒科技有限公司產(chǎn)品；酶標(biāo)儀(Multiskan fc)，賽默飛世爾科技公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 豬瘟抗體檢測(cè) 操作程序：參照愛德士豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒說明書，操作程序?yàn)椋簶悠废♂?2倍稀釋)-孵育(2 h)-洗板-酶標(biāo)抗體孵育(30 min)-洗板-顯色(10 min)-終止—讀數(shù)。

判斷標(biāo)準(zhǔn)：在450 nm處讀取每個(gè)樣品的OD值，在試驗(yàn)成立的情況下(陰性對(duì)照OD值>0.5且陽(yáng)性對(duì)照阻斷率%>50)，計(jì)算每個(gè)樣本的阻斷率，若阻斷率%≤30為陰性，30<阻斷率%<40為可疑，阻斷率%≥40為陽(yáng)性。對(duì)于試驗(yàn)不成立的樣本和成立的可疑樣本需重新進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2.2 豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè) 操作程序：參照愛德士豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)試劑盒說明書，操作程序?yàn)椋簶悠废♂?20倍～40倍稀釋)-孵育(30 min)-洗板-酶標(biāo)抗體孵育(30 min)-洗板-顯色(15 min)-終止-讀數(shù)。

判斷標(biāo)準(zhǔn)：在650 nm處讀取每個(gè)樣品的OD值，在試驗(yàn)成立的情況下(陽(yáng)性對(duì)照OD值-陰性對(duì)照OD值≥0.15且陰性對(duì)照OD值≤0.15)，計(jì)算每個(gè)樣本的S/P值，若S/P值<0.4為陰性，若S/P值≥0.4為陽(yáng)性。對(duì)于試驗(yàn)不成立的樣本需重新進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2.3 豬偽狂犬病抗體檢測(cè) 操作程序：參照愛德士豬偽狂犬病抗體檢測(cè)試劑盒說明書，操作程序?yàn)椋簶悠废♂?2倍稀釋)-孵育(1 h)-洗板-酶標(biāo)抗體孵育(20 min)-洗板-顯色(15 min)-終止-讀數(shù)。

判斷標(biāo)準(zhǔn)：在650 nm處讀取每個(gè)樣品OD值，在試驗(yàn)成立的情況下(陰性對(duì)照OD值-陽(yáng)性對(duì)照OD值≥0.3)，計(jì)算每個(gè)樣本的S/N值，若S/N>0.7為陰性，0.6

2 結(jié)果

2.1 年度分析

2017年9月至2019年12月累計(jì)檢測(cè)2 658份血清的豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征及豬偽狂犬病抗體，除豬繁殖與呼吸綜合征陽(yáng)性率為72%，剛達(dá)到國(guó)家免疫要求外，其他兩種常見疫病的抗體水平均高于80%(表1)。

表1 2017年-2019年陜西地區(qū)豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征及豬偽狂犬病抗體陽(yáng)性率(陽(yáng)性數(shù)/總數(shù))

不同年度的CSF抗體陽(yáng)性率為80%～90%，總體為83%，呈現(xiàn)年度下降趨勢(shì)；豬繁殖與呼吸綜合征抗體陽(yáng)性率為62%～78%，總體為72%，雖然整體陽(yáng)性率能達(dá)到國(guó)家免疫標(biāo)準(zhǔn)，但抗體陽(yáng)性率偏低，抗體陽(yáng)性率呈現(xiàn)年度上升趨勢(shì)；豬偽狂犬病(PR-gB)抗體陽(yáng)性率為89%～94%，總體為90%；豬偽狂犬病(PR-gE)抗體陽(yáng)性率為6%～24%，總體為20%，陽(yáng)性率呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)。

2.2 區(qū)域分析

按照陜西省地理位置可分為陜南、陜北和關(guān)中3個(gè)地區(qū)，將血液檢測(cè)結(jié)果按照樣品來源劃入陜南、陜北及關(guān)中地區(qū)進(jìn)行對(duì)比統(tǒng)計(jì)，分析結(jié)果見表2。

表2 2017年-2019年陜西省不同區(qū)域豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征及豬偽狂犬病抗體陽(yáng)性率(陽(yáng)性數(shù)/總數(shù))

不同區(qū)域的CSF抗體陽(yáng)性率為77%～91%，總體為83%，各地區(qū)均達(dá)到國(guó)家免疫要求；豬繁殖與呼吸綜合征抗體陽(yáng)性率為53%～81%，總體為72%，關(guān)中地區(qū)最高，陜南地區(qū)最低且低于國(guó)家免疫要求；豬偽狂犬病(PR-gB)抗體陽(yáng)性率為79%～92%,總體為90%；豬偽狂犬病(PR-gE)抗體陽(yáng)性率為17%～25%,總體為20%，陜北地區(qū)的豬偽狂犬病(PR-gE)抗體陽(yáng)性率高于其他地區(qū)。

2.3 養(yǎng)殖規(guī)模分析

將血液的抗體檢測(cè)結(jié)果按照血液來源豬場(chǎng)規(guī)模大小分為規(guī)模化豬場(chǎng)(養(yǎng)殖規(guī)?！?50頭)和散養(yǎng)戶(養(yǎng)殖規(guī)模<150)，進(jìn)行對(duì)比統(tǒng)計(jì)，分析結(jié)果見表3。

表3 2017年-2019年陜西省不同養(yǎng)豬規(guī)模豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征及豬偽狂犬病抗體陽(yáng)性率(陽(yáng)性數(shù)/總數(shù))

規(guī)?；蜕B(yǎng)戶豬場(chǎng)的CSF抗體陽(yáng)性率均達(dá)到國(guó)家免疫要求；規(guī)?；蜕B(yǎng)戶豬場(chǎng)豬繁殖與呼吸綜合征抗體陽(yáng)性率總體為72%，散養(yǎng)戶豬場(chǎng)為64%，未達(dá)到國(guó)家免疫要求；規(guī)模化和散養(yǎng)戶豬場(chǎng)的豬偽狂犬病(PR-gB)抗體陽(yáng)率總體為90%，散養(yǎng)戶豬場(chǎng)豬偽狂犬病(PR-gB)抗體陽(yáng)性率為31%，高于規(guī)?；i場(chǎng)。

3 討論

3.1 豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果分析

豬瘟是由豬瘟病毒引起的的高度接觸性傳染病，具有高發(fā)病率和高死亡率的特征，是危害養(yǎng)豬業(yè)最為嚴(yán)重的疾病[5]。我國(guó)主要采用豬瘟兔化弱毒疫苗(C株、HCLV)進(jìn)行免疫，歐盟使用豬瘟病毒E2蛋白亞單位和活載體疫苗[6]。調(diào)查表明，2017年-2019年間陜西地區(qū)豬瘟抗體陽(yáng)性率(83%)，均超過農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的70%標(biāo)準(zhǔn)，表明陜西省各地區(qū)都比較重視豬瘟的免疫工作，也間接證明了高質(zhì)量的豬瘟疫苗和科學(xué)合理的免疫程序?qū)ωi瘟防控十分重要[7]。由于豬瘟疫苗免疫后，抗體檢測(cè)無法區(qū)分豬瘟疫苗毒或野毒抗體，因此，關(guān)中地區(qū)的豬瘟抗體陽(yáng)性率略低于陜南和陜北地區(qū)的原因，不僅與各個(gè)區(qū)域的地理、環(huán)境和經(jīng)濟(jì)發(fā)展差異導(dǎo)致的生豬養(yǎng)殖方式不同有關(guān)[8]，還與不同地區(qū)的豬瘟發(fā)病情況有關(guān)。規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟抗體合格率高出散養(yǎng)戶16個(gè)百分點(diǎn)，這個(gè)差異除與采樣誤差有關(guān)外，還與不同規(guī)模豬場(chǎng)的飼養(yǎng)管理、疫苗免疫程序及生物安全防控措施等因素有一定的相關(guān)性[9 ]。

3.2 豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)結(jié)果分析

豬繁殖與呼吸綜合征又稱豬藍(lán)耳病，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起的一種以母豬繁殖障礙和保育豬、育肥豬呼吸道疾病為特征的傳染病[10]，尚無有效的治療方法，疫苗免疫是預(yù)防和控制豬繁殖與呼吸綜合征的主要方法之一[11]?？贵w檢測(cè)是評(píng)估疫苗免疫效果和監(jiān)測(cè)豬群產(chǎn)生免疫保護(hù)力的有效方法。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，2017年-2019年陜西地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征抗體陽(yáng)性率72%，超過農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的70%標(biāo)準(zhǔn),2017年豬繁殖與呼吸綜合征陽(yáng)性率最低，僅為62%，但豬繁殖與呼吸綜合征陽(yáng)性率隨年度變化呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，表明各豬場(chǎng)對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征的防控意識(shí)有所提高。從不同區(qū)域?qū)Ρ葋砜?，陜南地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征陽(yáng)性率最低，陜南地區(qū)的豬場(chǎng)需加強(qiáng)豬繁殖與呼吸綜合征的防控。豬繁殖與呼吸綜合征病毒的變異和重組使得不同疫苗毒株不能提供有效的交叉保護(hù)[12，13]，在適當(dāng)調(diào)整免疫程序的同時(shí)應(yīng)明確豬場(chǎng)流行毒株，有針對(duì)性的使用疫苗，從而提高免疫效果[14]。散養(yǎng)戶豬場(chǎng)的豬繁殖與呼吸綜合征陽(yáng)性率低于規(guī)?；i場(chǎng)，這可能與樣本選擇的隨機(jī)性有關(guān)，但也在一定程度上反映了不同規(guī)模豬場(chǎng)對(duì)疾病的重視程度、日常飼養(yǎng)管理水平及免疫程序的合理性等因素對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征陽(yáng)性率的影響。

3.3 豬偽狂犬病抗體檢測(cè)結(jié)果分析

豬偽狂犬病自2011年底在國(guó)內(nèi)暴發(fā)以來，一直是豬場(chǎng)的嚴(yán)重威脅，常用基因缺失活疫苗和滅活苗免疫[15]，目前主要采用缺失gE基因的疫苗[16]。該病雖然未列入國(guó)家免疫強(qiáng)制計(jì)劃，但調(diào)查發(fā)現(xiàn)，無論從年度分析、地域分析還是養(yǎng)殖規(guī)模分析，偽狂犬病(PR-gB)疫苗抗體陽(yáng)性率均高于79%，表明陜西地區(qū)偽狂犬病疫苗(PR-gB)免疫效果較為理想。從偽狂犬病野毒(PR-gE)抗體檢測(cè)結(jié)果來看，陜西地區(qū)豬群已普遍存在偽狂犬野毒感染，感染率呈現(xiàn)年度上升趨勢(shì)。偽狂犬野毒的感染與引種污染、免疫失敗、豬群飼養(yǎng)管理及生物安全管控等因素有關(guān)，該病一旦感染將終身帶毒，目前的疫苗株不能完全抵御野毒的感染[17]，建議及時(shí)凈化豬群。引種需做好隔離檢測(cè)及凈化維持工作，尤其是種公豬和后備種豬，建議逐頭檢測(cè)偽狂犬野毒抗體，及時(shí)淘汰陽(yáng)性帶毒豬只[18]；散養(yǎng)戶的野毒感染率明顯高于規(guī)?；i場(chǎng)與引種檢疫不嚴(yán)格、免疫程序不合理和生產(chǎn)水平低下等因素有關(guān)[19]。因此，建議根據(jù)不同規(guī)模豬場(chǎng)實(shí)際情況出發(fā)，提高日常飼養(yǎng)管理水平，加強(qiáng)生物安全管控措施，利用檢測(cè)診斷及時(shí)淘汰陽(yáng)性豬只，從種公豬和后備母豬的源頭下手，凈化豬群。

4 結(jié)論

隨著養(yǎng)殖水平的不斷提高，生豬養(yǎng)殖從業(yè)者的疫病防控思想和能力也在不斷提高。本調(diào)查顯示，3種疫病的免疫效果較好，偽狂犬病野毒的感染率無論從年份、地域還是豬場(chǎng)規(guī)模分析都存在較高的感染率。雖然偽狂犬病疫苗免疫是驗(yàn)證有效的控制病毒排毒和擴(kuò)散的方法，但是生產(chǎn)應(yīng)激的發(fā)生能刺激帶毒豬只機(jī)體排毒，進(jìn)而導(dǎo)致病毒擴(kuò)散，所以針對(duì)偽狂犬病野毒陽(yáng)性場(chǎng)，在控制疫病擴(kuò)散傳播的同時(shí)應(yīng)考慮疫病的凈化。