CXC趨化因子配體8促進(jìn)結(jié)直腸癌微環(huán)境中M2型巨噬細(xì)胞趨化及浸潤

高書華， 柴欣悅， 劉杭豐， 成敏蓉， 鄭錦秀,4)， 邵 瑩， 楊 濤,4)*

(1)山西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室，太原 030001；2)山西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，太原 030001；3)山西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，太原 030001；4)山西醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞生理學(xué)教育部重點實驗室，太原 030001)

趨化因子(chemokines)是一類參與白細(xì)胞向炎癥部位趨化的小分子蛋白質(zhì)，它是腫瘤微環(huán)境(tumor microenvironment，TME)中的重要組分，可通過靶向腫瘤微環(huán)境中的非免疫細(xì)胞，包括腫瘤細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)而調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖、腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞特性、腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移，直接或間接地參與抗腫瘤免疫應(yīng)答，并影響癌癥進(jìn)展、患者治療及預(yù)后[1-3]。

CXC趨化因子配體8(CXC chemokine ligand 8，CXCL8)又稱白細(xì)胞介素8(interleukin 8，IL-8)，由單核細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞等分泌[4-7]，主要通過與G蛋白偶聯(lián)受體C-X-C趨化因子受體1型(CXCR1)和C-X-C趨化因子受體2型(CXCR2)高親和力結(jié)合并發(fā)揮生物學(xué)作用[8]。研究證實，CXCL8在多種腫瘤中表達(dá)上調(diào)，通過CXCL8-CXCR1/2信號通路調(diào)控腫瘤血管生成、免疫細(xì)胞浸潤、細(xì)胞運動及調(diào)節(jié)局部抗腫瘤免疫反應(yīng)，從而介導(dǎo)腫瘤的惡性進(jìn)展[9-11]。已有部分研究表明，高濃度的CXCL8與結(jié)直腸癌患者TNM分期和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)[12, 13]，然而，CXCL8對結(jié)直腸癌(colorectal cancer，CRC)免疫微環(huán)境有何影響尚不清楚。

腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor-associated macrophages，TAMs)作為TME中主要的腫瘤侵襲性免疫細(xì)胞群，能夠促進(jìn)腫瘤免疫逃逸、血管生成、腫瘤生長和轉(zhuǎn)移。大量研究表明，TME中大量的趨化因子(CCL1、CCL2、CCL3、CCL4、CCLC、CXCL1、CXCL2、CXCL4、CX3CL1)能夠招募巨噬細(xì)胞進(jìn)入微環(huán)境[14]。進(jìn)入微環(huán)境后巨噬細(xì)胞主要被極化為M2型，促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移，與腫瘤不良預(yù)后相關(guān)[9, 10, 15, 16]。目前，已經(jīng)明確CRC中有大量的TAMs浸潤，并且與CRC轉(zhuǎn)移和脈管形成相關(guān)[17, 18]。但CXCL8作為一種趨化因子能否招募和趨化巨噬細(xì)胞仍未可知。因此，研究CXCL8是否能調(diào)節(jié)TAMs極化與浸潤對抑制結(jié)直腸癌惡性進(jìn)展具有重要意義。本文工作旨在探討CXCL8與結(jié)直腸癌微環(huán)境中M2型巨噬細(xì)胞浸潤之間的聯(lián)系。

1 材料與方法

1.1 材料

人結(jié)直腸癌細(xì)胞株HCT116、LoVo、CL34、SW620、SW480、人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞株THP-1均購自中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會細(xì)胞庫。收集2013年1月4日至2014年7月29日期間，于山西省腫瘤醫(yī)院手術(shù)后制備的結(jié)直腸癌及癌旁石蠟包埋組織102對，并制備組織芯片。本研究獲得山西醫(yī)科大學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者或其家屬均簽署知情同意書。RPMI1640培養(yǎng)基購自Hyclone公司；MCCOY′s 5A培養(yǎng)基、青鏈霉素混合液(P1400)、胰蛋白酶-EDTA消化液(No.T1300)均購自北京Solarbio公司；L-15培養(yǎng)基、胎牛血清購自Gibco公司；Phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)(HY18739)購自MCE公司；蛋白質(zhì)裂解液RIPA(P0013B)購自Beyotime Biotechnology公司；二辛可寧酸(bicinchonininc acid, BCA, WB6501)試劑盒購自New Cell &Molecular Biotechnology；超敏化學(xué)發(fā)光(enhanced chemiluminescent, ECL)(SW134-01)檢測試劑盒購自北京賽文創(chuàng)新生物科技有限公司；小鼠抗人CXCL8抗體(ab18672)、兔抗人CD163抗體(ab182422)購自Abcam公司；兔抗人CXCL8抗體(AHC0881)購自ThermoFisher公司；鼠抗肌動蛋白(actin)(HC201)購自全式金公司；辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)標(biāo)記的山羊抗鼠IgG(7076S)購自Cell signaling Technology，所用抗體均保存至-20 ℃；HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠/兔IgG聚合物及二氨基聯(lián)苯(diaminobenzidine, DAB)顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；RNA提取試劑盒(CW0581S)、反轉(zhuǎn)錄酶試劑(CW2020M)均購自中國康為世紀(jì)公司；QuantiNova SYBR Green PCR kit(No.208054)購自QIAGEN公司。

1.2 TCGA數(shù)據(jù)庫

使用臨床生信之家在線工具對癌癥基因組圖譜(TCGA)數(shù)據(jù)庫來源結(jié)直腸癌及正常組織樣本中CXCL8表達(dá)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，ssGSEA算法分析TCGA數(shù)據(jù)庫CRC樣本的免疫細(xì)胞浸潤情況。

1.3 芯片制備及IHC染色

制作帶有陣列孔的受體蠟塊，根據(jù)HE染色，穿取供體結(jié)直腸癌及其癌旁石蠟包埋組織蠟塊上具有代表性的區(qū)域，將其嵌入制備好的蠟塊陣列孔中，制備成組織芯片蠟塊。切片經(jīng)常規(guī)脫蠟水化，抗原修復(fù)后晾至室溫。加入300 ml/L過氧化氫溶液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，并用5%牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)進(jìn)行封閉；滴加兔抗人CXCL8多克隆抗體(1∶400)兔抗人CD163單克隆抗體(1∶500)，4℃過夜孵育；PBS振蕩清洗3次，每次2 min，加入HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠/兔IgG聚合物，室溫孵育30 min；PBS洗滌，DAB進(jìn)行顯色；蘇木素復(fù)染，脫水，常規(guī)封片。按照“染色陽性率評分(陰性0分，1分<25%，25%≤2分≤50%，3分>50%)”與“染色強(qiáng)度評分(陰性0分，弱陽性1分，中陽性2分，強(qiáng)陽性3分)”的乘積作為總評分進(jìn)行分組。根據(jù)患者所得評分中位值分為低表達(dá)組與高表達(dá)組，不染色或零星染色則定義為陰性。IHC染色結(jié)果均由兩位病理醫(yī)師經(jīng)雙盲法獨立評分。

1.4 細(xì)胞培養(yǎng)

使用RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)THP-1細(xì)胞、CL34細(xì)胞、LoVo細(xì)胞，MCCOY′5A培養(yǎng)基培養(yǎng)HCT116細(xì)胞，L-15培養(yǎng)基培養(yǎng)SW480、SW620細(xì)胞。培養(yǎng)基均含100 ml/L胎牛血清和100 IU/mL青霉素、100 μg/mL鏈霉素。其中，THP-1、CL34、LoVo、HCT116細(xì)胞置于50 mL/L CO2的37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，SW480、SW620細(xì)胞則置于37℃正常空氣的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。THP-1細(xì)胞收集、傳代采用離心方式；CL34、LoVo、HCT116、SW480、SW620細(xì)胞收集、傳代均采用2.5 g/L胰蛋白酶消化方式。

1.5 qRT-PCR檢測

使用TRIzol法提取細(xì)胞總RNA并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。根據(jù)QuantiNova SYBR Green PCR Kit試劑盒說明書配置反應(yīng)體系。反應(yīng)總體積為20 μL/管，包括cDNA 50 ng、引物為0.7 μmol/L、SYBR Green PCR Master Mix為10 μL/管，參比染料羅丹明X(rhodamine X, ROX)為2 μL/管，ddH2O補(bǔ)齊反應(yīng)體系。反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性2 min；95 ℃ 5 s，60 ℃ 10 s，重復(fù)40個循環(huán)。每個反應(yīng)設(shè)置3個復(fù)孔，以2-△△Ct值作為相對表達(dá)量，以GAPDH為內(nèi)參，其引物序列如Table 1所示。

Table 1 Sequences of the primers

1.6 Western 印跡檢測

Western 印跡檢測CXCL8蛋白表達(dá)。收集各組細(xì)胞沉淀，RIPA裂解細(xì)胞提取總蛋白質(zhì)，BCA試劑盒進(jìn)行蛋白質(zhì)定量。配置聚丙烯酰胺凝膠，上樣30 μg總蛋白質(zhì)/孔，電泳2 h，轉(zhuǎn)膜1.5 h，封閉1 h。加小鼠抗人β-肌動蛋白(β-actin)單克隆抗體(1∶4 000)、小鼠抗人CXCL8單克隆抗體(1∶500)，4 ℃孵育過夜；TBST洗滌，HRP標(biāo)記山羊抗小鼠IgG(1∶5 000)，室溫孵育1 h；ECL發(fā)光液，顯影。

1.7 慢病毒感染

慢病毒包裝CXCL8過表達(dá)質(zhì)粒由上海吉凱基因科技有限公司完成，以慢病毒包裝空載質(zhì)粒為對照組。感染前1 d，于6孔板中接種細(xì)胞8×104個/孔，37 ℃培養(yǎng)至細(xì)胞匯合度為20%～30%時，按照感染系數(shù)MOI=20感染HCT116細(xì)胞，12 h后更換新鮮培養(yǎng)基。感染過程中觀察感染效率，加入嘌呤霉素Polybrene篩選穩(wěn)定感染細(xì)胞。

1.8 M2型巨噬細(xì)胞的誘導(dǎo)

以100 ng/mL的PMA刺激THP-1細(xì)胞(5×105個/mL)24 h，貼壁后更換培養(yǎng)基，加入40 ng/mL IL-4，培養(yǎng)48 h，細(xì)胞相差顯微鏡下拍照。收集細(xì)胞沉淀，qRT-PCR檢測M2型巨噬細(xì)胞特異性標(biāo)志物CD163的mRNA表達(dá)水平。

1.9 Transwell趨化分析

Transwell小室置入24孔板，上室加入3×104個THP-1細(xì)胞，再加入100 ng/mL PMA作用24 h，待THP-1轉(zhuǎn)變?yōu)橘N壁細(xì)胞，更換上室培養(yǎng)基，加入40 ng/mL IL-4作用48 h，再次更換培養(yǎng)基，于下室分別加入2×104個HCT116、過表達(dá)CXCL8的HCT116細(xì)胞或IL-1β刺激HCT116后的條件培養(yǎng)基共培養(yǎng)24 h。同樣在SW480細(xì)胞對應(yīng)各組中進(jìn)行重復(fù)。取出上室，PBS清洗3次，甲醇固定30 min，PBS再次清洗，1%結(jié)晶紫溶液染色15 min，PBS洗滌3次，用棉簽輕輕拭去上室內(nèi)部細(xì)胞，顯微鏡下隨機(jī)選取5個視野觀察并拍照，計數(shù)各組穿出細(xì)胞數(shù)。每組設(shè)置3個復(fù)孔，實驗單獨重復(fù)3次。

1.10 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 CXC趨化因子配體8在結(jié)直腸癌患者癌組織中高表達(dá)

對TCGA數(shù)據(jù)庫的CRC患者癌組織及正常組織樣本表達(dá)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。結(jié)果正如Fig.1A所示，CRC患者腫瘤組織CXCL8的mRNA水平顯著高于正常組織(P<0.01)。為進(jìn)一步明確CXCL8在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)情況，本文通過IHC染色檢測102對結(jié)直腸癌組織及配對的癌旁組織中CXCL8的表達(dá)。結(jié)果顯示，CRC組織中CXCL8表達(dá)水平顯著高于癌旁組織(Fig.1B)。

Fig.1 CXCL8 was highly expressed in cancer tissues of CRC patients (A)The expression level of CXCL8 in CRC cancer tissues was higher than that in normal tissues.Tumor(n=620), Normal(n=51).(B)The expression of CXCL8 in cancer tissues of CRC patients was higher than the paired adjacent tissues.n=102

2.2 CXC趨化因子配體8高于表達(dá)結(jié)直腸癌組織浸潤更多的M2型巨噬細(xì)胞

使用ssGSEA算法分析TCGA數(shù)據(jù)庫CRC樣本的免疫細(xì)胞浸潤情況。結(jié)果正如Fig.2A所示，高表達(dá)CXCL8的CRC組織中巨噬細(xì)胞浸潤程度高于低表達(dá)CXCL8的CRC組織(P<0.05)。已有研究表明，腫瘤微環(huán)境中存在大量腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞，其表型大部分表現(xiàn)為M2型[9, 10]。隨后，本研究依據(jù)CXCL8表達(dá)中位值，將102例CRC組織分為低表達(dá)組與高表達(dá)組，并檢測樣本中CD163表達(dá)水平。結(jié)果顯示，相較于CXCL8低表達(dá)組，CXCL8高表達(dá)的CRC腫瘤組織中CD163表達(dá)水平更高，表明有更多的M2型巨噬細(xì)胞浸潤(Fig.2B)。

Fig.2 CRC tissues with high CXCL8 expression were infiltrated more M2 macrophages (A)Bioinformatic results showed that macrophage infiltration in the CXCL8 high-expression group was higher than the low-expression group in CRC tissues.(B)There are more M2 macrophages infiltrated in tumor tissues with high expression of CXCL8.n=102

2.3 結(jié)直腸癌細(xì)胞中CXC趨化因子配體8高表達(dá)促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞趨化

Western 印跡和qRT-PCR檢測5種CRC細(xì)胞HCT116、LoVo、CL34、SW480和SW620中CXCL8表達(dá)水平。結(jié)果如Fig.3A所示，相較于HCT116細(xì)胞，SW480細(xì)胞中CXCL8的mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)水平相對更高(P<0.05)，選取在CXCL8差異表達(dá)的HCT116細(xì)胞及SW480細(xì)胞中過表達(dá)CXCL8。檢測SW480及HCT116細(xì)胞中CXCL8主要配體CXCR1與CXCR2表達(dá)情況。結(jié)果見Fig.3B所示，CXCR2在SW480中表達(dá)較高,CXCR1在2株細(xì)胞中表達(dá)差異不明顯。Western 印跡、qRT-PCR檢測CXCL8過表達(dá)效率，結(jié)果正如Fig.3C所示，CXCL8蛋白及mRNA水平均顯著上調(diào)(P<0.05)。

qRT-PCR結(jié)果顯示，經(jīng)PMA及IL-4作用后，CD163表達(dá)水平明顯上調(diào)(P<0.05)，表明THP-1被成功誘導(dǎo)為M2型巨噬細(xì)胞(Fig.3D)。THP-1細(xì)胞本身為圓形或類圓形懸浮狀態(tài)，細(xì)胞邊緣整齊；經(jīng)PMA誘導(dǎo)后，細(xì)胞由懸浮轉(zhuǎn)為貼壁狀態(tài)；再經(jīng)IL-4誘導(dǎo)后，THP-1從胞體伸出偽足，形態(tài)不規(guī)則，表現(xiàn)為多邊形(Fig.3E)。將M2型巨噬細(xì)胞分別與HCT116或SW480及CXCL8/HCT116或CXCL8/SW480共培養(yǎng)。Transwell結(jié)果顯示，M2型巨噬細(xì)胞趨化數(shù)目隨CXCL8表達(dá)水平的升高而增加(Fig.3F)(P<0.05)。以上結(jié)果提示，腫瘤細(xì)胞高表達(dá)CXCL8促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞趨化。

Fig.3 High expression of CXCL8 in CRC cells can promote the chemotaxis of M2 macrophages (A)The mRNA and protein expression of CXCL8 were detected in CL34, LoVo, SW620, HCT116 and SW480 cells.(B)The protein expression of CXCL8，CXCR1，CXCR2 in HCT116 cells and SW480 cells were detected by Western blotting.(C)The efficiency of CXCL8 overexpression was detected by Western blotting and qRT-PCR.(D)qRT-PCR was used to verify the polarization efficiency of M2 macrophages.(E)Detection of morphological changes during the induction of THP-1 into M2 macrophages.(F)The chemotactic number of M2 macrophages was more in the CXCL8/HCT116 or CXCL8/SW480 group than that in the HCT116 or SW480 group.N=3, *P<0.05,** P<0.01

2.4 IL-1β誘導(dǎo)HCT116、SW480中CXC趨化因子配體8表達(dá)進(jìn)一步促進(jìn)其對M2型巨噬細(xì)胞的趨化

有文獻(xiàn)報道，IL-1β能刺激CXCL8表達(dá)上調(diào)[19-21]。據(jù)此，本文將終濃度為20 ng/mL和100 ng/mL的IL-1β分別處理HCT116細(xì)胞株48 h，終濃度為1 ng/mL和50 ng/mL的IL-1β分別處理SW480細(xì)胞株48 h。發(fā)現(xiàn)CXCL8蛋白及mRNA表達(dá)水平均顯著上調(diào)(Fig.4A，B)(P<0.05)。

為進(jìn)一步明確CXCL8對M2型巨噬細(xì)胞的趨化作用，將不同濃度IL-1β處理過HCT116與SW480的條件培養(yǎng)基與M2型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)。結(jié)果顯示，M2型巨噬細(xì)胞趨化數(shù)目明顯多于未經(jīng)IL-1β處理HCT116及SW480的培養(yǎng)基(Fig.4C，D)(P<0.05)。

Fig.4 The expression of CXCL8 in HCT116 and SW480 can induced by IL-1β, which can further promote the chemotaxis number of M2 macrophages (A)CXCL8 expression in HCT116 cells was upregulated via IL-1β treatment(20,100 ng/mL).(B)CXCL8 expression in SW480 cells was upregulated via IL-1β treatment(1,50 ng/mL).(C)The chemotaxis number of M2 macrophages increased significantly in the conditioned medium of HCT116 with IL-1β.(D)The chemotaxis number of M2 macrophages increased significantly in the conditioned medium of SW480 with IL-1β.n=3,*P<0.05,** P<0.01

3 討論

趨化因子CXCL8，在未受刺激的細(xì)胞中幾乎無法檢測到，其表達(dá)可受多種細(xì)胞因子(IL-1、IL-6、CXCL12和TNF-α)、缺氧、活性氧(ROS)、細(xì)菌顆粒和其他環(huán)境應(yīng)激的刺激調(diào)控[22-24]。CXCL8可能在炎癥期間和穩(wěn)態(tài)期間控制白細(xì)胞運輸，主要通過與趨化受體CXCR1、CXCR2[25]相互作用，這也解釋了炎癥與腫瘤發(fā)生發(fā)展之間的聯(lián)系。以往的研究僅揭示，CXCL8能夠促進(jìn)CRC細(xì)胞的增殖、遷移，能通過誘導(dǎo)血管生成和上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)換(EMT)，從而促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移[26]，而CXCL8對CRC微環(huán)境甚至是免疫細(xì)胞浸潤的調(diào)節(jié)作用知之甚少。因此，揭示結(jié)直腸癌中CXCL8對腫瘤微環(huán)境的調(diào)節(jié)機(jī)制有助于探索結(jié)直腸癌惡性進(jìn)展的機(jī)制。

腫瘤微環(huán)境是一個復(fù)雜的生態(tài)環(huán)境，主要由腫瘤細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞、細(xì)胞因子和趨化因子等組成。其中，基質(zhì)細(xì)胞又包括腫瘤細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞等[11, 27, 28]。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞作為腫瘤微環(huán)境中的重要組成部分，絕大部分均表現(xiàn)為M2表型，發(fā)揮促瘤作用[29, 30]。在巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的相互作用過程中，腫瘤細(xì)胞受到某些刺激能夠分泌大量的活性物質(zhì)。其中，就包括大量趨化因子，通過調(diào)控腫瘤微環(huán)境的變化，來進(jìn)一步募集M2型巨噬細(xì)胞或誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化為M2型，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)活動。目前，CRC中大量TAMs浸潤的機(jī)制尚未明確，趨化因子CXCL8是否調(diào)控CRC微環(huán)境、參與招募M2型巨噬細(xì)胞仍未得到研究。

本研究通過生物信息分析和臨床樣本檢測，發(fā)現(xiàn)CRC組織CXCL8的表達(dá)水平高于癌旁組織。在CXCL8高表達(dá)的CRC樣本中，有更多M2型巨噬細(xì)胞浸潤，提示M2型巨噬細(xì)胞浸潤可能與CXCL8高表達(dá)相關(guān)。將體外誘導(dǎo)的M2型巨噬細(xì)胞與不同CXCL8表達(dá)水平的HCT116細(xì)胞共培養(yǎng)。結(jié)果顯示，隨著CXCL8表達(dá)水平升高，M2型巨噬細(xì)胞趨化數(shù)目增加，提示CXCL8能夠趨化M2型巨噬細(xì)胞，這也進(jìn)一步驗證了生物信息學(xué)及患者組織中得到的結(jié)果。

IL-1β作為腫瘤微環(huán)境中另一種高度富集的趨化因子，參與腫瘤惡性進(jìn)程，與腫瘤進(jìn)展相關(guān)[31]。有大量研究表明，IL-1β能夠促進(jìn)CXCL8表達(dá)增加[19-21]。其中，在三陰性乳腺癌中，IL-1β通過誘導(dǎo)CXCL8表達(dá)進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤進(jìn)展[32]。但在CRC微環(huán)境中，IL-1β能否誘導(dǎo)CXCL8表達(dá)仍未得到驗證。本研究結(jié)果證實，IL-1β可誘導(dǎo)CRC細(xì)胞中CXCL8的表達(dá)，并進(jìn)一步加強(qiáng)了CRC細(xì)胞對M2型巨噬細(xì)胞的趨化作用。這提示CRC組織中，CXCL8高表達(dá)可能是由腫瘤微環(huán)境中高濃度IL-1β介導(dǎo)。但I(xiàn)L-1β的分泌及調(diào)控機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

綜上所述，CRC細(xì)胞中CXCL8可由IL-1β誘導(dǎo)產(chǎn)生，CXCL8表達(dá)增加能夠促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞的趨化，CRC微環(huán)境中M2型巨噬細(xì)胞大量浸潤可能與CXCL8表達(dá)升高有關(guān)。但是，CXCL8促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞浸潤具體機(jī)制仍未闡明。因此，課題組將進(jìn)一步探究CXCL8調(diào)控TAMs浸潤的具體分子機(jī)制，以期為結(jié)直腸癌的腫瘤免疫治療策略提供一些思路。