復(fù)配營養(yǎng)強化劑中維生素A和α-維生素E皂化液的穩(wěn)定性考察

◎ 南利華，聶阿真，趙雪峰，魏 卓，李夢雨，賈松濤，趙林萍

（1.河南中標(biāo)檢測服務(wù)有限公司，河南 鄭州 450001；2.鄭州中道生物技術(shù)有限公司，河南 鄭州 450001）

營養(yǎng)強化劑是為增加食品的營養(yǎng)成分（價值）而加入食品中的天然或人工合成的營養(yǎng)素和其他營養(yǎng)成分[1]。維生素A和維生素E作為營養(yǎng)強化劑，主要應(yīng)用于奶粉、米粉中，是人體必不可少的營養(yǎng)成分。維生素A是一種脂溶性維生素，化學(xué)式C20H30O，分子量286.45，維生素A易被氧化，紫外線可促進其氧化破壞，故檢測過程中需要避光，一般的加熱、堿性條件和弱酸性條件下維生素A比較穩(wěn)定[2-4]。α-維生素E是一種脂溶性維生素，化學(xué)式C29H50O2，分子量430.71，透明油狀液體，無色或幾乎無色或淺黃色或淺黃綠色，其水解產(chǎn)物為生育酚，是最主要的抗氧化劑之一。α-維生素E多溶于脂肪和乙醇等有機溶劑中，不溶于水，對熱及酸穩(wěn)定，對堿和紫外線 敏感[5]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

復(fù)配營養(yǎng)強化劑（維生素A 1000 μg·g-1，α-維生素E 20000 μg·g-1）。

氫氧化鉀、無水乙醇、維生素C、無水乙醚、石油醚（沸程：30～60 ℃）、無水硫酸鈉、2,6-二叔丁基對甲酚（BHT），以上試劑為分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；甲醇，色譜純，F(xiàn)isher；實驗用水為高純水；pH試紙，指示范圍1～14。

1.2 儀器與設(shè)備

有機系過濾頭（孔徑0.22 μm，津騰）；恒溫水浴振蕩器（SHZ-C）；萬分之一分析天平（FA2204B）；十萬分之一分析天平（OHAUS DV215CD）；分液漏斗萃取凈化振蕩器（RZK-C1000）；可見-紫外分光光度計（TU-1901，北京普析）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（RE-52AA）；高效液相色譜儀（賽默飛U3000），帶二極管陣列檢測器。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

維生素A標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（500 μg·mL-1）及α-維 生素E標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（1000 μg·mL-1）：分別稱取適量維生素A標(biāo)準(zhǔn)品和α-維生素E標(biāo)準(zhǔn)品于50 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，即得。

維生素A和α-維生素E混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確吸取維生素A標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液和α-維生素E標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，用甲醇逐級稀釋。維生素A的濃度點為0.2～10.0 μg·mL-1，α-維生素E的濃度點為 2.0～80.0 μg·mL-1，臨用配制。

1.4 樣品前處理

1.4.1 皂化

精密稱取0.3 g樣品（精確至0.001 g）共12個，并分別置于12個150 mL棕色三角瓶中，沿每個三角瓶壁加入40～50 ℃高純水20 mL（若瓶壁上沾有樣品，需沖干凈），混勻，加1.0 g維生素C，輕輕搖勻后加 1.0 g BHT，沿壁加入40 mL無水乙醇，搖勻后，沿壁輕輕加入50%的氫氧化鉀溶液，邊加邊振搖，搖勻，加塞后，在80 ℃恒溫水浴振蕩器上皂化30 min（皂化過程中，要間斷觀察，避免瓶塞崩開，崩開后，需重新蓋上，避免樣品含量損失），皂化后立即用冰水冷卻至室溫。12個樣品皂化液在暗處分別放置0 h、2 h、3 h、6 h、9 h及12 h后，分6組，每次2個平行樣分別進行樣品提取、洗滌、濃縮。

1.4.2 提取

將放置一定時間的樣品皂化液轉(zhuǎn)至分液漏斗中，加入50 mL石油醚無水乙醚混合液（1∶1），振蕩萃取8 min，下層溶液轉(zhuǎn)移至另一分液漏斗中，加入50 mL混合醚液再萃取，合并醚層。

1.4.3 洗滌與過濾

向分液漏斗中加入100 mL皂化液后，振搖，靜置1 min，把下層水棄去，重復(fù)3次后至中性，用pH試紙檢測第3次的下層水液中，pH為7左右。經(jīng)裝有無水硫酸鈉（約10 g）的漏斗過濾到250 mL棕色平底燒瓶中。

1.4.4 濃縮

將平底燒瓶接在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，于40 ℃水浴中減壓蒸餾濃縮，待瓶中提取液剩下約2 mL時，取下平底燒瓶，立即用甲醇分次將平底燒瓶中的殘留物溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻，精密吸取1 mL至10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻即得。用有機系過濾頭過濾到棕色樣品瓶中，用高效液相色譜儀測定（第1組樣品處理完畢后過濾到棕色樣品瓶后，放置到4 ℃冰箱內(nèi)，等樣品完全處理完后，12個樣品同時上機檢測）。實驗使用的所有器具均為干凈干燥的棕色器具，處理過程中避免紫外光照，整個過程均在通風(fēng)櫥中操作。

1.5 色譜條件

色譜柱：C18柱（規(guī)格：250 mm×4.6 mm，粒徑 5 μm）；柱溫：35 ℃；流動相：甲醇；流速：1.0 mL·min-1；紫外檢測波長：維生素A為325 nm；α-維生素E為293 nm；進樣量：20 μL。

1.6 測定及計算

按上述條件進行樣品測定，采用外標(biāo)法定量，樣品中維生素A或α-維生素E的含量計算公式如下：

式中：X為樣品中維生素A或α-維生素E含量， μg·g-1；C為上機濃度，μg·mL-1；V為定容體積，mL；m為樣品稱樣量，g；f為稀釋倍數(shù)，mL。

2 結(jié)果與分析

2.1 維生素A和α-維生素E譜圖

維生素A和α-維生素E譜圖見圖1、圖2。

圖1 維生素A譜圖

圖2 α-維生素E譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

將1.3維生素A和α-維生素E標(biāo)準(zhǔn)品溶液注入高效液相色譜儀中測定相應(yīng)的峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)測定液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見圖3和圖4。

圖3 維生素A校準(zhǔn)曲線圖

圖4 α-維生素E校準(zhǔn)曲線圖

2.3 皂化液的穩(wěn)定性考察

從表1可以看出，皂化液放置時間的長短對維生素A幾乎沒有影響，結(jié)果偏差均小于10%，但直接影響α-維生素E含量，隨著放置時間的增加含量逐漸降低，從放置時間3 h以后，α-維生素E含量偏差分別為22.49%、34.90%、44.81%、50.50%。

3 結(jié)論

試驗結(jié)果證明，經(jīng)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素A、D、E的測定》（GB 5009.82—2016）處理出來的皂化液放置時間的長短對維生素A幾乎沒有影響，結(jié)果偏差均小于10%，但直接影響α-維生素E含量，隨著放置時間的增加，α- 維生素E的含量逐漸降低，放置3 h以后，α-維生素E含量偏差均大于10%。處理食品中營養(yǎng)強化劑或其他樣品時（如奶粉、米粉），α-維生素E對堿敏感，為確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性，樣品皂化液放置時間盡量控制在2 h以內(nèi)，皂化液盡量在冰水下迅速冷卻至室溫。樣品多的情況下建議邊提取邊皂化，不要一次性皂化完畢。