• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于ITS2 DNA序列的雷公藤屬藥材資源譜系地理學(xué)研究

    2022-09-05 05:45:50陳一龍姚媛媛張小梅李勝容
    中草藥 2022年17期
    關(guān)鍵詞:雷公藤海棠昆明

    勵(lì) 娜,王 丹,陳一龍,姚媛媛,張小梅*,李勝容*

    基于ITS2 DNA序列的雷公藤屬藥材資源譜系地理學(xué)研究

    勵(lì) 娜1, 2,王 丹1, 2,陳一龍1, 2,姚媛媛3,張小梅1, 2*,李勝容1, 2*

    1. 重慶市中藥研究院,重慶 400065 2. 重慶市中藥研究院 重慶市中藥藥學(xué)評價(jià)工程技術(shù)研究中心,重慶 400065 3. 嘉興學(xué)院生物與化學(xué)化工學(xué)院,浙江 嘉興 314001

    采用ITS2 DNA條形碼技術(shù),研究雷公藤屬3種藥用植物的遺傳特性,揭示其地理分布格局的形成原因。收集雷公藤屬植物28個(gè)居群223份樣本,提取基因組DNA,擴(kuò)增ITS2基因序列并測序,并進(jìn)行遺傳多樣性分析,繪制失配分布曲線檢測群居歷史動(dòng)態(tài)變化情況,估算雷公藤屬種間、種內(nèi)群體間和群體內(nèi)的差異及遺傳分化系數(shù)。雷公藤屬28個(gè)居群223份樣本共檢測到12個(gè)堿基突變位點(diǎn),構(gòu)成10個(gè)單倍型。昆明山海棠共有7個(gè)單倍型,H2~H7為特有單倍型;雷公藤共有4個(gè)單倍型,H8為特有單倍型;東北雷公藤共有3個(gè)單倍型,無特有單倍型;H1為3個(gè)物種間的共有單倍型,H9和H10為雷公藤和東北雷公藤共有單倍型。群體遺傳多樣性分析顯示,雷公藤屬具有較高的單倍型多態(tài)性(d=0.615±0.024)和核苷酸多態(tài)性[i=(9.47±0.58)×10?3]。群體遺傳結(jié)構(gòu)分析顯示,雷公藤屬的變異主要存在于物種之間(76.14%),種內(nèi)群體間和群體內(nèi)的變異分別為11.42%、12.44%。群體動(dòng)態(tài)歷史分析表明,雷公藤屬、雷公藤和東北雷公藤曾經(jīng)歷過擴(kuò)張,而昆明山海棠未經(jīng)歷過擴(kuò)張。雷公藤屬及其屬下的昆明山海棠和雷公藤的遺傳多樣性水平較高,而東北雷公藤遺傳多樣性水平較低。雷公藤屬植物在第4紀(jì)冰期時(shí),將中國西南、華中和華東的部分地區(qū)作為冰期避難所,冰期后以冰期避難所為中心向四周擴(kuò)散,形成當(dāng)前雷公藤屬植物的分布格局。

    雷公藤屬;昆明山海棠;雷公藤;東北雷公藤;ITS2序列;譜系地理學(xué);遺傳特性

    第4紀(jì)冰期的氣候震蕩顯著改變了北半球溫帶地區(qū)的大多數(shù)物種的地理分布,產(chǎn)生了不同程度的范圍擴(kuò)展和收縮,影響了種群內(nèi)部和種群間遺傳變異的地理格局[1-2]。近年,基于DNA條形碼技術(shù)的分子譜系地理學(xué)是國際上研究居群遺傳分化進(jìn)化歷史的熱點(diǎn)和亮點(diǎn)[3]。分子譜系地理學(xué)研究技術(shù)在藥用植物遺傳多樣性、歷史進(jìn)化、地理分布格局歷史成因和資源保護(hù)等方面的研究中發(fā)揮著日益重要的作用[4-5]。ITS2基因序列常用于植物屬間、種間甚至居群間的系統(tǒng)關(guān)系探究,對于植物居群的動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)、歷史事件的發(fā)生過程有清晰的認(rèn)識,能全面的反應(yīng)居群的進(jìn)化歷史[6-7]。

    我國傳統(tǒng)藥用植物昆明山海棠(Lévl.) Hutch.和雷公藤Hook均屬于衛(wèi)矛科(Celastraceae)雷公藤屬L.植物,同屬植物還包括東北雷公藤Sprague et Takeda,其中前兩者廣泛分布于我國長江中、下游以南及西南地區(qū),后者主要分布于我國東北地區(qū)[8]。作為自身免疫性疾病臨床常用中藥,昆明山海棠與雷公藤植物藥材目前主要采自野生,經(jīng)過近30年的開發(fā)利用和適生環(huán)境被侵占,呈現(xiàn)資源銳減、供應(yīng)嚴(yán)重匱乏等現(xiàn)象,甚至部分地區(qū)面臨資源枯竭的危險(xiǎn)[9-10]。因此,本研究旨在通過分析我國雷公藤屬植物28個(gè)居群223份個(gè)體的ITS2的序列變異,闡明雷公藤屬植物遺傳特性及地理分布格局的歷史成因,以期為該屬植物的資源保護(hù)策略的制定提供一定的參考。

    1 材料

    1.1 藥材

    本研究共收集3種雷公藤屬植物28個(gè)居群223份樣本,經(jīng)重慶市中藥研究院瞿顯友研究員分別鑒定為昆明山海棠(Lévl.) Hutch.、雷公藤Hook和東北雷公藤Sprague et Takeda的干燥根。具體信息見表1。

    表1 樣品來源

    Table 1 Source of samples

    編號品種產(chǎn)地海拔/m經(jīng)度緯度 S1昆明山海棠四川米易普威2226E101°59′31″N27°03′33″ S2四川米易橫山1824E102°00′40″N26°59′26″ S3四川德昌1772E102°08′21″N27°23′44″ S4四川冕寧林里1624E102°11′57″N28°22′43″ S5四川冕寧石龍1840E102°12′14″N28°31′21″ S6云南南華2507E101°01′23″N25°19′30″ S7云南大理2450E100°07′31″N25°41′59″ S8云南南澗1696E100°32′51″N24°48′37″ S9云南保山2280E99°06′58″N25°07′30″ S10貴州雷山1160E108°13′43″N26°25′07″ S11貴州劍河 811E108°33′18″N26°37′58″ S12貴州印江 873E108°36′48″N27°56′27″ S13重慶武隆1589E107°42′24″N29°30′23″ S14重慶石柱1580E108°23′01″N30°13′23″ S15重慶江津1164E106°26′06″N28°36′21″ S16湖南南岳 764E112°38′18″N27°14′06″ S17湖南新寧1094E110°54′04″N26°26′07″ S18湖南武岡1415E110°37′21″N26°39′02″ S19湖北利川 738E108°39′50″N30°25′25″ S20雷公藤湖北通城 152E113°45′37″N28°07′20″ S21浙江龍泉1208E118°58′14″N28°05′21″ S22江西灣里 168E115°43′10″N28°48′29″ S23江西婺源 60E117°32′45″N29°05′40″ S24江西修水 152E114°02′41″N28°55′40″ S25東北雷公藤吉林通化 650E126°04′26″N41°34′02″ S26吉林江源1024E126°42′09″N41°55′39″ S27吉林臨江 739E126°55′20″N41°50′11″ S28吉林池北1090E128°10′59″N42°11′07″

    1.2 試劑與儀器

    植物基因組DNA試劑盒,天根生化科技有限公司;TIANGel Midi純化試劑盒,天根生化科技有限公司;UV-1100 SPECTROPHOTMETER,MAPADA有限公司;BP121S型電子天平,賽多利斯科學(xué)儀器有限公司;AEG-45SM型電子天平,日本島津公司;BJ-100型多功能粉碎機(jī),德清拜杰電器有限公司;KQ250DB型數(shù)控超聲波清洗器,鞏義市予華儀器有限公司;HH-S24型恒溫水浴鍋水浴鍋,金壇梅香儀器有限公司;SCIENTZ-48 DNA提取研磨機(jī);9700 GeneAmp PCR儀,Applied Biosystems公司;ABI 3730XL測序儀,Applied Biosystems公司。

    2 方法

    2.1 DNA提取、擴(kuò)增和測序

    根據(jù)植物基因組DNA試劑盒說明書提取上述28個(gè)居群223份雷公藤屬植物樣本總基因,參考Chen等[11]操作步驟進(jìn)行PCR擴(kuò)增。ITS2引物序列:正向?yàn)?’-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3’;反向?yàn)?’-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3’。采用1.0%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳,并使用TIANGel Midi試劑盒進(jìn)行純化。使用ABI 3730XL測序儀對純化后的樣品進(jìn)行測序。

    2.2 遺傳多樣性分析

    使用DnaSP v5軟件確定雷公藤屬3個(gè)物種28個(gè)居群ITS數(shù)據(jù)的單倍型,并統(tǒng)計(jì)多態(tài)位點(diǎn)和信息位點(diǎn)的數(shù)目,計(jì)算群體單倍型多樣性(haplotype diversity,d)、核苷酸多樣性(nucleotide diversity,i)。

    2.3 群體遺傳結(jié)構(gòu)分析

    使用PERMUT軟件計(jì)算雷公藤屬的遺傳分化參數(shù)(st、st),并檢驗(yàn)差異的顯著性。使用Arlequin3.5軟件進(jìn)行分子方差分析(AMOVA)估算屬內(nèi)種間、種內(nèi)群體間和群體內(nèi)的差異,以及種間和群體間遺傳分化系數(shù)。

    2.4 中性檢驗(yàn)

    使用DnaSP v5軟件計(jì)算中性檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)值Tajima’s(值)和Fu’(值)。中性學(xué)說認(rèn)為分子水平上的突變大多是中性或接近中性,對生物體的生存不存在任何有利或不利影響,且不受自然選擇的影響。突變是自然種群隨機(jī)遺傳漂變的結(jié)果,因此,核酸替換率只與它的突變率相關(guān),它們概率是相等的。通過檢驗(yàn)來判斷這些位點(diǎn)是否符合中性進(jìn)化模式。如果值為負(fù)值,說明種群內(nèi)存在大量低頻率的等位基因,暗示著種群曾經(jīng)經(jīng)歷過擴(kuò)張和或凈化選擇;如果值為正,則說明種群內(nèi)中等頻率的等位基因較多,那么種群可能經(jīng)歷過瓶頸效應(yīng)和或平衡選擇。值亦如此。但是值反映的是群體動(dòng)態(tài)的古老事件,而值反映的則是近期發(fā)生的群體動(dòng)態(tài)。

    2.5 失配分析

    失配分布是檢測群體大小變化的一種方法,可以推測群體是否經(jīng)歷過快速擴(kuò)張事件。失配分布檢驗(yàn)主要是將種群中的任意兩個(gè)序列進(jìn)行比較進(jìn)而得到兩個(gè)序列間差異的分布情況,其結(jié)果可用于計(jì)算雷公藤屬各水平類群在歷史上的種群動(dòng)態(tài)。通過觀察值與模擬值間的離差平方和和反映擬合曲線平滑度的RAG值,可以判斷雷公藤屬種群是否經(jīng)歷過種群擴(kuò)張或是瓶頸效應(yīng)。因?yàn)榉N群大小如果長期保持穩(wěn)定的話,那么它的分布曲線應(yīng)該出現(xiàn)至少2個(gè)峰值,而經(jīng)歷過快速擴(kuò)張的種群則會(huì)呈現(xiàn)為泊松分布。用DnaSP v5軟件繪制失配分布曲線,用Arlequin 3.5計(jì)算相關(guān)參數(shù)。

    2.6 單倍型網(wǎng)絡(luò)圖分析

    以獨(dú)子藤Roxb.作為外類群,利用Network構(gòu)建基于Median joining算法的單倍型網(wǎng)絡(luò)圖,并對該圖進(jìn)行手工調(diào)整。

    2.7 單倍型系統(tǒng)發(fā)育樹

    使用Modeltest 3.7軟件對ITS2單倍型序列進(jìn)行計(jì)算,以得到DNA序列替代模型的最佳模型。利用MrBayes 3.1.2軟件對ITS2序列數(shù)據(jù)進(jìn)行貝葉斯分析,構(gòu)建以獨(dú)子藤為外類群的雷公藤屬的單倍型系統(tǒng)樹。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 ITS2序列變異分析和單倍型分布

    雷公藤屬3個(gè)物種28個(gè)群體223份樣本成功擴(kuò)增出223 bp ITS2序列,共檢測到12個(gè)變異位點(diǎn)(Variable/polymorphic sites),全為堿基突變,共有11個(gè)信息位點(diǎn)(parsimony informative sites)(表2)。12個(gè)變異位點(diǎn)構(gòu)成了10個(gè)單倍型(H1~H10)。昆明山海棠共有7單倍型,其中6個(gè)為特有單倍型(H2~H7);雷公藤共有4單倍型,其中1個(gè)為特有單倍型(H8);東北雷公藤共有3單倍型,無特有單倍型;3個(gè)物種之間,H1是3個(gè)物種共有單倍型,H9和H10為雷公藤和東北雷公藤共有單倍型;除開H1,東北雷公藤和昆明山海棠之間、昆明山海棠和雷公藤之間再無其他共有單倍型(表3)。

    表2 雷公藤屬10種單倍型和12個(gè)變異位點(diǎn)

    Table 2 Ten haplotypes and 12 variant sites of Tripterygium

    類型變異位點(diǎn) 123456789101112 H1GGAAGTCATCCT H2?A?????????? H3??????????T? H4A?????T????? H5??????T????? H6?????CT????? H7?????C?????? H8??G????????? H9???T???GCT?A H10????A???????

    表3 雷公藤屬物種的單倍型多態(tài)性、核酸多態(tài)性和單倍型分布

    Table 3 Haplotype polymorphism, nucleic acid polymorphism and haplotype distribution in Tripterygium

    編號單倍型數(shù)量HdPi /(×10?3)單倍型種類及頻次 S01130.410±0.154 1.95±0.90H1(10)、H2(2)、H3(1) S02120.485±0.106 2.17±0.48H1(8)、H2(4) S03 90.000±0.000 0.00±0.00H1(9) S04120.000±0.000 0.00±0.00H1(12) S05 70.000±0.000 0.00±0.00H1(7) S06100.000±0.000 0.00±0.00H1(10) S07110.327±0.153 2.94±1.38H1(9)、H4(2) S08110.000±0.000 0.00±0.00H1(11) S09110.000±0.000 0.00±0.00H1(11) S10110.000±0.000 0.00±0.00H5(11) S11110.000±0.000 0.00±0.00H5(11) S12 50.000±0.000 0.00±0.00H5(5) S13120.485±0.106 2.17±0.48H1(4)、H2(8) S14130.000±0.00 0.00±0.00H5(13) S15120.409±0.133 1.83±0.60H1(3)、H5(9) S16120.000±0.000 0.00±0.00H1(12) S17 60.000±0.000 0.00±0.00H1(6) S18 31.000±0.272 5.98±1.99H1(1)、H6(1)、H7(1) S19 60.000±0.000 0.00±0.00H1(6) S20 80.000±0.000 0.00±0.00H1(8) S21100.000±0.000 0.00±0.00H8(10) S22150.590±0.07712.13±1.55H1(8)、H9(6)、H10(1) S23100.000±0.000 0.00±0.00H1(10) S24 90.000±0.000 0.00±0.00H1(9) S25100.000±0.000 0.00±0.00H9(10) S26180.000±0.000 0.00±0.00H9(18) S27200.468±0.10410.36±2.12H1(5)、H9(14)、H10(1) S28180.000±0.000 0.00±0.00H9(18)

    3.2 群體遺傳多樣性分析

    雷公藤屬28個(gè)群體共檢測到12種單倍型,每個(gè)群體的單倍型及個(gè)體數(shù)見表3。在28個(gè)群體中,8個(gè)群體具有單倍型多態(tài)性,其中4個(gè)群體具有2種單倍型,4個(gè)群體具有3種單倍型,無群體具有3個(gè)以上的單倍型。如表4所示,雷公藤屬具有較高的單倍型多態(tài)性(d=0.615±0.024)和核苷酸多態(tài)性[(i=9.47±0.58)×10?3],在物種水平上3個(gè)物種的多態(tài)性水平均小于雷公藤屬多態(tài)性水平,d的變化范圍為(0.170±0.060)(東北雷公藤)~(0.506±0.069)(雷公藤),i的變化范圍為(2.22±0.21)×10?3(昆明山海棠)~(6.26±1.51)×10?3(雷公藤)。群體水平上,d的變化范圍為(0.327±0.153)(大理)~(1.000±0.272)(武岡),i的變化范圍為(1.83±0.60)×10?3(江津)~(12.13±1.55)×10?3(南昌)。

    表4 雷公藤屬群體的單倍型多態(tài)性、核酸多態(tài)性和單倍型分布

    Table 4 Haplotype polymorphisms, nucleic acid polymorphisms, and haplotype distribution in Tripterygium

    樣本單倍型數(shù)量HdPi/(×10?3) 昆明山海棠1870.448±0.0352.22±0.21 雷公藤 520.506±0.0696.26±1.51 東北雷公藤 660.170±0.0603.90±1.36 雷公藤屬2230.615±0.0249.47±0.58

    3.3 群體遺傳結(jié)構(gòu)

    AMOVA分析顯示,雷公藤屬的變異主要存在于物種之間(76.14%),種內(nèi)群體間和群體內(nèi)的變異分別為11.42%、12.44%。物種水平上,雷公藤的變異在群體間和群體內(nèi)差異不大,分別為47.66%和52.34%;昆明山海棠的變異主要存在于群體間(65.54%),群體內(nèi)的變異為34.46%;東北雷公藤的變異主要存在于群體內(nèi)(76.64%),群體間的變異為23.36%(表5)。

    表5 雷公藤屬分子變異分析(AMOVA)

    Table 5 Molecular variation analysis of Tripterygium(AMOVA)

    樣本 變異來源自由度平方和變異百分比/%F值 雷公藤屬物種間2211.05976.14FCT=0.761 36 種內(nèi)群體間2554.11211.42FSC=0.478 64 群體內(nèi)27755.68812.44FST=0.875 58 東北雷公藤群體間36.30823.36 群體內(nèi)6221.95076.64FST= 0.233 61 昆明山海棠群體間1831.14265.54FST= 0.655 44 群體內(nèi)16814.80534.46 雷公藤群體間416.66347.66FST= 0.476 56 群體內(nèi)4718.93352.34

    3.4 群體動(dòng)態(tài)歷史分析

    分別在屬水平、物種水平進(jìn)行值和值中性檢驗(yàn)(表6),結(jié)果顯示值和值的正負(fù)不一,均未到達(dá)顯著水平,因此不能拒絕中性假說。說明雷公藤屬在屬水平和物種水平均未經(jīng)歷過群體擴(kuò)張或瓶頸事件。

    分別對雷公藤屬以及3個(gè)物種進(jìn)行了失配分布檢驗(yàn)(表6)。雷公藤屬水平上,SSD=0.072 78,=0.19,RAG=0.156 17,=0.32,不能拒絕擴(kuò)張假說。物種水平上,雷公藤和東北雷公藤的SSD和RAG的值都不顯著,不能拒絕擴(kuò)張假說;而昆明山海棠的SSD的值顯著,RAG的值不顯著,從SSD的結(jié)果看需要拒絕擴(kuò)張假說,而從RAG的結(jié)果看,不能拒絕擴(kuò)張假說,結(jié)果不一致。另外從失配分布曲線看,雷公藤屬、雷公藤和東北雷公藤的觀察曲線為雙峰,而昆明山海棠呈現(xiàn)的是比較完整的單峰分布,說明雷公藤屬、雷公藤和東北雷公藤曾經(jīng)經(jīng)歷過擴(kuò)張,而昆明山海棠未經(jīng)歷過擴(kuò)張(圖1)。

    中性檢驗(yàn)、失配分析的曲線以及SSD和RAG分析對雷公藤屬、昆明山海棠、雷公藤和東北雷公藤的群體動(dòng)態(tài)結(jié)果不一致,可能是由于ITS2一個(gè)片段的信息位點(diǎn)太少導(dǎo)致,需要進(jìn)一步增加片段進(jìn)行分析。

    3.5 單倍型網(wǎng)絡(luò)圖分析

    如圖2所示,單倍型網(wǎng)絡(luò)圖分析顯示雷公藤屬的10個(gè)單倍型構(gòu)成一個(gè)星狀的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu),其中單倍型H1和H5處于星狀結(jié)構(gòu)的中心,與其他單倍型具有最近的親緣關(guān)系,說明H1和H5是最原始的單倍型。根據(jù)星狀的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu),雷公藤屬10個(gè)單倍型大致可以分成3個(gè)支系,其中2個(gè)支系分別以H1和H5為祖先單倍型,H9單獨(dú)成為一個(gè)分支構(gòu)成一個(gè)支系。

    結(jié)合單倍型分布圖分析發(fā)現(xiàn),單獨(dú)為一個(gè)支系的單倍型H9為東北雷公藤獨(dú)有單倍型,4個(gè)東北雷公藤群體均有該單倍型,因此H9的分布與東北雷公藤的分布范圍一致,在我國東北部。以H5為祖先單倍型的支系,主要分布在云南北部、貴州、重慶南部和湖南西部地區(qū),該支系為昆明山海棠所獨(dú)有。剩余單倍型的以H1為祖先單倍型,雷公藤屬的3個(gè)物種都有該支系的單倍型,分布范圍最為廣闊。

    表6 雷公藤屬中性檢驗(yàn)和失配分析結(jié)果

    Table 6 Tripterygium neutrality test and mismatch analysis results

    樣本SSDP值HRAGP值F值P值D值P值 雷公藤屬0.072 780.190.156 20.32 0.812 360.692 0.249 730.638 雷公藤0.040 260.140.160 90.49 1.927 540.850?0.259 580.474 東北雷公藤0.033 030.060.717 60.67 1.917 660.819?0.748 920.249 昆明山海棠0.008 700.040.152 90.11?3.201 470.070?0.825 290.245

    圖1 雷公藤屬失配分布分析

    圖2 雷公藤屬單倍型網(wǎng)絡(luò)局部圖

    3.6 單倍型系統(tǒng)發(fā)育樹

    使用貝葉斯法構(gòu)建的雷公藤屬系統(tǒng)發(fā)育樹見圖3,該系統(tǒng)樹中多數(shù)分支的支持率很低,其中H5、H4和H6構(gòu)成的分支的支持率超過0.5,與單倍型網(wǎng)絡(luò)圖結(jié)果相似。系統(tǒng)樹中,H9依然是單獨(dú)夠成一支,與單倍型網(wǎng)絡(luò)圖的結(jié)果也類似。與單倍型網(wǎng)絡(luò)圖結(jié)果不一樣的是在系統(tǒng)發(fā)育樹中剩余單倍型并未獨(dú)聚為一支,而是與H5、H4和H6一起構(gòu)成一個(gè)支持率為0.53的分支,而H7和H8未與他們聚在一起。

    圖3 雷公藤屬單倍型系統(tǒng)發(fā)育樹

    4 討論

    4.1 群體遺傳多樣性

    在屬水平上,雷公藤屬具有較高的遺傳多樣性,d為0.615±0.024,i為(9.47±0.58)×10?3;物種水平上,雷公藤屬3個(gè)物種遺傳多樣性水平具有一定的差異,其中d由高到低依次為雷公藤(0.506±0.069)、昆明山海棠(0.448±0.035)、東北雷公藤(0.170±0.060);與雷公藤屬屬水平遺傳多樣性相比,物種水平的遺傳多樣性較低。雷公藤屬及其屬下2個(gè)種昆明山海棠和雷公藤的遺傳多樣性水平較高,而東北雷公藤遺傳多樣性水平較低。東北雷公藤遺傳水平低的原因可能有2種,一個(gè)是第4紀(jì)冰期時(shí),東北雷公藤已經(jīng)擴(kuò)散到我國東北地區(qū),在冰期時(shí)群體收縮由于嚴(yán)重的遺傳漂變導(dǎo)致群體遺傳多樣性下降。第2個(gè)是東北雷公藤在擴(kuò)散到東北時(shí),由于建群者效應(yīng)導(dǎo)致當(dāng)前的群體遺傳多樣性水平較低。

    4.2 群體遺傳結(jié)構(gòu)

    群體遺傳結(jié)構(gòu)方面,雷公藤屬3個(gè)物種群體水平的遺傳多樣性都很低。屬水平上,28個(gè)群體中只有8個(gè)群體具有遺傳多樣性。物種水平上,5個(gè)雷公藤群體只有1個(gè)群體具有遺傳多樣性,19個(gè)昆明山海棠群體只有6個(gè)群體具有遺傳多樣性,4個(gè)東北雷公藤群體只有1個(gè)群體具有遺傳多樣性。AMOVA分析顯示,雷公藤屬的變異主要存在于物種之間(76.14%),雷公藤屬物種間分化顯著。物種水平上,雷公藤的變異在群體間和群體內(nèi)差異不大;昆明山海棠的變異主要存在于群體間;東北雷公藤的變異主要存在于群體內(nèi)。Hamrick等[12]的研究認(rèn)為,在物種水平上植物群體遺傳多樣性水平主要收到系統(tǒng)分類地位、分布范圍、生活型、繁育系統(tǒng)和種子散播機(jī)制等因素的影響,群體水平上主要受到繁育系統(tǒng)、分布范圍、生活史、分類地位和種子的散播機(jī)制等因素的影響。根據(jù)Hamrick和Godt理論,多年生、異交為主、風(fēng)媒或水媒擴(kuò)散種子的植物群體間的分化程度較低,相反長壽的、自交為主的植物群體間的分化程度較高。

    4.3 冰期避難所

    氣候波動(dòng)對植物地理分布格局的影響非常大,第4紀(jì)冰期是對當(dāng)前我國植物地理分布格局影響最大的一次歷史氣候[13-14]。在第4季冰期時(shí),亞洲、美洲和歐洲都有明顯的大陸冰川,但是在我國范圍內(nèi)沒有明顯的大陸冰川,只有部分山地冰川[15]。冰期避難所是指在冰期尤其是盛冰期時(shí),許多物種分布范圍收縮后生存下來的區(qū)域[16]。避難所區(qū)域的群體比其他區(qū)域群體的遺傳多樣性高,根據(jù)這一特性及雷公藤屬單倍型分布格局,認(rèn)為在第4紀(jì)冰期時(shí),云南北部及四川南部的橫斷山脈、重慶的大巴山脈、湖南南部的南嶺和江西北部的廬山是雷公屬植物的冰期避難所。

    云南北部及四川南部地處我國橫斷山脈,橫斷山脈地區(qū)位于青藏高原東南部外圍,地質(zhì)構(gòu)造上十分活躍。該區(qū)域具有復(fù)雜的種子植物區(qū)系和豐富的特有種,是潛在的第4季冰期避難所[17]。大巴山脈具有山高、坡陡、谷深的地貌特點(diǎn)。秦巴山地是北部冷空氣南下的重要屏障,使得這一地區(qū)保存有第3紀(jì)植物最具豐富性和完整性[18]。周先容等[19-20]研究指出大巴山、武陵山、神農(nóng)架地區(qū)具有較大比例的古特有屬和珍稀瀕危物種,無遺是古植物區(qū)系的重要避難所。南嶺地區(qū)是熱帶和亞熱帶的過度地區(qū),長期保持濕熱的氣候環(huán)境,對中生代和新生代的植物進(jìn)化起著重要的作用。該區(qū)域中國特有種在總種數(shù)中占比高達(dá)59.9%,也是動(dòng)植物第4紀(jì)冰期的避難所。周秉根等[21-22]對揚(yáng)子鱷的研究認(rèn)為第四紀(jì)冰期是華中地區(qū)的中低山系(包括黃山、廬山、九華山和天目山等)不具備發(fā)育冰川的條件,而是季風(fēng)性冰緣環(huán)境且為溫暖帶氣候,很可能是第4紀(jì)冰期避難所。

    結(jié)合雷公藤屬植物單倍型分布圖和單倍型網(wǎng)絡(luò)圖分析發(fā)現(xiàn),雷公藤屬植物具有中國西南至華中,然后到華東,最后擴(kuò)散到東北的歷史遷移路線。筆者認(rèn)為,雷公藤屬植物在第4紀(jì)冰期時(shí)以云南北部及四川南部的橫斷山脈、重慶的大巴山脈、湖南南部的南嶺和江西北部的廬山作為冰期避難所,冰期后以冰期避難所為中心向四周擴(kuò)散,形成當(dāng)前雷公藤屬植物的分布格局。

    4.4 資源狀況分析

    雷公藤屬藥用植物資源目前主要來自野生,其中昆明山海棠分布面積較雷公藤和東北雷公藤更廣,野生資源較為豐富,在四川涼山等地成片生長,但由于過度開采及存在大量紫莖澤蘭惡性競爭其適生環(huán)境,其蘊(yùn)藏量已急劇減少。雷公藤多以散生為主,在本次實(shí)地取樣過程種未見大面積群落,一個(gè)地方僅有幾株、幾十株,重復(fù)取樣具有一定困難。且雷公藤喜陰濕,但需要一定陽光,郁閉度稍高,長勢就變?nèi)酢,F(xiàn)華東地區(qū)嚴(yán)禁砍伐木材后,山區(qū)森林郁閉度增高,雷公藤長勢漸弱,進(jìn)一步不利于雷公藤的生長繁殖。東北雷公藤的群落主要集中在長白山地區(qū)。由于其尚未開發(fā)利用,野生資源還未被破壞,但分布區(qū)較小,資源蘊(yùn)藏總量不多。

    綜上所述,基于ITS2基因序列對雷公藤屬藥用植物譜系地理學(xué)研究結(jié)果表明,該屬植物具有較高的遺傳多樣性,其下的3個(gè)物種群體水平的遺傳多樣性都很低。在第4紀(jì)冰期時(shí)以云南北部及四川南部的橫斷山脈、重慶的大巴山脈、湖南南部的南嶺和江西北部的廬山作為冰期避難所,冰期過后以冰期避難所為中心向四周擴(kuò)散,形成當(dāng)前雷公藤屬植物的分布格局。資源現(xiàn)狀分析提示雷公藤屬藥用植物野生資源匱乏,后續(xù)課題組將就此進(jìn)一步提出雷公藤屬藥用植物資源保護(hù)和可持續(xù)發(fā)展策略。

    利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

    [1] Li Q E, Guo X, Niu J F,. Molecular phylogeography and evolutionary history of the endemic species(Papaveraceae) on the Tibetan Plateau inferred from chloroplast DNA and ITS sequence variation [J]., 2020, 11: 436.

    [2] Hewitt G. The genetic legacy of the Quaternary ice ages [J]., 2000, 405(6789): 907-913.

    [3] 卓維, 劉艷, 白娟, 等. 基于nrDNA ITS序列的榧樹屬植物鑒定及親緣關(guān)系分析 [J]. 分子植物育種, 2021, 19(11): 3579-3587.

    [4] 李菁, 向婷婷, 許成, 等. 分子譜系地理學(xué)在藥用植物基因水平的研究進(jìn)展 [J]. 中草藥, 2015, 46(8): 1243-1246.

    [5] 劉曉光, 黃璐琦, 袁慶軍, 等. 基于分子譜系地理學(xué)的藥用植物核心種質(zhì)構(gòu)建 [J]. 中國中藥雜志, 2012, 37(5): 692-698.

    [6] 楊俊譽(yù), 魏世杰, 蘇代發(fā), 等. 云南黃毛草莓的nrDNA ITS和cpDNA psbA-trnH序列分子鑒定及進(jìn)化特征分析 [J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2020, 51(4): 748-757.

    [7] 張雪梅, 何興金. 青藏高原特有植物青海當(dāng)歸的譜系地理學(xué)初探 [J]. 植物分類與資源學(xué)報(bào), 2013, 35(4): 505-512.

    [8] 中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會(huì). 中國植物志(第六卷第一分冊, 蕨類植物門)[M]. 北京: 科學(xué)出版社, 1999: 178.

    [9] 王特, 李兆福, 李濤, 等. 昆明山海棠治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎作用機(jī)制的研究進(jìn)展 [J]. 風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎, 2019, 8(8): 60-63.

    [10] 徐娥, 任慧珠. 小劑量雷公藤多甙對早期糖尿病腎病患者的臨床療效觀察 [J]. 實(shí)用糖尿病雜志, 2020, 16(3): 57-58.

    [11] Chen S L, Yao H, Han J P,. Validation of the ITS2 region as a novel DNA barcode for identifying medicinal plant species [J]., 2010, 5(1): e8613.

    [12] Hamrick J L, Godt M J W.[M]. Massachusetts: Sinauer Associates Inc, 1990.

    [13] Qiu Y X, Fu C X, Comes H P. Plant molecular phylogeography in China and adjacent regions: Tracing the genetic imprints of Quaternary climate and environmental change in the world’s most diverse temperate flora [J]., 2011, 59(1): 225-244.

    [14] Hewitt G M. Genetic consequences of climatic oscillations in the Quaternary [J]., 2004, 359(1442): 183-195.

    [15] Zhao C, Wang C B, Ma X G,. Phylogeographic analysis of a temperate-deciduous forest restricted plant (Turcz.) reveals two refuge areas in China with subsequent refugial isolation promoting speciation [J]., 2013, 68(3): 628-643.

    [16] 沈浪, 陳小勇, 李媛媛. 生物冰期避難所與冰期后的重新擴(kuò)散 [J]. 生態(tài)學(xué)報(bào), 2002, 22(11): 1983-1990.

    [17] 陳冬梅, 康宏樟, 劉春江. 中國大陸第四紀(jì)冰期潛在植物避難所研究進(jìn)展 [J]. 植物研究, 2011, 31(5): 623-632.

    [18] 趙芳, 張百平, 朱連奇, 等. 秦巴山地垂直帶譜結(jié)構(gòu)的空間分異與暖溫帶—亞熱帶界線問題 [J]. 地理學(xué)報(bào), 2019, 74(5): 889-901.

    [19] 周先容, 尚進(jìn), 陳發(fā)波, 等. 巴山榧樹及近緣種的psbA-trnH序列分析 [J]. 西部林業(yè)科學(xué), 2015, 44(1): 16-21.

    [20] 周先容, 汪建華, 尚進(jìn), 等. 金佛山喀斯特山地巴山榧樹灌叢群落優(yōu)勢灌木種群的種間關(guān)系 [J]. 西南大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2016, 38(9): 88-94.

    [21] 周秉根, 盧曉. 揚(yáng)子鱷如何渡過第四紀(jì)冰期 [J]. 華中師范大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 1994, 2: 260-262.

    [22] 周秉根, 李剛, 姚敏, 等. 九華山第四紀(jì)冰緣地貌與古環(huán)境分析 [J]. 安徽師大學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 1994, 17(2): 48-53.

    Phylogeography ofinferred based on ITS2 DNA sequence variation

    LI Na1, 2, WANG Dan1, 2, CHEN Yi-long1, 2, YAO Yuan-yuan3, ZHANG Xiao-mei1, 2, LI Sheng-rong1, 2

    1. Chongqing Academy of Chinese Materia Medica, Chongqing 400065, China 2. Chongqing Academy of Chinese Materia Medica, Chongqing Engineering Research Center of Pharmaceutical Evaluation of Chinese Medicine, Chongqing 400065, China 3. College of Biological, Chemical Science and Engineering, Jiaxing University, Jiaxing 314001, China

    To studythe genetic characteristics and geographical distribution of three species of the genusby ITS2 DNA barcoding technique.A total of 223 samples from 28 populations ofwere collected. The genomic DNA extraction and ITS2 gene amplification and sequencing were performed on the above samples. Genetic diversity was analyzed by calculating haplotype diversity and nucleotide diversity. The dynamic change of social history was detected by drawing the curve of mismatch distribution. Based on the above data analysis, the differences among species, populations and populations, and the coefficient of genetic differentiation between species and populations were estimated.A total of 12 base mutation sites were detected in 223 samples from 28 populations of, which constituted 10 haplotypes. There were seven haplotypes in, and H2—H7 were unique haplotypes. There were four haplotypes in, and H8 was a unique haplotype. There were three haplotypes in. Among the three species, H1 is the haplotype of three species, H9 and H10 are the haplotypes ofand. The analysis of population genetic diversity showed thathad high haplotype and nucleotide polymorphism [d= 0.615 ± 0.024,i= (9.47 ± 0.58 )× 10?3] . The analysis of population genetic structure showed that the variation ofmainly existed among species (76.14%), and the variation of intraspecies and intrapopulation was 11.42% and 12.44%, respectively. The population dynamic analysis showed that,andhad experienced expansion, buthad not.The genetic diversity level of,andare higher than that of.used parts of Southwest China, Central China, and East China as refuges during the Quaternary ice age. After the ice age,spread around the refuge, forming the current distribution pattern.

    ;(Lévl.) Hutch.;Hook;Sprague et Takeda; ITS2 sequence; phylogeography; genetic characteristics

    R282.12

    A

    0253 - 2670(2022)17 - 5476 - 08

    10.7501/j.issn.0253-2670.2022.17.024

    2022-02-06

    國家重大新藥創(chuàng)制科技專項(xiàng)(2017ZX09101002);重慶市基礎(chǔ)科學(xué)與前沿技術(shù)研究項(xiàng)目(cstc2017jcyjAX0001,cstc2018jcyjAX0142);重慶市社會(huì)事業(yè)與民生保障科技創(chuàng)新專項(xiàng)(cstc2017shms-zdyfX00012)

    勵(lì) 娜,主任中藥師,從事中藥資源、質(zhì)量控制、中藥制劑、中藥炮制工藝及機(jī)制研究。E-mail: lina1281@163.com

    張小梅,主任中藥師,從事中藥資源與物質(zhì)基礎(chǔ)研究、中藥品種品種評價(jià)、中藥新藥研究。E-mail: 605050963@qq.com

    李勝容,主任藥師,從事中藥資源與質(zhì)量評價(jià)、中藥新藥研究開發(fā)。E-mail: 1079639273@qq.com

    [責(zé)任編輯 時(shí)圣明]

    猜你喜歡
    雷公藤海棠昆明
    Effectiveness and safety of tripterygium glycosides tablet (雷公藤多苷片) for lupus nephritis: a systematic review and Meta-analysis
    雪中昆明 一夢千年
    讀《明天要遠(yuǎn)足》,寫“我要去遠(yuǎn)足”
    雷公藤多苷片聯(lián)合甲氨蝶呤治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的療效
    昆明美
    民族音樂(2019年2期)2019-12-10 13:14:55
    《大嘴狗》
    找春天①
    ??(昆明)? ??????? ??? ??
    中國(韓文)(2018年6期)2018-06-25 07:10:44
    關(guān)于召開“第六屆全國雷公藤學(xué)術(shù)會(huì)議”的征文通知
    雷公藤紅素通過ROS/JNK途徑誘導(dǎo)Saos-2細(xì)胞發(fā)生caspase依賴的凋亡
    亚洲欧美精品综合久久99| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产一区在线观看成人免费| av在线天堂中文字幕| 欧美成狂野欧美在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 日本熟妇午夜| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 99国产综合亚洲精品| 亚洲成人久久爱视频| 国产综合懂色| 国产精品亚洲一级av第二区| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产精品av久久久久免费| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 久久午夜综合久久蜜桃| 黄色日韩在线| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲五月天丁香| 性欧美人与动物交配| 国产精品野战在线观看| 日韩免费av在线播放| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 久久午夜亚洲精品久久| 最近最新中文字幕大全电影3| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲国产精品999在线| 国产精品av久久久久免费| 在线看三级毛片| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 成人国产一区最新在线观看| 床上黄色一级片| 两性夫妻黄色片| 国产综合懂色| 欧美日韩黄片免| 色吧在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲av五月六月丁香网| 国产一区在线观看成人免费| 99国产精品一区二区蜜桃av| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲成a人片在线一区二区| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 欧美三级亚洲精品| 一二三四社区在线视频社区8| 免费观看的影片在线观看| 99久久成人亚洲精品观看| 亚洲av五月六月丁香网| 免费av毛片视频| 亚洲精华国产精华精| 亚洲avbb在线观看| 久久国产精品影院| 久久这里只有精品中国| 麻豆av在线久日| svipshipincom国产片| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 99久久精品热视频| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 欧美另类亚洲清纯唯美| 欧美乱色亚洲激情| 国产精品1区2区在线观看.| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 岛国视频午夜一区免费看| a级毛片在线看网站| www.精华液| 亚洲色图av天堂| 一区福利在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲电影在线观看av| 黄片小视频在线播放| 夜夜爽天天搞| 制服人妻中文乱码| 亚洲成人久久性| АⅤ资源中文在线天堂| 午夜精品久久久久久毛片777| 免费在线观看日本一区| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产精品日韩av在线免费观看| 麻豆国产av国片精品| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产高潮美女av| 日韩三级视频一区二区三区| 很黄的视频免费| netflix在线观看网站| 最好的美女福利视频网| 免费观看人在逋| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 又黄又粗又硬又大视频| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 18禁美女被吸乳视频| 婷婷丁香在线五月| 国产视频一区二区在线看| 国产91精品成人一区二区三区| 国产亚洲av嫩草精品影院| 观看免费一级毛片| 国产爱豆传媒在线观看| 成人特级av手机在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 午夜福利高清视频| 淫秽高清视频在线观看| x7x7x7水蜜桃| 少妇熟女aⅴ在线视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 午夜福利在线观看吧| 日韩欧美在线二视频| 国产精品国产高清国产av| 亚洲片人在线观看| 亚洲成av人片免费观看| 国产精品野战在线观看| 久久国产乱子伦精品免费另类| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产精品亚洲av一区麻豆| 成人永久免费在线观看视频| 热99在线观看视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 久久久久亚洲av毛片大全| 亚洲九九香蕉| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久精品影院6| 国产真实乱freesex| 真人做人爱边吃奶动态| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 亚洲黑人精品在线| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 麻豆成人av在线观看| 黄片小视频在线播放| 久99久视频精品免费| 人人妻人人看人人澡| 免费看a级黄色片| 黄色视频,在线免费观看| 人妻久久中文字幕网| 国产精品国产高清国产av| 丰满的人妻完整版| 麻豆国产av国片精品| 9191精品国产免费久久| 久久人人精品亚洲av| 岛国在线免费视频观看| 日本在线视频免费播放| 我的老师免费观看完整版| 午夜福利免费观看在线| 欧美成人免费av一区二区三区| 国语自产精品视频在线第100页| 91麻豆精品激情在线观看国产| 后天国语完整版免费观看| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲精品一区av在线观看| 日本免费a在线| 久久伊人香网站| 1000部很黄的大片| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲精品456在线播放app | 免费观看的影片在线观看| 国产av麻豆久久久久久久| av天堂在线播放| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 久久伊人香网站| 国内精品美女久久久久久| 久久久久久大精品| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久久久久久久午夜电影| 色综合欧美亚洲国产小说| 日韩中文字幕欧美一区二区| 欧美一区二区国产精品久久精品| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 女同久久另类99精品国产91| 久久香蕉国产精品| 校园春色视频在线观看| 免费在线观看影片大全网站| 91av网站免费观看| 国产综合懂色| 午夜影院日韩av| 在线观看午夜福利视频| 中文字幕av在线有码专区| 国产成人系列免费观看| 久久午夜亚洲精品久久| 搞女人的毛片| 精品国产亚洲在线| 国产黄色小视频在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| 日韩精品青青久久久久久| cao死你这个sao货| 日日夜夜操网爽| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产精华一区二区三区| 91九色精品人成在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 久99久视频精品免费| 国产精品乱码一区二三区的特点| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 十八禁人妻一区二区| 国产在线精品亚洲第一网站| 精品久久久久久,| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲国产中文字幕在线视频| 久久久久久九九精品二区国产| 国产黄色小视频在线观看| 中文在线观看免费www的网站| 午夜福利高清视频| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲午夜理论影院| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 成年人黄色毛片网站| 亚洲av片天天在线观看| 深夜精品福利| 99久久综合精品五月天人人| 12—13女人毛片做爰片一| 51午夜福利影视在线观看| 级片在线观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 1024手机看黄色片| 亚洲色图av天堂| 国产三级黄色录像| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 精品电影一区二区在线| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 看片在线看免费视频| 国产不卡一卡二| av女优亚洲男人天堂 | 男人的好看免费观看在线视频| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产私拍福利视频在线观看| 首页视频小说图片口味搜索| 12—13女人毛片做爰片一| 成人午夜高清在线视频| 久久久精品大字幕| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产成人av教育| 亚洲色图av天堂| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产综合懂色| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 在线观看日韩欧美| 757午夜福利合集在线观看| 国产一区二区激情短视频| 亚洲av电影不卡..在线观看| 久久精品人妻少妇| 午夜福利视频1000在线观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 哪里可以看免费的av片| 中文字幕最新亚洲高清| 国产成人系列免费观看| 国产麻豆成人av免费视频| 精品不卡国产一区二区三区| 我要搜黄色片| 国产1区2区3区精品| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产美女午夜福利| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 69av精品久久久久久| 亚洲 欧美一区二区三区| 一a级毛片在线观看| 亚洲国产色片| 久久香蕉精品热| а√天堂www在线а√下载| 一级毛片女人18水好多| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 日韩欧美国产在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| tocl精华| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 一个人观看的视频www高清免费观看 | ponron亚洲| 18美女黄网站色大片免费观看| 欧美日韩国产亚洲二区| 欧美一区二区国产精品久久精品| 国产成人av激情在线播放| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产美女午夜福利| 一区二区三区激情视频| 亚洲国产精品成人综合色| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲男人的天堂狠狠| www.自偷自拍.com| 国产淫片久久久久久久久 | 久久午夜综合久久蜜桃| 精品国产三级普通话版| 99热6这里只有精品| 国产视频一区二区在线看| 欧美成人性av电影在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 午夜福利欧美成人| 色视频www国产| av在线蜜桃| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 亚洲真实伦在线观看| 这个男人来自地球电影免费观看| 超碰成人久久| 偷拍熟女少妇极品色| 成人欧美大片| 99精品欧美一区二区三区四区| 免费看日本二区| 老熟妇仑乱视频hdxx| 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产精品一区二区免费欧美| 一进一出好大好爽视频| 婷婷丁香在线五月| 国产野战对白在线观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 黄色日韩在线| 男女视频在线观看网站免费| 国产毛片a区久久久久| 亚洲av成人av| 天堂网av新在线| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 美女高潮的动态| www.自偷自拍.com| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 男女之事视频高清在线观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 啦啦啦观看免费观看视频高清| avwww免费| 两人在一起打扑克的视频| 欧美日韩黄片免| a级毛片在线看网站| 亚洲一区二区三区不卡视频| 成年女人永久免费观看视频| 中文字幕久久专区| 九色成人免费人妻av| svipshipincom国产片| 久久久国产欧美日韩av| 国产69精品久久久久777片 | 亚洲第一电影网av| 99re在线观看精品视频| 国产成人欧美在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 欧美中文日本在线观看视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| a在线观看视频网站| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 色综合婷婷激情| 麻豆国产97在线/欧美| 国产 一区 欧美 日韩| 99re在线观看精品视频| xxxwww97欧美| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 欧美色欧美亚洲另类二区| 日韩人妻高清精品专区| 久久久久九九精品影院| 女同久久另类99精品国产91| 精品久久久久久久末码| 激情在线观看视频在线高清| 啪啪无遮挡十八禁网站| 曰老女人黄片| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲午夜理论影院| www.精华液| 最好的美女福利视频网| 欧美丝袜亚洲另类 | 校园春色视频在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久草成人影院| av中文乱码字幕在线| 在线免费观看不下载黄p国产 | 国产单亲对白刺激| 亚洲成人精品中文字幕电影| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲真实伦在线观看| 国产美女午夜福利| 18禁观看日本| 在线免费观看不下载黄p国产 | 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产高清激情床上av| 精品久久久久久成人av| 午夜a级毛片| 99久国产av精品| 日本五十路高清| 国产淫片久久久久久久久 | 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久中文看片网| 一本精品99久久精品77| 18禁国产床啪视频网站| 日韩欧美国产在线观看| 1024香蕉在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲在线自拍视频| 久久精品综合一区二区三区| 99久久精品一区二区三区| 88av欧美| 天堂网av新在线| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 少妇的逼水好多| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲av成人精品一区久久| 国产精品久久久久久精品电影| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 日本三级黄在线观看| 丰满的人妻完整版| 观看免费一级毛片| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲人成网站高清观看| 九色成人免费人妻av| 一级毛片女人18水好多| 国产午夜精品久久久久久| 久久久精品大字幕| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲国产欧美网| 久久中文字幕人妻熟女| 91在线观看av| 偷拍熟女少妇极品色| 久久久久免费精品人妻一区二区| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| av在线天堂中文字幕| 免费看光身美女| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 激情在线观看视频在线高清| 亚洲精华国产精华精| 亚洲色图av天堂| 国模一区二区三区四区视频 | 国内精品久久久久久久电影| 国产精品影院久久| 国产日本99.免费观看| 精品人妻1区二区| 欧美3d第一页| 一区福利在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产成人福利小说| 波多野结衣巨乳人妻| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| www日本在线高清视频| 国产成人精品无人区| 欧美不卡视频在线免费观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 国产淫片久久久久久久久 | 亚洲一区二区三区不卡视频| 欧美激情在线99| 在线观看免费视频日本深夜| 麻豆成人午夜福利视频| 午夜福利在线在线| 人妻久久中文字幕网| 99久久精品热视频| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲av电影在线进入| 一本综合久久免费| 亚洲国产欧美一区二区综合| 美女免费视频网站| svipshipincom国产片| 99热只有精品国产| 美女被艹到高潮喷水动态| 极品教师在线免费播放| 激情在线观看视频在线高清| 成人无遮挡网站| 老汉色∧v一级毛片| 无人区码免费观看不卡| 一级a爱片免费观看的视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 丰满的人妻完整版| 免费一级毛片在线播放高清视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 757午夜福利合集在线观看| 午夜福利在线观看吧| 动漫黄色视频在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 在线视频色国产色| 99久久成人亚洲精品观看| 亚洲18禁久久av| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 一个人免费在线观看电影 | 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 日韩免费av在线播放| 最新在线观看一区二区三区| 丰满的人妻完整版| 国产精品野战在线观看| 香蕉丝袜av| 欧美激情久久久久久爽电影| 男插女下体视频免费在线播放| 好男人电影高清在线观看| 国产亚洲欧美98| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 日本精品一区二区三区蜜桃| 91在线观看av| 嫩草影院入口| 动漫黄色视频在线观看| aaaaa片日本免费| 日本 av在线| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美日本视频| 91在线精品国自产拍蜜月 | 国产精品,欧美在线| 少妇的逼水好多| 国产高清有码在线观看视频| 久久精品91蜜桃| 99热6这里只有精品| 丁香欧美五月| 色尼玛亚洲综合影院| 哪里可以看免费的av片| 特级一级黄色大片| 麻豆av在线久日| 999精品在线视频| 国产美女午夜福利| 美女大奶头视频| 国产av一区在线观看免费| 麻豆国产97在线/欧美| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 色精品久久人妻99蜜桃| 色哟哟哟哟哟哟| 最新在线观看一区二区三区| 久久天堂一区二区三区四区| 国产av麻豆久久久久久久| 免费看美女性在线毛片视频| 黄色日韩在线| 精品无人区乱码1区二区| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲天堂国产精品一区在线| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 长腿黑丝高跟| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产精品久久视频播放| 午夜视频精品福利| 99久久综合精品五月天人人| 久久精品影院6| 搡老熟女国产l中国老女人| а√天堂www在线а√下载| 精品国产亚洲在线| 少妇的丰满在线观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 天堂网av新在线| 精品国产乱码久久久久久男人| 日韩中文字幕欧美一区二区| 桃色一区二区三区在线观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产极品精品免费视频能看的| 一级作爱视频免费观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 真实男女啪啪啪动态图| 男女之事视频高清在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲欧美激情综合另类| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲av片天天在线观看| 日本 欧美在线| 日本黄大片高清| 狂野欧美激情性xxxx| 岛国视频午夜一区免费看| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 身体一侧抽搐| 欧美另类亚洲清纯唯美| 一二三四社区在线视频社区8| 老司机深夜福利视频在线观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 久久人人精品亚洲av| 亚洲天堂国产精品一区在线| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产淫片久久久久久久久 | 婷婷精品国产亚洲av| 欧美日韩福利视频一区二区| 91av网一区二区| 制服人妻中文乱码| 成在线人永久免费视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产亚洲欧美98| 欧美午夜高清在线| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲黑人精品在线| 午夜免费成人在线视频| 级片在线观看| 偷拍熟女少妇极品色| 国内精品美女久久久久久| 又爽又黄无遮挡网站| 香蕉av资源在线| 色综合婷婷激情| 国产精华一区二区三区| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲九九香蕉| 成人av一区二区三区在线看| 色av中文字幕| 老汉色av国产亚洲站长工具| 婷婷亚洲欧美| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲成av人片在线播放无| 桃红色精品国产亚洲av| 少妇人妻一区二区三区视频| 久久久精品大字幕| 91在线精品国自产拍蜜月 | or卡值多少钱| 国产精品亚洲一级av第二区| 首页视频小说图片口味搜索| 国产午夜精品久久久久久| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲人与动物交配视频| 久久99热这里只有精品18| 亚洲专区字幕在线| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲成人中文字幕在线播放| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 欧美国产日韩亚洲一区| 久久久国产精品麻豆| 99视频精品全部免费 在线| 国产精品蜜桃在线观看| 麻豆国产97在线/欧美| 亚洲成人av在线免费| 亚洲欧美精品综合久久99|