巖藻多糖對斷奶羔羊小腸組織形態(tài)、消化酶活性和抗氧化指標的影響

郭廣振 陳佳怡 彭 蘇 邱曉媛 牛志力 吳卓明 蘭瑞霞 高振華 趙志輝 尹福泉

(廣東海洋大學(xué)濱海農(nóng)業(yè)學(xué)院，湛江 524088)

集約化養(yǎng)殖模式是我國畜禽養(yǎng)殖的必然趨勢，其中幼齡動物早期斷奶是牛羊產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展的必要環(huán)節(jié)。在羔羊斷奶前，液體乳是其主要的營養(yǎng)和免疫來源，因其瘤胃功能尚未健全和食管溝閉合作用，真胃和腸道成為機體消化吸收營養(yǎng)物質(zhì)的主要場所，也是機體最大的免疫器官[1]。尤其在斷奶過程中，小腸形態(tài)結(jié)構(gòu)的完整性和功能性直接或間接地影響機體的生長發(fā)育和健康狀況，如小腸絨毛高度變短、隱窩深度加深及其比值(絨毛高度/隱窩深度，V/C)下降，同時腸道中有害菌驟增等，會加劇腸道結(jié)構(gòu)和功能損傷，從而降低飼糧營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，并導(dǎo)致發(fā)病率上升[2-8]。傳統(tǒng)上應(yīng)用抗生素能很好地緩解羔羊斷奶應(yīng)激；但長期使用抗生素的后遺癥日趨嚴峻，加之2020年我國已施行“全面禁抗”措施[9]。因此，尋找新的替抗物質(zhì)對建立羔羊健康養(yǎng)殖、提高母羊繁殖率等方面具有重要意義。

隨著研究的不斷深入，研究人員發(fā)現(xiàn)植物多糖能有效改善幼齡動物的腸道健康[10-13]。而海藻是一類藥食同源的植物，因其長期生長在高鹽、高壓、低溫和缺氧等惡劣水環(huán)境中，其細胞壁產(chǎn)生了與陸地植物明顯不同結(jié)構(gòu)和功能的生物活性成分，如巖藻多糖等，其微生物降解速度慢于其他多糖[14]，同時具有抗病毒[15]、抗氧化[16-17]及腸道屏障保護作用[13]等生物學(xué)功能。目前，關(guān)于幼齡反芻動物早期斷奶的研究多集中于斷奶日齡、營養(yǎng)水平對瘤胃發(fā)育的影響等方面[18-19]，而關(guān)于巖藻多糖對早期斷奶幼齡反芻動物的小腸形態(tài)和功能的影響則鮮有報道。

鑒于本團隊前期結(jié)果發(fā)現(xiàn)，相比于未添加巖藻多糖組，飼喂巖藻多糖后，羔羊在試驗第1～30天內(nèi)平均日增重的增長率超過34%，其中0.3%和0.6%巖藻多糖添加組在試驗第1～30天的開食料采食量增長率超過30%，可見，代乳粉中添加巖藻多糖能提高斷奶羔羊生長性能；另外，飼喂0.3%和0.6%巖藻多糖后，提高了斷奶羔羊血清球蛋白含量和堿性磷酸酶、抗氧化酶活性以及抗炎因子白細胞介素-10含量，抑制了血清丙二醛和促炎因子腫瘤壞死因子-α、白細胞介素-1β含量，改善了血清生化指標，提高了血清抗氧化能力和免疫性能，在一定程度上緩解了斷奶應(yīng)激[20]。本研究進一步提出假設(shè)，認為代乳粉中添加巖藻多糖能改善早期斷奶羔羊的小腸結(jié)構(gòu)和功能。因此，本試驗在前期研究基礎(chǔ)上[20]，進一步研究代乳粉中添加巖藻多糖對早期斷奶羔羊小腸通透性、組織形態(tài)、消化酶活性及抗氧化指標的影響，為幼齡反芻動物腸道健康養(yǎng)殖提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗用巖藻多糖來源某公司，生產(chǎn)日期為2021年1月5日，為淡黃色粉末，具有海藻氣味，純度為98%，其中水分含量為7.87%、總糖含量為66.3%、巖藻糖含量為24.9%、硫酸基含量為28.9%。

1.2 試驗設(shè)計

選取體重相近、健康狀況良好的30日齡去勢川中黑山羊公羔24只，平均初始重為(7.32±0.37)kg。采用單因素試驗設(shè)計，按照同質(zhì)原則將試驗羔羊隨機分為4個組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)1只羊。4組羔羊分別飼喂代乳粉(對照組，Ⅰ組)、代乳粉+0.1%巖藻多糖(Ⅱ組)、代乳粉+0.3%巖藻多糖(Ⅲ組)和代乳粉+0.6%巖藻多糖(Ⅳ組)。羔羊自由采食開食料。試驗預(yù)試期7 d，正試期30 d。

1.3 試驗飼糧

代乳粉購自北京精準動物營養(yǎng)研究中心，營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))：粗蛋白質(zhì)23%、粗脂肪12%、粗纖維3%、粗灰分10%、鈣1.5%和磷1.2%。開食料配方根據(jù)《肉羊飼養(yǎng)標準》(NY/T 816—2004)設(shè)計，其組成及營養(yǎng)水平見表1，精粗比為80∶20。

表1 開食料組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗地點在廣東省雷州市某養(yǎng)殖場，時間為2021年4月至2021年6月。29日齡前的羔羊隨母羊哺乳，30日齡進行強制斷奶，并單籠飼養(yǎng)。根據(jù)體重的1.2%飼喂代乳粉，代乳粉和溫開水按照重量與體積1∶6比例進行稀釋沖調(diào)，攪拌搖勻至充分溶解后，室溫晾至40 ℃使用奶瓶(250 mL)進行飼喂。每天分4次等量飼喂，飼喂時間分別為08:00、11:00、14:00和17:00。各組的代乳粉采食量無顯著差異[20]。飼糧飼喂程序：首先少量開食料(記錄重量)，其次代乳粉，最后自由采食開食料。羊圈衛(wèi)生按照養(yǎng)殖場管理措施，進行定期打掃與消毒。

1.5 檢測指標及方法

1.5.1 腸道通透性指標

樣品采集：正試期結(jié)束當天(即第30天)20:00開始禁食、禁水12 h。次日08:00，將所有羔羊保定后，通過頸靜脈采集羔羊血液10 mL，將采血管在4 ℃下傾斜60°靜置20 min后，4 ℃、1 789×g離心10 min，將上清液分裝至1.5 mL Ep管中，置于-20 ℃冰箱保存，待測。

腸道通透性指標：血清中二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)活性、內(nèi)毒素(endotoxin,ET)和D-乳酸(D-lactic acid,DLA)含量采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒測定。

1.5.2 小腸組織和食糜采集

小腸組織采集：當天采集完血液樣品后，立即采用頸動脈放血法屠宰。羔羊屠宰后采集小腸組織中段樣品(十二指腸、空腸、回腸，約1 cm腸管)，并用磷酸緩沖液(PBS)沖洗之后，將每只羔羊腸段分成2份，一份固定在4%多聚甲醛中用于組織形態(tài)學(xué)分析；另一份裝入2 mL無酶離心管，液氮速凍，之后轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱保存，待測。

食糜采集：在采集腸道組織同時，緊接馬上采集空腸中段食糜樣品，裝于已高壓滅菌的15 mL離心管中，液氮速凍，之后轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱保存，待測。

1.5.3 小腸組織形態(tài)學(xué)指標

蘇木精-伊紅(HE)染色：小腸組織切片經(jīng)蘇木素染色、伊紅染色、不同濃度梯度酒精脫水和二甲苯透明處理后，中性樹膠封片。染色完成后，在光學(xué)顯微鏡鏡下觀察組織，并利用TCapture images軟件采集圖像，每張切片觀察10個視野，統(tǒng)計腸道組織絨毛高度、隱窩深度及V/C以及黏膜厚度和肌層厚度。

1.5.4 小腸組織抗氧化指標

樣品前處理：準確稱取小腸組織重量，按照重量(g)∶體積(mL)=1∶9的比例，加入9倍體積的預(yù)冷PBS(pH 7.4)，在冰水浴中充分勻漿后，1 732×g低溫離心20 min取上清，制成10%組織提取液，置于-80 ℃冰箱保存，待測。

小腸組織抗氧化指標：總抗氧化能力(T-AOC)、過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量采用試劑盒測定。

1.5.5 空腸食糜消化酶活性

樣品前處理：取出冷凍的食糜，解凍后用冷凍離心機在4 ℃條件下6 928×g離心10 min，取上清后與4 ℃ 0.4 mol/L的KCl溶液按體積比1∶4進行稀釋分裝至2 mL無酶離心管，置于-80 ℃冰箱保存，待測。

消化酶活性：α-淀粉酶、乳糖酶、脂肪酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶活性采用試劑盒測定。

以上指標測定所用試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，具體操作步驟按照產(chǎn)品說明書進行。

1.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2019進行整理和計算，用SPSS 23.0軟件中的ANOVA程序進行單因素方差分析，并采用Duncan氏法進行多重比較，數(shù)據(jù)用平均值和均值標準誤(SEM)表述，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 巖藻多糖對斷奶羔羊血清DAO活性、DLA和ET含量的影響

由表2可知，與對照組(Ⅰ組)相比，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅵ組斷奶羔羊血清DLA含量分別降低了15.43%(P=0.057)、26.60%(P=0.002)和20.94%(P=0.012)，血清DAO活性分別降低了8.21%(P=0.130)、14.28%(P=0.011)和12.95%(P=0.020)；隨著巖藻多糖添加水平的提高，各組血清ET含量呈先下降后上升的趨勢(P=0.051)。這表明飼喂巖藻多糖可降低斷奶羔羊腸道黏膜的通透性。

表2 巖藻多糖對斷奶羔羊血清DAO活性、DLA和ET含量的影響

2.2 巖藻多糖對斷奶羔羊小腸組織形態(tài)的影響

由表3可知，Ⅲ組和Ⅳ組斷奶羔羊空腸、回腸的絨毛高度顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，且與Ⅱ組差異不顯著(P>0.05)；Ⅲ組十二指腸絨毛高度較Ⅰ組顯著提高了14.36%(P=0.002)。各組之間的小腸組織隱窩深度差異不顯著(P>0.05)。Ⅲ組和Ⅳ組小腸各段V/C顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組十二指腸、空腸V/C差異不顯著(P>0.05)，Ⅲ組回腸V/C顯著高于Ⅱ組和Ⅳ組(P<0.05)；Ⅱ組和Ⅳ組回腸V/C差異不顯著(P>0.05)，且都顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。Ⅲ組小腸各段黏膜厚度均顯著高于Ⅰ組(P<0.05)；Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組小腸各段黏膜厚度差異均不顯著(P>0.05)；Ⅱ組和Ⅳ組十二指腸、Ⅳ組回腸黏膜厚度顯著高于Ⅰ組(P<0.05)；Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅳ組空腸黏膜厚度差異不顯著(P>0.05)。Ⅲ組和Ⅳ組小腸各段肌層厚度均顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，且與Ⅱ組相比差異均不顯著(P>0.05)；Ⅰ組和Ⅱ組小腸各段肌層厚度差異均不顯著(P>0.05)。

表3 巖藻多糖對斷奶羔羊小腸組織形態(tài)的影響

如圖1所示，羔羊早期斷奶后，Ⅰ組小腸絨毛排列紊亂、不整齊、粗短不均、形狀不規(guī)則、稀疏，腸絨毛出現(xiàn)脫落和黏連等現(xiàn)象。而飼喂巖藻多糖后，小腸絨毛外形纖細呈指狀，較為整齊完整，長度明顯增加；相比于Ⅲ組，Ⅱ組和Ⅳ組的空腸和回腸絨毛粗細不均、腸絨毛出現(xiàn)斷裂和黏連現(xiàn)象；而各組小腸的隱窩深而不明顯；同時，巖藻多糖添加組小腸黏膜厚度和肌層厚度明顯厚于Ⅰ組。

圖1 巖藻多糖對斷奶羔羊小腸組織形態(tài)的影響

2.3 巖藻多糖對斷奶羔羊空腸消化酶活性的影響

由表4可知，與Ⅰ組相比，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅵ組斷奶羔羊空腸α-淀粉酶活性分別提高了4.56%(P=0.493)、36.50%(P<0.001)和26.67%(P=0.001)；Ⅲ組和Ⅳ組空腸乳糖酶活性顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，分別提高了72.52%(P=0.003)和51.15%(P=0.026)，巖藻多糖添加組間(即Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組)、Ⅰ組和Ⅱ組之間空腸乳糖酶活性差異不顯著(P>0.05)。各組間空腸脂肪酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶活性差異均不顯著(P>0.05)。

表4 巖藻多糖對斷奶羔羊空腸消化酶活性的影響

2.4 巖藻多糖對斷奶羔羊小腸抗氧化指標的影響

由表5可知，代乳粉添加不同水平的巖藻多糖，不同程度提高了斷奶羔羊十二指腸、空腸和回腸的抗氧化能力。與Ⅰ組相比，Ⅲ組和Ⅳ組十二指腸、空腸T-AOC和GSH-Px活性均顯著提高(P<0.05)；Ⅱ組十二指腸的T-AOC和GSH-Px活性差異不顯著(P>0.05)。與Ⅰ組相比，Ⅲ組和Ⅳ組空腸SOD活性分別提高了30.90%(P<0.001)和22.33%(P=0.001)。隨著巖藻多糖添加水平的提高，各組間回腸T-AOC(P=0.076)、GSH-Px(P=0.070)和SOD(P=0.088)活性和十二指腸SOD活性(P=0.074)均呈現(xiàn)先升后降趨勢。與Ⅰ組相比，Ⅲ組和Ⅳ組十二指腸、空腸CAT活性均顯著提高(P<0.05)，Ⅳ組回腸CAT活性顯著提高了34.74%(P=0.007)，Ⅱ組組十二指腸、回腸CAT活性差異不顯著(P>0.05)。與Ⅰ組相比，Ⅲ組和Ⅳ組十二指腸、空腸和回腸MDA含量均顯著降低(P<0.05)，但Ⅲ組和Ⅳ組小腸各段MDA含量差異不顯著(P>0.05)；Ⅱ組十二指腸、空腸MDA含量分別顯著降低了42.03%(P=0.005)和22.20%(P<0.001)。

3 討 論

3.1 巖藻多糖對斷奶羔羊血清DAO活性、DLA和ET含量的影響

在早期斷奶過程中，羔羊腸道屏障的損傷是實施早期斷奶的最大技術(shù)障礙。斷奶過早，斷奶應(yīng)激作用強烈，對小腸組織破壞增強，其后期的恢復(fù)能力較慢，腸道通透性增加[21-22]，易導(dǎo)致羔羊腸道屏障功能紊亂等[8,23-24]，嚴重抑制羔羊生長；而斷奶過晚，則延遲了母羊發(fā)情周期和降低繁殖率，增加飼養(yǎng)成本[25]。因此，緩解斷奶應(yīng)激，提高斷奶期間羔羊小腸消化吸收功能是羔羊培育和育肥的關(guān)鍵。DAO是位于動物小腸黏膜上層絨毛中具有高度活性的細胞結(jié)構(gòu)酶，參與細胞核酸和蛋白質(zhì)的合成，調(diào)控腸黏膜細胞增殖，其活性與黏膜細胞代謝密切相關(guān)[26]。DLA和ET是腸腔內(nèi)多種微生物的代謝產(chǎn)物。由于機體缺乏降解DLA的關(guān)鍵酶，因此血清中DLA含量升高預(yù)示了腸道通透性增加，腸上皮細胞受損，導(dǎo)致大量DLA進入血液中[27]。而ET多存在于革蘭氏陰性菌細胞壁中，腸道屏障受損后，ET通過血液循環(huán)可誘發(fā)全身性炎癥反應(yīng)，因此血清中DAO活性以及DLA和ET含量均可反映機體腸道屏障的完整性和損傷程度[26-28]。巖藻多糖具有廣泛的生物學(xué)功能[13,15-17]，受其提取工藝的影響，巖藻多糖純度越高、提取的成本越高等缺點限制[29]，未能在畜禽養(yǎng)殖中大規(guī)模的推廣。本研究結(jié)果中，飼喂巖藻多糖能有效降低斷奶羔羊血清DAO活性以及DLA和ET含量，其中0.3%和0.6%巖藻多糖能顯著降低血清DAO活性和DLA含量。這與楊晉[30]、陳麗玲等[31]的研究結(jié)果一致。適量的植物多糖能降低斷奶對羔羊小腸黏膜的損傷，從而緩解斷奶應(yīng)激，但腸道通透性并未隨巖藻多糖的增加而降低。這可能與巖藻多糖的復(fù)雜結(jié)構(gòu)，不易被微生物所降解有關(guān)[14]，過量植物多糖則降低了腸道微生物的多樣性及改變了微生物群落結(jié)構(gòu)，造成機體代謝紊亂，從而影響了腸道微生物屏障[32-33]。

3.2 巖藻多糖對斷奶羔羊小腸組織形態(tài)的影響

腸道黏膜屏障能將腸道內(nèi)容物與機體內(nèi)環(huán)境分隔開、阻止致病菌進入機體，通常將其分為機械屏障、化學(xué)屏障、微生物屏障和免疫屏障。機械屏障是腸道黏膜屏障的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，是由腸上皮細胞和細胞間連接復(fù)合物構(gòu)成的完整結(jié)構(gòu)，在營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收和調(diào)節(jié)腸道通透性方面發(fā)揮重要作用。研究表明，斷奶初期對腸道組織形態(tài)的影響尤為明顯，且影響其后期生長發(fā)育與健康狀況[2-7]。本試驗中，各組斷奶羔羊小腸絨毛均出現(xiàn)黏連和粗細不均的現(xiàn)象，但相比于對照組，巖藻多糖添加組的小腸絨毛形狀較為規(guī)則整齊，腸絨毛長度、黏膜和肌層厚度明顯增大。而且，隨著巖藻多糖添加水平的提高，各組小腸絨毛高度、V/C、黏膜和肌層厚度均呈現(xiàn)先升后降趨勢，其中0.3%和0.6%巖藻多糖添加組絨毛高度、V/C、黏膜和肌層厚度均明顯增加。這與楊晉[30]、Yang等[34]、Xue等[35]的研究結(jié)果一致?？梢?，適量的巖藻多糖能有效緩解小腸組織損傷，降低腸道通透性，抵御腸道內(nèi)的致病菌侵襲和有害物質(zhì)進入血液循環(huán)，緩解斷奶應(yīng)激[13,30]。

3.3 巖藻多糖對斷奶羔羊空腸消化酶活性的影響

化學(xué)屏障，又稱黏液屏障，由腸上皮細胞和消化腺分泌的凝膠狀黏液構(gòu)成，是腸道黏膜屏障中重要組成部分。其中，消化酶既是腸道黏液的組成成分，因其大量分泌能稀釋毒素和沖洗腸腔，使?jié)撛诘臈l件性致病菌難以黏附于腸上皮表面；又是反映動物采食量的重要指標，其活性高低直接影響機體對飼糧的消化吸收程度。乳糖酶是飼糧碳水化合物消化吸收的關(guān)鍵酶；淀粉酶主要是由胰腺合成并分泌至腸液中的溶解性酶，其消化作用主要集中在十二指腸和空腸[36]；空腸內(nèi)容物的乳糖酶和淀粉酶活性最高[37-38]。本團隊前期研究結(jié)果顯示，0.3%和0.6%巖藻多糖顯著提高了羔羊開食料采食量。在本研究中，0.3%和0.6%巖藻多糖同樣促進了斷奶羔羊空腸內(nèi)容物乳糖酶和α-淀粉酶活性的提高。這與楊晉[30]、馮士彬等[39]、董金金等[40]的研究結(jié)果較為一致。這可能與巖藻多糖的組成成分和結(jié)構(gòu)有關(guān)。巖藻多糖主要由含硫酸基巖藻糖組成，并伴有少量半乳糖、甘露糖等天然雜多糖，能改善腸道內(nèi)環(huán)境，如降低pH、吸附有害物質(zhì)并加速排出體外等，降低腸道黏膜損傷和提高腸道消化酶活性，從而提高羔羊的生長性能[30,41]。

胰臟分泌的胰蛋白酶和糜蛋白酶是機體分解蛋白質(zhì)的2種重要消化酶。小腸內(nèi)容物脂肪酶主要是由胰臟分泌的胰脂肪酶，它能將母乳或代乳粉中的脂肪分解為脂肪酸和甘油供機體利用。本研究結(jié)果中，各組羔羊空腸內(nèi)容物的脂肪酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶活性無顯著差異。這與郭江鵬等[42]的研究結(jié)果較為一致。郭江鵬等[42]研究發(fā)現(xiàn)，不同斷奶日齡(即28和42日齡)羔羊在斷奶初期(即7 d內(nèi))，斷奶抑制了羔羊小腸部分消化酶活性，如十二指腸和回腸的脂肪酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶等活性；而斷奶14 d后，由于羔羊?qū)︼暭Z的逐漸適應(yīng)，小腸脂肪酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶活性恢復(fù)如初?？梢姡瑪嗄虒Ω嵫蛐∧c脂肪酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶的影響較小。這可能是因為動物飼糧更換引發(fā)暫時性應(yīng)激，但飼糧的主要營養(yǎng)成分和含量與母乳相近，機體能進行自我調(diào)節(jié)，以適應(yīng)飼糧轉(zhuǎn)變。

3.4 巖藻多糖對斷奶羔羊小腸抗氧化指標的影響

在畜禽生產(chǎn)中，腸道的氧化應(yīng)激加劇及其抗氧化能力減弱與早期斷奶造成的腸道損傷密切相關(guān)[8,43-45]。在氧化應(yīng)激狀態(tài)下，幼齡動物腸道黏膜會產(chǎn)生大量高活性分子，如氧自由基(reactiveoxygenspecies,ROS)，打破機體抗氧化系統(tǒng)的平衡，致使清除速率遠低于產(chǎn)生速率，抑制抗氧化酶活性；同時高濃度ROS也將誘導(dǎo)DNA雙鏈斷裂進而激活DNA的損傷，引起黏膜中的細胞膜脂質(zhì)過氧化，最終導(dǎo)致腸道組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的損傷及其通透性增加，破壞機體的腸道黏膜屏障，加重消化道疾病[8,43-47]。腸道抗氧化酶是化學(xué)屏障中由腸上皮細胞分泌的黏液成分，可阻止有害物質(zhì)的入侵。大量研究表明，巖藻多糖具有很強的抗氧化活性和抗炎作用，其作用機理包括：1)巖藻多糖能與腸道內(nèi)的細菌膜蛋白結(jié)合，改變、破壞細胞膜的完整性，同時抑制病毒的吸附作用，從而維持腸道黏膜屏障完整性[15,48]；2)巖藻多糖能與自由基形成所需的金屬離子發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，間接抑制ROS產(chǎn)生[49]；3)通過提高SOD、GSH-Px等抗氧化酶的活性發(fā)揮清除過量ROS作用[16-17,50]；4)巖藻多糖可改善因環(huán)磷酰胺引起的小腸黏膜炎，通過對核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)/抗氧化原件(ARE)信號通路的上調(diào)，改善小腸的細胞凋亡能力[51-52]。

本研究結(jié)果顯示，斷奶羔羊小腸抗氧化酶活性隨巖藻多糖添加水平的提高呈先升后降的趨勢，小腸MDA含量則呈先降后升的趨勢。其中，Ⅲ組和Ⅳ組羔羊十二指腸、空腸的T-AOC、CAT活性顯著高于Ⅰ組；Ⅲ組十二指腸、空腸的GSH-Px活性以及Ⅲ組和Ⅳ組空腸的SOD活性顯著高于Ⅰ組；巖藻多糖添加組小腸各腸段(Ⅱ組回腸除外)MDA含量顯著低于Ⅰ組。這表明代乳粉中添加巖藻多糖對斷奶羔羊的小腸抗氧化能力產(chǎn)生了積極作用，緩解了羔羊的斷奶應(yīng)激。同時，本試驗也發(fā)現(xiàn)，0.1%巖藻多糖對羔羊的十二指腸和回腸的抗氧化指標并未表現(xiàn)顯著作用?？赡艿脑蛴?個方面：一方面與巖藻多糖的分子質(zhì)量有關(guān)，王瑩等[53]在研究巖藻聚糖硫酸酯(巖藻多糖)及其酶解產(chǎn)物對氧化損傷小鼠血清和肝臟的抗氧化作用中發(fā)現(xiàn)，酶解后低分子質(zhì)量的巖藻聚糖硫酸酯比高分子質(zhì)量巖藻聚糖硫酸酯有更顯著的抗氧化作用；另一方面與羔羊自身小腸各腸段的長度和結(jié)構(gòu)有關(guān)，其中羔羊各腸段長度排名：空腸>十二指腸>回腸，空腸長度占其后腸道總長度的80%以上，且空腸環(huán)形皺襞發(fā)達，空腸排空速度減慢，這意味著巖藻多糖與空腸黏膜的接觸時間相對增加[54]?；趲r藻多糖的積極影響，本課題組后續(xù)將進一步對巖藻多糖對斷奶羔羊空腸免疫屏障和相關(guān)屏障基因表達量的影響進行研究。

4 結(jié) 論

① 代乳粉中添加巖藻多糖能有效降低斷奶羔羊血清DLA含量和DAO活性，提高小腸黏膜厚度、肌層厚度、絨毛高度以及V/C，并提高空腸α-淀粉酶和乳糖酶活性及小腸抗氧化能力，改善小腸腸道屏障結(jié)構(gòu)與功能，在一定程度上改善斷奶羔羊的腸道健康。

② 在本試驗條件下，代乳粉中巖藻多糖的適宜添加水平為0.3%。