共軛亞油酸對(duì)貴妃雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、血清和蛋黃生化指標(biāo)以及在蛋黃中富集量的影響

常強(qiáng)強(qiáng) 郭 彥 孫天原 劉曉霞 李亞莉 張 蒙 楊 玉 王旭貞 郝松華 趙雅麗 楊子森 張俊珍*

(1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，太谷 030801；2.山西農(nóng)康新拓科技發(fā)展有限公司，陽(yáng)曲 030100；3.山西省畜牧獸醫(yī)學(xué)校，太原 030024；4.山西省生態(tài)畜牧產(chǎn)業(yè)工作站，太原 030008)

貴妃雞作為優(yōu)質(zhì)的肉蛋兼用型禽類，具有耐粗飼、抗病力強(qiáng)等特點(diǎn)，且其生產(chǎn)的蛋具有高蛋白質(zhì)、低膽固醇等優(yōu)點(diǎn)。共軛亞油酸(conjugated linoleic acid,CLA)具有抗癌[1]、降膽固醇[2]、抗氧化[3]、改善肉品質(zhì)[4]和改善生產(chǎn)性能[5]等功能。劉雪蘭等[6]研究發(fā)現(xiàn)，CLA對(duì)海蘭白蛋雞生產(chǎn)性能無(wú)顯著影響，飼糧中添加1% CLA能使蛋殼強(qiáng)度顯著提高。李曉軒等[7]在固始雞的研究中表明，飼糧中添加CLA能顯著降低蛋黃總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量，且添加量為2%時(shí)還可以改善蛋黃色澤。孫曉軍等[8]研究表明，飼糧中添加CLA可使蛋黃中丙二醛(MDA)含量顯著降低。Chamruspollert等[9]研究發(fā)現(xiàn)，蛋黃中CLA的富集量與飼糧中CLA的添加量有關(guān)。劉雪蘭等[10]在海蘭白蛋雞飼糧中添加CLA發(fā)現(xiàn)，蛋黃中CLA的富集量隨著CLA添加量的增加而增加。鄭洲等[11]研究發(fā)現(xiàn)，CLA對(duì)家禽生產(chǎn)性能無(wú)顯著影響，但蛋黃中有CLA富集。王生輝[12]在海蘭褐蛋雞飼糧中添加CLA發(fā)現(xiàn)，CLA添加量為2%時(shí)，蛋黃中CLA的富集量達(dá)到最高，合理添加可以得到富含CLA的雞蛋。目前，人們對(duì)CLA的報(bào)道主要集中在海蘭褐、海蘭白等蛋雞中，關(guān)于CLA在貴妃雞中的應(yīng)用研究尚未報(bào)道。因此，本試驗(yàn)旨在研究飼糧中添加CLA對(duì)貴妃雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、血清和蛋黃生化指標(biāo)、抗氧化能力以及蛋黃中CLA富集量的影響，為CLA在貴妃雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)，以開發(fā)強(qiáng)化CLA的貴妃雞雞蛋。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物和材料

本試驗(yàn)所用貴妃雞由山西省養(yǎng)殖技術(shù)試驗(yàn)基地提供。CLA購(gòu)買于青島某生物有限公司，純度為80.6%，其中2種主要異構(gòu)體c9,t11-CLA和t10,c12-CLA含量分別為38.1%和39.4%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)和飼糧

試驗(yàn)選取360只63周齡、健康的貴妃雞，隨機(jī)分為5個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧+4%大豆油；CLA組分別飼喂在對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)上添加1%、2%、3%和4% CLA的飼糧，并分別以相應(yīng)的CLA添加量等量替換大豆油。試驗(yàn)預(yù)試期7 d，正試期42 d?；A(chǔ)飼糧參照《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)[13]配制，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)在山西省太原市陽(yáng)曲縣山西省養(yǎng)殖技術(shù)試驗(yàn)基地進(jìn)行，在良好的飼養(yǎng)管理?xiàng)l件下，采用3層階梯式籠養(yǎng)，每個(gè)重復(fù)3個(gè)雞籠，每籠4只雞，重復(fù)之間相隔1個(gè)空雞籠。試驗(yàn)每天07：00和15：00各喂料1次，人工光照16 h/d，每天記錄產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重、給料量和剩料量。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.4.1 生產(chǎn)性能

以重復(fù)為單位，每天記錄產(chǎn)蛋數(shù)、給料量和剩料量，計(jì)算平均蛋重、平均日采食量、產(chǎn)蛋率和料蛋比。計(jì)算公式如下：

平均蛋重=每重復(fù)總蛋重/每重復(fù)雞蛋數(shù)；產(chǎn)蛋率=100×(總產(chǎn)蛋個(gè)數(shù)/總蛋雞數(shù))；平均日采食量=(每天給料量-每天剩料量)/試驗(yàn)雞數(shù)；料蛋比=日耗料量/日產(chǎn)蛋總重。

1.4.2 蛋品質(zhì)

收集試驗(yàn)第42天的雞蛋，每個(gè)重復(fù)選取3枚蛋，用多功能蛋品質(zhì)分析測(cè)定儀(EA-01，以色列ORKA公司)測(cè)定蛋重、蛋白高度、蛋黃顏色和哈氏單位；用蛋殼強(qiáng)度儀(EFR-01，以色列ORKA公司)測(cè)定蛋殼強(qiáng)度；將蛋殼膜剝離后稱重，記錄蛋殼重量；用數(shù)顯千分尺(青島澳海源國(guó)際貿(mào)易有限公司)分別測(cè)量剝離膜的蛋殼銳端、鈍端和中間的厚度，計(jì)算三者平均值，記錄蛋殼厚度。

1.4.3 血清和蛋黃生化指標(biāo)

在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取3只雞，由翅下靜脈采血5 mL，靜置后，以3 000 r/min、離心10 min，取上清液置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆肹14]，用于測(cè)定血清生化指標(biāo)。蛋黃使用冷凍干燥機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)凍干成蛋黃凍干粉，準(zhǔn)確稱取蛋黃凍干粉，按重量(g)∶體積(mL)=1∶9的比例，加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(無(wú)水乙醇)，冰水浴條件下機(jī)械勻漿，2 500 r/min、離心10 min，取上清液用于測(cè)定蛋黃生化指標(biāo)。用酶標(biāo)儀(ELx808，美國(guó)伯騰儀器有限公司)測(cè)定總膽固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量，試劑盒均購(gòu)自于南京建成生物工程研究所，并嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作。

1.4.4 血清和蛋黃抗氧化指標(biāo)

取血清和蛋黃待測(cè)液測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、過(guò)氧化物酶(CAT)活性和總抗氧化能力(T-AOC)以及丙二醛(MDA)含量，試劑盒均購(gòu)自于南京建成生物工程研究所，并嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作。

1.4.5 蛋黃CLA富集量

首先進(jìn)行脂肪酸的提?。悍Q取0.1～0.2 g蛋黃凍干粉，加入25 mL帶蓋玻璃試管中。將8 mL氯仿-甲醇溶液和1 mL濃度為2 μg/mL內(nèi)標(biāo)溶液(C17∶0)加入到玻璃試管振蕩后靜置1～2 h后，用不含脂肪的濾紙過(guò)濾。用氯仿-甲醇溶液沖洗2次，轉(zhuǎn)移到20 mL帶蓋玻璃試管中。加入4 mL 0.04% MgCl2溶液混勻靜置，直至分層。棄上清液，加入氯仿-甲醇-0.04% MgCl2溶液混勻，分層后，棄上清液并用氮?dú)獯蹈?。再?jīng)甲酯化后用氣相色譜儀(GC-8960，山東瑞津儀器有限公司)測(cè)定蛋黃中CLA含量。蛋黃中CLA含量委托青島拜恩檢測(cè)技術(shù)服務(wù)有限公司測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel 2019記錄試驗(yàn)數(shù)據(jù)，使用SPSS 22.0進(jìn)行單因素方差分析，并采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較。以P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以“平均值(mean)±標(biāo)準(zhǔn)差(SD)”表示。

2 結(jié) 果

2.1 CLA對(duì)貴妃雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，與對(duì)照組相比，1% CLA組和4% CLA組貴妃雞平均日采食量極顯著降低(P<0.01)，4% CLA組產(chǎn)蛋率顯著降低(P<0.05)，1% CLA組、2% CLA組和3% CLA組料蛋比顯著提高(P<0.05)，飼糧添加CLA對(duì)平均蛋重?zé)o顯著影響(P>0.05)。

表2 CLA對(duì)貴妃雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 CLA對(duì)貴妃雞蛋品質(zhì)的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，飼糧添加CLA有提高貴妃雞蛋殼強(qiáng)度的趨勢(shì)(P=0.060)，4% CLA組蛋黃重量極顯著降低(P<0.01)，4%CLA組蛋黃顏色顯著低于1% CLA組(P<0.05)；飼糧添加CLA對(duì)蛋殼重量、蛋重、蛋殼厚度、蛋白高度和哈氏單位無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表3 CLA對(duì)貴妃雞蛋品質(zhì)的影響

2.3 CLA對(duì)貴妃雞血清和蛋黃生化指標(biāo)的影響

由表4可知，與對(duì)照組相比，2% CLA組、3% CLA組和4% CLA組貴妃雞血清TG含量極顯著降低(P<0.01)；各CLA組血清LDL-C含量極顯著降低(P<0.01)，且2% CLA組和4% CLA組最低；2% CLA組血清HDL-C含量極顯著提高(P<0.01)；飼糧添加CLA對(duì)血清T-CHO含量無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表4 CLA對(duì)貴妃雞血清生化指標(biāo)的影響

由表5可知，與對(duì)照組相比，各CLA組貴妃雞蛋黃T-CHO含量極顯著降低(P<0.01)，且4% CLA組最低；飼糧添加CLA對(duì)蛋黃TG含量無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表5 CLA對(duì)貴妃雞蛋黃生化指標(biāo)的影響

2.4 CLA對(duì)貴妃雞血清和蛋黃抗氧化指標(biāo)的影響

由表6可知，與對(duì)照組相比，3% CLA組和4% CLA組貴妃雞血清T-AOC極顯著降低(P<0.01)，且3% CLA組最低；1% CLA組血清SOD活性極顯著提高(P<0.01)，3% CLA組和4% CLA組血清SOD活性極顯著降低(P<0.01)；4% CLA組血清GSH-Px活性極顯著提高(P<0.01)；各CLA組血清MDA含量極顯著降低(P<0.01)；2% CLA組和3% CLA組血清CAT活性極顯著提高(P<0.01)，且2% CLA組最高。

表6 CLA對(duì)貴妃雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表7可知，與對(duì)照組相比，2% CLA組、3% CLA組和4% CLA組貴妃雞蛋黃T-AOC以及SOD和CAT活性極顯著提高(P<0.01)，且4% CLA組最高；各CLA組蛋黃GSH-Px活性極顯著升高(P<0.01)，且3% CLA組最高；各CLA組蛋黃MDA含量極顯著降低(P<0.01)，且2% CLA組最低。

表7 CLA對(duì)貴妃雞蛋黃抗氧化指標(biāo)的影響

2.5 CLA在貴妃雞蛋黃中的富集量

由表8可知，與對(duì)照組相比，2% CLA組貴妃雞蛋黃中CLA的富集量極顯著升高(P<0.01)，4% CLA組蛋黃中CLA的富集量極顯著降低(P<0.01)。

表8 CLA在貴妃雞蛋黃中的富集量

3 討 論

3.1 CLA對(duì)貴妃雞生產(chǎn)性能的影響

CLA作為一種營(yíng)養(yǎng)素由天然植物提取而來(lái)，具有抗癌、促進(jìn)脂肪氧化分解以及降血脂等作用。Shang等[15]在褐矮母雞飼糧中添加CLA發(fā)現(xiàn)，飼糧添加1% CLA可以提高平均日采食量和產(chǎn)蛋率。Chamruspollert等[9]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加5% CLA顯著降低62周齡白萊航蛋雞平均日采食量。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，1% CLA組和4% CLA組貴妃雞平均日采食量極顯著降低，4% CLA組產(chǎn)蛋率顯著降低，這與Chamruspollert等[9]研究62周齡白萊航蛋雞的結(jié)果基本一致。各組飼糧能量和蛋白質(zhì)水平相同，1% CLA組和4% CLA組平均日采食量極顯著降低，可能是因?yàn)轱暭Z中CLA的添加量影響了飼糧適口性；而4% CLA組產(chǎn)蛋率顯著降低可能與4% CLA組平均日采食量降低有關(guān)。本試驗(yàn)中，1% CLA組、2% CLA組和3% CLA組料蛋比顯著提高，且2% CLA組最高，這與胡艷等[16]的結(jié)果一致；各組平均蛋重?zé)o顯著差異，但隨著飼糧CLA添加量的增加有下降趨勢(shì)，這與劉雪蘭等[6]的研究結(jié)果相同，這可能與周齡、品種和采食量降低有關(guān)。

3.2 CLA對(duì)貴妃雞蛋品質(zhì)的影響

劉雪蘭等[6]研究發(fā)現(xiàn)，在海蘭白蛋雞飼糧中添加1% CLA能顯著提高蛋殼厚度。Shang等[15]在褐矮母雞飼糧中添加CLA發(fā)現(xiàn)，蛋黃和蛋殼重隨著飼糧CLA添加量的增加而線性下降。王生輝[12]研究表明，在海蘭褐蛋雞飼糧中添加2%和4% CLA組蛋殼強(qiáng)度高于對(duì)照組。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，4% CLA組蛋黃重量極顯著降低，這與前人研究結(jié)果一致；2% CLA組和4% CLA組蛋殼強(qiáng)度有提高趨勢(shì)，這與王生輝[12]研究結(jié)果一致；3% CLA組和4% CLA組蛋殼厚度有降低趨勢(shì)，這可能與CLA添加量有關(guān)[16]，或者與4% CLA組貴妃雞采食量降低，導(dǎo)致從飼糧中獲取鈣源減少有關(guān)。

3.3 CLA對(duì)貴妃雞血清和蛋黃生化指標(biāo)的影響

產(chǎn)蛋期蛋雞的脂質(zhì)代謝更加活躍，蛋雞脂質(zhì)代謝與機(jī)體健康和產(chǎn)蛋性能密切相關(guān)。Nicolosi等[17]在倉(cāng)鼠血清脂代謝研究中發(fā)現(xiàn)，CLA可以顯著降低倉(cāng)鼠血清T-CHO和TG含量。Yamasaki等[18]研究發(fā)現(xiàn)，CLA對(duì)小鼠肝臟和腹脂中TG含量有顯著降低作用。李曉軒等[7]研究表明，隨著固始雞飼糧中CLA添加量的增加，血清T-CHO和TG含量顯著降低。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，各CLA組貴妃雞血清T-CHO含量無(wú)顯著差異；2% CLA組、3% CLA組和4% CLA組血清TG含量均極顯著降低，這與李曉軒等[7]的研究結(jié)果一致；2% CLA組血清HDL-C含量極顯著提高，各CLA組血清LDL-C含量極顯著降低，這與齊曉龍[3]的研究結(jié)果相同；血清T-CHO含量變化結(jié)果與前人研究結(jié)果不同，可能與CLA添加量以及試驗(yàn)動(dòng)物品種和日齡有關(guān)。

王生輝[12]研究發(fā)現(xiàn)，2%和4% CLA能顯著降低海蘭褐蛋黃T-CHO含量。Yin等[19]研究表明，2.5% CLA對(duì)矮小型褐殼蛋雞蛋黃T-CHO含量呈顯著降低趨勢(shì)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，各CLA組蛋黃T-CHO含量極顯著降低，蛋黃TG含量無(wú)顯著差異，這與前人研究結(jié)果一致。飼糧中添加CLA降低了蛋黃T-CHO含量可能是CLA抑制了卵母細(xì)胞卵黃生成受體(OVA)的基因表達(dá)，減少了極低密度脂蛋白(VLDL)的沉積量，降低了OVA的生成，進(jìn)而降低蛋黃中膽固醇含量[20]。

3.4 CLA對(duì)貴妃雞血清和蛋黃抗氧化指標(biāo)的影響

產(chǎn)蛋雞的脂質(zhì)代謝異常旺盛會(huì)引起脂質(zhì)過(guò)氧化，對(duì)機(jī)體造成破壞，進(jìn)而引發(fā)各種疾病。齊曉龍[3]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加CLA顯著提高海蘭褐蛋雞血清SOD和GSH-Px活性，顯著降低血清MDA含量。吳國(guó)玲[21]研究表明，在褐殼蛋雞飼糧中添加2% CLA顯著提高血清T-AOC和GSH-Px活性；隨著CLA添加量的增加，血清SOD活性呈先上升后下降趨勢(shì)；飼糧添加2% CLA顯著降低血清MDA含量。本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著CLA添加量的增加，貴妃雞血清T-AOC和SOD活性呈先上升后下降趨勢(shì)，在添加量為1%時(shí)最高；與對(duì)照組相比，4% CLA組血清GSH-Px活性極顯著升高，血清MDA含量極顯著降低；2% CLA組和3% CLA組血清CAT活性極顯著升高。上述結(jié)果與前人研究結(jié)果基本一致，表明CLA能夠提高貴妃雞機(jī)體抗氧化能力，但血清中抗氧化酶活性并不是隨著添加量的增加而無(wú)限升高，這可能與機(jī)體免疫機(jī)能有關(guān)[21]。

孫曉軍等[8]研究表明，在海蘭白蛋雞飼糧中添加CLA(0.5%～2.0%)可使蛋黃中SOD活性線性提高；2.0% CLA顯著降低蛋黃MDA含量，顯著提高蛋黃GSH-Px活性。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，2% CLA組、3% CLA組和4% CLA組貴妃雞蛋黃T-AOC以及SOD和CAT活性極顯著提高；各CLA組蛋黃GSH-Px活性極顯著升高，蛋黃MDA含量極顯著降低。這與前人研究結(jié)果具有相似性，表明CLA可增強(qiáng)機(jī)體清除自由基的能力，而是否具有直接清除自由基作用，以及其提高抗氧化酶活性的量效關(guān)系、作用機(jī)理和有效活性成分等還有待于進(jìn)一步研究[8]。

3.5 CLA在貴妃雞蛋黃中的富集量

CLA既是人和動(dòng)物不可缺少的脂肪酸之一，又是人和動(dòng)物無(wú)法合成的一種物質(zhì)，必須從食物中攝取，這使得有關(guān)增加CLA在食物中含量的研究日益引起人們的關(guān)注。Chamruspollert等[9]研究發(fā)現(xiàn)，蛋黃中CLA的富集量隨著基礎(chǔ)飼糧中CLA添加量的增加而增加，當(dāng)飼糧中添加5% CLA時(shí)，蛋黃中可富集340 mg/kg左右CLA。劉雪蘭等[10]在海蘭白蛋雞飼糧中添加CLA表明，飼糧CLA添加量在1%～6%時(shí)，蛋黃中CLA的富集量在10 d左右達(dá)到最高，可富集692 mg/kg CLA。尚秀國(guó)[22]研究發(fā)現(xiàn)，矮小型褐殼蛋雞飼糧中添加5% CLA，蛋黃中可富集630 mg/kg左右CLA。Sch?fer等[24]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加2% CLA，蛋黃中可富集400 mg/kg左右CLA。大量研究表明，飼糧中CLA添加量越高，蛋黃中CLA的富集量就越高，但不會(huì)持續(xù)增高。本試驗(yàn)中，隨著飼糧CLA添加量的增加，蛋黃中CLA的富集量呈先升高后降低趨勢(shì)，在添加量為2%時(shí)達(dá)到最高，在蛋黃中的富集量在1 439 mg/kg左右，這與前人研究海蘭白和矮小型褐殼蛋雞蛋黃中CLA的富集量相差甚大。由此可推測(cè)，貴妃雞可能更易富集CLA，添加量過(guò)高時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)富集量降低現(xiàn)象。

4 結(jié) 論

① 飼糧中CLA添加量過(guò)高(3%和4%)時(shí)會(huì)影響貴妃雞的生產(chǎn)性能，飼糧添加2% CLA可提高蛋殼強(qiáng)度，降低血清和蛋黃中膽固醇含量，提高抗氧化能力，且在蛋黃中CLA的富集量最高。

② 在不影響生產(chǎn)性能的前提下，飼糧中添加2% CLA能更好地在蛋黃中富集CLA，以生產(chǎn)CLA強(qiáng)化雞蛋。