雞壞死性腸炎的致病機(jī)理及益生菌干預(yù)

童狄清 鐘 晨 高春起

(華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，廣東省動物營養(yǎng)調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510642)

雞壞死性腸炎(necrotic enteritis)是家禽常見的腸道疾病，每年給全球家禽業(yè)帶來約60億美元的經(jīng)濟(jì)損失[1]。雖然急性雞壞死性腸炎死亡率高達(dá)50%，生產(chǎn)中更多的是以亞臨床雞壞死性腸炎(subclinical necrotic enteritis，SNE)的形式存在，其嚴(yán)重影響家禽的生長性能和飼料轉(zhuǎn)化效率。飼糧添加抗生素是防治雞壞死性腸炎的有效措施，但隨著我國全面禁止抗生素作為促生長類飼料添加劑的使用，雞壞死性腸炎的防治面臨巨大挑戰(zhàn)。2001年，益生菌被定義為“通過攝取適當(dāng)?shù)牧繒r(shí)對宿主身體健康能發(fā)揮有效作用的活菌”[2]。益生菌及其代謝產(chǎn)物尤其是短鏈脂肪酸(short-chain fatty acids，SCFAs)、次級膽汁酸(secondary bile acids，SBA)和色氨酸(Trp)等，具有維持腸道上皮物理屏障、穩(wěn)定腸道微生物區(qū)系、調(diào)節(jié)宿主免疫功能、促進(jìn)胃腸蠕動和抑制有害菌在腸上皮黏附侵襲等功能[3]。本文主要綜述了雞壞死性腸炎致病的重要毒力因子及益生菌對其干預(yù)方面的最新研究進(jìn)展，為通過益生菌防治雞壞死性腸炎提供參考。

1 雞壞死性腸炎及其致病機(jī)理

1.1 雞壞死性腸炎的誘發(fā)因素及癥狀

雞壞死性腸炎主要是由產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridiumperfringens)感染引起的腸道組織壞死性疾病。單一的產(chǎn)氣莢膜梭菌感染并非是導(dǎo)致壞死性腸炎的必然結(jié)果，還需其他誘發(fā)因素的共同作用，如高密度飼養(yǎng)帶來的應(yīng)激、含魚粉的高蛋白質(zhì)飲食等，均會導(dǎo)致雞壞死性腸炎[4]。產(chǎn)氣莢膜梭菌定植的主要場所為小腸部位[5]。雞壞死性腸炎病變主要表現(xiàn)為：1)組織層面。小腸大部分融合性黏膜壞死，腸內(nèi)覆蓋有黃褐色或膽汁染色的假膜，典型的特征有黏膜表面凹陷潰瘍，壞死組織和活組織間界限清晰[5-6]。2)細(xì)胞水平。腸道血管內(nèi)皮細(xì)胞成孔死亡，壞死處嗜異性粒細(xì)胞聚集，大量的免疫細(xì)胞浸潤到固有層[7]。3)分子水平。胞間緊密連接分子被破壞[8]，胞內(nèi)促炎因子表達(dá)水平顯著提高，并誘導(dǎo)壞死因子的高表達(dá)[9]。

1.2 雞壞死性腸炎的致病機(jī)理

1.2.1 分泌毒素

產(chǎn)氣莢膜梭菌是革蘭氏陽性、厭氧菌，且革蘭氏陽性菌的細(xì)胞壁主要成分為肽聚糖(peptidoglycan)。肽聚糖可作為病原相關(guān)分子模式(pathogen-associated molecular patterns，PAMPs)被腸上皮細(xì)胞模式識別受體(pattern recognition receptors)，包括核苷酸寡聚化結(jié)構(gòu)域(nucleotide-binding oligomerization domain，NOD)樣受體或Toll樣受體(Toll-like receptors，TLRs)所識別，進(jìn)而激活核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear factor-kappa B，NF-κB)信號通路所介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)[10-11]。產(chǎn)氣莢膜梭菌可分泌20多種毒素[6]，引起疾病相關(guān)的毒素主要包括α(CPA，編碼基因plc或cpa)、β(CPB)、ε(編碼基因etx)、ι(編碼基因iap和ibp)、CPE(編碼基因cpe)和NetB(編碼基因netB)毒素[12]。根據(jù)毒素的類型，產(chǎn)氣莢膜梭菌被分為A～G型[13]。編碼α毒素的plc基因存在于細(xì)菌染色體的穩(wěn)定區(qū)域，可在所有產(chǎn)氣莢膜梭菌菌株中表達(dá)[12]；β毒素會引起腸毒血癥并可在細(xì)胞膜上成孔。最新研究發(fā)現(xiàn)，CD31是內(nèi)皮細(xì)胞上特異性結(jié)合CPB的膜受體，膜外近端的的結(jié)構(gòu)域免疫球蛋白6(Ig6)足以引起結(jié)合β毒素后產(chǎn)生的細(xì)胞損傷[14]，這可能是β毒素引起雞腸道黏膜出血的重要原因。由F型產(chǎn)氣莢膜梭菌分離出的CPE(與CPB毒素結(jié)構(gòu)類似)，是分子量為35 kDa的多肽單體，其C末端結(jié)構(gòu)域(cCPE)結(jié)合集序和閉合蛋白(claudins，CLDNs)家族結(jié)合形成寡聚體，并將CLDNs分解，而且CLDNs中NPLVA153基序(該基序穿透cCPE-β鏈之間的凹槽)的第3位亮氨酸能顯著提高其結(jié)合親和力[8,15]。NetB毒素是由G型產(chǎn)氣莢膜梭菌分泌的一種成孔毒素(與β毒素功能類似)，鳥類紅細(xì)胞對其具有高度敏感性[16]，能夠在敏感細(xì)胞膜上形成內(nèi)徑為26 ?的七聚體孔[17]，并且該孔對陽離子有強(qiáng)烈的偏好性。另外，對腸道基底膜(basement membranes)的破壞涉及到產(chǎn)氣莢膜梭菌分泌的一種微生物膠原酶(由colA基因編碼)，該酶能夠分解膠原蛋白質(zhì)破壞基底膜的完整性并加重腸上皮組織的壞死[6]。

1.2.2 黏附定植

細(xì)菌的黏附定植與其自身的菌毛或鞭毛結(jié)構(gòu)以及分泌的黏附素密切相關(guān)，能防止物理性的移位，這也是絕大多數(shù)細(xì)菌致病前提。產(chǎn)氣莢膜梭菌與許多革蘭氏陽性菌不同，其缺乏運(yùn)動型鞭毛但具有與獨(dú)立鞭毛不同的Ⅳ型菌毛(T4P)的滑行功能，且Ⅳ型菌毛系統(tǒng)有多種生物功能，如細(xì)菌生物膜的形成和黏附[18]，這可能是其具有黏附定植能力的主要原因。產(chǎn)氣莢膜梭菌中高度保守的VR-10B基因座編碼7個(gè)基因，大部分被預(yù)測為黏附菌毛樣蛋白[19]，其中黏附素編碼基因cnaA缺失突變體無法誘導(dǎo)肉雞壞死性腸炎的發(fā)生，且對Ⅳ型膠原蛋白的黏附及破壞能力顯著下降[20]，這表明cnaA基因是決定產(chǎn)氣莢膜梭菌黏附定植的關(guān)鍵基因；Ⅳ型膠原蛋白是腸基底膜的主要成分，基底膜在組織結(jié)構(gòu)和功能維護(hù)中發(fā)揮重要作用[21]。研究表明，強(qiáng)毒性產(chǎn)氣莢膜梭菌菌株失去編碼帶有netB的NELoc-1基因座，其毒力顯著下降，單獨(dú)引入netB基因后對體外細(xì)胞的毒性可恢復(fù)至野生型，但攻擊雞后卻沒有完全恢復(fù)毒力作用，因?yàn)镹ELoc-1上仍然編碼著預(yù)測的毒力因子，比如黏附素[22]。這些研究提示，產(chǎn)氣莢膜梭菌需要在宿主上黏附定植后才具有完整的毒力作用，可能潛在介導(dǎo)產(chǎn)氣莢膜梭菌黏附定植后刺激宿主并造成損傷的途徑，但具體機(jī)制有待解析。

1.2.3 群體感應(yīng)(quorum sensing，QS)系統(tǒng)

QS系統(tǒng)是細(xì)菌之間通過信號肽(signaling peptide)分子來實(shí)現(xiàn)交流的重要方式，不同細(xì)菌種間和種內(nèi)能夠通過QS系統(tǒng)調(diào)節(jié)彼此的生長及基因表達(dá)[23]。近年來的研究表明，輔助基因調(diào)節(jié)(accessory gene regulator，AGR)系統(tǒng)是產(chǎn)氣莢膜梭菌最主要的QS調(diào)節(jié)系統(tǒng)，對其毒素分泌和調(diào)節(jié)發(fā)揮關(guān)鍵作用[24-25]，這也可能是益生菌通過QS系統(tǒng)抑制產(chǎn)氣莢膜梭菌分泌毒素的重要途徑之一。AGR系統(tǒng)是QS系統(tǒng)的一種，由4個(gè)共轉(zhuǎn)錄基因(agrA、agrB、agrC和agrD)組成，agrD編碼的自誘導(dǎo)肽(autoinducing peptide)前體被agrB轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白加工成活性自誘導(dǎo)肽后分泌到環(huán)境中，然后被VirS/VirR(VirS/R)雙組分調(diào)節(jié)系統(tǒng)(two-component regulatory systems，TCRS)識別并且調(diào)節(jié)毒素[α、β、NetB和PFO(θ)等]的基因表達(dá)[26-27]。最新研究證實(shí)，VirS膜受體蛋白主要是細(xì)胞外環(huán)與信號肽進(jìn)行識別結(jié)合[28]。值得一提的是，屬于QS系統(tǒng)的2型自誘導(dǎo)信號分子(autoinducer-2)在革蘭氏陽性菌及革蘭氏陰性菌均有表達(dá)[23,29]，2型自誘導(dǎo)信號分子是否能夠被AGR系統(tǒng)識別尚不清楚，也可能是益生菌抑制產(chǎn)氣莢膜梭菌分泌毒素或降解酶表達(dá)的潛在生物因子。

1.2.4 誘導(dǎo)腸上皮細(xì)胞壞死性凋亡

腸上皮細(xì)胞壞死是雞壞死性腸炎標(biāo)志特征，且上皮細(xì)胞程序性壞死與受體互相作用蛋白激酶1/3(receptor interacting protein kinase 1/3，RIPK1/3)結(jié)合形成的壞死復(fù)合體有關(guān)。Shrestha等[9]研究表明，特異性RIPK1/3抑制劑能夠減少CPE毒素誘導(dǎo)的混合譜系激酶結(jié)構(gòu)域樣假激酶(MLKL)的寡聚化和Caco-2細(xì)胞凋亡，說明RIPK1、RIPK3和MLKL是促進(jìn)CPE誘導(dǎo)細(xì)胞壞死性凋亡的重要信號分子。然而，CPE誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡途徑在不同類型細(xì)胞間存在差異。另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，Parkin蛋白質(zhì)(由PARK2基因編碼的一種蛋白質(zhì))通過抑制RIPK3的磷酸化和RIPK1/3復(fù)合體的形成來負(fù)調(diào)控細(xì)胞壞死性凋亡而非自噬，且Parkin蛋白質(zhì)的E3泛素連接酶活性是抑制細(xì)胞壞死所必要的，這種調(diào)節(jié)可能是誘導(dǎo)腸上皮組織壞死和炎癥的重要機(jī)制[30]。

2 益生菌對壞死性腸炎的干預(yù)效果及機(jī)理

2.1 維持腸道結(jié)構(gòu)和功能完整性

腸絨毛高度/隱窩深度(V/C)值是衡量腸道消化吸收功能的重要指標(biāo)。Shanmugasundaram等[31]研究指出，通過給感染壞死性腸炎的雞口服復(fù)合益生菌(羅伊乳酸桿菌、糞腸球菌、動物雙歧桿菌和乳酸片球菌)的共培養(yǎng)上清液，逆轉(zhuǎn)了V/C值的降低，改善了腸道結(jié)構(gòu)的完整性。這可能與復(fù)合益生菌中的乳酸菌能夠產(chǎn)酸有關(guān)，因?yàn)楫?dāng)pH低于5.1時(shí)，對酸度敏感的產(chǎn)氣莢膜梭菌增殖能力大幅下降[32]。腸道上皮細(xì)胞間的緊密連接(tight junction)是腸道機(jī)械屏障主要的物理防御，其中閉鎖蛋白(occludin，OCLN)和CLDNs是緊密連接的2類關(guān)鍵蛋白，能夠維持腸上皮結(jié)構(gòu)的完整性，防止外界有害因子跨過腸道屏障進(jìn)入黏膜層甚至基底膜，進(jìn)而對腸道組織造成嚴(yán)重?fù)p傷[33]。脂多糖(LPS)處理人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(hCMEC/D3)后OCLN的表達(dá)顯著下調(diào)，p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinases，p38 MAPK)的磷酸化顯著增加[34]，這可能是機(jī)體對屏障損傷的代償機(jī)制。微生物的代謝產(chǎn)物SCFAs具有提高組織緊密連接蛋白表達(dá)、維持腸道甚至大腦屏障的功能[35-36]。Gharib-Naseri等[37]研究表明，雞患壞死性腸炎時(shí)補(bǔ)充解淀粉芽孢桿菌CECT 5940可顯著上調(diào)CLDN-2和OCLN蛋白的表達(dá)，丁酸梭菌可通過劑量依賴方式上調(diào)宿主腸道CLDN-1和CLDN-2的mRNA豐度[38]，可能是其代謝產(chǎn)物丁酸鹽通過促進(jìn)腸道緊密連接蛋白的表達(dá)所致(圖1)[27,38-39]。

2.2 提高腸道抗氧化能力

腸黏膜的抗氧化能力對腸道健康至關(guān)重要，而抗氧化能力的降低是壞死性腸炎對宿主腸道損傷、降低生產(chǎn)性能的重要途徑。Zhao等[40]研究表明，飼糧添加地衣芽孢桿菌H2可顯著提高患壞死性腸炎雞回腸的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性和總抗氧化能力(T-AOC)，表明地衣芽孢桿菌H2能夠有效增強(qiáng)腸道組織的抗氧化能力，緩解壞死性腸炎引起的腸道氧化損傷。Wang等[39]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加約氏乳桿菌BS15可顯著提高壞死性腸炎雞小腸過氧化氫酶(CAT)、SOD和GSH-Px的活性以及降低丙二醛(MDA)的含量，提高抗氧化能力。Eeckhaut等[41]研究表明，飼糧添加一種可以高效產(chǎn)生丁酸鹽的益生菌，可有效降低因壞死性腸炎導(dǎo)致的死亡雞的數(shù)量。上述結(jié)果表明，益生菌能夠提高感染壞死性腸炎動物腸道的抗氧化能力，減少腸道氧化損傷程度，降低動物的死亡率。

2.3 改善腸道微生物區(qū)系平衡

腸道菌群的失衡易導(dǎo)致疾病的發(fā)生，感染壞死性腸炎的腸道中有益菌及菌群結(jié)構(gòu)的豐度均受到不同程度的改變。感染壞死性腸炎后保守的腸道菌群改變表現(xiàn)為：梭菌科的減少和乳桿菌科及其他種類的相對增加，菌群結(jié)構(gòu)變化或許可作為評價(jià)雞壞死性腸炎的重要指標(biāo)之一。研究顯示，梭菌科如未分類的梭狀芽胞桿菌科、念珠菌節(jié)桿菌、未分類的SMB53和未分類的消化鏈球菌和鏈球菌豐度均顯著降低，這些都是產(chǎn)氣莢膜梭菌感染前腸道中高度豐富的原生菌群，且原生的梭狀芽孢桿菌由感染前胃腸道占比的40%下降到10%[42]，土著細(xì)菌豐度的降低表明產(chǎn)氣莢膜梭菌在宿主腸道中奪取生態(tài)位以及營養(yǎng)物所致的競爭性抑制。產(chǎn)氣莢膜梭菌會抑制有益菌的增殖，患有壞死性腸炎雞的盲腸中魏氏乳酸菌和布氏瘤胃球菌的數(shù)量均顯著下降[43]。魏氏乳酸菌VP30是一種高產(chǎn)胞外多糖(EPS)的有益菌[44]，EPS是益生菌產(chǎn)生的功能(抗炎、抗氧化和抗腫瘤)物質(zhì)；布氏瘤胃球菌是高效的抗性淀粉降解菌[45]，同樣是人腸結(jié)腸中關(guān)鍵的抗性淀粉的關(guān)鍵物種[46]，而抗性淀粉和纖維有利于腸道重要的微生物代謝產(chǎn)物SCFAs的產(chǎn)生，因此補(bǔ)充具有分泌EPS或強(qiáng)分解抗性淀粉功能的益生菌可能有助于預(yù)防或緩解壞死性腸炎對腸道微生物區(qū)系平衡的破壞。

益生菌的補(bǔ)充能抑制宿主腸道中產(chǎn)氣莢膜梭菌的增殖，促進(jìn)有益菌的繁殖，進(jìn)而改善腸道微生物區(qū)系。感染壞死性腸炎后添加丁酸梭菌，能夠增加泰國外絲菌、臨時(shí)未分類外絲菌和乳酸片球菌等有益菌的豐度[38]。植物乳桿菌和多黏類芽孢桿菌能夠恢復(fù)壞死性腸炎導(dǎo)致的腸道菌群失調(diào)，增加枯草桿菌、乳球菌、假黃桿菌和口腔桿菌等有益菌的豐度[47]。給患有壞死性腸炎雞飼糧補(bǔ)充凝結(jié)芽孢桿菌，其盲腸內(nèi)容物中大腸桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量顯著下降，乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量顯著上升，說明凝結(jié)芽孢桿菌有利于增強(qiáng)有益菌的生態(tài)位，維持腸道菌群穩(wěn)態(tài)[48]。上述研究表明，腸道穩(wěn)態(tài)可保證宿主機(jī)體營養(yǎng)物質(zhì)的穩(wěn)定供應(yīng)，壞死性腸炎會破壞腸道穩(wěn)態(tài)并導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)吸收失衡，而益生菌的外源補(bǔ)充能修復(fù)腸道穩(wěn)態(tài)，增強(qiáng)腸道對壞死性腸炎的抵抗能力。

2.4 增強(qiáng)宿主腸道免疫功能

雞壞死性腸炎導(dǎo)致宿主腸道炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，益生菌可通過抑制促炎因子、促進(jìn)抗炎因子的表達(dá)水平，進(jìn)而提高腸道免疫功能，緩解壞死性腸炎誘導(dǎo)的腸道損傷。白細(xì)胞介素-17(IL-17)是一種由輔助性T淋巴細(xì)胞17(Th17)分泌產(chǎn)生的促炎因子，p38 MAPK介導(dǎo)Th17細(xì)胞在誘導(dǎo)組織炎癥中具有特異性調(diào)控作用[49]。Gong等[50]研究表明，枯草芽孢桿菌可下調(diào)腸道IL-17的表達(dá)，緩解因葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)的小鼠炎癥性腸炎。相反，白細(xì)胞介素-10(IL-10)是一種重要的抗炎因子，幾乎由所有的白細(xì)胞亞群產(chǎn)生，包括樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、自然殺傷(NK)細(xì)胞、T和B淋巴細(xì)胞等[51]，其通過激活JAK激酶和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白(STAT)轉(zhuǎn)錄因子途徑發(fā)揮作用，且STAT3是該通路不可或缺的信號分子[52]。發(fā)生炎癥反應(yīng)時(shí)，IL-10對Th17細(xì)胞的抑制作用是必要的[53]，且細(xì)菌及代謝產(chǎn)物可激活TLRs及其下游信號通路調(diào)節(jié)IL-10基因表達(dá)[54]。Li等[55]研究表明，嗜酸乳桿菌的補(bǔ)充上調(diào)了IL-10的mRNA的表達(dá)和抑制壞死性腸炎誘導(dǎo)的干擾素-γ(IFN-γ)大量產(chǎn)生。微生物可通過其代謝產(chǎn)物調(diào)控腸道免疫功能，如微生物代謝產(chǎn)物SCFAs能調(diào)節(jié)細(xì)胞促炎因子和抗炎因子的表達(dá)。Huang等[38]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加丁酸梭菌可顯著上調(diào)IL-10和抑制IL-17A(IL-17家族的一員)的表達(dá)，這可能與其代謝產(chǎn)物丁酸鹽通過介導(dǎo)p38 MAPK的磷酸化進(jìn)而促進(jìn)產(chǎn)IL-10的B10細(xì)胞生成有關(guān)[56]。在結(jié)腸炎和多發(fā)性硬化癥的小鼠模型中，戊酸鹽可通過誘導(dǎo)效應(yīng)T和B淋巴細(xì)胞上調(diào)IL-10的分泌，并抑制組蛋白乙?；富钚訹57]；脫氧膽酸(DCA)以劑量依賴方式緩解壞死性腸炎誘導(dǎo)的腸道炎癥和體重?fù)p失[7]。以上研究說明，益生菌及其代謝產(chǎn)物通過TRLs和p38 MAPK介導(dǎo)激活下游信號通路調(diào)節(jié)IL-10和IL-17表達(dá)，緩解炎癥反應(yīng)，增強(qiáng)宿主自身免疫功能，改善產(chǎn)氣莢膜梭菌誘導(dǎo)的腸道炎癥損傷。

重組益生菌能夠作為表達(dá)無毒抗原的載體，激活機(jī)體特異性免疫。Alimolaei等[58]研究發(fā)現(xiàn)，通過將產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素的C末端結(jié)構(gòu)域(cpa247-370)整合到干酪乳桿菌ATCC 393獲得的重組LC-α菌株可作為口服疫苗，有效刺激宿主腸道特異性免疫機(jī)能，并產(chǎn)生高水平的分泌型免疫球蛋白A(sIgA)，注射致死劑量的α毒素后，添加重組LC-α治療組小鼠對α毒素的抗性顯著增強(qiáng)。益生菌對產(chǎn)氣莢膜梭菌損傷動物腸道健康的緩解效應(yīng)見表1。

表1 益生菌對產(chǎn)氣莢膜梭菌損傷動物腸道健康的緩解效應(yīng)

2.5 抑制腸上皮細(xì)胞凋亡

產(chǎn)氣莢膜梭菌可通過誘導(dǎo)腸上皮細(xì)胞凋亡，破壞宿主腸道機(jī)能；益生菌可緩解宿主炎癥反應(yīng)，抑制細(xì)胞凋亡。促凋亡蛋白B細(xì)胞淋巴瘤蛋白2相關(guān)X蛋白(Bax)和抗凋亡蛋白B細(xì)胞淋巴瘤蛋白2(Bcl-2)的平衡被破壞后，線粒體膜的通透性增加，導(dǎo)致線粒體膜的細(xì)胞色素C(cytochrome C)釋放到胞質(zhì)中，激活半胱天冬酶-3(Caspase-3)介導(dǎo)的凋亡途徑引起細(xì)胞凋亡[59]。研究表明，患有壞死性腸炎雞的腸組織中Bax/Bcl-2表達(dá)比值顯著提高，說明壞死性腸炎可能誘導(dǎo)線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程，而添加約氏乳桿菌BS15能夠抑制細(xì)胞凋亡程度[39]。解淀粉芽孢桿菌CECT 5940能夠抑制雞壞死性腸炎導(dǎo)致Caspase-3和Caspase-8表達(dá)上調(diào)，從而抑制細(xì)胞凋亡[37]。另外，p53是一種多功能蛋白，能夠通過促進(jìn)凋亡前基因(如Bax)的表達(dá)來誘導(dǎo)凋亡，抑制抗凋亡基因[如存活素(survivin)]表達(dá)，從而激活半胱天冬酶依賴性途徑，最終觸發(fā)凋亡[60]。復(fù)合益生菌能夠抑制壞死性腸炎模型p53信號通路介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[47]。因此，益生菌能抑制雞壞死性腸炎腸細(xì)胞線粒體介導(dǎo)的凋亡途徑，與其參與調(diào)控p53、Bax和Bcl-2的基因表達(dá)有關(guān)。

3 小 結(jié)

產(chǎn)氣莢膜梭菌可通過自身或其分泌的毒素破壞雞腸道物理屏障、化學(xué)屏障和微生物屏障，導(dǎo)致雞壞死性腸炎的發(fā)生。而益生菌可改善壞死性腸炎引起的腸道損傷，恢復(fù)腸道微生物區(qū)系平衡，提高腸道免疫功能等。但是雞壞死性腸炎的致病機(jī)理和益生菌對其的干預(yù)機(jī)制仍待進(jìn)一步闡明，如產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素激活RIPK1/3介導(dǎo)的細(xì)胞壞死的確切機(jī)制尚不完全清楚；益生菌緩解產(chǎn)氣莢膜梭菌誘導(dǎo)細(xì)胞損傷和凋亡的分子機(jī)制是什么；益生菌是否可通過QS系統(tǒng)抑制產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素的分泌，這些問題的解決可為雞甚至人壞死性腸炎的防治提供理論參考。另外，靶向緩解產(chǎn)氣莢膜梭菌誘導(dǎo)產(chǎn)生壞死性腸炎的功能益生菌的篩選需要制定統(tǒng)一評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)而為綠色新型飼料添加劑的開發(fā)提供有效的營養(yǎng)干預(yù)策略。