秦嶺細(xì)鱗鮭人工馴養(yǎng)繁殖及受精卵孵化技術(shù)

張國(guó)維，秦 勇，高祥云，王劍周，張崇信

（1.甘肅省漁業(yè)技術(shù)推廣總站，甘肅 蘭州 730030；2.天水市漁業(yè)技術(shù)推廣站，甘肅 天水 741000；3.張家川馬鹿秦嶺細(xì)鱗鮭馴養(yǎng)繁殖場(chǎng)，甘肅 天水 741020）

秦嶺細(xì)鱗鮭（Brachymystax lenoktsinlingensis）屬魚(yú)綱、鮭形目、鮭科、細(xì)鱗鮭屬，是我國(guó)秦嶺西端所特有的魚(yú)類(lèi)物種，列入我國(guó)國(guó)家Ⅱ級(jí)保護(hù)野生動(dòng)物。近幾十年以來(lái)秦嶺細(xì)鱗鮭資源量急劇減少，目前其野生種群僅分布于甘肅省渭河上游及其支流流域和陜西省漢水北側(cè)支流湑水河、子午河的上游溪流中[1-3]。秦嶺細(xì)鱗鮭是冷水性魚(yú)類(lèi)，生活在海拔900～2 300 m的山澗河流深潭中，最適生長(zhǎng)水溫13～16 ℃，生存水溫范圍為1～19 ℃[4-5]。本文總結(jié)研究了秦嶺細(xì)鱗鮭親魚(yú)人工馴養(yǎng)繁殖和受精卵孵化的關(guān)鍵技術(shù)，以期為秦嶺細(xì)鱗鮭相關(guān)研究提供參考。

1 秦嶺細(xì)鱗鮭的人工馴養(yǎng)

1.1 人工馴養(yǎng)環(huán)境的構(gòu)建

模擬秦嶺細(xì)鱗鮭自然生存環(huán)境，修建人工仿生態(tài)水泥流水馴養(yǎng)池。單個(gè)水泥池長(zhǎng)10～20 m、寬2～3 m、高1.2～1.5 m，水位保持在0.8～1.2 m，并排并聯(lián)建造多組，池壁光滑整潔，池體末端搭建遮陽(yáng)網(wǎng)，外部搭建立體防護(hù)網(wǎng)以防飛禽捕食親魚(yú)和幼魚(yú)。水源為地下泉水或山溪河流的冷流水，水質(zhì)優(yōu)良無(wú)污染，水質(zhì)符合GB 11607-1989《漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)》要求，水溫范圍4～18 ℃，溶解氧含量7.0～10.0 mg/L，pH值7.0～7.8。山區(qū)的流水池塘應(yīng)設(shè)置防洪防泥石流設(shè)施，構(gòu)建沉淀池和應(yīng)急水源，避免雨季持續(xù)性的山洪影響。

1.2 人工馴食方法

野生秦嶺細(xì)鱗鮭屬肉食性魚(yú)類(lèi)，主要攝食水生昆蟲(chóng)（牛虻、蜉蝣、飛蟻以及蜻蜓等）的幼蟲(chóng)和成蟲(chóng)、蝦類(lèi)、林蛙及小型魚(yú)類(lèi)等鮮活動(dòng)物餌料[6]。在人工馴養(yǎng)的生長(zhǎng)條件下，可采用人工馴食方法，使其轉(zhuǎn)變食性逐步適應(yīng)并完全攝食人工配合顆粒飼料，克服在自然生長(zhǎng)狀態(tài)下喜食鮮活動(dòng)物餌料的習(xí)慣。馴食前期，可使用黃粉蟲(chóng)活蟲(chóng)，按魚(yú)體重2%的日投餌量每天投喂2次（早、晚），持續(xù)20～30 d；馴食中期，用水浸泡處理10 min殺死的黃粉蟲(chóng)和人工配合顆粒飼料按1∶1的重量比混合投喂，以增強(qiáng)飼料的誘食性，日投餌量為魚(yú)體重的2%～3%，每天投喂2次（早、晚），持續(xù)30～60 d；馴食后期，完全使用人工配合顆粒飼料投喂，日投餌量為魚(yú)體重的2%～3%，每天投喂3次（早、中、晚），完成從天然活餌到人工飼料的食性轉(zhuǎn)變，之后可長(zhǎng)期使用飼料飼養(yǎng)。

1.3 馴養(yǎng)技術(shù)和日常管理

人工餌料以黃粉蟲(chóng)和顆粒飼料為主，并輔助黑光燈誘蟲(chóng)補(bǔ)充外源性餌料。采用“四定”原則（定位、定時(shí)、定量、定質(zhì)）投喂優(yōu)質(zhì)餌料。日投餌量根據(jù)秦嶺細(xì)鱗鮭攝食實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整，具體以投餌后10 min內(nèi)吃完、池底無(wú)殘餌為宜。定期巡塘，監(jiān)測(cè)水質(zhì)，檢查馴養(yǎng)環(huán)境，防止野生飛禽捕食。

2 秦嶺細(xì)鱗鮭的人工繁殖

2.1 親魚(yú)的強(qiáng)化培育

2.1.1 親魚(yú)篩選和集中培育 因?yàn)榍貛X細(xì)鱗鮭雌魚(yú)懷卵量較少，一般為500～2 000粒，親魚(yú)的品質(zhì)不良會(huì)影響魚(yú)卵的質(zhì)量和數(shù)量，降低人工繁殖成功率。在繁殖季節(jié)前（2月下旬），篩選個(gè)體大、體型好、無(wú)傷病、成熟度高的3～5齡且體重在0.25 kg以上的種魚(yú)作為繁殖用親魚(yú)。按體型大小分組，轉(zhuǎn)至繁育車(chē)間的流水孵化缸暫養(yǎng)培育，雌雄比為1∶（2～3），放養(yǎng)密度20～30尾/m3，水深0.5～0.7 m，進(jìn)水管管口落差高度0.5 m以上，并加強(qiáng)流水刺激促進(jìn)親魚(yú)性腺發(fā)育。周?chē)煤谏诠饩W(wǎng)圈圍，防止親魚(yú)跳池死亡。3月中下旬水溫接近9 ℃提前將雌雄親魚(yú)分開(kāi)培育，以免雌魚(yú)自行排卵，水溫到9～12 ℃時(shí)可進(jìn)行人工催產(chǎn)[7]。

2.1.2 親魚(yú)的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化 野生秦嶺細(xì)鱗鮭生活習(xí)性特殊，棲息環(huán)境條件要求苛刻，在人工馴養(yǎng)繁殖條件下要對(duì)親魚(yú)進(jìn)行仿生態(tài)模擬強(qiáng)化培育，并人工調(diào)控親魚(yú)的性腺發(fā)育。在繁殖前期加強(qiáng)親魚(yú)的營(yíng)養(yǎng)，投喂黃粉蟲(chóng)成蟲(chóng)+高蛋白顆粒飼料，日投餌量為親魚(yú)體重的2%，分2次投喂，開(kāi)展人工繁殖前5 d停食。

2.2 人工繁殖

2.2.1 全人工繁殖方法 通過(guò)注射催產(chǎn)素人工催產(chǎn)、人工孵化受精卵的方法為全人工繁殖。人工誘導(dǎo)親魚(yú)性腺成熟、發(fā)情，并產(chǎn)卵或排精，短期內(nèi)獲得大量發(fā)育和生長(zhǎng)同步的受精卵，有助于苗種規(guī)模化培育，縮短親魚(yú)繁殖周期，提升繁殖效率。

2.2.1.1 人工催產(chǎn)。3月底至4月中旬，挑選發(fā)育狀況良好符合人工繁殖條件的親魚(yú)，經(jīng)丁香酚麻醉劑麻醉后，注射催產(chǎn)激素進(jìn)行催產(chǎn)，注射激素種類(lèi)為DOM、LRH-A2和HCG混合使用，注射劑量一般按1 kg雌魚(yú)親魚(yú)注射DOM 2～4 mg+LRH－A210 μg+HCG 1 000 IU，24～48 h 注射第二針，注射劑量減半；雄魚(yú)一般情況可通過(guò)自然發(fā)育順利性成熟，在人工授精時(shí)可直接取出精液，也可直接在雌魚(yú)注射后第二天再注射相同的催產(chǎn)素，注射劑量為雌魚(yú)的一半，注射部位均為胸腔。通過(guò)人工催產(chǎn)的調(diào)控技術(shù)，使雌魚(yú)、雄魚(yú)的性腺發(fā)育基本同步，可達(dá)到雌雄親魚(yú)同步排卵排精的效果。

2.2.1.2 人工授精。注射催產(chǎn)素后，雌雄親本分養(yǎng)在不同流水孵化缸中，加大親魚(yú)檢查頻率，觀察到雌魚(yú)腹部呈白色且膨大柔軟，生殖孔紅腫外漏，取出雌魚(yú)采用腹部節(jié)律擠壓的方法活體采集魚(yú)卵并盛于已消毒的瓷盆中，獲得的魚(yú)卵為半黏性沉性卵，要用生理鹽水輕輕漂洗2～3次進(jìn)行脫黏，同時(shí)取出雄魚(yú)采用干法人工授精將精液擠至魚(yú)卵表面，并立即加入少量清水激活精子，用雞毛輕柔攪拌精液和魚(yú)卵1～2 min，使卵子與精液充分混合受精，再將受精卵用清水清洗2～3次，將清洗干凈的受精卵緩慢倒入孵化框中孵化。

2.2.2 半人工繁殖方法 半人工繁殖是采用親魚(yú)自然發(fā)育，不使用催產(chǎn)素，待親魚(yú)自然性成熟，人工采卵取精進(jìn)行人工授精，獲得受精卵的方法。將雌魚(yú)和雄魚(yú)按1∶1的比例搭配暫養(yǎng)，加大水流量用流水刺激親魚(yú)發(fā)情。一般情況，雌魚(yú)排卵時(shí)間為4月中下旬，及時(shí)觀察親魚(yú)性成熟狀態(tài)，性成熟親魚(yú)表現(xiàn)為活動(dòng)頻繁，性情暴躁不安，沿進(jìn)水口處上躥，對(duì)聲音刺激敏感緊張，對(duì)即將排卵的雌性親魚(yú)及時(shí)取出進(jìn)行人工擠卵，排卵后立即將雄性親魚(yú)的精液擠出對(duì)卵子進(jìn)行人工授精。人工授精方法與全人工繁殖人工授精方法一致。

3 受精卵的人工孵化

3.1 孵化設(shè)施

在室內(nèi)孵化車(chē)間孵化，全過(guò)程避免強(qiáng)光直射，保持孵化環(huán)境安靜。由于秦嶺細(xì)鱗鮭卵為沉性卵，在流水孵化缸（或孵化槽）中放置孵化框，將受精卵均勻鋪放在孵化框底部進(jìn)行孵化。孵化設(shè)施保持微流水，孵化期間水流量控制在0.002～0.005 m3/s，確保日換水量大于200%。水體流速要適宜，水流太小會(huì)導(dǎo)致受精卵缺氧死亡或發(fā)育不良，水流過(guò)大會(huì)形成較大沖擊力震動(dòng)受精卵，影響正常的胚胎發(fā)育。在進(jìn)水口處設(shè)置2層濾網(wǎng)，過(guò)濾水體雜物及小型水生生物；孵化裝置上游掛置鹽瓶（帶有5～10個(gè)針孔的塑料瓶中加入粗鹽），使水體保持較低鹽度預(yù)防水霉滋生，有條件的情況下可在進(jìn)水口處加裝紫外消毒燈對(duì)孵化用水消毒殺菌處理，最大限度殺滅水體有害微生物。

3.2 人工孵化

按孵化框表面積計(jì)算孵化密度為0.5～1.0萬(wàn)粒/m2。溫度恒定有助于受精卵的發(fā)育，受精卵在恒溫地下泉水（水溫10 ℃）條件下孵化時(shí)，15 d左右受精卵出現(xiàn)眼點(diǎn)進(jìn)入發(fā)眼期，18～20 d胚體擺動(dòng)明顯，孵化全程共需200～220個(gè)累積溫度（度日），20～22 d仔魚(yú)成型出膜并分布于孵化框底部。魚(yú)苗孵化出膜9 d后，開(kāi)始出現(xiàn)口裂，體色逐漸變深，出現(xiàn)沖游，出膜13 d左右卵黃囊開(kāi)始消失，魚(yú)苗上浮開(kāi)口攝食外來(lái)餌料，營(yíng)養(yǎng)由內(nèi)源性轉(zhuǎn)為外源性[8-9]。從受精卵到上浮平游開(kāi)口需35 d左右，上浮開(kāi)口期可使用雞蛋黃、豐年蟲(chóng)、魚(yú)苗專(zhuān)用粉末飼料開(kāi)口馴食7 d左右；90%魚(yú)苗出現(xiàn)沖游行為后，移出孵化框，移至仔魚(yú)培育孵化缸流水培育。秦嶺細(xì)鱗鮭受精卵孵化發(fā)育不同階段的積溫和天數(shù)見(jiàn)表1。

表1 秦嶺細(xì)鱗鮭受精卵孵化發(fā)育不同階段的積溫和時(shí)間

3.3 孵化管理

3.3.1 孵化環(huán)境控制 秦嶺細(xì)鱗鮭受精卵胚胎發(fā)育和孵化出膜率受環(huán)境因子影響較大，主要因子有水溫、溶氧、光照及病原微生物等，孵化精細(xì)化管理是提高孵化率的關(guān)鍵技術(shù)。一是光線控制。發(fā)眼卵和剛出膜的仔魚(yú)對(duì)光線敏感，有懼光現(xiàn)象，強(qiáng)光直射會(huì)顯著降低發(fā)眼卵的孵化率和仔魚(yú)的成活率，孵化室內(nèi)的孵化設(shè)施采取遮光處理，避免強(qiáng)光直射。二是環(huán)境控制。受精卵胚胎發(fā)育過(guò)程中對(duì)環(huán)境刺激極為敏感，物理性震動(dòng)和強(qiáng)烈的噪音會(huì)延滯發(fā)育甚至死亡，要保持安靜、穩(wěn)定的孵化環(huán)境。三是孵化管理。每天早晚巡查3～6次，包括繁育池、孵化缸、培育池、引水渠、進(jìn)水口、出水口、其他設(shè)施，及時(shí)打撈水源通路淤積的腐枝樹(shù)葉、泥沙、雜物，保證水路通暢，做好水質(zhì)監(jiān)測(cè)記錄。

3.3.2 受精卵發(fā)育控制 正常的受精卵呈淡黃色，發(fā)育過(guò)程中因各種原因不可避免會(huì)產(chǎn)生一些死卵、未受精的卵，一般呈白色，要及時(shí)用塑料吸管吸除，以免形成水霉病害感染其他健康卵。定時(shí)清理進(jìn)水口濾網(wǎng)和孵化裝置的沉淀雜物，以免破壞水質(zhì)。不同批次的受精卵，仔魚(yú)出膜時(shí)間和個(gè)體的大小規(guī)格也不一致，由于秦嶺細(xì)鱗鮭魚(yú)苗食性偏肉食性且有種間相殘的習(xí)性，因此應(yīng)及時(shí)區(qū)分不同規(guī)格批次的仔稚魚(yú)，進(jìn)行分池培育，提高苗種數(shù)量和成活率。

4 結(jié)語(yǔ)

秦嶺細(xì)鱗鮭人工馴養(yǎng)繁殖及受精卵孵化技術(shù)的應(yīng)用是人為干預(yù)條件下保護(hù)該物種種質(zhì)資源的重要途徑。張家川馬鹿秦嶺細(xì)鱗鮭馴養(yǎng)繁殖場(chǎng)自2012年至今連續(xù)多年開(kāi)展秦嶺細(xì)鱗鮭人工馴養(yǎng)繁殖及受精卵孵化工作，通過(guò)多年實(shí)踐探索，采用人工調(diào)控等技術(shù)方法可實(shí)現(xiàn)人工馴養(yǎng)和雌雄親魚(yú)性腺同步發(fā)育，保證人工繁殖和受精卵孵化順利進(jìn)行，有效提高馴養(yǎng)成活率、受精率、孵化率，并連續(xù)多年提供苗種用于渭河上游秦嶺細(xì)鱗鮭增殖放流活動(dòng)，對(duì)秦嶺細(xì)鱗鮭種質(zhì)資源的養(yǎng)護(hù)和野外種群數(shù)量的恢復(fù)有積極意義。