丹皮酚的體內(nèi)抗炎鎮(zhèn)痛和體外抗氧化效果評(píng)價(jià)

張 鵬，程鳳琦，金圣奇，范露露，王 超

(1.沈陽工學(xué)院，遼寧 撫順 113122 ； 2.遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，遼寧 營口 115009)

丹皮酚(C9H10O3)又稱芍藥醇，是一種存在于毛茛科植物牡丹根皮中的小分子酚類化合物，以往依靠中藥提取技術(shù)從牡丹根皮中獲取。目前已有多種途徑進(jìn)行人工合成[1]。因丹皮酚具備多種藥理活性，如抗炎、抗腫瘤、保護(hù)神經(jīng)、保護(hù)心血管等[2]，在醫(yī)學(xué)研究、生物醫(yī)藥等領(lǐng)域中備受關(guān)注。近些年，國內(nèi)外對(duì)丹皮酚的藥理作用及機(jī)制進(jìn)行了大量的研究[3]，且已經(jīng)證明丹皮酚在緩解結(jié)腸炎[4]、胰腺炎[5]、心肌缺血[6]、關(guān)節(jié)炎[7]、牙周炎[8]等疾病中發(fā)揮積極的作用。因此本試驗(yàn)在前人研究基礎(chǔ)上進(jìn)一步考察丹皮酚體內(nèi)抗炎、鎮(zhèn)痛和體外抗氧化能力，以期為臨床抗炎、抗氧化獸藥研發(fā)與應(yīng)用提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明系小鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量18～22 g，雄性，購自遼寧長生生物技術(shù)股份有限公司，許可證號(hào)：SCXK(遼)2020—1—0001。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 丹皮酚對(duì)小鼠耳腫脹的影響 選取30只小鼠，隨機(jī)分為5個(gè)組，每組6只，分別為模型對(duì)照組、地塞米松對(duì)照組[5 mg/(kg·bw)]、丹皮酚低、中、高劑量組[100 mg/(kg·bw)、200 mg/(kg·bw)、300 mg/(kg·bw)]。采取灌胃給藥，每日定時(shí)1次，持續(xù)喂藥5 d。最后1次喂藥40 min后，使用50 μL二甲苯均勻涂抹在小鼠右耳前后兩面，左耳涂抹同等體積的蒸餾水作為對(duì)照，40 min后脫頸處死小鼠。將雙耳順著小鼠耳廓基線剪下，用直徑 8 mm的打孔器分別在左右兩耳相同位置切下圓耳片，用分析天平快速稱重。用左耳、右耳質(zhì)量的差值表達(dá)小鼠耳廓腫脹度。耳腫脹抑制率通過公式(1)計(jì)算。

(1)

1.3.2 丹皮酚對(duì)小鼠足趾腫脹的影響 小鼠分組及喂藥方法同1.3.1。最后1次喂藥后1 h，用0.01 mL含0.1%角叉菜膠的氯化鈉溶液在每只小鼠左后足皮下至踝關(guān)節(jié)處注入，致炎后4 h處死小鼠。將小鼠后足自踝關(guān)節(jié)剪下，用分析天平快速稱重，用左足、右足質(zhì)量的差值表達(dá)小鼠足趾腫脹度。足趾腫脹抑制率通過公式(2)計(jì)算。

(2)

1.3.3 冰醋酸致小鼠扭體試驗(yàn) 小鼠分組及喂藥方法同1.3.1。其中，用等量的阿司匹林替代地塞米松對(duì)照組中地塞米松。末次給藥后1 h，向小鼠腹腔注射0.1 mL/(10 g·bw)的0.6%冰醋酸溶液，誘發(fā)小鼠扭體，疼痛反應(yīng)指標(biāo)以30 min后采用攝影機(jī)記錄小鼠20 min內(nèi)扭體頻率為準(zhǔn)。疼痛抑制率通過公式(3)計(jì)算。

(3)

DPPH自由基清除率/%=[1-(A測定組-A對(duì)照組)÷A空白組]×100%

(4)

(5)

(6)

(7)

1.4 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 所有數(shù)據(jù)需要進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，本試驗(yàn)使用SPSS Statistics 17.0和OriginPro 9.1軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和繪圖。

2 結(jié)果

2.1 丹皮酚對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹的影響 結(jié)果如表1所示，不同劑量丹皮酚均可以抑制小鼠耳廓腫脹，且呈劑量依賴性，但與模型對(duì)照組相比，只有丹皮酚高劑量組具有極顯著差異(P<0.01)，丹皮酚中劑量組具有顯著差異(P<0.05)。此外，丹皮酚中、高劑量組抑制率好于地塞米松對(duì)照組，由此可見丹皮酚劑量越大，抑制效果越好。

表1 丹皮酚對(duì)小鼠耳廓腫脹的影響

2.2 丹皮酚對(duì)小鼠足趾腫脹的影響 結(jié)果如表2所示，與模型對(duì)照組相比，丹皮酚低劑量組顯著抑制小鼠足趾腫脹(P<0.05)，地塞米松對(duì)照組、丹皮酚中劑量組和高劑量組極顯著抑制小鼠足趾腫脹(P<0.01)。丹皮酚高劑量組的足趾腫脹抑制率與地塞米松對(duì)照組抑制率相當(dāng)，高達(dá)63.41%，丹皮酚低劑量組仍有一定的抑制效果，抑制率為17.07%，由此可知，不同劑量的丹皮酚均有抑制足腫脹的效果。

表2 丹皮酚對(duì)小鼠足趾腫脹的影響

2.3 丹皮酚對(duì)冰醋酸致小鼠扭體的影響 結(jié)果如由表3所示，低、中、高劑量丹皮酚均抑制小鼠扭體，且呈劑量依賴性。丹皮酚低劑量組顯著抑制小鼠扭體(P<0.05)，阿司匹林對(duì)照組、丹皮酚中劑量組和高劑量組極顯著抑制小鼠扭體(P<0.01)。丹皮酚高劑量抑制率(76.74%)要高于陽性藥物阿司匹林(61.92%)。因此，不同劑量的丹皮酚均有抗炎效果，尤其是高劑量丹皮酚效果更加明顯。

表3 丹皮酚對(duì)冰醋酸致小鼠扭體的影響

2.4 丹皮酚體外抗氧化效果

2.4.1 丹皮酚對(duì)DPPH自由基清除能力 結(jié)果如圖1所示，丹皮酚和維生素C的DPPH自由基清除率均隨著質(zhì)量濃度的增加而增加，并且呈現(xiàn)出較好的量效關(guān)系，將丹皮酚的DPPH自由基清除率(Y)與其濃度(X)進(jìn)行線性擬合，線性擬合方程為：Y(DPPH)=-0.000 8X2+0.429 9X+14.697，R2=0.995 4，呈現(xiàn)出良好的線性量效關(guān)系；由此可計(jì)算出丹皮酚清除DPPH自由基的半抑制濃度(IC50)為98.90 mg/mL。丹皮酚對(duì)DPPH自由基具有清除效果，且存在劑量效應(yīng)，當(dāng)?shù)てし淤|(zhì)量濃度為300 mg/mL時(shí)，其最大清除率達(dá)70.59%，呈現(xiàn)良好的抗氧化活性。

圖1 丹皮酚和維生素C對(duì)DPPH自由基清除能力

圖2 丹皮酚和維生素C對(duì)抑制率

2.4.3 丹皮酚抑制·OH-的產(chǎn)生 結(jié)果如圖3所示，丹皮酚和維生素C的·OH-抑制率均隨著質(zhì)量濃度的增加而增加，并且呈現(xiàn)出較好的量效關(guān)系。對(duì)丹皮酚的·OH-抑制率(Y)與其濃度(X)進(jìn)行線性擬合，線性擬合方程為：Y=-0.000 4X2+0.274 7X+42.388，R2=0.994 6，呈現(xiàn)出良好的線性量效關(guān)系；由此可計(jì)算出丹皮酚抑制·OH-的IC50為29.03 mg/mL。丹皮酚對(duì)·OH-具有抑制效果，且存在劑量效應(yīng)，當(dāng)?shù)てし淤|(zhì)量濃度為300 mg/mL時(shí)，其最大抑制率達(dá)85.45%，呈現(xiàn)良好的抗氧化活性。

圖3 丹皮酚和維生素C對(duì)·OH-抑制率

2.4.4 丹皮酚的總抗氧能力 總抗氧化能力是物質(zhì)清除不同自由基的有效和，可一定程度上反映機(jī)體防御體系的抗氧化能力。本試驗(yàn)用總抗氧化能力(T-AOC)測試盒測定1 mg/mL 的丹皮酚和維生素C的總抗氧化能力，其結(jié)果如表4所示。丹皮酚的總抗氧化能力為 65.04 U/mg，維生素C的總抗氧化能力為 229.07 U/mg。

表4 丹皮酚和維生素C總抗氧化能力

3 討論

綜上所述，丹皮酚具有良好的抗氧化能力，雖然體外抗氧化能力遠(yuǎn)不如維生素C，但其同時(shí)擁有抗炎、鎮(zhèn)痛等藥理作用，在獸醫(yī)臨床中具有潛在的應(yīng)用價(jià)值，其相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。