牛磺酸通過(guò)調(diào)控miR-126對(duì)高糖誘導(dǎo)的大鼠內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)制＊

謝雯雯，何志凌，招煦杰，羅 銳

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院 廣州 510000）

全球糖尿病發(fā)病率不斷上升，中國(guó)有超過(guò)1.5 億的糖尿病患者[1]。 糖尿病是由高血糖引起的慢性疾病，臨床表現(xiàn)為高血糖,可出現(xiàn)多尿、多飲、多食、消瘦，即三多一少癥狀。糖尿病可分為1 型和2 型糖尿病，1型糖尿病主要是由β細(xì)胞破壞和胰島素絕對(duì)缺乏引起的自身免疫性疾病，2 型糖尿病主要是胰島素抵抗，伴隨攝入過(guò)多糖分而導(dǎo)致胰島素分泌不足[2-3]。血管內(nèi)皮細(xì)胞是被覆于血管內(nèi)膜的一群細(xì)胞，代謝活躍且可合成及分泌大量的血管活性物質(zhì)，對(duì)維持血管正常生理功能具有重要作用[4-5]。糖尿病并發(fā)癥與血管內(nèi)皮功能損傷有關(guān)。糖尿病是全球性的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題，嚴(yán)重威脅人類健康，因此，亟待研究糖尿病的致病機(jī)理，尋找更有效的治療策略。?；撬嵊置Ｄ懰?、牛膽堿、牛膽素，是中藥牛黃的活性成分。?；撬峋哂蟹乐剐难懿〉淖饔?，在循環(huán)系統(tǒng)中可抑制血小板凝集，降低血脂，保持人體正常血壓和防止動(dòng)脈硬化；對(duì)心肌細(xì)胞有保護(hù)作用，對(duì)降低血液中膽固醇含量有明顯作用[6-8]。?；撬峥娠@著降低糖尿病大鼠的血糖水平，減輕胰島素抵抗，改善功能失調(diào)的神經(jīng)傳導(dǎo)[9]。miRNA 是一類由內(nèi)源基因編碼的長(zhǎng)度約為22 個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA 分子，它們?cè)趧?dòng)植物中參與轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)調(diào)控。有研究表明，miRNA 在血管內(nèi)皮細(xì)胞中有一定程度的表達(dá)，且對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)修復(fù)起到極其重要的調(diào)節(jié)作用[10-11]。miR-126 表達(dá)水平降低參與了胰島素抵抗及2 型糖尿病的發(fā)生和發(fā)展[12]。miR-126 表達(dá)降低與妊娠期糖尿病患者的胰島素抵抗相關(guān)[13]。1 型糖尿病患者血漿中miR-126 呈低表達(dá)，miR-126 參與了1 型糖尿病患者的炎癥反應(yīng)及脂質(zhì)代謝異常，且其水平隨年齡增長(zhǎng)而下降[14]。過(guò)表達(dá)miR-126 可促進(jìn)高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞HREC 增殖，并抑制其凋亡[15]。盡管已有研究發(fā)現(xiàn)牛磺酸、miR-126 對(duì)糖尿病具有一定緩解作用，但牛磺酸是否可通過(guò)調(diào)控miR-126 表達(dá)緩解糖尿病細(xì)胞損傷還尚未可知。研究表明，急、慢性的高糖狀態(tài)可抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，并誘發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，從而加重血管內(nèi)皮損傷[16-17]。本實(shí)驗(yàn)主要探討?；撬嵬ㄟ^(guò)調(diào)控miR-126對(duì)高糖誘導(dǎo)的大鼠內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

牛磺酸購(gòu)自Sigma 公司；大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞購(gòu)自美國(guó)ATCC 細(xì)胞庫(kù)；細(xì)胞培養(yǎng)DMEM 培養(yǎng)基購(gòu)自HyClone 公司；miR-126 模擬物和抑制物購(gòu)自北京華大基因公司；細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒（CCK-8）購(gòu)自南京凱基公司；膜聯(lián)蛋白V（Annexin-V）-異硫氰酸熒光素（FITC）/碘化丙啶（PI）細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Cell signaling technology 公司；Cleaved-caspase3、Procaspase3一抗及二抗購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR Green master mix 購(gòu)自北京寶日醫(yī)生物技術(shù)公司。二氧化碳培養(yǎng)箱購(gòu)自美國(guó)Thermo 公司；ABI7500 熒光定量 PCR 儀購(gòu)自美國(guó) ABI公司；酶標(biāo)儀購(gòu)自德國(guó)Eppendorf 公司；BG-sub MIDI型多用途水平電泳儀購(gòu)自美國(guó)Baygene公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)分組

大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞在DMEM 培養(yǎng)基（含10%胎牛血清、1%青霉素、1%鏈霉素）和細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃、5%CO2）中培養(yǎng)和傳代。待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)至約80%融合時(shí)，更換培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞做12 h 的饑餓處理（培養(yǎng)液中的血清濃度從10%降到無(wú)血清或2%，使培養(yǎng)液因缺乏血清中的生長(zhǎng)因子而不能使細(xì)胞分裂），之后加藥干預(yù)。細(xì)胞分組和處理如下：NC 組（用5.5 mmol·L-1葡萄糖培養(yǎng)基培養(yǎng)）、HG 組（用含30.0 mmol·L-1葡萄糖培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h）、HG+低濃度?；撬峤M、HG+中濃度?；撬峤M和HG+高濃度牛磺酸組（分別用含5.0、10.0、20.0 μmol·L-1牛磺酸和含30.0 mmol·L-1葡萄糖的培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h）。miR-NC+HG 組、miR-126+HG 組、anti-miR-NC+HG 組、anti-miR-126+HG 組分別將 miR-NC、miR-126 mimics、anti-miR-NC、antimiR-126 轉(zhuǎn)染至大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞（用含30.0 mmol·L-1葡萄糖培養(yǎng)基轉(zhuǎn)染細(xì)胞24 h）；牛磺酸+antimiR-NC+HG 組、?；撬?anti-miR-126+HG 組分別將anti-miR-NC、anti-miR-126 轉(zhuǎn)染大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞（用含30.0 mmol·L-1葡萄糖和20.0 μmol·L-1?；撬崤囵B(yǎng)液轉(zhuǎn)染細(xì)胞24 h）。

1.3 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力

將各組細(xì)胞培養(yǎng)24 h 后，每組取100 μL 密度為5×103/mL 的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，每孔加入10 μL的CCK-8 溶液，二氧化碳培養(yǎng)箱孵育2 h 后。用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔在450 nm 處吸光度（A）值，各實(shí)驗(yàn)組設(shè)置3 個(gè)復(fù)孔，細(xì)胞活性( %) =（A對(duì)照組-A實(shí)驗(yàn)組）)/ A對(duì)照組×100%。

1.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率

取各組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞加入預(yù)冷PBS 洗滌，4 ℃條件下經(jīng)3000 r·min-1離心6 min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀，向細(xì)胞沉淀中加入500 μL 結(jié)合緩沖液，加入 5 μL Annexin V-FITC 與 5 μL PI，室溫振蕩孵育 10 min，應(yīng)用 FACS Calibur 流式細(xì)胞儀及應(yīng)用 Cellauest 軟件檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率。

1.5 RT-qPCR檢測(cè)miR-126的表達(dá)水平

各組細(xì)胞培養(yǎng)48 h，提取總RNA，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒降RNA 合成cDNA，按照SYBR Green master mix試劑盒說(shuō)明進(jìn)行PCR，反應(yīng)條件為95℃2 min，95℃15 s，60℃ 30 s；72℃ 30 s，共 40 個(gè)循環(huán)。相對(duì)表達(dá)量用2-△△Ct法計(jì)算。miR-126分別U6為內(nèi)參，miR-126上游引物：5’-TACTTTTGGTACGCGCTGTG-3’，下游引物：5’-GCTAGCTACGATCACACTACG-3’；U6 上游引物：5’-CGCTTCGGCAGCACATATACTA-3’，下游引物：5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCA-3’；引物由上海生工生物工程公司合成。

1.6 Western blot 檢測(cè) Cleaved-caspase3、pro-caspase3蛋白表達(dá)

各組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中加入400 μL RIPA裂解液，提取細(xì)胞總蛋白，采用BCA 法檢測(cè)蛋白濃度，蛋白變性，采用SDS-PAGE 電泳分離蛋白，轉(zhuǎn)膜、封閉2 h，分別孵育一抗稀釋液（稀釋比1:1000，條件：4℃孵育24 h）與二抗稀釋液（稀釋比1:2000，條件：室溫孵育1 h），滴加ECL，暗室內(nèi)曝光顯影，應(yīng)用ImageJ 軟件分析各條帶灰度值。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組比較行t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 牛磺酸對(duì)HG處理的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞活性的影響

由表1可知，與NC組比較，HG組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞活性顯著降低（P＜0.05）；與HG 組比較，HG+低濃度?；撬峤M、HG+中濃度?；撬峤M、HG+高濃度牛磺酸組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞活性顯著升高（P＜0.05）。

表1 ?；撬釋?duì)HG處理的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞活性的影響（，n=9）

表1 牛磺酸對(duì)HG處理的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞活性的影響（，n=9）

注：與NC比較，*P＜0.05；與HG比較，#P＜0.05。

吸光度（A）值0.982±0.08 0.387±0.03*0.632±0.06#0.766±0.07#0.856±0.08#組別NC HG HG+低濃度?；撬峤MHG+中濃度牛磺酸組HG+高濃度?；撬峤M藥物濃度5.0 μmol·L-1 10.0 μmol·L-1 20.0 μmol·L-1細(xì)胞活性99.88±10.65 36.58±3.68*68.96±5.58#76.98±6.31#85.62±8.80#

2.2 ?；撬釋?duì)HG處理的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響

由表 2 和圖 1、2 可知，與 NC 組比較，HG 組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)顯著上升，Pro-caspase3 蛋白表達(dá)顯著降低（P＜0.05）；與HG 組比較，HG+低濃度?；撬峤M、HG+中濃度?；撬峤M、HG+高濃度?；撬峤M大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)顯著降低，Pro-caspase3蛋白表達(dá)顯著升高（P＜0.05）。

表2 ?；撬釋?duì)HG處理的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響（，n=9）

注：與NC比較，*P＜0.05；與HG比較，#P＜0.05。

Pro-caspase3 蛋白0.89±0.09 0.29±0.02*0.41±0.04#0.53±0.05#0.67±0.07#組別NC HG HG+低濃度?；撬峤MHG+中濃度?；撬峤MHG+高濃度牛磺酸組藥物濃度5.0 μmol·L-1 10.0 μmol·L-1 20.0 μmol·L-1凋亡率（%）7.44±0.69 35.61±5.80*20.37±2.89#13.85±1.94#10.69±1.07#Cleaved-caspase3 蛋白0.25±0.03 0.85±0.08*0.66±0.06#0.51±0.05#0.43±0.04#

圖1 ?；撬釋?duì)HG處理的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響凋亡圖

2.3 牛磺酸對(duì)miR-126表達(dá)的影響

由表3可知，與NC組比較，HG組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中miR-126 表達(dá)顯著降低（P＜0.05）；與HG 組比較，HG+低濃度?；撬峤M、HG+中濃度牛磺酸組、HG+高濃度牛磺酸組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中miR-126表達(dá)顯著升高（P＜0.05）。

表3 ?；撬釋?duì)miR-126表達(dá)的影響（，n=9）

表3 ?；撬釋?duì)miR-126表達(dá)的影響（，n=9）

注：與NC比較，*P＜0.05；與HG比較，#P＜0.05。

miR-126表達(dá)水平1.01±0.09 0.36±0.03*0.64±0.06#0.77±0.07#0.86±0.08#組別NC HG HG+低濃度?；撬峤MHG+中濃度?；撬峤MHG+高濃度牛磺酸組藥物濃度5.0 μmol·L-1 10.0 μmol·L-1 20.0 μmol·L-1

2.4 過(guò)表達(dá)miR-126對(duì)HG處理的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞活性、凋亡的影響

圖2 牛磺酸對(duì)HG處理的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響蛋白圖

由表 4 和圖 3 可知，與 HG+miR-NC 組比較，HG+miR-126組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中miR-126表達(dá)顯著升高，細(xì)胞活性、Pro-caspase3 蛋白表達(dá)顯著升高（P＜0.05）；凋亡率、Cleaved-caspase3 蛋白表達(dá)顯著降低（P＜0.05）。

表4 過(guò)表達(dá)miR-126對(duì)HG處理的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞活性、凋亡的影響（，n=9）

表4 過(guò)表達(dá)miR-126對(duì)HG處理的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞活性、凋亡的影響（，n=9）

注：與HG+miR-NC比較，*P＜0.05。

Pro-caspase3蛋白0.30±0.03 0.88±0.08*108.643 0.000組別HG+miR-NC HG+miR-126 t P miR-126表達(dá)水平1.00±0.10 2.29±0.18*98.324 0.000細(xì)胞活性（%）34.61±2.81 81.07±7.20*112.084 0.000吸光度（A）值0.392±0.03 0.841±0.09*101.965 0.000凋亡率（%）37.51±4.22 11.39±1.25*85.641 0.000 Cleaved-caspase3蛋白0.91±0.09 0.45±0.04*82.014 0.000

圖3 過(guò)表達(dá)miR-126對(duì)HG處理的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

2.5 低表達(dá)miR-126可以逆轉(zhuǎn)?；撬釋?duì)HG處理的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞活性、凋亡影響

由表5 和圖4 可知，與HG+?；撬峤M和HG+牛磺酸+ anti-miR-NC 組比較，HG+?；撬? anti-miR-126組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中miR-126 表達(dá)顯著降低，細(xì)胞活性、Pro-caspase3 蛋白表達(dá)顯著降低，凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)顯著升高（P＜0.05）。

圖4 低表達(dá)miR-126 可以逆轉(zhuǎn)?；撬釋?duì)HG 處理的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

表5 低表達(dá)miR-126可以逆轉(zhuǎn)?；撬釋?duì)HG處理的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞活性、凋亡的影響（，n=9）

表5 低表達(dá)miR-126可以逆轉(zhuǎn)?；撬釋?duì)HG處理的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞活性、凋亡的影響（，n=9）

注：與HG+?；撬岜容^，*P＜0.05；與anti-miR-NC+HG+?；撬?，#P＜0.05。

Pro-caspase3蛋白0.89±0.09 0.88±0.08 0.31±0.04*#組別HG+?；撬酘G+牛磺酸+anti-miR-NC HG+?；撬?anti-miR-126藥物濃度20.0 μmol·L-1 20.0 μmol·L-1 20.0 μmol·L-1 miR-126表達(dá)水平1.03±0.10 0.99±0.09 0.37±0.03*#細(xì)胞活性（%）85.21±9.20 84.28±5.55 34.28±2.16*#吸光度（A）值0.851±0.08 0.388±0.03 0.393±0.04*#凋亡率（%）10.62±0.82 11.29±1.00 36.54±3.85*#Cleaved-caspase3蛋白0.42±0.04 0.43±0.03 0.89±0.08*#

3 討論

牛磺酸具有多種生理活性。研究表明，?；撬峥删徑舛喾N細(xì)胞損傷。如?；撬峥赏ㄟ^(guò)調(diào)控Keap1-Nrf2 通路關(guān)鍵基因的表達(dá)和抑制氧化應(yīng)激來(lái)減輕棕櫚酸誘導(dǎo)的胰島素抵抗細(xì)胞模型損傷[18]。?；撬峥赏ㄟ^(guò)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激活化顯著改善胡蘿卜素誘導(dǎo)的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y 損傷[19]。牛磺酸預(yù)處理可顯著降低脂多糖引起的奶牛肝臟原代細(xì)胞BHEC炎癥反應(yīng)[20]。牛磺酸處理對(duì)百草枯誘導(dǎo)的帕金森小鼠模型損傷具有緩解作用[21]。?；撬峥梢种瓢捉樗卣T導(dǎo)的大鼠椎間盤(pán)退變模型髓核細(xì)胞的凋亡、炎癥和氧化應(yīng)激[22]。糖尿病的病理機(jī)制非常復(fù)雜，受高血壓、非酶糖化、血脂異常、腎血流動(dòng)力學(xué)改變、氧化應(yīng)激和細(xì)胞因子等多種因素影響[23]。糖尿病發(fā)病時(shí)糖脂代謝紊亂，血管緊張素Ⅱ釋放增加，均可刺激活性氧產(chǎn)生而損傷血管內(nèi)膜，引起內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，進(jìn)而促進(jìn)血管病變的發(fā)生[24-25]。?；撬岵粌H參與維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)，而且對(duì)多種組織細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用。研究顯示，?；撬崮茴A(yù)防高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，其抗凋亡效應(yīng)與降低細(xì)胞內(nèi)活性氧簇和穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)鈣水平相關(guān)[26]。miRNAs 廣泛參與了機(jī)體多種生理病理過(guò)程的調(diào)控，miRNAs已成為生命科學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)[27-28]。

細(xì)胞凋亡是程序性細(xì)胞死亡，是為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定由基因控制的細(xì)胞自主死亡。Caspase 蛋白家族廣泛存在于細(xì)胞質(zhì)中，參與調(diào)控細(xì)胞凋亡過(guò)程，Caspase 3 的激活標(biāo)志著細(xì)胞凋亡進(jìn)入不可逆階段[29]。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，高糖誘導(dǎo)的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞活性顯著降低；但?；撬犸@著升高高糖誘導(dǎo)組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞活性。高糖誘導(dǎo)的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率、Cleaved-caspase3 蛋白表達(dá)顯著上升，Procaspase3 蛋白表達(dá)顯著降低；但?；撬犸@著降低糖誘導(dǎo)的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)，顯著升高Pro-caspase3 蛋白表達(dá)。說(shuō)明，牛磺酸提高高糖誘導(dǎo)的大鼠內(nèi)皮細(xì)胞活性，并促進(jìn)凋亡。有類似的研究表明，?；撬崮芤种苾?nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激，減少細(xì)胞凋亡，對(duì)防治糖尿病并發(fā)血管疾病具有重要臨床意義[30]。梁棟等[31]研究表明，?；撬嵬ㄟ^(guò)激活PI3K/Akt 信號(hào)通路抑制高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。

本研究發(fā)現(xiàn)，高糖誘導(dǎo)的大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中miR-126 表達(dá)顯著降低；但?；撬犸@著升高大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中miR-126 表達(dá)。說(shuō)明，牛磺酸提升了高糖誘導(dǎo)的大鼠內(nèi)皮細(xì)胞miR-126 表達(dá)。有類似研究發(fā)現(xiàn)，miR-96-5p 在高糖誘導(dǎo)的脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞應(yīng)激中表達(dá)顯著下調(diào)[32]。miR-126 可通過(guò)NF-κB 信號(hào)通路減輕膿毒癥大鼠腦損傷[33]。miR-126 通過(guò)促進(jìn)歸巢和維持晚期生長(zhǎng)內(nèi)皮祖細(xì)胞的干性來(lái)緩解血管損傷[34]。外泌體來(lái)源的miR-126可降低急性心肌梗塞缺血/再灌注損傷引起的氧化應(yīng)激和凋亡[35]。miR-126-3p 在小鼠纖維化腎臟和心臟組織中下調(diào)，miR-126-3p 過(guò)表達(dá)可抑制內(nèi)皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化[36]。

本實(shí)驗(yàn)研究顯示，HG+miR-126 組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中miR-126 表達(dá)顯著升高，細(xì)胞活性、Procaspase3 蛋白表達(dá)顯著升高；凋亡率、Cleavedcaspase3 蛋白表達(dá)顯著降低。HG+?；撬?anti-miR-126 組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中miR-126 表達(dá)顯著降低，細(xì)胞活性、Pro-caspase3 蛋白表達(dá)顯著降低，凋亡率、Cleaved-caspase3 蛋白表達(dá)顯著升高。說(shuō)明，牛磺酸通過(guò)上調(diào)miR-126 表達(dá)促進(jìn)高糖誘導(dǎo)的大鼠內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。

綜上所述，?；撬嵬ㄟ^(guò)上調(diào)miR-126 抑制了高糖誘導(dǎo)的大鼠內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，為治療糖尿病提供了理論依據(jù)。本論文的創(chuàng)新點(diǎn)主要在中藥通過(guò)調(diào)控非編碼RNA的表達(dá)來(lái)促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制增殖。