上海地區(qū)成人網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)參數(shù)參考區(qū)間的建立

徐倩倩， 姜王慶， 沈林杰， 陸英杰， 陳 健， 蔣浩琴

（復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)科，上海 200040）

網(wǎng)織紅細(xì)胞（reticulocyte，RET）是晚幼紅細(xì)胞脫核后但尚未完全成熟的紅細(xì)胞，是反映骨髓紅系造血功能以及判斷貧血和相關(guān)疾病療效的重要指標(biāo)，臨床上常用RET絕對(duì)計(jì)數(shù)和百分比來反映紅細(xì)胞增生活性[1]。隨著血細(xì)胞分析儀的不斷改進(jìn)，許多新參數(shù)被發(fā)現(xiàn)，儀器不僅可計(jì)數(shù)骨髓釋放的RET數(shù)量，還可檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白含量（reticulocyte hemoglobin，RETHe），并可通過校正公式計(jì)算外周血中網(wǎng)織紅細(xì)胞生成指數(shù)（reticulocyte production index，RPI）。RET-He含量是指RET細(xì)胞質(zhì)中的血紅蛋白含量，與機(jī)體內(nèi)貯存鐵數(shù)量密切相關(guān)，可反映體內(nèi)鐵蛋白代謝最新狀態(tài)，用于缺鐵性貧血、鐵利用障礙等慢性功能性貧血的診斷和鑒別診斷，其相關(guān)參數(shù)對(duì)貧血的診斷和鑒別診斷及療效觀察有重要的參考價(jià)值[2]。目前，儀器法檢測(cè)RET相關(guān)參數(shù)參考區(qū)間的報(bào)道不多，臨床上難以有效利用這些新的、有價(jià)值的檢測(cè)參數(shù)。本研究通過采用全自動(dòng)血液分析儀對(duì)2 080名體檢健康者外周血RET及其相關(guān)參數(shù)進(jìn)行檢測(cè)，建立上海地區(qū)成人網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)參數(shù)的參考區(qū)間，以提高RET在臨床血液、腎臟等疾病中的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2019年1月—2020年5月復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院體檢健康者2 237名，其中男1 095名、女1 142名，年齡18～88歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：無明顯感染癥狀和貧血表現(xiàn)，無血液系統(tǒng)相關(guān)疾病，白細(xì)胞計(jì)數(shù)為（3.5～9.5）×109/L，C反應(yīng)蛋白<10 mg/L，男性血紅蛋白為130～175 g/L、女性血紅蛋白為115～150 g/L。排除標(biāo)準(zhǔn)：空腹血糖>6.1 mmol/L或糖化血紅蛋白異常，三酰甘油>3.0 mmol/L，膽固醇>8.0 mmol/L，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶>75 U/L，肌酐>120 μmol/L，尿素>12 mmol/L，尿液紅細(xì)胞計(jì)數(shù)>10個(gè)/高倍鏡視野或尿液白細(xì)胞計(jì)數(shù)>5個(gè)/高倍鏡視野；近期服用鐵劑；3個(gè)月之內(nèi)獻(xiàn)血；處于哺乳期及妊娠期。

1.2 方法

用真空采血管（紫色蓋，美國(guó)BD公司）采集所有研究對(duì)象靜脈血2 mL，乙二胺四乙酸二鉀抗凝，采用日本Sysmex公司XN-9000全自動(dòng)血液分析儀及配套試劑、質(zhì)控品檢測(cè)RET及相關(guān)參數(shù)：網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（the percentage of reticulocyte，RET%）、網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值（the absolute value of reticulocyte，RET#）、未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（immature reticulocyte fraction percentage，IRF%）、低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（low fluorescence intensity reticulocyte percentage，LFR%）、中熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（medium fluorescence intensity reticulocyte percentage，MFR%）、高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（high fluorescence intensity reticulocyte percentage，HFR%）、RET-He、RPI。所有樣本均在采集4 h內(nèi)完成檢測(cè)。檢測(cè)前已進(jìn)行儀器校準(zhǔn)和性能驗(yàn)證，確保當(dāng)日質(zhì)控在控。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用Dixon法剔除離群值。采用Kolomogrow-Smirnov正態(tài)性檢驗(yàn)分析RET相關(guān)參數(shù)的數(shù)據(jù)分布情況。呈非正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)（M）[四分位數(shù)（P25，P75）]表示，2個(gè)組之間比較采用Mann-Whitney檢驗(yàn)，多組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，采用百分位數(shù)法（P2.5～P97.5）建立參考區(qū)間。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RET相關(guān)參數(shù)的數(shù)據(jù)分布

共剔除157個(gè)離群值，最終納入2 080名體檢健康者，其中男1 059名，年齡（41.9±12.1）歲；女1 021名，年齡（40.4±11.8）歲。Kolomogrow-Smirnov檢驗(yàn)結(jié)果顯示，RET相關(guān)參數(shù)均呈偏態(tài)分布（P<0.05）。見表1。

表1 RET相關(guān)參數(shù)的數(shù)據(jù)分布

2.2 不同性別之間RET相關(guān)參數(shù)檢測(cè)結(jié)果比較

男、女性之間各項(xiàng)RET參數(shù)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 不同性別之間RET相關(guān)參數(shù)檢測(cè)結(jié)果比較

2.3 不同年齡之間RET相關(guān)參數(shù)檢測(cè)結(jié)果比較

將所有研究對(duì)象按年齡分為18～40歲組、41～60歲組和61～80歲組。RET%、RET#、RPI各年齡組之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。41～60歲組、61～80歲組IRF%、LFR%、MFR%、HFR%、RET-He與18～40歲組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而41～60歲組與61～80歲組之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

表3 不同年齡之間RET相關(guān)參數(shù)檢測(cè)結(jié)果比較

2.4 各年齡組不同性別之間IRF%、LFR%、MFR%、HFR%、RET-He的比較

18～40歲組中，男、女性之間IRF%、LFR%、MFR%、HFR%、RET-He差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表4。

表4 18～40歲組不同性別之間IRF%、LFR%、MFR%、HFR%、RET-He比較

將4 1～6 0歲組和6 1～8 0歲組合并為41～80歲組，男、女性之間除RET-He差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.0 5）外，其他項(xiàng)目差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.0 5）。見表5。

表5 41～80歲組不同性別之間RET參數(shù)比較

2.5 上海地區(qū)成人RET相關(guān)參數(shù)參考區(qū)間

對(duì)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的不同年齡、性別各組進(jìn)行合并，采用百分位數(shù)法建立參考區(qū)間。見表6、表7。

表6 上海地區(qū)成人RET%、RET#、RPI參考區(qū)間

表7 上海地區(qū)成人IRF%、LFR%、MFR%、HFR%、RET-He參考區(qū)間

2.6 參考區(qū)間的驗(yàn)證

另收集2020年6月15日—6月25日復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院體檢健康者血常規(guī)檢測(cè)標(biāo)本40份，其中男、女性樣本各20份。對(duì)建立的RET相關(guān)參數(shù)的參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示，40份樣本的RET相關(guān)參數(shù)檢測(cè)結(jié)果均在建立的參考區(qū)間內(nèi)，驗(yàn)證通過。

3 討論

RET是晚幼紅粒細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞之間的過渡細(xì)胞，可用于精確診斷貧血，評(píng)估貧血治療后的再生性，監(jiān)測(cè)接受重組紅細(xì)胞生成素治療、化療或骨髓移植患者愈后狀況[3]。RET可分為高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（high fluorescence intensity reticulocyte，HFR）、中熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（medium fluorescence intensity reticulocyte，MFR）、低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（low fluorescence intensity reticulocyte，LFR），HFR和MFR的總和是未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞（immature reticulocyte fraction，IRF），IRF、HFR、MFR、LFR、RPI是反映造血功能的新參數(shù)。其中，HFR、MFR和LFR變化比RET#或RET%變化更敏感，因此可用來鑒別診斷慢性溶血性貧血和化療引起的骨髓抑制性貧血，以及血液透析所致的貧血[4-6]。

RPI可客觀反映RET的生成情況。RET%或RET#會(huì)受RET在外周血帶網(wǎng)時(shí)間影響而偏高或偏低，如RET在外周血帶網(wǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，RET就會(huì)偏高；帶網(wǎng)時(shí)間減少，則會(huì)假性偏低。RPI通過RET成熟時(shí)間校正貧血造成的RET提前釋放因素，可更真實(shí)地反映骨髓增生情況，因此臨床上一般采用RPI來消除RET帶網(wǎng)時(shí)間影響[7]。有研究發(fā)現(xiàn)，RPI水平可敏感地反映骨髓紅細(xì)胞增生狀態(tài)，輔助鑒別貧血類型，包括進(jìn)一步鑒別溶血性貧血和非溶血性貧血[8]，這也是后續(xù)本研究擬結(jié)合更多貧血指標(biāo)進(jìn)行聯(lián)合分析的內(nèi)容。健康人群RET-He在RET完整生命周期中是恒定的，RET-He是RET細(xì)胞質(zhì)中的血紅蛋白含量，可反映體內(nèi)鐵蛋白代謝的最新狀態(tài)。

本研究建立的RET相關(guān)參數(shù)參考區(qū)間與目前采用的參考區(qū)間相比，范圍更寬，且相關(guān)參數(shù)數(shù)據(jù)基本呈偏態(tài)分布，其中RPI參考區(qū)間[0.90～2.40（男）、0.60～1.80（女）]與標(biāo)準(zhǔn)理論值1相比差異明顯，原因可能是RPI敏感性比較高，更易受飲食、運(yùn)動(dòng)、應(yīng)激狀態(tài)等各種因素影響，而本研究未排除體檢人群近期是否運(yùn)動(dòng)、服用補(bǔ)品、處于生理期前后或壓力過大等影響因素，導(dǎo)致離散值較大。IRF和HFR均為幼稚RET，在正常人外周血中含量較少，機(jī)體大量失血或處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí)才會(huì)代償性增加，是反映造血功能最敏感的指標(biāo)[9]。本研究結(jié)果顯示，男性、女性RET相關(guān)參數(shù)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001），男性RET%略高于女性，LFR%略低于女性，提示男性紅細(xì)胞更新速度快于女性，與男性紅細(xì)胞計(jì)數(shù)高于女性相符，與其他地區(qū)結(jié)果[10]一致。

本研究結(jié)果顯示，不同年齡組之間RET#、RET%、RPI差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），IRF%、LFR%、MFR%、HFR%、RET-He差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；隨著年齡的增長(zhǎng)，RET%、RET#、IRF%、RPI均先上升，再逐漸下降，而LFR%隨著年齡的增長(zhǎng)逐漸升高，提示隨著年齡的增長(zhǎng)，紅細(xì)胞的生成能力會(huì)逐漸減弱，這與李小龍等[10]報(bào)道的情況類似。本研究RET-He參考區(qū)間（男30.4～35.6 pg、女27.8～34.6 pg）低于趙麗娟等[11]的研究（男30.2～36.0 pg、女29.1～35.4 pg），可能因?yàn)楸狙芯康难芯繉?duì)象為上海地區(qū)人群，而后者的研究對(duì)象為長(zhǎng)春地區(qū)人群，提示不同人群由于地理環(huán)境、生活方式以及生理結(jié)構(gòu)等因素影響，機(jī)體內(nèi)鐵含量會(huì)不同，從而導(dǎo)致不同地區(qū)人群RET-He含量有所差異。因此，各臨床實(shí)驗(yàn)室均應(yīng)建立各自的參考區(qū)間。

綜上所述，本研究初步建立了上海地區(qū)健康成人外周血RET相關(guān)參數(shù)的參考區(qū)間，進(jìn)一步提高了RET相關(guān)參數(shù)的臨床應(yīng)用價(jià)值，有利于貧血類疾病、腎性貧血等疾病的診斷、鑒別診斷和療效觀察。