sCD147、sCD40L、miR-21與ACI患者頸動(dòng)脈粥樣斑塊類型及預(yù)后的關(guān)系

杜宇平， 陳 陽(yáng)

（聯(lián)勤保障部隊(duì)第904醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，江蘇 無(wú)錫 214044）

急性腦梗死（acute cerebral infarction，ACI）的致殘率及病死率均較高，嚴(yán)重威脅著患者的生命安全[1]。頸動(dòng)脈粥樣硬化是ACI發(fā)生的主要病理基礎(chǔ)，其中頸動(dòng)脈粥樣斑塊在ACI病程進(jìn)展中扮演著重要角色[2]。CD147是一種基質(zhì)金屬蛋白酶刺激因子，可加劇血管內(nèi)皮損傷，引起動(dòng)脈粥樣硬化，加快血栓形成，可溶性CD147（soluble CD147，sCD147）是其可溶性形式，可在血液中被檢測(cè)出來(lái)[3]?？扇苄訡D40配體（soluble CD40 ligand，sCD40L）可促使趨化因子被大量釋放，上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞中炎癥因子的表達(dá)，在動(dòng)脈硬化粥樣斑塊的形成中起重要作用[4]。微小RNA（microRNA，miRNA）是一類非編碼的小分子核糖核酸。有研究發(fā)現(xiàn)，miRNA異常表達(dá)可能參與了動(dòng)脈粥樣硬化粥樣斑塊的形成，其中微小RNA-21（microRNA-21，miR-21）對(duì)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化粥樣斑塊具有一定的識(shí)別作用[5]。目前，關(guān)于血清sCD147、sCD40L、miR-21水平與ACI患者頸動(dòng)脈粥樣斑塊類型的關(guān)系及其在預(yù)后評(píng)估中的作用的研究較少。為此，本研究擬探討sCD147、sCD40L、miR-21與ACI患者頸動(dòng)脈粥樣斑塊類型的關(guān)系，并分析其在ACI預(yù)后評(píng)估中的價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2018年6月—2021年3月聯(lián)勤保障部隊(duì)第904醫(yī)院確診的ACI患者159例，其中男105例、女54例，年齡48～73歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）均符合ACI診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，并經(jīng)頭顱電子計(jì)算機(jī)斷層掃描或磁共振成像確診為ACI；（2）發(fā)病時(shí)間≤24 h，且均為首次發(fā)?。唬?）簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）近期有免疫抑制劑、抗菌藥物、激素等藥物治療史；（2）合并先天性心臟病、心律失常、心臟瓣膜病等嚴(yán)重器質(zhì)性心臟?。唬?）合并甲狀腺功能亢進(jìn)或減退；（4）既往有重大手術(shù)或嚴(yán)重外傷史；（5）合并顱腦或其他部位惡性腫瘤；（6）精神、行為異常。本研究經(jīng)聯(lián)勤保障部隊(duì)第904醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 基線資料收集 采用調(diào)查問(wèn)卷形式收集所有研究對(duì)象性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)、基礎(chǔ)疾病、吸煙史、飲酒史、發(fā)病至溶栓時(shí)間、血脂異常情況、頸動(dòng)脈粥樣斑塊類型、美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院卒中量表（the National Institute of Health Stroke Scale，NIHSS）評(píng)分。血脂異常判定標(biāo)準(zhǔn)：總膽固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）中至少有1項(xiàng)異常。頸動(dòng)脈粥樣斑塊采用IU22型彩色多普勒超聲診斷儀（荷蘭飛利浦公司）進(jìn)行檢測(cè)，頸總動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度>1.2 mm為動(dòng)脈粥樣斑塊形成，根據(jù)超聲影像形態(tài)和回聲特點(diǎn)將頸動(dòng)脈粥樣斑塊分為穩(wěn)定斑塊（扁平斑和硬斑）和不穩(wěn)定斑塊（軟斑和潰瘍斑）。NIHSS評(píng)分為0～42分，得分越高，神經(jīng)功能缺損程度越嚴(yán)重。

1.2.2 血清sCD147、sCD40L、miR-21檢測(cè) 采集所有研究對(duì)象入院第2天清晨的空腹靜脈血6 mL，室溫條件下靜置30 min，1 000×g離心15 min，分離血清，-80 ℃保存待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清sCD147、sCD40L水平，試劑盒購(gòu)自上海江萊生物科技有限公司，檢測(cè)儀器為DNM-9602型酶標(biāo)儀（南昌普朗醫(yī)用設(shè)備有限公司）。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）檢測(cè)miR-21，試劑盒購(gòu)自北京厚生博泰科技有限公司。檢測(cè)儀器為StepOne Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（美國(guó)ABI公司），引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。上游引物序列5'-GACTGAGTACAAACTGGTGG-3'，下游引物序列5'-GGGCCTCACCTCTATGGTG-3'。采用2-ΔΔCt法計(jì)算miR-21的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.3 ACI治療方案及預(yù)后評(píng)價(jià) 所有患者均接受靜脈溶栓、糾正電解質(zhì)紊亂、降顱內(nèi)壓、降脂、抑制血小板聚集等綜合治療。根據(jù)發(fā)病3個(gè)月后的改良Rankin量表（modified Rankin Scale，mRS）評(píng)分分為預(yù)后不良組（mRS評(píng)分為3～6分，47例）和預(yù)后良好組（mRS評(píng)分為0～2分，112例）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。呈正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，2個(gè)組之間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析。計(jì)數(shù)資料以例或率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Spearman相關(guān)分析評(píng)估sCD147、sCD40L、miR-21與頸動(dòng)脈粥樣斑塊類型的相關(guān)性。采用Pearson相關(guān)分析評(píng)估sCD147、sCD40L、miR-21與NIHSS評(píng)分的相關(guān)性。采用多元線性回歸分析評(píng)估ACI患者預(yù)后不良的影響因素。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 預(yù)后不良組與預(yù)后良好組基線資料及頸動(dòng)脈粥樣斑塊類型比較

預(yù)后不良組發(fā)病至溶栓時(shí)間、頸動(dòng)脈粥樣斑塊類型、血脂異常例數(shù)、NIHSS評(píng)分與預(yù)后良好組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；2個(gè)組之間性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)、基礎(chǔ)疾病、吸煙史、飲酒史差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1。

表1 預(yù)后不良組與預(yù)后良好組基線資料、頸動(dòng)脈斑塊類型比較

2.2 預(yù)后不良組與預(yù)后良好組血清sCD147、sCD40L、miR-21水平比較

預(yù)后不良組血清sCD147、sCD40L、miR-21水平顯著高于預(yù)后良好組（P<0.05）。見(jiàn)表2。

表2 預(yù)后不良組與預(yù)后良好組血清sCD147、sCD40L、miR-21水平比較

2.3 血清sCD147、sCD40L、miR-21與頸動(dòng)脈粥樣斑塊類型、NIHSS評(píng)分的相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清sCD147、sCD40L、miR-21與ACI患者頸動(dòng)脈穩(wěn)定斑塊、不穩(wěn)定斑塊均呈正相關(guān)（P<0.05）。Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清sCD147、sCD40L、miR-21與NIHSS評(píng)分均呈正相關(guān)（P<0.05）。見(jiàn)表3。

表3 血清sCD147、sCD40L、miR-21與頸動(dòng)脈粥樣斑塊類型、NIHSS評(píng)分的相關(guān)性

2.4 ACI預(yù)后不良影響因素

多元線性回歸分析結(jié)果顯示，調(diào)整年齡、頸動(dòng)脈粥樣斑塊類型、NIHSS評(píng)分、血脂異常、發(fā)病至溶栓時(shí)間等因素后，血清sCD147、sCD40L、miR-21與ACI預(yù)后不良（mRS評(píng)分）顯著相關(guān)（P<0.05）。見(jiàn)表4。

表4 ACI患者預(yù)后不良的多元線性回歸分析

3 討論

CD147是高糖基化的跨膜蛋白，其可溶形式sCD147可刺激單核細(xì)胞內(nèi)核因子-κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）活化，參與炎癥反應(yīng)[7]。鄭海建等[8]的研究結(jié)果顯示，sCD147是老年動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[比值比（odds ratio，OR）=0.114]。郭均濤等[9]發(fā)現(xiàn)，隨著粥樣斑塊穩(wěn)定性的下降，sCD147水平逐漸升高，因此sCD147可作為判斷粥樣斑塊性質(zhì)的指標(biāo)，與本研究結(jié)果一致。sCD147可增加細(xì)胞金屬蛋白酶含量，誘導(dǎo)血管壁基底膜與細(xì)胞外基質(zhì)降解，并利用NF-κB依賴形式，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞異常增殖，上調(diào)炎癥因子表達(dá)，強(qiáng)化巨噬細(xì)胞遷移能力，導(dǎo)致暴露在內(nèi)皮下的纖維帽溶解、淺表糜爛，從而提高斑塊易損性，促使斑塊破裂，進(jìn)一步加重ACI病情[10]。因此，抑制CD147表達(dá)或能達(dá)到延緩動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程、防止粥樣斑塊破裂、緩解病情的目的。本研究多元線性回歸分析結(jié)果顯示，血清sCD147與ACI預(yù)后不良顯著相關(guān)（偏回歸系數(shù)為0.584，P<0.05）。提示血清sCD147表達(dá)升高可能會(huì)增加ACI患者預(yù)后不良的風(fēng)險(xiǎn)，sCD147或可作為ACI預(yù)后潛在的預(yù)測(cè)標(biāo)志物。

sCD40L可使膜上CD40分子交聯(lián)，調(diào)控細(xì)胞間黏附分子表達(dá)，促使單核細(xì)胞及上皮細(xì)胞合成、釋放大量炎癥因子和促凝物質(zhì)[11-12]。本研究結(jié)果顯示，預(yù)后不良的ACI患者血清sCD40L水平顯著升高，并與頸動(dòng)脈粥樣斑塊類型、NIHSS評(píng)分密切相關(guān)，與文獻(xiàn)報(bào)道[13-14]一致。ACI發(fā)生會(huì)導(dǎo)致血清sCD40L水平迅速升高，而在長(zhǎng)期慢性炎癥反應(yīng)過(guò)程中，sCD40L異常高表達(dá)可引起血管內(nèi)壁炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，誘導(dǎo)粥樣斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞向泡沫細(xì)胞轉(zhuǎn)化，進(jìn)而釋放大量活性物質(zhì)，導(dǎo)致纖維帽變薄，刺激CD40/CD40L通路表達(dá)，損傷內(nèi)皮細(xì)胞功能，提高頸動(dòng)脈粥樣斑塊易損性，促進(jìn)頸動(dòng)脈不穩(wěn)定斑塊的形成，影響血流動(dòng)力學(xué)，致使腦血管缺血缺氧，加重神經(jīng)功能損傷程度，導(dǎo)致預(yù)后不良[15]。由此可見(jiàn)，血清sCD40L有望作為判斷頸動(dòng)脈粥樣斑塊類型、評(píng)估病情嚴(yán)重程度、預(yù)測(cè)預(yù)后的潛在生物學(xué)標(biāo)志物。

miR-21表達(dá)異?？赡軙?huì)損傷新生血管內(nèi)皮，提高心血管事件發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，因此可作為診斷和監(jiān)測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)心血管疾病的生物標(biāo)志物[16]。SUN等[17]的研究結(jié)果顯示，miR-21可能在腦卒中發(fā)展中發(fā)揮重要作用，可能是缺血性腦卒中療效評(píng)估的重要分子指標(biāo)。還有研究結(jié)果顯示，ACI患者血清miR-21表達(dá)升高與疾病嚴(yán)重程度有關(guān)，或可作為判斷腦損傷嚴(yán)重程度的潛在標(biāo)志物[18]。本研究Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清miR-21與ACI患者頸動(dòng)脈斑塊類型、NIHSS評(píng)分呈正相關(guān)（P<0.05）。這可能是由于血清miR-21可調(diào)控血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞異常增殖，參與了頸動(dòng)脈粥樣斑塊的發(fā)生、發(fā)展。由此可見(jiàn)，血清miR-21對(duì)ACI患者頸動(dòng)脈粥樣斑塊類型的判斷、病情嚴(yán)重程度的評(píng)估均有一定的價(jià)值。但王磊等[19]的研究結(jié)果顯示，急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者血清miR-21表達(dá)下調(diào)，可作為評(píng)估病情嚴(yán)重程度的標(biāo)志物，與本研究結(jié)果不同，可能與研究對(duì)象不同有關(guān)。本研究多元線性回歸分析結(jié)果顯示，血清sCD147、sCD40L、miR-21與ACI預(yù)后不良（mRS評(píng)分）顯著相關(guān)，提示這3項(xiàng)指標(biāo)對(duì)ACI預(yù)后評(píng)估有一定的價(jià)值。

綜上可知，血清sCD147、sCD40L、miR-21與ACI患者頸動(dòng)脈粥樣斑塊類型及預(yù)后均有關(guān)。但本研究樣本量較小，且未研究sCD147、sCD40L、miR-21在ACI預(yù)后評(píng)估中協(xié)同作用的機(jī)制，這有待擴(kuò)大樣本量后進(jìn)一步分析。