卵巢癌組織中SIRT-1、CD44的表達(dá)及臨床意義

劉 蓉， 王德剛

（利川市人民醫(yī)院婦科，湖北 利川 445400）

卵巢癌是女性常見的惡性腫瘤之一，早期無特異性癥狀，其發(fā)病率、病死率分別居女性惡性腫瘤的第3位、第1位，有效評估卵巢癌病情對指導(dǎo)治療具有重要的臨床意義[1]。有研究結(jié)果顯示，沉默信息調(diào)節(jié)因子1（silence information regulator-1，SIRT-1）是一種與細(xì)胞代謝、增殖、凋亡等有關(guān)的蛋白脫乙?；福诙喾N腫瘤中呈高表達(dá)狀態(tài)[2]。CD44是一種跨膜糖蛋白，可參與細(xì)胞生長、分化、遷移等生物學(xué)行為，其表達(dá)與多種腫瘤發(fā)生有關(guān)[3]。目前，關(guān)于SIRT-1、CD44在卵巢癌組織中的表達(dá)及其與病情關(guān)系的研究較少。為此，本研究擬分析乳腺癌組織SIRT-1、CD44表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2018年1月—2020年1月利川市人民醫(yī)院確診的卵巢癌患者116例，年齡（55.93±8.35）歲，腫瘤直徑為（3.87±0.69）cm，其中漿液型78例、黏液型38例，組織學(xué)分級G1級68例、G2～G3級48例，國際婦產(chǎn)科聯(lián)合會(huì)（the International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期Ⅰ～Ⅱ期62例、Ⅲ～Ⅳ期54例，浸潤度T1～T2期70例、T3～T4期46例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者50例、無轉(zhuǎn)移者66例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）病理學(xué)檢查確診為卵巢癌；（2）無胃、肝、肺等其他臟器的原發(fā)性腫瘤；（3）病理學(xué)檢查前無免疫、化療、放療等治療史；（4）簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡<18歲；（2）有精神病病史；（3）臨床病理或隨訪資料缺失；（4）有心、肝、腎等臟器的嚴(yán)重疾病；（5）孕產(chǎn)婦或哺乳期女性。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑 鼠抗人SIRT-1抗體（美國eBioscience 公司），兔抗人CD44單克隆抗體及二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司），Envision兩步法免疫組化試劑盒（美國GeneTech公司），辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗（北京博奧森生物技術(shù)有限公司）。

1.2.2 免疫組化檢測 取卵巢癌組織及切緣陰性>1 cm的癌旁組織，以10%甲醛固定、梯度酒精脫水、石蠟包埋后，蒸餾水漂洗5 min，連續(xù)4 μm切片，行熱修復(fù)后于37 ℃恒溫箱中孵育30 min，封閉后滴加一抗（SIRT-1抗體、CD44抗體，1∶100稀釋），4 ℃過夜（12 h），磷酸鹽緩沖液（phosphate-buffered saline，PBS）洗片，加二抗，室溫封閉30 min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染3 min，脫水、返藍(lán)、封固后采用BX51型光學(xué)顯微鏡（日本奧林巴斯公司）閱片。嚴(yán)格按試劑盒說明書要求進(jìn)行操作。

1.3 結(jié)果評估

由2名病理科醫(yī)師采用盲法閱片。CD44以細(xì)胞膜出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽性，SIRT-1以細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽性。隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野（×400）進(jìn)行評估。以陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度（無色為0分、淡黃色為1分、黃色為2分、棕黃色為3分）與百分率（<5%為0分、5%～25%為1分、26%～50%為2分、51%～75%為3分、>75%為4分）積分之和≥4分為陽性表達(dá)、≤3分為陰性表達(dá)[4-5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以例或率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Spearman等級相關(guān)評估SIRT-1與CD44的相關(guān)性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 卵巢癌患者癌組織與癌旁組織中SIRT-1、CD44表達(dá)陽性率的比較

癌組織SIRT-1、CD44表達(dá)陽性率分別為62.07%（72/116）、68.97%（80/116），均顯著高于癌旁組織[18.97%（22/116）、20.69%（24/116）]（P<0.05），見表1。SIRT-1、CD44陽性表達(dá)見圖1、圖2。

表1 卵巢癌患者組織中SIRT-1、CD44陽性表達(dá)比較

圖1 癌組織及癌旁組織SIRT-1、CD44陽性表達(dá)情況（免疫組化染色，×400）

圖2 癌組織及癌旁組織SIRT-1和CD44陽性表達(dá)情況（蘇木精-伊紅染色，×400）

2.2 卵巢癌患者癌組織SIRT-1、CD44表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

組織學(xué)分級G1期、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、浸潤度T3～T4期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者癌組織SIRT-1、CD44陽性率分別高于G2～G3期、Ⅰ～Ⅱ期、T1～T2期和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者（P<0.05），不同年齡、病理類型和腫瘤直徑患者SIRT-1、CD44陽性率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

表2 不同臨床病理特征卵巢癌患者癌組織中SIRT-1、CD44陽性表達(dá)的比較

2.3 癌組織SIRT-1表達(dá)與CD44表達(dá)的相關(guān)性

Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果顯示，卵巢癌組織SIRT-1表達(dá)與CD44表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.721，P<0.001）。見表3、圖3。

表3 卵巢癌組織中SIRT-1與CD44表達(dá)的關(guān)系

圖3 卵巢癌組織中SIRT-1表達(dá)與CD44表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

卵巢癌的發(fā)病機(jī)制尚不明確，普遍認(rèn)為主要與遺傳、環(huán)境、生活和飲食習(xí)慣等有關(guān)。盡管手術(shù)、放療、化療、內(nèi)分泌、免疫等治療方法不斷改進(jìn)，但因40%～70%的卵巢癌患者被確診時(shí)已處于中晚期，預(yù)后較差[6-7]。有研究結(jié)果顯示，卵巢癌細(xì)胞異常增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為是一個(gè)多步驟、多因素參與的連續(xù)過程，與多種細(xì)胞因子表達(dá)異常有關(guān)，提示檢測相關(guān)因子表達(dá)對評估患者病情有重要的臨床價(jià)值[8]。

本研究結(jié)果顯示，卵巢癌組織中SIRT-1、CD44陽性率顯著高于癌旁組織（P<0.05），表明SIRT-1、CD44與卵巢癌發(fā)生有關(guān)，與WANG等[9]和侯小滿等[10]的研究結(jié)果一致。SIRT-1是Sirtuins家族成員之一，其依賴于煙堿胺腺嘌呤二核苷酸發(fā)揮調(diào)控細(xì)胞代謝、分化、增殖、凋亡、DNA損傷修復(fù)等作用[11]。有研究結(jié)果顯示，SIRT-1在胃癌中呈高表達(dá)，主要通過調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的能量代謝、增殖、凋亡等方式促進(jìn)胃癌的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移[12]。

腫瘤干細(xì)胞學(xué)說是一個(gè)腫瘤新理論，認(rèn)為在腫瘤實(shí)質(zhì)中存在極少的具有干細(xì)胞特性的腫瘤細(xì)胞，具有自我更新、高致瘤性、耐藥性的特點(diǎn)，也是腫瘤發(fā)生與惡化的根源[13]。CD44是黏附分子家族成員，也是分離和鑒定腫瘤干細(xì)胞的表面標(biāo)記物，其通過與透明質(zhì)酸的特異性結(jié)合可介導(dǎo)細(xì)胞間或細(xì)胞與基質(zhì)間的特異性黏附，并可調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞歸巢、轉(zhuǎn)移等，在促進(jìn)乳腺癌、腸癌等惡性腫瘤的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移中具有重要的作用[14-15]。在卵巢癌發(fā)生過程中，可能伴隨著SIRT-1和CD44基因表達(dá)的激活，SIRT-1高表達(dá)可能會(huì)改變卵巢癌細(xì)胞的能量代謝、增殖、凋亡等生物學(xué)過程，而CD44的高表達(dá)可能會(huì)刺激卵巢腫瘤干細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)卵巢細(xì)胞增殖、分化等生物學(xué)功能的改變，促使卵巢細(xì)胞發(fā)生癌變[16-17]。本研究結(jié)果顯示，組織學(xué)分級G1期、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、浸潤度T3～T4期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者癌組織SIRT-1、CD44陽性率分別高于G2～G3期、Ⅰ～Ⅱ期、T1～T2期和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者（P<0.05），不同年齡、病理類型和腫瘤直徑患者SIRT-1、CD44陽性率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。表明SIRT-1、CD44與卵巢癌生長、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為有關(guān)。原因可能是SIRT-1、CD44介導(dǎo)了卵巢癌的病情進(jìn)展，SIRT-1表達(dá)升高可能會(huì)加快卵巢癌細(xì)胞的能量代謝、增殖，抑制其凋亡；CD44表達(dá)升高可能會(huì)增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞增殖、分化的能力，從而促進(jìn)卵巢癌的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移。

本研究Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果顯示，卵巢癌組織SIRT-1表達(dá)與CD44表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.721，P<0.001）。提示SIRT-1、CD44在促進(jìn)卵巢癌進(jìn)展中可能存在協(xié)同作用，但二者相互作用的具體機(jī)制尚不明確。

本研究的不足之處在于樣本量較小，結(jié)論尚需大樣本量的臨床研究加以驗(yàn)證。另外，SIRT-1、CD44在卵巢癌中的作用機(jī)制尚需進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，SIRT-1、CD44與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，二者可能共同促進(jìn)了卵巢癌的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移。SIRT-1、CD44表達(dá)陽性提示患者病情可能較嚴(yán)重，應(yīng)盡早采取相應(yīng)的干預(yù)措施，以改善患者預(yù)后。SIRT-1、CD44表達(dá)或可作為評估卵巢癌患者病情的標(biāo)志物。