濁度儀法檢測(cè)注射用頭孢唑林鈉溶液的澄清度

于曉娜，劉瑩，時(shí)佳靜，焦云飛，楊軒，李敏，楊夢(mèng)德，表亞囡

（1.華北制藥河北華民藥業(yè)有限責(zé)任公司，石家莊 052165；2.抗生素酶催化與結(jié)晶技術(shù)國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室，石家莊 052165；3.河北省頭孢類藥物制備技術(shù)創(chuàng)新中心，石家莊 052165）

頭孢唑林鈉屬于第一代頭孢菌素類抗生素，具有殺菌能力強(qiáng)、毒性低的特點(diǎn)，對(duì)革蘭氏陽性球菌具有良好的抗菌活性。有研究表明注射用頭孢唑林鈉溶液的澄清度與細(xì)胞毒性有明顯的相關(guān)性[1]，因此將該檢測(cè)項(xiàng)作為注射用頭孢唑林鈉的主要質(zhì)量控制項(xiàng)目。

《中國(guó)藥典》2020年版四部通則0902澄清度檢查法[2]及《歐洲藥典》10.0溶液的澄清度[3]均收載了目視法與濁度儀法，現(xiàn)多采用目視法，若增加濁度儀法，可對(duì)目視法無法判斷的樣品提供補(bǔ)充檢測(cè)方法。其中儀器法常有三種類型，透射光式、散射光式和透射光-散射光比較測(cè)量模式（比率濁度模式）。采用散射光式進(jìn)行測(cè)定時(shí)，中國(guó)藥典報(bào)道其僅適用于無色供試品溶液的澄清度測(cè)定，同時(shí)也有報(bào)道稱濁度儀無法消除有色溶液顏色對(duì)濁度的干擾[4]。因注射用頭孢唑林鈉溶液有顏色，因此需選擇能消除顏色影響的濁度儀。

有文獻(xiàn)報(bào)道采用哈希濁度儀在860 nm紅外LED光源檢測(cè)澄清度可不受溶液的顏色影響[5]。經(jīng)咨詢廠家同時(shí)結(jié)合文獻(xiàn)[6-7]報(bào)道選取TL2310型號(hào)濁度儀對(duì)注射用頭孢唑林鈉的溶液澄清度進(jìn)行方法建立，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。

1 儀器與試劑

儀器：TL2310型臺(tái)式濁度計(jì)，（860±30）nm下的發(fā)光二極管（LED），5 mL比濁管，美國(guó)哈希試劑：注射用頭孢唑林鈉（批號(hào)分別為190801、190802、190803、190804、190805、190806）；硫 酸 肼（天津光復(fù)）、烏洛托品（天津光復(fù)）；純化水（自制）、2NTU二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)濁度校準(zhǔn)液（哈希）；氯化鈷比色液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（北京中科二環(huán)科技）、重鉻酸鉀比色液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（北京中科二環(huán)科技）、硫酸銅比色液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（北京中科二環(huán)科技）。

2 測(cè)定方法與結(jié)果

2.1 測(cè)定步驟

取純化水及2NTU二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)濁度校準(zhǔn)液進(jìn)行儀器校準(zhǔn)，將供試品溶液緩慢倒入比濁管中，避免產(chǎn)生氣泡，測(cè)得濁度值。

2.2 溶液的配制

2.2.1 空白溶液：純化水

2.2.2 供試品溶液

取本品，按標(biāo)示量分別加水制成每1 mL中含0.1 g的溶液，立即測(cè)定。

2.3 專屬性試驗(yàn)

因注射用頭孢唑林鈉溶液為黃色或黃綠色，因此需考察顏色對(duì)濁度的影響。分別取氯化鈷比色液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、重鉻酸鉀比色液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、硫酸銅比色液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)按照中國(guó)藥典2020年版四部通則0901溶液顏色檢查法[8]配制黃色及黃綠色標(biāo)準(zhǔn)貯備液，同時(shí)配制0.5號(hào)～10號(hào)黃色及黃綠色標(biāo)準(zhǔn)比色液取樣檢測(cè)。結(jié)果見表1，結(jié)果顯示，各個(gè)比色液均與水的濁度值接近，因此溶液的顏色不會(huì)干擾測(cè)定。

2.4 檢測(cè)限和定量限試驗(yàn)

取純化水平行測(cè)定11次，3σ/k為本方法檢測(cè)限，10σ/k為本方法定量限，σ為11次測(cè)定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，k為線性的斜率。試驗(yàn)結(jié)果見表2，結(jié)果顯示本方法的檢測(cè)限為濁度標(biāo)準(zhǔn)原液的0.01%，定量限為濁度標(biāo)準(zhǔn)原液的0.03%，即可測(cè)定至與水一樣的澄清度。

2.5 線性試驗(yàn)

分別取硫酸肼及烏洛托品按照中國(guó)藥典2020年版四部通則0902澄清度檢查法制備0.5號(hào)～4號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液，取樣檢測(cè)。以濁度標(biāo)準(zhǔn)液的濃度為橫坐標(biāo)（X），濁度值為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸分析，試驗(yàn)結(jié)果見圖1。結(jié)果顯示，各濁度標(biāo)準(zhǔn)液與濁度值線性相關(guān)為y= 38.155x+ 0.5627，系數(shù)大于0.999，線性相關(guān)性良好。

2.6 精密度試驗(yàn)

取供試品溶液，重復(fù)測(cè)定6次，結(jié)果顯示，6次溶液的濁度值的RSD值為1.8%，小于10.0%，因此本方法儀器精密度良好；平行配制6份供試品溶液，立即測(cè)定，結(jié)果顯示，6份溶液的濁度值的RSD值為8.2%，小于10.0%，因此本方法重復(fù)性良好；取重復(fù)性溶液分別于不同天進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示，12份溶液的濁度值的RSD值為10.4%，小于20.0%，因此本方法中間精密度良好。

2.7 回收率試驗(yàn)

0.5號(hào)濁度加標(biāo)溶液：取本品1.0 g，加入適量純化水轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加入濁度標(biāo)準(zhǔn)原液0.25 mL，用純化水稀釋至10 mL，平行配制3份；1號(hào)濁度加標(biāo)溶液：取本品1.0 g，加入適量純化水轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加入濁度標(biāo)準(zhǔn)原液0.5 mL，用純化水稀釋至10 mL，平行配制3份；2號(hào)濁度加標(biāo)溶液：取本品1.0 g，加入適量純化水轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加入濁度標(biāo)準(zhǔn)原液1 mL，用純化水稀釋至10 mL，平行配制3份。

供試品溶液：按“2.2.2”方法配制，平行配制2份。

分別取11份溶液立即進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示，各個(gè)濁度標(biāo)準(zhǔn)液的回收率在70%～125%范圍內(nèi)，9份回收率溶液的RSD值的平均值為4.0%，小于15%，因此本方法準(zhǔn)確度較好。

2.8 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液室溫放置0 min、10 min，分別于每個(gè)點(diǎn)取樣測(cè)定濁度值，測(cè)定結(jié)果顯示10 min內(nèi)濁度值波動(dòng)超0.1 NTU，因此本品應(yīng)立即測(cè)定。

2.9 耐用性試驗(yàn)

分別配制（0.1±0.01）g/mL供試品溶液，測(cè)定濁度值。測(cè)定結(jié)果見表3，結(jié)果顯示供試品溶液濃度波動(dòng)0.01 g/mL，濁度值波動(dòng)0.02 NTU，小于0.1 NTU，因此本方法在供試品濃度波動(dòng)0.01 g/mL范圍內(nèi)耐用性良好。

表3 耐用性結(jié)果Tab.3 The result of durability

2.10 樣品測(cè)定

按“2.2.2”方法配制供試品溶液，同時(shí)取“2.4”中1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表4，由結(jié)果可知，6批樣品均滿足中國(guó)藥典限度要求，即小于1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液濁度值。

表4 樣品測(cè)定結(jié)果Tab.4 Sample determination results

3 結(jié)束語

頭孢類抗生素的溶液澄清度檢測(cè)項(xiàng)為質(zhì)量控制的關(guān)鍵項(xiàng)，該類溶液多為有色溶液，目測(cè)法判定溶液的澄清度受顏色的影響較大，因此需開發(fā)儀器法測(cè)定溶液的澄清度作為補(bǔ)充方法。目前中國(guó)藥典認(rèn)為儀器法只可檢測(cè)無色溶液，本文查詢文獻(xiàn)同時(shí)結(jié)合實(shí)際試驗(yàn)結(jié)果建立一種可用于檢測(cè)有色溶液的澄清度的儀器方法，同時(shí)對(duì)該方法進(jìn)行全面的方法學(xué)驗(yàn)證，結(jié)果證明，該方法可用于檢測(cè)有色溶液的澄清度，可作為目測(cè)法的補(bǔ)充檢測(cè)方法。