基于“既病防變”理論研究消潰湯調(diào)控IL-6/STAT3信號(hào)通路抑制潰瘍性結(jié)腸炎癌變的作用機(jī)制*

王芳增，盧玉陽(yáng)，楊會(huì)舉，劉佃溫

(1.濮陽(yáng)市第三人民醫(yī)院，河南 濮陽(yáng) 457000；2.河南中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，河南 鄭州 450046；3.河南中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院肛腸科，河南 鄭州 450008)

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)是一種病因復(fù)雜、機(jī)制不明、以結(jié)直腸反復(fù)炎癥性病變?yōu)橹鞯募膊1]。其臨床表現(xiàn)以腹瀉、腹痛、黏液膿血便為主，腸外癥狀為輔，反復(fù)發(fā)作，病程遷延，伴有癌變的風(fēng)險(xiǎn)[2-3]。潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病率有逐年增高的趨勢(shì)，在潰瘍性結(jié)腸炎中結(jié)腸癌的發(fā)病率為3%～5%。隨著患病時(shí)間的延長(zhǎng)，發(fā)生結(jié)腸癌的危險(xiǎn)性也逐年增加，≥10年者的發(fā)生率是普通人的10倍以上[4]。《素問(wèn)·四氣調(diào)神大論篇》曰：“圣人不治已病治未病，不治已亂治未亂。”意即未病先防與既病防變：在未患病時(shí)采取有效措施，扶助正氣，去除病因，使疾病不能顯現(xiàn)；患病之后，采取有效措施進(jìn)行早期診斷和治療，截?cái)嗉膊〉陌l(fā)展和傳變，并阻止疾病預(yù)后復(fù)發(fā)，鞏固療效[5]。消潰湯是劉佃溫教授自擬方。本課題組經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期臨床觀察發(fā)現(xiàn)，消潰湯治療UC療效確切，能明顯改善患者臨床癥狀；同時(shí)前期研究[6]表明，消潰湯能阻斷大鼠UC病程進(jìn)展，修復(fù)受損黏膜，改善癥狀。方中白頭翁入大腸經(jīng)，清熱解毒，涼血止痢，為君藥。白及收斂止血，消腫生肌，為臣藥。佐以石榴皮、五倍子澀腸止瀉，收斂止血；黃連、苦參清大腸之濕熱，祛大腸之濁毒。白蒺藜活血祛風(fēng)使大腸得以濡養(yǎng)，為使藥。全方共奏清熱解毒滲濕、澀腸止血之效。本研究通過(guò)建立大鼠UC模型，基于“既病防變”理論觀察消潰湯對(duì)于白細(xì)胞介素(IL)-6/轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT3)信號(hào)通路的調(diào)控作用，探究其抑制潰瘍性結(jié)腸炎癌變的相關(guān)機(jī)制，旨在為UC的臨床治療提供相關(guān)理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng) 物

4～5周齡SD大鼠60只，雄性，體質(zhì)量(200±20)g，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證編號(hào)為SCXK(豫)2017-0001，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)41003100001868。飼養(yǎng)于河南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，實(shí)驗(yàn)室使用許可證編號(hào)SYXK(豫)2010-0001。環(huán)境相對(duì)濕度40%～60%，室溫20～22 ℃，每日光照12 h。飼養(yǎng)在塑料籠內(nèi)，每籠大鼠不多于3只，自由飲水、攝食，常規(guī)飼養(yǎng)7 d以適應(yīng)環(huán)境。

1.2 藥品、試劑與儀器

消潰湯藥物組成：白頭翁20 g，石榴皮15 g，白及20 g，五倍子15 g，白蒺藜10 g，黃連15 g，苦參15 g。藥材由河南中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院中藥房提供。參照徐叔云教授主編的《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》大鼠和人之間按照體表面積折算出來(lái)的等效劑量比值換算，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的治療組按成人劑量的7倍為有效劑量。成人體質(zhì)量以60 kg計(jì)算，臨床用藥量為110 g/d，給藥劑量為1.83 g/kg；大鼠給藥量為10倍計(jì)算，即給藥劑量為18.3 g/kg。煎煮方法：先將以上藥物置于干凈的玻璃杯中，加入蒸餾水500 mL浸泡 2 h；于100 ℃煎煮30 min，過(guò)濾藥渣得濾液約300 mL；將藥渣再加入蒸餾水400 mL，同法煎煮，得濾液約300 mL；合并兩次濾液濃縮成60 mL(生藥含量1.83 g/mL)，置4 °C冰箱保存，備用。美沙拉嗪緩釋顆粒劑，愛的發(fā)制藥公司產(chǎn)品，注冊(cè)證號(hào)H20100063，0.5 g/袋，用生理鹽水配制成0.1 g/mL的混懸液，于4 ℃冰箱中備用。以成人每天4 g臨床用藥量、體質(zhì)量60 kg計(jì)，用藥劑量為0.07 g/kg；大鼠給藥劑量按成人臨床用量的10倍計(jì)算，即0.7g/kg體質(zhì)量。Trizol，賽默飛世爾公司產(chǎn)品，批號(hào)15596-026；HiScript Reverse Transcriptase(RNaseH)、5×HiScript Buffer、50×ROX Reference Dye2、SYBR Green Master Mix，均為諾唯贊公司產(chǎn)品，批號(hào)為101-01/02、101-01/02、111-02、111-02；ddH2O(DNase/RNase Free)，復(fù)能基因公司產(chǎn)品，批號(hào)C1D230A；Ribonuclease Inhibitor，北京全式金公司產(chǎn)品，批號(hào)LOT#J11202；dNTP，天根生化科技公司產(chǎn)品，批號(hào)LOT#P4325；Taq Plus DNA Polymerase和DL2000 DNA Marker，均為天根生化科技公司產(chǎn)品，批號(hào)T105-01、MD114-02；Random Primer(N6)，北京艾德萊生物科技公司產(chǎn)品，批號(hào)271830AH；三硝基苯磺酸，西格瑪奧德里奇公司產(chǎn)品，批號(hào)P2297；大鼠IL-6 ELISA試劑盒、大鼠IL-10 ELISA試劑盒，均為武漢基因美生物科技公司產(chǎn)品，批號(hào)13314128222、13814124222。E200型光學(xué)顯微鏡，日本尼康公司產(chǎn)品；QuantStudio6實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司產(chǎn)品；Nano-100型微量分光光度計(jì)，杭州奧盛儀器有限公司產(chǎn)品；EDC-810型PCR儀，東勝創(chuàng)新生物科技有限公司產(chǎn)品；JY02S型紫外分析儀，北京君意東方電泳設(shè)備有限公司產(chǎn)品；KD-BMII型石蠟切片機(jī)，德國(guó)徠卡產(chǎn)品；H1650-W離心機(jī)，德國(guó)艾本德公司產(chǎn)品。

1.3 模型的建立與分組

隨機(jī)選取15只大鼠作為正常組，不予造模；將剩余45只大鼠采用TNBS灌腸方法制備UC模型[7]。造模后每日觀察記錄大鼠飲食、體質(zhì)量、活動(dòng)量等一般情況，詳細(xì)記錄其大便性狀及肛周污物情況。參照參考文獻(xiàn)[8]，擬定UC模型大鼠診斷標(biāo)準(zhǔn)：①便溏或伴有膿血；②體質(zhì)量下降，食欲不振；③精神萎靡，毛發(fā)枯萎；④弓背、活動(dòng)減少；⑤腸黏膜組織病理學(xué)檢查見黏膜層及黏膜下層炎癥浸潤(rùn)、潰瘍形成。具備上述條件則表明造模成功。造模期間死亡4只，考慮死因?yàn)樗幬锒拘圆荒褪堋? d后造模結(jié)束，將宏觀癥狀不符合標(biāo)準(zhǔn)的2只排除[9]。在余下39只中隨機(jī)取3只處死，解剖結(jié)腸組織確定造模成功。將剩余的36只大鼠隨機(jī)分為模型組、消潰湯組、美沙拉嗪組3組，每組12只。

1.4 給藥方法

造模成功 24 h 后開始給藥。消潰湯組給予消潰湯煎劑18.3 g/kg體質(zhì)量，美沙拉嗪組給予美沙拉嗪混懸液0.7 g/kg體質(zhì)量，模型組及正常組灌胃生理鹽水，灌胃容積均為2 mL，1次/d，持續(xù)14 d。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)

1.5.1 樣本采集

末次給藥后24 h，以100 g/L水合氯醛按3 μL/g體質(zhì)量行腹腔注射麻醉，取材。①腹主動(dòng)脈采血5 mL，于肝素抗凝管中靜置5 min，以離心半徑13.5 cm、轉(zhuǎn)速3 000 r/min 離心15 min，取血清置入EP管，凍存-80 ℃冰箱，用于ELISA檢測(cè)IL-10、IL-6。②采血后,取肛門以上2～12 cm腸段，4 ℃生理鹽水清洗，濾紙吸干；剪開腸管，肉眼觀察腸黏膜并記錄結(jié)果。此外，取一塊約1 cm病變結(jié)腸，40 g/L多聚甲醛固定，脫水、透明后石蠟包埋，制成4 μm切片，顯微鏡下觀察組織學(xué)變化。③取1 g新鮮結(jié)腸組織于-80 ℃冰箱中冰凍保存，用于實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)測(cè)定IL-6 mRNA、Janus激酶2(JAK2)mRNA、STAT3 mRNA和缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)mRNA相對(duì)表達(dá)量。

1.5.2 一般情況

每天灌胃前觀察大鼠的活動(dòng)、飲食飲水、毛發(fā)光澤、精神狀態(tài)。

1.5.3 疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)評(píng)分

給藥的第1、14天稱量體質(zhì)量，觀察大便性狀，檢測(cè)潛血情況，進(jìn)行DAI評(píng)分[10]。計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)：體質(zhì)量無(wú)下降、下降1%～15%、下降>15%各計(jì)0、2、4分；大便正常、半稀便、稀便各計(jì)0、2、4分；大便潛血陰性、潛血陽(yáng)性、肉眼血便各計(jì)0、2、4分。DAI評(píng)分=體質(zhì)量下降評(píng)分+大便性狀評(píng)分+便血評(píng)分

1.5.4 結(jié)腸黏膜損傷指數(shù)(CMDI)評(píng)分

取整個(gè)結(jié)腸組織，剪開標(biāo)本、沖洗大便，腸黏膜層向上展開，平鋪在濾紙上，用大頭針兩端固定，浸沒在生理鹽水中，肉眼觀察黏膜損傷程度。按以下標(biāo)準(zhǔn)[11]進(jìn)行評(píng)分。無(wú)損傷，計(jì)0分；局部充血、水腫但未出現(xiàn)潰瘍，計(jì)1分；有潰瘍，但沒有明顯炎癥，計(jì)2分；有潰瘍，僅有一處出現(xiàn)炎癥，計(jì)3分；有多處潰瘍和炎癥，潰瘍大小l cm，計(jì)5分。

1.5.5 結(jié)腸組織損傷指數(shù)(TDI)評(píng)分

采用蘇木素-伊紅(HE)染色法觀察大鼠結(jié)腸組織病理變化。取石蠟切片，60 ℃烤片2h，常規(guī)脫蠟、水化，置于蘇木素染液內(nèi)，鹽酸乙醇進(jìn)行分化，流水沖洗，采用伊紅染液處理2 min復(fù)染，蒸餾水沖洗充分去除染液，脫水，透明，封片，光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照。采用以下標(biāo)準(zhǔn)[12]進(jìn)行相關(guān)評(píng)分：正常黏膜，計(jì)0分；基底隱窩缺損1/3，計(jì)1分；基底隱窩缺損2/3，計(jì)2分；隱窩缺失，僅余表面上皮，伴炎細(xì)胞浸潤(rùn)，計(jì)3分；黏膜糜爛、潰瘍伴大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，計(jì)4分。

1.5.6 血清IL-10、IL-6水平

按照試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)。

1.5.7 結(jié)腸IL-6、JAK2、STAT3、HIF-1α mRNA水平

采用Trizol法提取RNA，將干燥RNA沉淀溶于20 μL DEPC水中。利用分光光度計(jì)檢驗(yàn)RNA純度及濃度是否合格。將總RNA放于-80 ℃冰箱內(nèi)保存以備用。

①反轉(zhuǎn)錄。反應(yīng)體系總體積20 μL：2 μL RNA，1 μL Oligo(dT)Primer，4 μL dNTP，4 μL 5×Hiscript Buffer，1 μL Hiscript Reverse Transcriptase，0.5 μL Ribonuclease Inhibitor，用無(wú)核糖核酸酶的去離子水補(bǔ)足至20 μL。反應(yīng)條件設(shè)置為：25 ℃反應(yīng)5 min，50 ℃反應(yīng)15 min，85 ℃反應(yīng)5 min，4 ℃反應(yīng)10 min。

定量PCR。反應(yīng)體系總體積20 mL,其中4 μL cDNA(已稀釋3倍)，0.4 μL的Forward Primer(10 μmol/L)和0.4 μL Reverse Primer(10 μmol/L)，10 μL SYBR Green Master Mix，0.4 μL 50×ROX Reference Dye 2，4.8 μL ddH2O(Rnasefree)。反應(yīng)條件設(shè)置為：50 ℃ 2 min，95 ℃10 min，95 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，40 個(gè)循環(huán)。運(yùn)用2-△△CT法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。引物由北京博邁德生物技術(shù)有限公司合成。引物序列見表1。

表1 PCR引物序列

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠一般情況對(duì)比

正常組：從實(shí)驗(yàn)開始到結(jié)束，大鼠體質(zhì)量穩(wěn)步増長(zhǎng)，精神狀況良好，毛發(fā)光亮，進(jìn)食水量正常，敏捷活潑，無(wú)便血及黏液，無(wú)腹瀉及黏液膿血便，無(wú)死亡。模型組：造模開始當(dāng)天即出現(xiàn)腹瀉；后逐漸出現(xiàn)黏液膿血便、毛發(fā)欠光澤、活動(dòng)度減少、進(jìn)食量減少、體質(zhì)量下降等表現(xiàn)，肛門周圍沾有污物；2周后大鼠大便次數(shù)進(jìn)一步增多，多呈黏液膿血便，大鼠肛周污物呈暗紅色。灌胃期間大鼠無(wú)死亡。消潰湯組、美沙拉嗪組：造模后表現(xiàn)同模型組。灌胃給藥2周后，大便逐漸正常，精神好轉(zhuǎn)，活動(dòng)量増多，毛發(fā)逐漸光澤，大便成形、無(wú)黏液膿血、無(wú)惡臭，肛周變清潔，飲水量增加，體質(zhì)量回升。

2.2 各組大鼠DAI評(píng)分對(duì)比

給藥第1天，與正常組對(duì)比，模型組、消潰湯組和美沙拉嗪組DAI評(píng)分增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。給藥第14天，與模型組對(duì)比，消潰湯組和美沙拉嗪組的DAI評(píng)分均下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；消潰湯組和美沙拉嗪組之間DAI評(píng)分對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與正常組對(duì)比，其余3組的DAI評(píng)分仍然偏高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 各組大鼠DAI評(píng)分對(duì)比 分，

2.3 各組大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)形態(tài)、CMDI評(píng)分 和TDI評(píng)分對(duì)比

正常組：大鼠結(jié)腸黏膜組織表面光滑完整，未見充血，潰瘍形成；光鏡下腺體分布規(guī)則，可見少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組：大鼠結(jié)腸黏膜表面充血水腫，伴壞死及潰瘍形成，達(dá)結(jié)腸肌層；光鏡下可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肌層結(jié)構(gòu)紊亂，杯狀細(xì)胞減少，隱窩膿腫形成，黏膜損傷指數(shù)顯著增高。消潰湯組和美沙拉嗪組：結(jié)腸黏膜表面潰瘍基本愈合，伴有散在黏膜糜爛點(diǎn)；光鏡下可見中等量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肌層結(jié)構(gòu)較清晰，損傷指數(shù)較模型對(duì)照組均顯著降低。見圖1。

與正常組對(duì)比，模型組CMDI評(píng)分、TDI評(píng)分均增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組對(duì)比，消潰湯組和美沙拉嗪組的CMDI評(píng)分、TDI評(píng)分均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。消潰湯組和美沙拉嗪組之間2個(gè)指標(biāo)對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 各組大鼠CMDI評(píng)分、TDI對(duì)比 分，

2.4 各組大鼠血清IL-6、IL-10水平對(duì)比

與正常組對(duì)比，模型組大鼠血清IL-6升高、IL-10降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組對(duì)比,消潰湯組和美沙拉嗪組IL-6降低、IL-10增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。消潰湯組和美沙拉嗪組之間2個(gè)指標(biāo)對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表4 各組大鼠血清IL-6、IL-10水平對(duì)比

2.5 各組大鼠結(jié)腸組織IL-6、JAK2、STAT3、HIF-1α mRNA水平對(duì)比

與正常組對(duì)比，模型組、美沙拉嗪組和消潰湯組大鼠結(jié)腸組織中IL-6、JAK2、STAT3、HIF-1α mRNA均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組對(duì)比，消潰湯組和美沙拉嗪組大鼠結(jié)腸組織中的IL-6、JAK2、STAT3、HIF-1α mRNA均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。消潰湯組和美沙拉嗪組之間各指標(biāo)對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表5。

表5 各組大鼠結(jié)腸組織IL-6 mRNA、JAK2 mRNA、STAT3 mRNA、HIF-1α mRNA水平對(duì)比

3 討 論

近年來(lái)UC發(fā)病率逐年增高，隨著病程的延長(zhǎng)結(jié)腸癌變的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加[13]。UC是由多種因素引起的，包括遺傳易感性、環(huán)境因素、吸煙、飲食因素、腸道微生物群和免疫系統(tǒng)功能的變化[14]。UC屬中醫(yī)學(xué)“腸澼”“痢疾”“腸風(fēng)”等范疇。濁毒是該病發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵，是UC的病程進(jìn)展中病因和病理的統(tǒng)一。UC病因初為濕盛，濕盛化濁，濁久為痰，濕、濁、痰三者郁久化熱，熱之極為毒，終而形成濁毒[15]。其壅滯臟腑阻礙傳化糟粕的功能，壅滯經(jīng)絡(luò)損傷大腸脂膜血絡(luò)，導(dǎo)致局部氣血郁結(jié)，日久化熱，瘀血化為膿血。消潰湯由白頭翁、白及、石榴皮、五倍子、白蒺藜、黃連、苦參組成，具有清熱解毒、化濁收斂的功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，其組方中各單味藥材具有抗炎、抗腫瘤作用[16-20]。本研究證實(shí)了消潰湯治療UC的有效性。結(jié)果表明，消潰湯具有抑制炎癥反應(yīng)、改善腸道功能及恢復(fù)腸道生理結(jié)構(gòu)的作用。

以往研究[21-22]發(fā)現(xiàn)：炎癥或感染部位是結(jié)腸癌等腫瘤的高發(fā)部位，細(xì)胞突變概率的增加與炎癥環(huán)境相關(guān)；炎癥可通過(guò)破壞機(jī)體免疫，進(jìn)而減弱相關(guān)療法對(duì)癌癥的治療作用。研究[23-24]表明：促炎癥細(xì)胞因子IL-6能通過(guò)STAT3信號(hào)通路誘導(dǎo)相關(guān)基因的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞增殖和凋亡，參與機(jī)體炎癥反應(yīng)；同時(shí)，一定程度阻斷該通路能夠?qū)Π┘?xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移發(fā)揮抑制作用，此種效應(yīng)可能通過(guò)阻斷通路傳導(dǎo)進(jìn)而調(diào)控下游相關(guān)基因表達(dá)實(shí)現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)[25]證明，抗炎藥物能降低各種癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，長(zhǎng)期使用可有效降低結(jié)腸癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)、死亡風(fēng)險(xiǎn)，減小腫瘤體積。由此可推斷，炎癥反應(yīng)對(duì)腫瘤的發(fā)展有一定的促進(jìn)作用。

生理狀態(tài)下，結(jié)腸黏膜的損傷與修復(fù)處于動(dòng)態(tài)平衡之中。當(dāng)黏膜的防御和修復(fù)能力低于損傷因素或炎癥攻擊時(shí)，機(jī)體動(dòng)態(tài)平衡被打破，病理狀態(tài)發(fā)生。IL-6是多效性細(xì)胞因子，在所有炎癥性疾病及癌癥的病理過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[26]。研究表明，其可激活細(xì)胞內(nèi)JAK2/STAT3信號(hào)傳導(dǎo)產(chǎn)生聯(lián)級(jí)反應(yīng)，使炎癥呈瀑布樣爆發(fā)。IL-6與靶細(xì)胞表面的同源受體IL-6R識(shí)別并結(jié)合，進(jìn)一步活化細(xì)胞膜表面糖蛋白130，進(jìn)而激活JAK2，使受體酪氨酸激酶活化，并與STAT3蛋白結(jié)合，STAT3磷酸化形成二聚體，以此種形式轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞核中以誘導(dǎo)受STAT3調(diào)控的基因表達(dá)，進(jìn)一步產(chǎn)生IL-6因子，以及調(diào)控下游蛋白而加重炎癥反應(yīng)[27-29]。HIF-1α是轉(zhuǎn)錄激活因子，對(duì)于腸道黏膜細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)吸收、腸道屏障功能、先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)至關(guān)重要[30]。于傳宗等[31]發(fā)現(xiàn)，野生蒙古口蘑多糖通過(guò)抑制JAK-STAT3和HIF-1α信號(hào)通路發(fā)揮抗炎作用，此進(jìn)一步明確了HIF-1α參與了潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生機(jī)制。

本研究結(jié)果顯示，消潰湯組的血清IL-6水平較模型組降低，IL-10水平升高，表明消潰湯能抑制IL-6分泌并促進(jìn)IL-10的分泌，間接證明消潰湯能提高大鼠機(jī)體內(nèi)單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的功能，減少致炎因子的釋放。炎癥介質(zhì)可分為促炎介質(zhì)和抑炎介質(zhì)兩類，兩者的平衡關(guān)系被打破就會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)[32]。本研究證明消潰湯對(duì)促炎介質(zhì)有抑制作用，對(duì)抑炎介質(zhì)有一定的促進(jìn)作用，調(diào)控相關(guān)因子可能是消潰湯發(fā)揮其治療作用的機(jī)制之一，但消潰湯是由多種藥物配伍而成，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，IL-6、JAK2、STAT3、HIF-1α與潰瘍性結(jié)腸炎具有相關(guān)性；消潰湯通過(guò)抑制IL-6、JAK2、STAT3基因的表達(dá)，從而減輕腸道炎癥反應(yīng)，在治療UC中其機(jī)理可能通過(guò)抑制IL-6/JAK2/STAT3信號(hào)通路來(lái)完成。消潰湯能有效抑制致炎因子IL-6的釋放，降低JAK2/STAT3通路的過(guò)度磷酸化，引起下游基因HIF-1α轉(zhuǎn)錄翻譯水平的降低，削弱炎癥聯(lián)級(jí)反應(yīng)。相關(guān)研究證實(shí)多種腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展、侵襲和轉(zhuǎn)移與JAK/STAT信號(hào)通路過(guò)度激活密切相關(guān)，病理狀態(tài)下HIF-1α過(guò)度激活會(huì)加劇腸道組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)的改變，導(dǎo)致腸道損傷、炎癥和結(jié)腸直腸癌的發(fā)生[33-34]。本研究表明，消潰湯是通過(guò)一系列聯(lián)級(jí)反應(yīng)對(duì)潰瘍創(chuàng)面進(jìn)行治療使之恢復(fù)，并且對(duì)炎癥性腸病的癌變起到抑制作用。

綜上所述，消潰湯治療UC大鼠作用機(jī)制通過(guò)調(diào)節(jié)IL-6/JAK2/STAT3/HIF-1α軸，降低血清IL-6水平和抑制病變組織IL-6 mRNA表達(dá)，從而降低JAK2 mRNA表達(dá)，減少STAT3磷酸化，引起STAT3 mRNA表達(dá)量降低，并通過(guò)HIF-1α靶點(diǎn)抑制其基因表達(dá)，最終起到抗?jié)冃越Y(jié)腸炎作用，且能抑制其癌變。通過(guò)提取中藥有效成分針對(duì)IL-6/JAK2/STAT3/HIF-1α軸中相關(guān)蛋白和酶為靶點(diǎn)用于治療UC可能會(huì)成為未來(lái)研究的方向。然而JAK/STAT信號(hào)通路和其他信號(hào)通路之間的協(xié)同作用還沒有很好的解釋，尚需要進(jìn)一步研究。