Ro52抗體與其他肌炎抗體共陽(yáng)性的相關(guān)性研究

鄭藝明，郝洪軍，劉怡琳，郭 晶，趙亞雯，張 巍，袁 云

(北京大學(xué)第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，北京 100034)

Ro52抗體屬于肌炎相關(guān)性抗體，是炎癥性肌病患者的常見(jiàn)抗體之一，也常見(jiàn)于干燥綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、系統(tǒng)性硬化以及自身免疫性肝炎等其他自身免疫性疾病[1-3]。Ro52蛋白相對(duì)分子質(zhì)量為52×103，含有一個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)域、B-box基序以及N端的卷曲螺旋(coiled-coil)結(jié)構(gòu)，屬于三結(jié)構(gòu)域(tripartite motif-containing, TRIM)蛋白家族成員之一，又稱為TRIM21。Ro52具有泛素蛋白連接酶E3的作用，其抗體的具體致病機(jī)制尚不明確[4]。目前Ro52抗體的檢測(cè)方法主要有酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)和線性免疫印跡檢測(cè)法(line-blot immunoassay，LIA)，而后者具有較高的敏感性及特異性[5]。

Ro52抗體可以和肌炎特異性抗體同時(shí)出現(xiàn)，包括抗合成酶抗體、Mi-2以及抗信號(hào)識(shí)別顆粒(singnal recognition particle, SRP)抗體等，與炎癥性肌病患者的肺間質(zhì)纖維化及其嚴(yán)重程度可能有關(guān)[1]。既往研究發(fā)現(xiàn)，Ro52抗體在炎性肌病患者中的出現(xiàn)率約為28.6%(26.3%～31.2%)，且各種類型炎癥性肌病之間并無(wú)明顯差異[1-2]。Jo-1抗體陽(yáng)性患者比Jo-1抗體陰性患者合并Ro52抗體的陽(yáng)性率更高[3, 6-8]，而是否所有抗合成酶抗體都與Ro52抗體共陽(yáng)性率高、Ro52抗體共陽(yáng)性是否與肌炎抗體滴度有關(guān)等尚不明確。本研究通過(guò)回顧性分析1 509例臨床疑診為炎癥性肌病患者的肌炎抗體檢查結(jié)果，進(jìn)一步探索Ro52抗體同其他肌炎抗體共陽(yáng)性的相關(guān)規(guī)律。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

研究納入自2010年1月至2016年12月臨床疑診為炎癥性肌病、在北京大學(xué)第一醫(yī)院神經(jīng)免疫室行肌炎抗體檢查的1 509例患者，其中男性720例，女性789例(男女比例1 ∶1.1)，平均年齡(43.3±19.9)歲(1～90歲)。

1.2 抗體檢查方法

采用商業(yè)化的LIA方法測(cè)定血清中的11種肌炎IgG抗體(德國(guó)歐蒙生物科技有限公司)，包括7種肌炎特異性抗體[組氨酰-tRNA合成酶(Jo-1)、蘇氨酰-tRNA合成酶(PL-7)、丙氨酰-tRNA合成酶(PL-12)、甘氨酰-tRNA合成酶(EJ)、異亮氨酰-tRNA合成酶(OJ)、SRP以及Mi-2抗體]以及4種肌炎相關(guān)性抗體[抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl 100、PM-Scl 75)、Ku抗體以及Ro52抗體]。按商品說(shuō)明書(shū)操作，將檢測(cè)試劑膜條經(jīng)過(guò)預(yù)處理、血清孵育、用酶標(biāo)記的二抗孵育以及酶底物顯色，最后通過(guò)EUROLineScan軟件掃描記錄譜帶強(qiáng)度(band intensity)。譜帶強(qiáng)度與免疫印跡反應(yīng)線性條帶的灰度值相關(guān)，按照既往研究結(jié)果，譜帶強(qiáng)度大于10代表結(jié)果陽(yáng)性[5, 9]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用Excel軟件錄入原始數(shù)據(jù)，用SPSS 17.0以及Graph Pad PRISM軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及作圖。計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)(百分比)表示，卡方檢驗(yàn)用于比較不同肌炎抗體陽(yáng)性組合并出現(xiàn)Ro52抗體的陽(yáng)性率之間的差異，獨(dú)立樣本組間t檢驗(yàn)用于比較合并Ro52抗體與不合并Ro52抗體兩組之間肌炎抗體譜帶強(qiáng)度之間的差異，Pearson相關(guān)性分析用于分析Ro52抗體譜帶強(qiáng)度同其他肌炎抗體之間譜帶強(qiáng)度之間的相關(guān)性，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

1 509例臨床疑診為炎癥性肌病患者的血清11種肌炎抗體檢查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肌炎抗體總的陽(yáng)性率為32.6%(492/1 509例)，Ro52抗體為本組患者最常見(jiàn)的肌炎抗體，陽(yáng)性率為18.3%(276/1 509例)，抗SRP抗體則為肌炎抗體中第二常見(jiàn)、肌炎特異性抗體中最常見(jiàn)的抗體，陽(yáng)性率為 9.3%(141/1 509例)，見(jiàn)圖1。

表1顯示，276例Ro52抗體陽(yáng)性的患者中有143例(51.8%)合并其他肌炎抗體，其中最常合并SRP抗體(52例，18.8%)，其次為Jo-1抗體(36例，13.0%)。在其他肌炎抗體陽(yáng)性的患者中，除OJ抗體最常合并出現(xiàn)PM-Scl 75抗體以外，最常合并出現(xiàn)的肌炎抗體均為Ro52抗體，共陽(yáng)性率最高出現(xiàn)于EJ抗體陽(yáng)性的患者中(80.0%，12/15例)、最低出現(xiàn)于PM-Scl 75抗體陽(yáng)性的患者中(30.4%，31/102例)。在抗合成酶抗體(包括Jo-1、EJ、OJ、PL-7及PL-12抗體)陽(yáng)性患者中，Ro52抗體的共陽(yáng)性率顯著高于非抗合成酶抗體(包括SRP、Mi-2、Ku、PM-Scl 75、PM-Scl 100抗體)陽(yáng)性組[57.3% (75/131例)vs. 35.2% (119/338例)，χ2=18.916,P<0.001]。在各個(gè)抗合成酶抗體陽(yáng)性組中，Ro52抗體共陽(yáng)性率均高于非抗合成酶抗體組，但OJ抗體陽(yáng)性組和PL-7抗體陽(yáng)性組與非抗合成酶抗體組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 肌炎抗體之間共陽(yáng)性的頻數(shù)及頻率Table 1 The frequency of co-positive of myositis antibodies n (%)

3 討論

本研究對(duì)1 509例臨床疑診為炎癥性肌病患者的血清11種肌炎抗體檢查結(jié)果進(jìn)行了回顧性研究，分析了Ro52抗體和其他肌炎抗體共陽(yáng)性的相關(guān)規(guī)律，證實(shí)Jo-1抗體陽(yáng)性的患者常合并出現(xiàn)Ro52抗體，共陽(yáng)性率高達(dá)59%。既往本中心曾報(bào)道16例Jo-1綜合征患者的臨床病理表現(xiàn)，發(fā)現(xiàn) 31.2%的患者合并Ro52抗體，而既往文獻(xiàn)報(bào)道Jo-1抗體合并Ro52抗體的比例為40%～72%[3, 7, 10-12]，共陽(yáng)性率的不同可能與患者入組標(biāo)準(zhǔn)以及檢測(cè)方法不同有關(guān)。本組患者抗合成酶抗體陽(yáng)性者合并Ro52抗體的比例為 57.3%，顯著高于非抗合成酶抗體組(34.9%)，尤其在EJ抗體組，Ro52抗體共陽(yáng)性率高達(dá)80.0%。國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道，EJ、OJ、PL-7以及PL-12等抗體合并Ro52抗體的比例為33%～100%[7, 12]，提示該現(xiàn)象并非Jo-1抗體獨(dú)有，可能是所有抗合成酶抗體陽(yáng)性患者的共同特點(diǎn)。

Ro52同其他TRIM家族蛋白一樣，具有泛素蛋白酶E3的活性和功能，其作用底物有干擾素調(diào)節(jié)因子3、5、7、8，提示可能因此調(diào)節(jié)干擾素1以及細(xì)胞因子的信號(hào)通路，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)異常。此外，Ro52還作為胞漿內(nèi)免疫球蛋白Fc段受體參與免疫反應(yīng)，以及與細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞氧化應(yīng)激等有關(guān)，但Ro52抗體的具體致病機(jī)制尚不明確[2]。抗合成酶以及Ro52并無(wú)骨骼肌組織特異性，雖同為胞質(zhì)內(nèi)抗體但并無(wú)直接聯(lián)系[8]。

Ro52抗體同其他肌炎抗體共陽(yáng)性的機(jī)制目前也尚不明確，可以肯定的是Ro52抗體共陽(yáng)性并不是肌炎抗體間的交叉反應(yīng)造成的假象[3, 8]。Ro52抗體最常與抗合成酶抗體共陽(yáng)性，提示兩種類型的抗體可能在免疫反應(yīng)的某個(gè)途徑中同時(shí)受累。既往研究多以是否合并Ro52抗體的定性研究為主，本研究采用LIA法，用譜帶強(qiáng)度來(lái)分析，雖精確性欠佳，但譜帶強(qiáng)度基本能反映抗體滴度[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，合并Ro52抗體組肌炎抗體譜帶的強(qiáng)度更高，且SPR抗體譜帶強(qiáng)度與Ro52抗體譜帶強(qiáng)度呈顯著正相關(guān)，提示Ro52抗體的共陽(yáng)性可能與抗體滴度有關(guān)，可能對(duì)Ro52抗體共陽(yáng)性機(jī)制提供研究線索。既往研究也發(fā)現(xiàn)，Ro52抗體高滴度的患者病情更重、進(jìn)展更快[13]，佐證了抗體滴度在發(fā)病機(jī)制中的作用。

本研究因納入所有行肌炎抗體檢查的臨床疑診為炎癥性肌病的患者，故樣本量較大，但因多為門診患者，沒(méi)有詳盡的臨床資料輔助分析，未能進(jìn)一步明確這些患者的最終診斷以及合并Ro52抗體的臨床意義，是本研究的不足。

既往Ro52抗體和Ro60抗體并稱為SS-A/Ro抗體，隨后的研究發(fā)現(xiàn)Ro52抗體和Ro60(SS-A)抗體為相互獨(dú)立的不同抗體，具有不同的臨床意義。Ro52抗體比Ro60(SS-A)抗體更常見(jiàn)于系統(tǒng)性硬化以及炎癥性肌病的患者[2, 14-16]。本組疑診為炎癥性肌病的患者有 18.3%出現(xiàn)Ro52抗體，為最常檢測(cè)出的肌炎抗體。以往有文獻(xiàn)綜述報(bào)道，在明確診斷為炎癥性肌病的患者中，Ro52抗體的陽(yáng)性率更高，為28.6%(26.3%～31.2%，374/1 306例)[2]。既往研究發(fā)現(xiàn)，合并Ro52抗體與否與患者的年齡、性別以及是否有吞咽困難等無(wú)關(guān)，而出現(xiàn)Ro52抗體的患者可能更容易合并技工手、雷諾現(xiàn)象、關(guān)節(jié)炎、惡性腫瘤以及間質(zhì)性肺病等[10, 17-18]。此外，合并高滴度Ro52抗體的Jo-1綜合征患者常對(duì)環(huán)磷酰胺、環(huán)孢霉素以及硫唑嘌呤等傳統(tǒng)免疫抑制劑耐藥，而利妥昔單抗治療有效[10,13]。

本研究發(fā)現(xiàn)，除抗合成酶抗體外，SRP抗體、Mi抗體等肌炎特異性抗體合并Ro52抗體陽(yáng)性率均在30%以上，而這些抗體與Ro52抗體共陽(yáng)性的患者臨床表型以及對(duì)藥物治療是否有差異尚有待進(jìn)一步研究。

綜上，本研究進(jìn)一步證實(shí)包括Jo-1抗體在內(nèi)的抗合成酶抗體陽(yáng)性患者最常合并Ro52抗體，其他非抗合成酶抗體陽(yáng)性的患者(如SRP抗體陽(yáng)性患者)也常合并出現(xiàn)Ro52抗體，是否合并Ro52抗體可能與肌炎抗體滴度有關(guān)，具體機(jī)制尚不明確。