精子形態(tài)學(xué)分析結(jié)合精液常規(guī)參數(shù)在男性不育癥診斷中的應(yīng)用

羅滿亮 謝榮章 林律初 梁慧宇 溫韶強

精子形態(tài)被認(rèn)為是男性生育能力評價的重要指標(biāo),其也是受孕的重要參數(shù)之一［1］。有資料顯示［2］,正常形態(tài)精子的百分比和受孕成功與否有著密切的關(guān)系。如果正常形態(tài)精子的百分比＜60%,生育能力就會受到嚴(yán)重影響。精子形態(tài)在精子動力學(xué)分析、精子成熟度、DNA 損傷等各類功能性試驗中發(fā)揮重要的作用。最近研究發(fā)現(xiàn)［3］,解脲支原體感染和一些睪丸感染性疾病會嚴(yán)重影響精子的質(zhì)量,造成精子畸形,因而精液質(zhì)量評價對于不孕不育診療具有重要的意義。本研究采集2020 年6 月～2022 年1 月期間來云浮市人民醫(yī)院送檢的20～45 周歲男性不孕癥患者精液標(biāo)本進行分析,探討精子形態(tài)學(xué)分析結(jié)合精液常規(guī)參數(shù)在男性不育癥診斷中的應(yīng)用價值,現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020 年6 月～2022 年1 月期間來云浮市人民醫(yī)院治療的男性不育癥患者80 例作為觀察組,年齡25～45 歲,平均年齡(27.46±6.17)歲；不育癥時間2～6 年,平均不育癥時間(3.25±1.28)年；精液體積2.10～2.58 ml,平均精液體積(2.33±0.18)ml；根據(jù)精子狀態(tài)分為少精癥組(精子濃度＜15×106/ml,15 例)、弱精癥組(精子存活率＜40%或前向運動精子的百分比＜32%,但是精子濃度正常,35 例)、白細(xì)胞精子癥組(精液白細(xì)胞計數(shù)≥1×106/ml,30 例)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①已婚；②婚后同居時間＞1 年,并且夫妻性生活正常；③性生活過程中,未采取避孕措施；④既往無家族遺傳史、無生育系統(tǒng)外傷史；⑤體檢未見睪丸、附睪、輸精管等生育系統(tǒng)異常。排除標(biāo)準(zhǔn)：①重要臟器功能障礙者；②各類遺傳性疾病者；③女性不宜因素；④各類血液系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病者。同時選取本院健康體檢男性100 例作為對照組,年齡24～46 歲,平均年齡(27.08±6.36)歲。觀察組和對照組的年齡等一般資料比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 所有研究對象均禁欲2～7 d,采用手淫的方式取出全部精液樣本,收集在干燥無毒的容器內(nèi),放置在37℃恒溫水浴箱中,等到完全液化后進行檢測。

1.2.2 儀器與試劑 儀器：BX53 普通光學(xué)顯微鏡(日本OLYMPUS 公司)、移液器(德國Eppendorf 公司)、CU-600 恒溫水浴箱(上海齊欣科學(xué)儀器有限公司)、計算機輔助精液分析系統(tǒng)(西班牙Microptic 公司)。試劑：精細(xì)形態(tài)學(xué)快速染色液(珠海貝索生物技術(shù)有限公司)、Sper-mGrad 梯度液(瑞典Vitrolife 公司)、Sper-mRinse 洗精液(瑞典Vitrolife 公司)、體外受精培養(yǎng)液(瑞典Vitrolife 公司)。

1.2.3 操作方法

1.2.3.1 手工精子形態(tài)學(xué)分析 首先通過儀器對精液標(biāo)本進行常規(guī)性的自動化分析,涂片后采用Diff-Quick法染色,每一份標(biāo)本涂片染色2 張,進行形態(tài)學(xué)計數(shù),最終獲取平均值。

1.2.3.2 精液常規(guī)檢測 通過系統(tǒng)分析精液常規(guī)參數(shù),主要包括精液量、精子濃度、精子的總數(shù)、前向運動精子百分比、精子總活力、活動精子濃度等。正常范圍：精子濃度≥15×106/ml、精子總數(shù)≥39×106,前向運動精子百分比+精子總活力≥40%,前向運動精子百分比≥32%。

1.2.3.3 精子形態(tài)分析 染色后通過光學(xué)顯微鏡隨機觀察200 條精子,對精子形態(tài)進行分析,計算精子正常形態(tài)率,精子正常形態(tài)率≥4%為正常。

1.2.3.4 精子DNA 完整百分比檢測 通過精子染色質(zhì)擴散法對研究對象的精子核DNA 完整性進行檢測。首先對精子懸液濃度進行調(diào)整,保持在(5.0～10.0)×106/ml,將其和低熔點瓊脂糖混合,平鋪在載玻片上,載玻片采用1%瓊脂糖預(yù)包被。再經(jīng)過酸、裂解液處理,完成核蛋白去除,通過瑞士染色,對精子DNA完整百分比觀察。完整DNA 評價標(biāo)準(zhǔn)：DNA 在精子核附著,向外擴散呈現(xiàn)出特征性暈環(huán),染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)相對松散。已經(jīng)損傷的精子不會產(chǎn)生或者是形成暈環(huán)較小,暈環(huán)的直徑大于等于精子頭部直徑,其可以評價成為完整的DNA。通過低倍顯微鏡隨機觀察400 個精子,對精子DNA 完整百分比檢測結(jié)果進行分析。

1.4 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 比較觀察組和對照組的精液檢測結(jié)果,觀察組各小組的精液檢測結(jié)果。檢測結(jié)果主要包括精子濃度、正常形態(tài)精子百分比、精子存活率、前向運動精子百分比、精子DNA 完整百分比。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS23.0 統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行處理。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組和對照組的精液檢測結(jié)果比較 觀察組精子濃度、精子存活率、前向運動精子百分比、正常形態(tài)精子百分比、精子DNA 完整百分比均低于對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 觀察組和對照組的精液檢測結(jié)果比較()

表1 觀察組和對照組的精液檢測結(jié)果比較()

注：與對照組比較,aP＜0.05

2.2 觀察組各小組的精液檢測結(jié)果比較 少精癥組精子濃度均低于弱精癥組、白細(xì)胞精子癥組,弱精癥組精子濃度低于白細(xì)胞精子癥組,弱精癥組精子存活率低于少精癥組、白細(xì)胞精子癥組,白細(xì)胞精子癥組前向運動精子百分比高于少精癥組、弱精癥組,白細(xì)胞精子癥組正常形態(tài)精子百分比低于少精癥組、弱精癥組,弱精癥組正常形態(tài)精子百分比低于少精癥組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；三組精子濃度、精子存活率、前向運動精子百分比、正常形態(tài)精子百分比比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；三組精子DNA 完整百分比比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

表2 觀察組各小組的精液檢測結(jié)果比較()

表2 觀察組各小組的精液檢測結(jié)果比較()

注：與少精癥組比較,aP＜0.05；與弱精癥組比較,bP＜0.05

3 討論

近年來隨著人們生活壓力增大和生活飲食習(xí)慣的變化,不孕不育的發(fā)生率呈現(xiàn)明顯升高的趨勢［4］。不孕不育發(fā)生率中,男性所占比例近60%,精液檢查對于男性不育癥原因的診斷具有重要意義［5］。精子形態(tài)分析和精子動力學(xué)特征有一定的相關(guān)性,二者聯(lián)合檢查可以對男性的生育能力進行更好的評估［6］。同時男性不育癥會對家庭和社會和諧造成嚴(yán)重的影響,精液質(zhì)量和不育癥有密切關(guān)系,對其進行評估可指導(dǎo)不育癥臨床診療,對提高患者生活質(zhì)量具有重要價值［7］。

精子DNA 作為人類遺傳信息的重要載體,其從染色體結(jié)構(gòu)開始,保證了基因完整的遺傳給下一代,為受精過程的完成和胚胎的正常發(fā)育奠定了重要基礎(chǔ)［8-10］。有資料顯示［11-13］,如果精子DNA 損傷,會對生殖結(jié)局造成不良影響。有資料證實［14-16］,精子DNA 如果發(fā)生損傷,會降低胚胎中谷氨酰胺水平,升高丙酮酸,對于胚胎正常代謝造成不良影響,進而出現(xiàn)生殖結(jié)局的異常現(xiàn)象［17-19］。近年來研究發(fā)現(xiàn),不同年齡、種族、職業(yè)、環(huán)境、生活習(xí)慣及病毒感染等都可能成為影響精子質(zhì)量的因素［20］。

目前,云浮地區(qū)并未系統(tǒng)全面地開展精子形態(tài)學(xué)分析項目檢測,如果只參考精液常規(guī)參數(shù),過于單一,且精液常規(guī)參數(shù)受影響的因素較多,不能為臨床診斷與治療男性不育癥提供更多準(zhǔn)確的信息和依據(jù)。如果在現(xiàn)有基礎(chǔ)上發(fā)展精子形態(tài)學(xué)分析項目,將會對男性不育癥的診斷與治療提供更多的指導(dǎo)與幫助。本研究選取2020 年6 月～2022 年1 月期間來云浮市人民醫(yī)院男性不育癥患者80 例作為觀察組,根據(jù)精子狀態(tài)分為少精癥組(15 例)、弱精癥組(35 例)、白細(xì)胞精子癥組(30 例)；同時選取本院健康體檢男性100 例作為對照組。結(jié)果表明,觀察組精子濃度、精子存活率、前向運動精子百分比、正常形態(tài)精子百分比、精子DNA 完整百分比均低于對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；提示不孕癥患者隨著精子DNA 完整百分比的降低,其正常存活率、濃度和前向運動均受到了不同程度的影響,減少了正常精子水平,進而誘發(fā)不育癥的發(fā)生。另外,少精癥組精子濃度均低于弱精癥組、白細(xì)胞精子癥組,弱精癥組精子濃度低于白細(xì)胞精子癥組,弱精癥組精子存活率低于少精癥組、白細(xì)胞精子癥組,白細(xì)胞精子癥組前向運動精子百分比高于少精癥組、弱精癥組,白細(xì)胞精子癥組正常形態(tài)精子百分比低于少精癥組、弱精癥組,弱精癥組正常形態(tài)精子百分比低于少精癥組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；三組精子濃度、精子存活率、前向運動精子百分比、正常形態(tài)精子百分比比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。提示不同類型的精子異常狀態(tài)是導(dǎo)致不育的直接原因,但是三組精子DNA 完整百分比比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),提示可能與三組不育癥患者病例數(shù)過少有關(guān),有待于進一步擴大樣本量進行研究。

綜上所述,男性不育癥患者精子濃度、精子存活率、前向運動精子百分比、正常形態(tài)精子百分比均明顯降低,為臨床診療提供了可靠的理論依據(jù)。