原發(fā)性高血壓病人Salusin-β、miRNA-375與免疫因子的相關(guān)性分析

趙茜茜，王 珅，盧相琴，楊 婷

原發(fā)性高血壓是臨床常見的心血管疾病，主要由環(huán)境因素、遺傳因素共同導(dǎo)致的多基因遺傳性疾病，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，且隨著病情不斷進(jìn)展。臨床研究顯示，原發(fā)性高血壓會(huì)對(duì)心臟、腎臟、大腦造成損傷，同時(shí)也是腦卒中、動(dòng)脈粥樣硬化等血管性疾病發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素[1-2]。有研究顯示，原發(fā)性高血壓約占高血壓病人的90%，原發(fā)性高血壓是高血壓急癥的多發(fā)群體，引發(fā)心肌梗死、高血壓腦病等一系列危險(xiǎn)疾病，對(duì)病人生命健康造成威脅[3]。近年來，隨著全球范圍內(nèi)原發(fā)性高血壓發(fā)病率升高，引發(fā)的心腦血管病病死率升高，對(duì)人類生存質(zhì)量及生命健康造成影響，并造成較重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[4-5]。隨著對(duì)疾病的不斷深入研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性高血壓發(fā)生、發(fā)展與免疫反應(yīng)及相關(guān)因子水平有關(guān)[5]。本研究對(duì)原發(fā)性高血壓病人Salusin-β、miRNA-375、免疫因子水平進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)分析相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年11月—2020年11月我院收治的原發(fā)性高血壓病人77例，作為觀察組；另選取同時(shí)間于我院體檢健康者77名，作為對(duì)照組。觀察組，男39例，女38例；年齡40～69(54.5±12.3)歲；病程2～5(3.5±1.2)年。對(duì)照組，男40名，女37名；年齡41～67(54.1±10.9)歲。兩組性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。所有研究對(duì)象對(duì)本研究知情同意，并獲得我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：觀察組病人均符合《中國高血壓防治指南》內(nèi)原發(fā)性高血壓診療標(biāo)準(zhǔn)[6]；年齡18～70歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：一般資料不全；繼發(fā)性高血壓；合并高脂血癥、肥胖、糖尿病、腦血管等其他慢性疾?。缓喜⑿?、肺、肝、腎等重要臟器功能不全；合并惡性腫瘤；合并嚴(yán)重器質(zhì)性疾??；患有肺炎、尿道感染等急性感染性疾??；精神疾病及認(rèn)知障礙；長(zhǎng)期嗜煙、嗜酒及濫用藥物。

1.2 標(biāo)本采集 抽取所有研究對(duì)象空腹靜脈血6 mL，于室溫下，以3 000 r/min離心10 min，分離上清液至無RNA酶的EP管中，-70 ℃保存，待用。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)Salusin-β、超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、白細(xì)胞介素10(IL-10)水平 取50 mmol/L碳酸鹽包緩沖液對(duì)抗原進(jìn)行稀釋，在聚苯乙烯反應(yīng)孔內(nèi)加入使用50 mmol/L碳酸鹽包緩沖液稀釋后抗原，加蓋處理之后存放24 h置于4 ℃冰箱內(nèi)，次日進(jìn)行3次洗滌，之后拋干，將稀釋液(pH值為7.4，0.02 mol/L Tris-HCl緩沖液)待測(cè)標(biāo)本0.1 mL放入每個(gè)孔，同時(shí)放入陽性和陰性對(duì)照標(biāo)本，置于42 ℃環(huán)境中60 min，移除液體，3次洗滌后拋干，在每個(gè)孔中放Salusin-β、hs-CRP、IL-10抗體0.1 mL，存放60 min，移除液體后。進(jìn)行3次洗滌并拋干，在每個(gè)孔中放入低物液(0.1 mol/L Na2HPO4，0.05 mol/L枸櫞酸)，混勻之后置入0.1 mL鄰苯二胺，進(jìn)行20 min遮光，再次置入2 mol/L H2SO40.05 mL放置在每個(gè)孔內(nèi)，終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀檢測(cè)A450值檢測(cè)Salusin-β、hs-CRP、IL-10。

1.3.2 散射比濁法檢測(cè)免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平 提取IgA、IgM、IgG、TNF-α血清樣品在凝固過程中發(fā)生變化的散射光檢測(cè)，在光探檢測(cè)器為90°直角的單色光源中向血清樣本加入凝血激活劑，在樣品凝塊過程中，散射光強(qiáng)度緩慢增加，血清樣本完全凝固后，光探測(cè)器發(fā)生變化，送到檢測(cè)器上處理并描出凝固曲線后檢測(cè)IgA、IgM、IgG、TNF-α水平。

1.3.3 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)miRNA-375表達(dá) 首先提取miRNA-375細(xì)胞總RNA，對(duì)提取總RNA的純度、含量進(jìn)行檢測(cè)，之后逆轉(zhuǎn)，逆轉(zhuǎn)錄處理后獲得cDNA，獲得cDNA后使用Primer5.0軟件設(shè)計(jì)引物，2-△△Ct方法計(jì)算，內(nèi)參U6。設(shè)置反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件：25 ℃ 10 min，40 ℃ 60 min，85 ℃ 5 min；設(shè)置擴(kuò)增條件：94 ℃ 20 s，72 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，35個(gè)循環(huán)，采用2-△△Ct計(jì)算miRNA-375表達(dá)量。

2 結(jié) 果

2.1 對(duì)照組和觀察組血清Salusin-β水平、miRNA-375表達(dá)比較 與對(duì)照組比較，觀察組Salusin-β水平、miRNA-375表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。詳見表1。

表1 對(duì)照組和觀察組血清Salusin-β水平、miRNA-375表達(dá)比較(±s)

2.2 對(duì)照組和觀察組免疫因子水平比較 與對(duì)照組比較，觀察組IgA、IgG水平升高，IgM水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。詳見表2。

表2 對(duì)照組和觀察組免疫因子水平比較(±s) 單位：g/L

2.3 對(duì)照組和觀察組血清細(xì)胞因子水平比較 與對(duì)照組比較，觀察組hs-CRP、TNF-α平升高，IL-1水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。詳見表3。

表3 對(duì)照組和觀察組血清細(xì)胞因子水平比較(±s)

2.4 不同高血壓分級(jí)病人血清Salusin-β水平、miRNA-375表達(dá)比較 與1級(jí)高血壓病人比較，2級(jí)、3級(jí)高血壓病人Salusin-β水平、miRNA-375表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與2級(jí)高血壓病人比較，1級(jí)高血壓病人Salusin-β水平、miRNA-375表達(dá)較低，3級(jí)高血壓病人Salusin-β水平、miRNA-375表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表4。

表4 不同分級(jí)高血壓病人血清Salusin-β水平、miRNA-375表達(dá)比較(±s)

2.5 Salusin-β、miRNA-375與原發(fā)性高血壓病人免疫因子的相關(guān)性分析 Salusin-β與IgA呈正相關(guān)(r=0.608，P<0.001)，Salusin-β與IgM呈負(fù)相關(guān)(r=-0.523，P<0.001)，Salusin-β與IgG呈正相關(guān)(r=0.598，P<0.001)；miRNA-375與IgA呈正相關(guān)(r=0.621，P<0.001)，miRNA-375與IgM呈負(fù)相關(guān)(r=-0.701，P<0.001)，miRNA-375與IgG呈正相關(guān)(r=0.519，P<0.001)。詳見圖1、圖2。

圖1 Salusin-β水平與原發(fā)性高血壓病人免疫因子相關(guān)性分析的散點(diǎn)圖

圖2 miRNA-375水平與原發(fā)性高血壓病人免疫因子相關(guān)性分析的散點(diǎn)圖

3 討 論

高血壓是以動(dòng)脈壓升高為特征的疾病，是伴有心、腎、血管、腦等器官功能性或器質(zhì)性改變的全身性疾病，分為原發(fā)性高血壓和繼發(fā)性高血壓，其中原發(fā)性高血壓發(fā)病率約占高血壓的90%[7-8]。流行病學(xué)研究顯示，老年人為原發(fā)性高血壓主要發(fā)病人群，我國60歲以上人群發(fā)病率高達(dá)60%，原發(fā)性高血壓臨床表現(xiàn)以耳鳴、頭脹、頭暈等為主，若不及時(shí)進(jìn)行有效干預(yù)，造成心血管結(jié)構(gòu)和功能變化，并引發(fā)高血壓腦病、冠心病、心力衰竭等各種疾病[9-10]。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展、生活節(jié)奏加快、精神壓力緊繃等多種因素影響，導(dǎo)致高血壓發(fā)病率呈逐年升高趨勢(shì)，同時(shí)各種心血管疾病病死率隨之升高。對(duì)人類生活質(zhì)量及生命健康造成威脅。因此，及時(shí)預(yù)防及控制高血壓具有重要的意義[11]。

相關(guān)研究顯示，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷及局部炎癥反應(yīng)與高血壓、心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，同時(shí)造成血栓形成并增加血管緊張性[12]。Salusin-β作為內(nèi)源性心血管調(diào)節(jié)肽，在促進(jìn)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)、血管平滑肌細(xì)胞增殖及血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。相關(guān)研究表明，Salusin-β可促進(jìn)機(jī)體炎性因子釋放，加重血管內(nèi)皮細(xì)胞受損程度，從而誘發(fā)冠心病等[13]。另有研究顯示，中樞Salusin-β有助于激活交感神經(jīng)，促進(jìn)精氨酸加壓釋放，導(dǎo)致血壓升高。Salusin-β具有調(diào)節(jié)血壓的作用，通過檢測(cè)原發(fā)性高血壓病人Salusin-β水平，可較好地預(yù)測(cè)高血壓急癥發(fā)生[14]。本研究結(jié)果顯示，Salusin-β水平隨高血壓分級(jí)增加而升高，證實(shí)Salusin-β水平變化與原發(fā)病高血壓病人病情發(fā)展具有密切聯(lián)系，可作為生物學(xué)標(biāo)志物應(yīng)用于原發(fā)性高血壓病人的早期預(yù)估，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

人體內(nèi)廣泛存在的內(nèi)源性非編碼RNA為微小核糖核酸，在多種基因轉(zhuǎn)錄及表達(dá)中均有參與[15]。miRNA-375是一種在胰島細(xì)胞中特異性表達(dá)的miRNA，成熟的miRNA作用于靶基因以發(fā)揮其功能。相關(guān)研究顯示，miRNA-375通過對(duì)充足胰島素樣生長(zhǎng)因子1產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用，導(dǎo)致細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)肌動(dòng)蛋白絲組成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，促進(jìn)胰島素小泡和細(xì)胞膜融合，從而釋放胰島素。相關(guān)研究顯示，miRNA-375表達(dá)水平在維持人體葡萄糖穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮著重要的作用[16-17]。本研究結(jié)果顯示，miRNA-375參與原發(fā)性高血壓的發(fā)生、發(fā)展。以miRNA-375為靶點(diǎn)設(shè)計(jì)小分子物質(zhì)拮抗miRNA-375作用，可為臨床原發(fā)性高血壓提供藥物治療的新靶點(diǎn)。

免疫球蛋白在原發(fā)性高血壓發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。相關(guān)研究顯示，原發(fā)性高血壓病人T細(xì)胞功能異常，導(dǎo)致輔助介導(dǎo)B細(xì)胞活化分泌亢進(jìn)，從而導(dǎo)致免疫球蛋白水平紊亂[18]。相關(guān)研究顯示，原發(fā)性高血病人IgA水平升高，而IgM水平降低，可能是由于疾病發(fā)展過程中炎癥消耗所致。原發(fā)性高血壓病人IgG存在異常表達(dá)，IgG形成抗原抗體復(fù)合物，沉積血管基底層，造成血管內(nèi)皮損傷發(fā)生[19]。本研究結(jié)果顯示，免疫球蛋白IgA、IgM、IgG均參與原發(fā)性高血壓發(fā)生、發(fā)展過程，提示其可能參與原發(fā)性高血壓功能及結(jié)構(gòu)改變等病理過程。

原發(fā)性高血壓以全身動(dòng)脈血管的慢性炎癥反應(yīng)為特征，多種細(xì)胞因子在高血壓發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸中發(fā)揮著重要作用。相關(guān)研究顯示，hs-CRP作為系統(tǒng)炎癥反應(yīng)的標(biāo)志物因子與高血壓有關(guān)，可能是導(dǎo)致高血壓發(fā)生、發(fā)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[20]。IL-10作為細(xì)胞因子中極少存在的抑制性細(xì)胞因子，具有限制及終止炎癥作用；可有效抑制炎癥細(xì)胞產(chǎn)生白細(xì)胞介素1(IL-1)、白細(xì)胞介素6(IL-6)等多種炎性因子[21]。TNF-α作為具有多種生物活性的多肽炎性因子，通過細(xì)胞毒作用對(duì)血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)直接造成破壞，并對(duì)舒張功能造成影響。有研究顯示，TNF-α可誘導(dǎo)IL-1分泌，導(dǎo)致血管壁重塑，是促進(jìn)原發(fā)性高血壓發(fā)展的重要危險(xiǎn)因素[22]。本研究結(jié)果顯示，原發(fā)性高血壓病人炎性因子水平存在異常表達(dá)。提示炎性因子可有效評(píng)估病人病情，有利于原發(fā)性高血壓診斷及預(yù)后評(píng)估，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，Salusin-β、miRNA-375及免疫因子對(duì)原發(fā)性高血壓病人的診斷及干預(yù)具有重要的臨床意義，且Salusin-β、miRNA-375及免疫因子在原發(fā)性高血壓中具有相關(guān)性，可為臨床原發(fā)性高血壓的診斷提供一定參考依據(jù)。