暈寧顆粒的質(zhì)量標準提高研究

鄭宗江 趙 穎

南京市中醫(yī)院藥學部，江蘇南京 210022

醫(yī)院制劑是臨床用藥的重要組成部分，其在保障患者健康、滿足醫(yī)院科研需要及彌補市場藥物供給不足等方面發(fā)揮著重要的作用[1-3]。醫(yī)院制劑的發(fā)展有著悠久歷史，在此期間，其監(jiān)管制度不斷完善[4-5]。自2005年以來，國家加強對醫(yī)院制劑的監(jiān)管，導致一些醫(yī)院制劑由于嚴格的申請注冊標準等原因而萎縮。2017年公布的《中醫(yī)藥法》，國家高度重視醫(yī)院制劑的研發(fā)和應用，因此，醫(yī)院制劑又迎來了新的機遇[6]。目前，醫(yī)院制劑存在不足之處，如醫(yī)院制劑的質(zhì)量控制系統(tǒng)尚不完善，部分醫(yī)院制劑缺乏科學、合理的質(zhì)量控制體系。因此，建立科學、合理的質(zhì)量標準，才能更好地造福更多患者[7-9]。暈寧顆粒是南京市中醫(yī)院自制制劑，該方由制何首烏、芍藥、丹參、陳皮、白術(shù)等十味藥組成，具有補益肝腎，熄風化痰，和中止嘔的作用。本研究在該制劑原有的質(zhì)量標準基礎上，開展了質(zhì)量標準提高研究。

1 材料

1.1 儀器

安捷倫1260 infinityⅡ高效液相色譜儀（安捷倫公司）；KQ-500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；AL104型電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；labtower edi15純化水系統(tǒng)（aglilent technologies公司）。

1.2 試藥

芍藥苷對照品（批號：110736-201842），由中國藥品鑒定研究院提供，含量以97.4%計。暈寧顆粒樣品（批號：180710、180209、170512）及陰性對照品（缺白芍）。

2 含量測定

2.1 色譜條件的選擇

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（250 mm×4.6 mm，粒度：5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（13∶87）；檢測波長：260 nm；進樣量：10 μl；柱溫：30℃；流速：1.0 ml/min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷2.90 mg（含量以97.4%計）至5 ml的量瓶，加甲醇定容，制成芍藥苷濃度為0.58 mg/ml的溶液，作為芍藥苷對照品儲備液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取暈寧顆粒，研細，稱定3 g，放入具塞錐形瓶內(nèi)，倒入70%甲醇25 ml，稱量后，放入超聲機30 min，冷卻，再稱量，倒入70%甲醇補足缺失的重量，搖勻后，過濾即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 取相當于0.3 g白芍的陰性制劑，制備處理同供試品溶液[10-11]。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

采用不同的流動相比例進行分離。流動相1：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（12∶88）；流動相2：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（13∶87）；流動相3：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（14∶86），結(jié)果顯示，以流動相2分離效果最佳。見圖1～3。

圖1 乙腈∶0.1磷酸水溶液（12∶88）

圖2 乙腈∶0.1磷酸水溶液（13∶87）

圖3 乙腈∶0.1磷酸水溶液（14∶86）

2.4 專屬性試驗

分別取芍藥苷對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液，搖勻，按照上述色譜條件，進樣10 μl，測定。結(jié)果顯示，陰性樣品溶液在與芍藥苷對照品溶液相同的保留時間位置處，無干擾。見圖4～6。

圖4 芍藥苷色譜圖

圖5 暈寧顆粒樣品圖

圖6 暈寧顆粒陰性色譜圖

2.5 標準曲線的制備

精 密吸取上述對照品液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 ml，加入至2 ml容量瓶中，加甲醇定容，得系列芍藥苷對照品溶液，其中芍藥苷濃度分別為28.25、56.50、84.75、113.00、141.25 μg/ml。分別精密吸取上述5種濃度的對照品溶液各10 μl，注入液相色譜儀中，平行進2針，同上色譜條件，以平均峰面積均值（Y）為縱坐標，進樣濃度（X）為橫坐標，得到回歸方程，繪制標準曲線。回歸方程為Y=8.8963X+68.9700、相關(guān)系數(shù)r=0.9999；芍藥苷在28.25～141.25 μg/ml范圍線性關(guān)系良好。見圖7。

圖7 芍藥苷的線性關(guān)系圖

2.6 精密度試驗

精確吸取芍藥苷對照品溶液，連續(xù)進樣6次，記錄其峰面積測量值，RSD值為0.53%，提示儀器的精密度試驗良好。

2.7 重復性試驗

取同一批號（170512）的樣品6份，按照上述方法測定供試品中芍藥苷的含量，計算平均含量，RSD值為0.63%，提示樣品的重復性試驗良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

按照上述方法，并每隔2 h測定一次峰面積，直至10 h，RSD值為0.95%。提示芍藥苷在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗

稱量含芍藥苷總量為0.8137 mg/g的顆粒1.5 g，精確稱量后，放入具塞錐形瓶中，平行處理6份。精密加入濃度為1.1570 mg/ml芍藥苷對照品溶液1 ml，倒入70%甲醇約25 ml，稱重后，放入超聲機，超聲30 min，取出放涼，再次稱重后，倒入70%甲醇補足缺失的重量，搖勻后，過濾，即得。色譜條件同前，進樣量10 μl。測定其芍藥苷含量，結(jié)果顯示，本法的加樣回收率試驗良好，加樣回收率符合要求。見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果

2.10 樣品測定及含量限度的確定

依照含量測定法，測定了三批不同樣品中芍藥苷的含量。結(jié)合三批樣品的含量測定結(jié)果，取平均含量最低的180209批次來制訂芍藥苷的標準，暫定為本品芍藥苷含量不得少于0.355 mg/g。見表2。

表2 不同批次的樣品含量測定（mg/g）

3 討論

白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根[12]。白芍主要含有單萜及其苷類化合物、三萜類化合物、多酚類化合物、黃酮類化合物、多糖類化合物等，現(xiàn)代藥理研究顯示白芍具有抗炎、鎮(zhèn)痛、保肝、促進造血功能、抗血栓、抗腫瘤以及抗氧化等作用，被廣泛應用于臨床[13-14]。白芍中的萜類化合物主要為單萜，還有其糖苷類化合物和三萜類化合物。其中研究最為廣泛的是單萜及其糖苷類化合物。芍藥苷是發(fā)現(xiàn)最早的一種單萜苷、也是單萜類成分中含量最高的，大量研究證明芍藥苷具有抗抑郁、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、保肝、保護神經(jīng)、調(diào)節(jié)免疫、鎮(zhèn)靜催眠等多種藥理作用[15-16]。治療眩暈的方劑中，多數(shù)含有藥味白芍，諸如白芍天麻飲、葛根湯、防眩湯等[17-18]。本研究選芍藥苷作為質(zhì)控檢測指標，在含量測定研究中，考察了甲醇-水、甲醇-甲酸水、乙腈-水、乙腈-磷酸水溶液，發(fā)現(xiàn)甲醇-水、甲醇-甲酸水，存在拖尾的情況，乙腈-水，基線不平穩(wěn)。乙腈-磷酸水溶液條件良好，因此將乙腈-0.1%磷酸溶液（13∶87）列入標準正文。