蜂王漿中活性因子對(duì)衰老小鼠的保護(hù)作用

余賢嫻， 汪 玲， 蘭 天， 余春濤， 黃文琦，吳泉勇， 肖乾煌， 聶欣可， 譚惠子， 聶少平*

（1. 南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/中國(guó)-加拿大食品學(xué)與技術(shù)聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室 （南昌）/江西省生物活性多糖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047； 2. 江西汪氏蜜蜂園有限公司，江西 南昌 330008）

衰老是指機(jī)體內(nèi)眾多組織器官的功能隨著時(shí)間的推移而衰退，是很多疾病的潛在危險(xiǎn)因素。 隨著當(dāng)前社會(huì)經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展以及人口結(jié)構(gòu)的改變，我國(guó)將步入并會(huì)較長(zhǎng)時(shí)間處于老齡化社會(huì)，如何延緩機(jī)體衰老是近年來越來越多的學(xué)者正在研究的問題，并且對(duì)于抗衰老的相關(guān)產(chǎn)品的需求也在日益增長(zhǎng)。 雖然機(jī)體衰老是一個(gè)不可逆的過程，但已有發(fā)現(xiàn)可通過多種不同途徑延緩衰老的發(fā)展速度。 已有研究報(bào)道說明蜂王漿（royal jelly，RJ）具有抗衰老的作用[1]，但是對(duì)于具有延緩衰老作用的具體成分少有報(bào)道。 因此，進(jìn)一步了解蜂王漿的功能活性因子的保健功效以及開發(fā)對(duì)應(yīng)的新型天然產(chǎn)物產(chǎn)品尤為重要。D-半乳糖對(duì)小鼠造成的衰老模型是最接近自然衰老的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停?由于其模型操作簡(jiǎn)單、效果顯著等特點(diǎn)，常用于食物、藥物的抗衰老功能的研究。

蜂王漿作為一種藥食兩用的食品，是由青年工蜂下咽頭腺和大顎腺分泌，主要作為蜂王和幼蟲的食物。其通常呈乳白色、淡黃色或淺橙色弱酸性半透明黏稠漿狀物體，有特殊香味[2]，味酸、澀、辛，富含蛋白質(zhì)、糖類、脂肪酸、維生素、游離氨基酸及微量元素等多種生理活性物質(zhì)[3]。 研究顯示蜂王漿具有改善睡眠[4-5]、修復(fù)細(xì)胞損傷[6-9]、增強(qiáng)免疫力[10-11]、抗菌[12-14]、抗氧化[15-17]、延緩衰老[18]、調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)[19]及抗腫瘤[20-22]等多種生理活性，具有極高的藥用和保健價(jià)值，深受國(guó)內(nèi)外消費(fèi)者喜歡和追捧。

蜂王漿的抗衰老效果顯著，能夠修復(fù)機(jī)體的細(xì)胞損傷和降低機(jī)體的氧化活性[7，17]。10-羥基-2-癸烯酸（10-hydroxy-2-decenoic acid，10-HDA）是蜂王漿中具有功能活性的不飽和脂肪酸，其含量是衡量蜂王漿質(zhì)量的重要指標(biāo)之一[23]，除了10-HDA 之外，蜂王漿中還含有兩種主要的不飽和脂肪酸（10-HDAA和SEA）[24]。蜂王漿蛋白是由水溶性蛋白和非水溶性蛋白構(gòu)成的，而水溶性蛋白為主要成分，也稱蜂王漿主蛋白（major royal jelly proteins，MRJPs）。MRJPs包含MRJP1~MRJP9 九個(gè)家族成員[25]，其中蜂王漿主蛋白MRJP1 是質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高的蛋白質(zhì)， 約為48%，其相對(duì)分子質(zhì)量為49 000~60 000，以55 000和57 000 為主[26]。 蜂王漿中的蛋白質(zhì)及脂肪酸是其多種功能活性的主要來源。 研究報(bào)道，MRJP1 可以降低大鼠血清膽固醇水平[27]，MRJP2 具有很好的抗菌[28]和抗氧化[29]活性。

因此， 作者采用了D-半乳糖致衰老的動(dòng)物模型，通過T-迷宮來考察蜂王漿中的功能活性因子對(duì)衰老小鼠的工作記憶行為學(xué)的影響，再結(jié)合小鼠的體質(zhì)量、肝臟指數(shù)、腦指數(shù)、脾臟指數(shù)以及腎臟指數(shù)、肝組織中的丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量等指標(biāo)，探究蜂王漿及其蛋白質(zhì)類、脂類功能因子提取物對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)的小鼠衰老的延緩作用，為蜂王漿的深度開發(fā)利用提供一定的理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

蜂王漿原漿： 江西汪氏蜜蜂園有限公司產(chǎn)品；BCA 試劑盒： 上海碧云天生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；10-羥基-2-癸烯酸標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)羥基苯甲酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品透析膜（相對(duì)分子質(zhì)量8 000~14 000）：上海源葉生物科技有限公司產(chǎn)品；磷酸鹽緩沖液（PBS）片劑：生工生物工程（上海）股份有限公司產(chǎn)品；甲醇（色譜純）：德國(guó)Merck 公司產(chǎn)品；無水乙醇（優(yōu)級(jí)純）：西隴科學(xué)有限公司產(chǎn)品；超濾管（截留相對(duì)分子質(zhì)量30 000）： 美國(guó)Millipore 公司產(chǎn)品；VC 片狀補(bǔ)充劑：湯臣倍健股份有限公司產(chǎn)品；D-（+）半乳糖（Dgal）：北京索萊寶生物科技有限公司產(chǎn)品，其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純產(chǎn)品；ELISA 試劑盒：南京建成生物工程研究所。

8 周齡C57BL/6J 小鼠 （雌性130 只， 體質(zhì)量20~25 g）： 北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供（北京百善SCXK（京）2021-0006）；常規(guī)動(dòng)物飼料：北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供。

電子天平： 瑞士Mettler Toledo 公司產(chǎn)品；LYNX4000 高速離心機(jī)： 美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司產(chǎn)品；SHB-Ⅲ循環(huán)水式真空泵： 鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司產(chǎn)品；PowerPacTMUniversal Power Supply 通用電泳儀： 美國(guó)伯樂（BIO-ARD）公司產(chǎn)品；e2695 高效液相色譜儀：美國(guó)Waters 科技有限公司產(chǎn)品；1260 高效液相色譜儀：美國(guó)Agilent 科技有限公司產(chǎn)品； 真空冷凍干燥機(jī)：美國(guó)Labconco 公司產(chǎn)品；N1300 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：EYELA 東京理化器械株式會(huì)社產(chǎn)品； 全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀：美國(guó)Molecular Devices 公司產(chǎn)品。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1蜂王漿中蛋白質(zhì)類功能因子的提取 通過透析法對(duì)蜂王漿粗蛋白進(jìn)行提取純化，具體實(shí)驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)[30]。 根據(jù)BCA 試劑盒說明書，測(cè)定粗蛋白中的蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)。并采用SDS-PAGE 蛋白質(zhì)電泳檢測(cè)粗蛋白提取物中的蛋白質(zhì)組成。

通過濃縮超濾法對(duì)蜂王漿蛋白質(zhì)類物質(zhì)提取純化，具體實(shí)驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)[31]。 根據(jù)BCA 試劑盒說明書， 檢測(cè)提取物中蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)。 采用SDS-PAGE 蛋白質(zhì)電泳檢測(cè)提取物中的蛋白質(zhì)組成。 采用GPC 液相色譜法[32]檢測(cè)提取物中各組分的占比。

1.2.2蜂王漿中脂類功能因子的提取 通過有機(jī)相萃取法對(duì)蜂王漿脂類功能因子進(jìn)行提取純化，參照文獻(xiàn)[33]。 參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 9697—2008 中高效液相色譜法檢測(cè)提取物中10-HDA 的相對(duì)含量。

1.2.3動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組及處理方法 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)選用8周齡的雌性C57BL/6J 小鼠（20~25 g）在正常條件下飼養(yǎng)，溫度為（22±2）℃，相對(duì)濕度為55±10 和12 h/12 h明暗循環(huán)。 本研究中涉及的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所有程序均按照美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和使用指南進(jìn)行，并經(jīng)南昌大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)中心、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)方法參照已有研究報(bào)道[34-35]，稍有修改，具體如下（見圖1）：將所有的C57BL/6J小鼠隨機(jī)分13 組，每組10 只，分別為空白對(duì)照組（B），模型組（M），蜂王漿組（RJ），陽性對(duì)照組（VC），粗蛋白提取物的低、中、高劑量組（CL、CM、CH），蛋白質(zhì)類功能因子提取物的低、中、高劑量組（PL、PM、PH）及脂類功能因子提取物的低、中、高劑量組（AL、AM、AH）。

圖1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案Fig. 1 Protocols of the animal experiment

所有動(dòng)物經(jīng)適應(yīng)期并常規(guī)飼養(yǎng)至12 周齡后，除空白對(duì)照組外所有小鼠每日由腹腔注射100 mg/kg（以體質(zhì)量計(jì)）的D-gal 溶液[36]，空白對(duì)照組小鼠注射相同劑量的生理鹽水，連續(xù)7 周，進(jìn)行衰老造模。 同時(shí)，從第3 周開始，陽性對(duì)照組小鼠每天灌胃100 mg/kg 的VC 溶液[37]，蜂王漿組每天灌胃637 mg/kg 的蜂王漿原漿（相當(dāng)于體質(zhì)量70 kg 成年人每日攝取4.9 g 蜂王漿），粗蛋白提取物的低、中、高劑量組小鼠每天分別灌胃60、120、240 mg/kg 的蜂王漿蛋白質(zhì)粗提取物，蛋白質(zhì)類功能因子的低、中、高劑量組小鼠每天分別灌胃44、88、176 mg/kg 的蜂王漿蛋白質(zhì)類功能因子的提取物， 脂類功能因子的低、中、高劑量組小鼠每天分別灌胃13.1、26.2、52.4 mg/kg 的脂類功能因子的提取物 （所有組分的中劑量組攝入劑量與蜂王漿組中蜂王漿攝入劑量相對(duì)應(yīng)）， 空白對(duì)照組與模型組小鼠則每天灌胃等體積的蒸餾水，連續(xù)5 周。 飼養(yǎng)間溫度控制在20~26 ℃，相對(duì)濕度控制在40%~70%， 白天與黑夜每12 h 為一個(gè)循環(huán)。 整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中監(jiān)測(cè)體質(zhì)量和精神狀況， 所有小鼠在戊巴比妥鈉麻醉下頸椎脫臼處死，收集小鼠的血清、肝臟、腎臟、脾臟以及腦組織并稱質(zhì)量，計(jì)算各組織的器官指數(shù)，并進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.4T-迷宮動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn) T-迷宮行為學(xué)實(shí)驗(yàn)基于空間工作記憶原理， 實(shí)驗(yàn)方法參照已有報(bào)道，稍有調(diào)整[38-39]。 在實(shí)驗(yàn)最后一周，將小鼠放入T形迷宮適應(yīng)兩天后，開始訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)和測(cè)試實(shí)驗(yàn)。

1）訓(xùn)練實(shí)驗(yàn) 每一個(gè)trial 包括兩個(gè)部分，即forced run 和test run。 Forced run：任意選擇T 形迷宮的一臂，用木閘門將之關(guān)閉，小鼠只能進(jìn)入一臂獲取食物。 取食完畢，立即取出，用乙醇清洗去除氣味；15 s 后，撤去所有的閘門。 Test run：兩臂全部打開，將小鼠放入開始臂中，若小鼠選擇未曾進(jìn)入的臂，為正確選擇，給予食物獎(jiǎng)勵(lì)；若重復(fù)進(jìn)入相同的臂，則為錯(cuò)誤選擇，不給予食物。 每只動(dòng)物每天進(jìn)行4 個(gè)trial，每次間隔15 min，連續(xù)4 d，分別計(jì)算每天每組小鼠的準(zhǔn)確率。 當(dāng)小鼠選擇準(zhǔn)確率達(dá)到80%以上，則代表小鼠形成工作記憶，可停止實(shí)驗(yàn)。

2）測(cè)試實(shí)驗(yàn) 延長(zhǎng)forced run 和test run 之間的時(shí)間間隔至1 min，連續(xù)測(cè)試16 次，分別計(jì)算每組小鼠的準(zhǔn)確率。

T-迷宮行為學(xué)實(shí)驗(yàn)期間，小鼠飲水不限，但每天進(jìn)食控制在4~5 g， 以使體質(zhì)量保持在正常進(jìn)食小鼠體質(zhì)量的85%[38]。在整個(gè)訓(xùn)練和測(cè)試期間，小鼠體質(zhì)量每周增加不超過5 g。

1.2.5肝臟丙二醛（MDA）水平測(cè)定 采用ELISA試劑盒按照生產(chǎn)廠家說明書進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析采用GraphPad Prism 軟件結(jié)合two-tailed unpairedt-test 方法，若P值（Pvalue）小于0.05 則認(rèn)為數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 粗蛋白提取物及蛋白質(zhì)類功能因子提取物

粗蛋白提取物經(jīng)過BCA 試劑盒測(cè)得蛋白質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)約為79.42%。 從SDS-PAGE 蛋白質(zhì)電泳結(jié)果顯示（見圖2），相對(duì)分子質(zhì)量為50 000~60 000及35 000~45 000 的條帶灰度最高， 推測(cè)可能是MPRJ1 及MPRJ2 成分。

在此基礎(chǔ)上， 進(jìn)一步提取相對(duì)分子質(zhì)量為50 000~60 000 的蛋白質(zhì)類功能因子。 結(jié)果表明，通過SDS-PAGE 蛋白質(zhì)電泳檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)類功能因子提取物的蛋白質(zhì)條帶主要位于50 000~60 000。 且通過GPC 液相色譜發(fā)現(xiàn)該方法所得的目標(biāo)蛋白相對(duì)含量能達(dá)到93.08%（見圖3），得率占蜂王漿蛋白質(zhì)組分的43.20%。

圖3 蛋白質(zhì)類功能因子提取物的GPC 液相色譜圖Fig. 3 GPC liquid chromatography of functional protein fractions

2.2 脂類功能因子

蜂王漿凍干樣經(jīng)旋蒸后所得的脂質(zhì)組分在形態(tài)上呈現(xiàn)淡黃色或金黃色，為固液混合物。 經(jīng)高效液相色譜分析后發(fā)現(xiàn)，所得的脂類功能因子提取物中10-HDA 相對(duì)含量43.85%（見圖4）。得率占蜂王漿脂質(zhì)組分的38.50%。

圖4 脂類功能因子提取物中10-HDA 相對(duì)含量色譜圖Fig. 4 Chromatogram of 10-HDA relative content in lipid functional factor extract

2.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3.1小鼠體質(zhì)量 由于在實(shí)驗(yàn)最后一周的T-迷宮動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)需要通過飲食控制使小鼠體質(zhì)量下降為原體質(zhì)量的85%，所以對(duì)小鼠飲食控制前體質(zhì)量變化（見圖5（a）~圖5（d））及體質(zhì)量增長(zhǎng)率（見圖5（e）~圖5（h））進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)。 結(jié)果顯示，Dgal 造模（模型組）會(huì)降低小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)量，而所有給藥組小鼠的體質(zhì)量增長(zhǎng)量較模型組均有上升，其中陽性對(duì)照組，蜂王漿組，粗蛋白提取物低、中劑量組，蛋白質(zhì)類功能因子提取物低劑量組，脂類功能因子提取物組體質(zhì)量增長(zhǎng)率更趨近與空白對(duì)照組。

圖5 小鼠飲食控制前的體質(zhì)量變化及增長(zhǎng)率Fig. 5 Body weight alterations and body weight gain of mice before alimentary control

2.3.2小鼠的組織器官指數(shù)D-gal 造模能夠上調(diào)雌性小鼠的肝臟組織腫大（見圖6），與空白對(duì)照組小鼠相比，D-gal 造模小鼠的肝臟組織器官指數(shù)顯著上升（P＜0.05），上升約10%。 所有給藥組小鼠的肝臟指數(shù)均有下降，其中粗蛋白提取物高劑量組（P＜0.05）、蛋白質(zhì)類功能因子提取物高劑量組（P＜0.01）及3種劑量的脂類功能因子提取物組（P＜0.01）小鼠的肝臟指數(shù)均有顯著下降， 接近空白對(duì)照組小鼠。推測(cè)蜂王漿中蛋白質(zhì)組分，特別是相對(duì)分子質(zhì)量為50 000~60 000 的組分， 以及脂類組分能夠改善衰老模型小鼠的肝臟功能。

圖6 各組小鼠肝臟組織器官指數(shù)Fig. 6 Organ index of liver of mice in each group

同時(shí)，D-gal 造模使雌性小鼠的腦、脾臟及腎臟組織器官指數(shù)均有所增加（見圖7）。 蛋白質(zhì)類功能因子提取物低劑量組小鼠腦組織器官指數(shù)低于模型組（見圖7（a））；粗蛋白提取物高劑量組，蛋白質(zhì)類功能因子提取物中劑量組及脂類功能因子提取物中、高劑量組小鼠脾臟器官指數(shù)低于模型組（見圖7（b））；蜂王漿組，粗蛋白提取物高劑量組，蛋白質(zhì)類功能因子提取物中、低劑量組及脂類功能因子提取物組小鼠腎臟器官指數(shù)低于模型組（見圖7（c））。

圖7 各組小鼠腦組織、脾臟及腎臟的器官指數(shù)Fig. 7 Organ indexes of brain， spleen and kidney of mice in each group

2.3.3T-迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果 與空白對(duì)照組小鼠相比，D-gal 造模小鼠在T-迷宮中尋找食物的準(zhǔn)確率（與模型組相比）顯著下降（P＜0.01，見圖8），比空白對(duì)照組準(zhǔn)確率低23.2%。 陽性對(duì)照組（VC），蜂王漿組，蛋白質(zhì)類功能因子提取物中、高劑量組及脂類功能因子提取物組小鼠的準(zhǔn)確率均顯著高出模型組（P＜0.05），增加幅度為18.8%~21.7%，接近于空白對(duì)照組。 說明蜂王漿及其中相對(duì)分子質(zhì)量為50 000~60 000 組分、10-HDA 對(duì)改善衰老模型小鼠的認(rèn)知記憶功能具有顯著作用。

圖8 小鼠T-迷宮測(cè)試結(jié)果Fig. 8 T-maze test results of mice

2.3.4小鼠肝臟MDA 水平D-gal 造模使模型組小鼠的肝組織中MDA 質(zhì)量摩爾濃度升高（見圖9）。蜂王漿組，粗蛋白提取物高劑量組，蛋白質(zhì)類功能因子提取物中劑量組及脂類功能因子提取物低、中劑量組小鼠的肝臟MDA 質(zhì)量摩爾濃度則趨近于空白對(duì)照組，說明蜂王漿及上述組分能夠緩解肝臟組織的氧化應(yīng)激反應(yīng)。

圖9 各組小鼠的肝組織中MDA 質(zhì)量摩爾濃度Fig. 9 MDA molality in liver tissue of mice in each group

2.3.5討論 衰老是生物隨著時(shí)間的推移，自發(fā)的一種復(fù)雜的自然現(xiàn)象，是機(jī)體的一個(gè)必然過程。 其常常伴隨著機(jī)體代謝減緩，器官功能的減退以及認(rèn)知水平的減弱。 當(dāng)前，社會(huì)物質(zhì)的極大豐富導(dǎo)致人口老齡化進(jìn)程加速，如何防治腦老化和延緩衰老成為人們備受關(guān)注的問題。 作者采用D-gal 造成的小鼠亞急性衰老模型（該動(dòng)物衰老模型是最接近于自然衰老的過程），參照已有研究報(bào)道[37]，稍有修改，通過腹腔注射D-gal 溶液連續(xù)7 周的方法建立衰老模型，同時(shí)進(jìn)行給藥5 周。

記憶水平的顯著下降就是腦老化的一種臨床表現(xiàn)。 記憶可以廣義定義為對(duì)先前獲取的信息的持久性， 其中工作記憶的能力和持續(xù)時(shí)間都是有限的，與特定任務(wù)的執(zhí)行密切相關(guān)，空間工作記憶最成熟的測(cè)試之一是自發(fā)交替的T-迷宮實(shí)驗(yàn)[40]。 T 形迷宮是一個(gè)T 形裝置，允許在兩個(gè)相反的手臂之間進(jìn)行選擇。 小鼠從T 的底部開始行動(dòng)，并允許選擇其中一端的目標(biāo)臂。 如果快速連續(xù)進(jìn)行兩次實(shí)驗(yàn)，在第二次實(shí)驗(yàn)中，小鼠傾向于選擇以前沒有訪問過的手臂，這反映了對(duì)第一選擇的記憶，這被稱為“自發(fā)交替”。 這種傾向可以通過使動(dòng)物饑餓并在交替時(shí)獎(jiǎng)勵(lì)其首選食物來加強(qiáng)[41]。 自發(fā)和獎(jiǎng)勵(lì)對(duì)海馬體功能障礙非常敏感，可以很好地反映小鼠的空間工作記憶能力。通過T-迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示D-gal 能夠顯著降低小鼠在T 形迷宮中尋找食物的準(zhǔn)確率，說明模型組小鼠的認(rèn)知水平發(fā)生了明顯下降，衰老模型造模成功。 經(jīng)過蜂王漿、蛋白質(zhì)類功能因子提取物中、 高劑量及脂類功能因子提取物的單獨(dú)干預(yù)，小鼠的準(zhǔn)確率顯著高出模型組18.8%~21.7%（P＜0.05）， 粗蛋白提取物組分雖然能夠提高準(zhǔn)確率，但數(shù)據(jù)沒有顯著性差異。 說明蛋白質(zhì)提取物中相對(duì)分子質(zhì)量為50 000~60 000 組分、 脂類功能因子組分對(duì)衰老相關(guān)空間工作記憶功能下降的改善作用與蜂王漿原漿效果一致，并且低于等量蜂王漿原漿的脂類功能因子也能夠顯著增強(qiáng)衰老小鼠的記憶能力。

氧化應(yīng)激也是生物體衰老的一項(xiàng)重要指標(biāo)，機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生的氧自由基會(huì)攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸， 引起脂質(zhì)過氧化生成過氧化脂質(zhì)（lipid peroxidation，LPO），并且其最終的氧化產(chǎn)物是MDA，從而造成核酸和蛋白質(zhì)等大分子聚合，影響線粒體酶活性和加劇膜損傷，產(chǎn)生細(xì)胞毒性，進(jìn)一步導(dǎo)致機(jī)體受損以及人體衰老[36]。 肝臟是參與機(jī)體抗氧化和代謝調(diào)控的重要器官，已有研究報(bào)道，衰老相關(guān)的記憶減退與肝臟功能異常密切相關(guān)[42]。 在本研究中D-半乳糖造模后的小鼠肝臟器官指數(shù)明顯上調(diào)，MDA 質(zhì)量摩爾濃度也高于空白對(duì)照組，推測(cè)D-半乳糖對(duì)衰老小鼠肝臟器官造成一定程度的功能損傷，同時(shí)，D-半乳糖也輕微降低了小鼠體質(zhì)量，增加了腦、脾臟及腎臟器官指數(shù)，但無顯著性，說明衰老癥狀建立的同時(shí)未對(duì)小鼠生命健康造成嚴(yán)重?fù)p害。 通過干預(yù)發(fā)現(xiàn)，蜂王漿原漿能夠部分降低肝臟器官指數(shù)及肝臟MDA 水平， 說明蜂王漿可能減緩小鼠衰老過程中的肝臟功能衰退。 其中，與蜂王漿原漿等量的粗蛋白提取物（中劑量）及蛋白質(zhì)類功能因子提取物（中劑量）能夠降低肝臟器官指數(shù)的平均水平，但無顯著性。 然而高劑量粗蛋白提取物（P＜0.05）及高劑量蛋白質(zhì)類功能因子提取物（P＜0.01）對(duì)肝臟器官指數(shù)異常有明顯的調(diào)節(jié)作用，低、中、高劑量的脂類功能因子（P＜0.01）均能夠顯著緩解肝臟腫大現(xiàn)象。 另外，除粗蛋白提取物的低、中劑量組外，其他組分對(duì)肝臟組織氧化應(yīng)激水平的調(diào)節(jié)作用趨近于蜂王漿原漿。 上述結(jié)果說明，脂類功能因子抑制肝臟損傷的效果相對(duì)較好，粗蛋白及蛋白質(zhì)類功能因子在高于等量蜂王漿原漿的劑量下能夠發(fā)揮緩解作用。

3 結(jié) 語

作者對(duì)蜂王漿及其蛋白質(zhì)、脂類組分的抗衰老作用和改善學(xué)習(xí)記憶能力進(jìn)行了初步探究。 結(jié)果表明，蜂王漿發(fā)揮延緩衰老作用的主要功效成分可能為脂類物質(zhì)，因其在等同成人攝入蜂王漿推薦劑量及其一半或兩倍的劑量下均有效果，且以兩倍效果最佳。 同時(shí)，粗蛋白組分僅對(duì)衰老相關(guān)的肝臟腫大有緩解作用， 相對(duì)分子質(zhì)量為50 000~60 000 的蛋白質(zhì)組分在高劑量的條件下能夠提高記憶水平并緩解肝臟器官指數(shù)異常，因此推測(cè)蜂王漿中主要蛋白質(zhì)類功能因子（相對(duì)分子質(zhì)量為50 000~60 000）在抗衰老的過程中能夠發(fā)揮一定的協(xié)同作用。 該研究結(jié)果能夠?yàn)檫M(jìn)一步科學(xué)解釋蜂王漿功能活性的機(jī)理打下基礎(chǔ)，為蜂王漿及其功能活性因子在改善衰老及相關(guān)記憶減退方面的應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)。