SPF種豬場通過冷凍精液方式引種試驗

楊 光，沈 君，方禮祿，麻文靜，李鵬亮，郭曉宇，嚴彩紅

（北京市SPF豬育種管理中心，北京 海淀 100089）

隨著國內養(yǎng)豬行業(yè)規(guī)?；?、大型化、工廠化的發(fā)展，養(yǎng)豬企業(yè)的種豬育種和品種培育工作顯得十分重要，品種育種和培育工作是豬場提高生產水平、增加養(yǎng)殖經濟效益的關鍵。由于部分豬場核心群數(shù)量偏少，同時采用封閉式育種，遺傳基礎較窄，也喪失了引進優(yōu)良基因的機會，從而導致近交增量過大和遺傳方差減少過快，使得其遺傳改良的速度相當緩慢[1]，所以種豬場之間應該開展優(yōu)秀種豬資源交流和聯(lián)合育種，但是引進活體豬會受到地理位置和季節(jié)影響，同時也會導致養(yǎng)殖成本增加以及豬病不可控。隨著豬冷凍精液技術逐漸成熟，冷凍精液可以長期保存、遠距離運輸，可提前通過PCR等方法檢測，確保引進的凍精無特定病原體，使得冷凍精液更加安全可靠的同時促進優(yōu)秀遺傳資源交流。2020年7月至2021年9月北京市SPF豬育種管理中心通過冷凍精液方式進行一次SPF豬引種工作，通過冷凍精液和常溫精液對比，來評估冷凍精液技術作為SPF豬引種方式的可行性。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 精液來源 冷凍精液采購于某公司英系大白細管冷凍精液，經檢測無特定病原體，細管規(guī)格0.25 mL，10支稀釋成1頭份，選用公豬血統(tǒng)4個，精子活力0.5以上。常溫精液為北京市SPF豬育種管理中心核心場提供，每頭份60 mL，精子活力0.8以上。

1.1.2 母豬及分群 在北京市SPF豬育種管理中心選取2～4胎英系大白斷奶母豬130頭，隨機分為2組，每組65個重復，每個重復1頭，對照組使用常溫精液，試驗組采用冷凍精液方式，所有母豬輸精方式全部采用子宮深部輸精。

1.1.3 儀器設備 儀器設備包括scA780-54fc全自動精子質量分析系統(tǒng)、顯微鏡、恒溫水浴鍋、50 L液氮罐、一次性豬深部輸精管、剪刀、長柄鑷子、潤滑劑等。

1.2 試驗方法

1.2.1 冷凍精液解凍與檢測 提前把精液稀釋室室溫調到26 ℃，將水浴鍋加溫到37 ℃，準備好精液稀釋液，把準備好的精液稀釋液放在水浴鍋里至少1 h，向輸精瓶里加60 mL預熱好的精液稀釋液；從液氮中取出1～2支冷凍精液，立即轉入37 ℃水浴鍋中解凍，37 ℃下解凍20 s，立即取出冷凍精液，用干凈面巾紙擦干冷凍精液管外部，搖動精液管將氣泡移至將要開口的棉花端，在棉花端剪開，放到37 ℃的裝好稀釋液輸精瓶里，再剪開精液管另一端，把精液吹入已經加溫到37 ℃的輸精瓶，獲得1頭份精液需要10支，把裝稀釋好精液輸精瓶放水浴鍋里20 min，對稀釋好的精液鏡檢，在預溫到35～38 ℃的玻璃片上鏡檢，通過全自動精子質量分析系統(tǒng)檢查其精液活力情況，配種精液活力不得低于0.5。

1.2.2 試情與輸精 試情過程要有公豬在現(xiàn)場，對母豬背部、耳根、腹側和乳腺等敏感部位進行觸摸、按壓和人員騎在母豬背部上，母豬會出現(xiàn)呆立不動的靜立反射，母豬陰門內流出一些黏性液體，即判斷母豬發(fā)情。母豬試情要在精液解凍前做完，保障凍精稀釋后及時給發(fā)情母豬配種，18 h后再用同樣方法給母豬再輸一次，30 h后母豬仍在發(fā)情再配第3次，一頭母豬發(fā)情期中的配種只能使用同一公豬的冷凍精液。參與試驗母豬飼養(yǎng)在同一圈舍，由專人飼養(yǎng)管理。

1.2.3 數(shù)據記錄與統(tǒng)計分析 記錄參與試驗母豬的耳號、品種、胎次和配種時間，以及所用精液的種類、公豬耳號和活力等數(shù)據。詳細記錄試驗母豬窩總產仔數(shù)、窩產活仔數(shù)和窩產死胎數(shù)。分娩率相關計算式：分娩率=分娩母豬頭數(shù)/配種母豬頭數(shù)×100%。采用Excel進行數(shù)據初步分析，用SPSS計算各指標的平均值和標準差，并對各指標進行差異顯著性檢驗。

2 結果與分析

由表1可知，試驗組母豬窩總產仔數(shù)和窩產活仔數(shù)分別比對照組低1.08頭（P＜0.01）和1.48頭（P＜0.01），降低幅度分別達10.7%和15.5%；但試驗組母豬窩產死胎數(shù)比對照組高0.38頭（P＜0.01），增加幅度達57.6%。試驗組母豬分娩率比對照組低10.77個百分點（P＜0.05）。

表1 不同精液對配種母豬分娩成績的影響

3 討論

本試驗中冷凍精液組窩總產仔數(shù)為（9.08±1.87）頭，窩產活仔數(shù)為（8.04±2.04）頭，窩產死胎數(shù)為（1.04±0.60）頭，分娩率為78.46%，與陳輝[2]、瞿文學等[3]研究結果基本相一致。和陳映等[4]、鄧雙義等[5]報道數(shù)據相比，本試驗母豬分娩率要高于其試驗中分娩率，但是窩總產仔數(shù)和窩產活仔數(shù)要低于其試驗數(shù)據。導致母豬分娩率、窩總產仔數(shù)和窩產活仔數(shù)不相同與冷凍精液來源不同、冷凍精液解凍程序不同、每頭份稀釋好精液中精子含量不一致以及豬的品種等有關之外，還有豬場內的配種管理方面的原因。比如發(fā)情鑒定，參與試情人員要認真負責，在公豬配合下，鑒定出發(fā)情明顯、穩(wěn)定的母豬，不能采取強迫配種和過早或過晚配種。與常溫精液不同，冷凍精液配置好鏡檢合格后，應該迅速輸入發(fā)情母豬子宮內，因為解凍稀釋20 min后精子活率開始迅速降低[6]，所以最好解凍稀釋后在20 min內使用完。用冷凍精液配置好的精液必須現(xiàn)用現(xiàn)配，不能存放。在配種方式上最好選用子宮深部輸精，可以減少精子穿過子宮頸口的損失，加速精子到子宮獲能的時間，縮短精子與卵子結合的距離。通過孫志峰等[7]研究表明，采用冷凍精液深部輸精技術可以有效提高母豬的生產性能。

近幾年來，隨著國內外豬精液冷凍技術發(fā)展和深部輸精技術的推廣，大幅推動了養(yǎng)豬企業(yè)豬冷凍精液的廣泛應用。冷凍精液的優(yōu)點是不受時間和地理位置差異的限制，可以促進豬場優(yōu)秀種豬遺傳資源通過冷凍精液方式保留下來，并可以各場之間相互交流，有利于育種企業(yè)和科研單位進行豬遺傳資源聯(lián)合育種，進一步打破養(yǎng)豬育種行業(yè)“引種→維持→退化→再引種”怪圈[8]。由于非洲豬瘟的傳播使養(yǎng)豬行業(yè)把生物安全放在豬場生產管理的首位，豬場引種工作成了較大的難題。冷凍精液需要在-196 ℃的液氮中保存，部分病毒性傳染病的病毒無法在超低溫環(huán)境下生存[9]，通過建立疾病凈化豬場、SPF公豬站，制定冷凍精液檢測機制，可以杜絕在引入豬優(yōu)質遺傳資源的同時也引進潛在的生物安全危險。

4 結論

本次試驗結果表明與常溫精液相比，采用冷凍精液方式配種沒有提高母豬繁育標準，但是根據本試驗和眾多關于冷凍精液試驗報道可知，冷凍精液技術達到或接近大多數(shù)豬場生產常溫精液配種繁育水平，豬冷凍精液技術顯著進步，可以在種豬場和繁育機構進行推廣。通過冷凍精液方式使北京市SPF豬育種管理中心母豬分娩了410頭仔豬，采血檢測鑒定無特定病原體，經過初步選育，102頭保育仔豬進入待選后備群，為豬場成功引入新的血統(tǒng)。