外源褪黑素處理對(duì)紅托竹蓀鮮品貯藏品質(zhì)的影響

馬 超，王如福，陳光賢，徐二娟，楊再群，周小青，楊庭梅，王 瑞,

（1.貴陽學(xué)院，貴州貴陽 550003；2.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，山西晉中 030801；3.貴州美味鮮竹蓀產(chǎn)業(yè)有限公司，貴州畢節(jié) 552102）

紅托竹蓀（Dictyophora rubrovolvata），是鬼筆科竹蓀屬，屬于多孔性食用菌，其含有豐富多糖和氨基酸，具有抗氧化、抗癌、降血糖等功效，深受消費(fèi)者喜愛[1-2]。新鮮的蔬菜和水果對(duì)人體的健康非常有益[3]。因此，隨著消費(fèi)觀念的升級(jí)以及消費(fèi)市場對(duì)紅托竹蓀鮮品的需要，紅托竹蓀鮮品市場銷售比例將日益增大。然而，紅托竹蓀鮮品表面組織脆嫩、缺乏有效的保護(hù)組織、子實(shí)體含水量高，采后失水、自溶、腐爛現(xiàn)象頻頻發(fā)生，嚴(yán)重影響商品價(jià)值[4]。因此，開展紅托竹蓀鮮品貯藏保鮮技術(shù)研究具有重要意義。

褪黑素（Melatonin，MT），又名N-乙?；?5-甲氧基色胺，是一種廣泛存在于植物體內(nèi)的吲哚類植物激素，在調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育、延緩衰老、促進(jìn)果實(shí)成熟等多種生理過程中發(fā)揮作用[5]。此外，褪黑素還可以作為一種抗氧化劑，可以直接清除活性氧，激活抗氧化酶，提高其它抗氧化劑的效率，從而提高果蔬對(duì)非生物和生物脅迫的耐受性[6]。因此，褪黑素作為一種新型、天然、安全的保鮮劑，在果蔬采后貯藏保鮮方面具有較好的應(yīng)用前景[7]。研究表明，褪黑素主要是通過清除自由基、抑制乙烯合成、誘導(dǎo)蛋白氧化損傷修復(fù)酶及調(diào)控能量代謝4 個(gè)方面的作用來延緩果蔬衰老[8]。一分子褪黑素可以清除10 個(gè)以上自由基分子，減緩植物所受的氧化脅迫程度[9]。Liu 等[10]采用0.1 mmol/L 外源褪黑素處理草莓，發(fā)現(xiàn)褪黑素可以促進(jìn)FaTDC、FaT5H、FaSNAT、FaASMT4 個(gè)與內(nèi)源褪黑素合成相關(guān)的基因上調(diào)，促進(jìn)內(nèi)源褪黑素的合成，延緩草莓衰老，此外，Morteza 等[11]也發(fā)現(xiàn)0.1 mmol/L處理可以維持草莓較高的二磷酸腺苷、三磷酸腺苷及較高的能荷。Ma 等[12]研究表明，褪黑素處理能夠提高CAT、SOD 活性，減少氧化應(yīng)激，延緩木薯生理品質(zhì)的下降。Zhang 等[13]報(bào)道，0.4 mol/L 褪黑素處理可以上調(diào)荔枝LcMsrA1、LcMsrA2、LcMsrB1和LcMsrB2四個(gè)氧化損傷修復(fù)酶基因的表達(dá)，延緩荔枝的衰老進(jìn)程。褪黑素處理還可誘導(dǎo)雙孢菇帽酚類物質(zhì)和抗壞血酸的含量增加，改善雙孢蘑菇帽的營養(yǎng)品質(zhì)[14]。除此以外，褪黑素還在番茄[15]、黃瓜[16]、香蕉[17]、獼猴桃[18]等果蔬得貯藏中都取得了很好的效果。然而，目前關(guān)于紅托竹蓀鮮品的保鮮，尤其是褪黑素應(yīng)用于紅托竹蓀鮮品保鮮的文章還未見報(bào)道。本研究以“黔優(yōu)1 號(hào)”紅托竹蓀鮮品為材料，通過不同濃度褪黑素處理，研究紅托竹蓀鮮品貯藏期間品質(zhì)及活性氧代謝的變化，以期為褪黑素在紅托竹蓀鮮品中的應(yīng)用提供有效支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

紅托竹蓀（八成熟，子實(shí)體破殼后，菌裙露出菌蓋后不超過菌柄三分之一）采摘于貴州省美味鮮竹蓀產(chǎn)業(yè)有限公司基地，采摘當(dāng)天運(yùn)抵實(shí)驗(yàn)室，挑選大小均一、成熟度基本一致、無機(jī)械損傷、無病蟲害的紅托竹蓀鮮品進(jìn)行處理；褪黑素 上海源葉生物科技有限公司；PE20 保鮮膜 國家保鮮工程技術(shù)研究中心（天津）；其他試劑 均為分析純。

CR400-色差儀 日本柯尼卡美能達(dá)有限公司；Spectra-MAX-M2 多功能酶標(biāo)儀 美國Molecular Devices；H2100A 型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī) 長沙湘儀離心機(jī)有限公司；Check PiontⅡ便攜式殘氧儀丹麥丹圣有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.2 指標(biāo)測定方法

1.2.2.1 感官品質(zhì)評(píng)價(jià) 參照趙偉璐等[19]測定方法，略有改動(dòng)，由6 名食品專業(yè)本科生（3 名男生，3 名女生）組成的評(píng)價(jià)小組，對(duì)貯藏末期（12 d）時(shí)的紅托竹蓀的品質(zhì)、外觀、氣味等感官指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)，具體評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1 感官品質(zhì)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Sensory quality evaluation standard

1.2.2.2 腐爛率的測定 以表面流水、長霉或自溶記作腐爛紅托竹蓀，采用計(jì)數(shù)法測定紅托竹蓀的腐爛率，計(jì)算公式如下：

1.2.2.3 呼吸強(qiáng)度的測定 參照鄧淑芳等[5]方法略作改進(jìn)。稱取6 根紅托竹蓀鮮品，置于100 mL 密封罐內(nèi)，密閉4 h 后測定CO2濃度，記錄容器體積V，紅托竹蓀凈重W，測定溫度T0，頂空分析儀空白對(duì)照數(shù)據(jù)D0，空分析儀空白實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)D1，按照式（1）計(jì)算呼吸強(qiáng)度。

1.2.2.4 丙二醛（MDA）含量的測定 參照Li 等[20]的方法略作改進(jìn)。準(zhǔn)確稱取5 g 經(jīng)液氮凍樣的樣品在10 mL 的5%（w/v）三氯乙酸（TCA）中勻漿，隨后在9000×g，4 ℃的條件下離心20 min。將上清液（2 mL）與2 mL 10% TCA 混合，在95 ℃下加熱10 min。立即在冰浴中冷卻，隨后在10000×g，4 ℃的條件下離心10 min，取上清液，在450、535 和600 nm 測定吸光度值，按照式（2）計(jì)算MDA 含量。

1.2.2.5 褐變指數(shù)的測定 參考賈樂等[21]方法略作改進(jìn)，每處理隨機(jī)取20 根紅托竹蓀，在子實(shí)體中部進(jìn)行測定，記錄色差儀上L*、a*和b*，結(jié)果取平均值，褐變指數(shù)BI 計(jì)算公式如下：

其中：

其次，老人雖然基于親情和血緣關(guān)系可以免費(fèi)幫子女帶孩子，但是如果他們?nèi)椭鷦e人帶孩子、做保姆，卻能獲得一筆勞動(dòng)報(bào)酬。從這個(gè)角度而言，讓老人充當(dāng)“免費(fèi)保姆”，實(shí)際上也是一種間接“啃老”。所以，子女在把自己的孩子托付給老人的同時(shí)，應(yīng)該考慮到老人的經(jīng)濟(jì)損失，主動(dòng)而適當(dāng)?shù)亟o予一些勞動(dòng)報(bào)酬。畢竟，如果不請(qǐng)父母幫帶孩子，去請(qǐng)保姆也同樣要花錢。

1.2.2.6 三磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺苷（ADP）、一磷酸腺苷（AMP）質(zhì)量分?jǐn)?shù)及能荷測定 參考Liu 等[22]方法測定，準(zhǔn)確稱取1 g 經(jīng)液氮凍樣的樣品，在6 mL 0.6 mol/L 的高氯酸能荷進(jìn)行研磨，隨后在12000×g，4 ℃的條件下離心15 min，取上清液，立即用1 mol/L的KOH 溶液調(diào)節(jié)pH 至6.5～6.8，30 min 后，定容至3 mL，過濾，在254 nm 處采用高效液相色譜檢測。A 相中為0.06 mol/L 磷酸氫二鈉和0.04 mol/L 磷酸二氫鉀，溶解在去離子氫水中，加入0.1 mol/L 氫氧化鉀，調(diào)整至pH 為7.0。流動(dòng)相B 為純甲醇。用85% A 和15% B 洗脫15min，流速為1 mL/min。按照式（5）進(jìn)行計(jì)算：

1.2.2.7 超氧陰離子（O2-·）產(chǎn)生速率與H2O2含量測定 參考鄧淑芳等[5]方法進(jìn)行測定。準(zhǔn)確稱取0.1 g經(jīng)液氮凍樣的樣品，加入1 mL pH7.8 的50 mmol/L磷酸提取緩沖液后冰浴勻漿，隨后在10000×g，4 ℃的條件下離心20 min，取上清置于冰上待測。取待測液0.5 mL 于試管中，加入0.4 mL 1 mmol/L 鹽酸羥胺溶液，混勻后于37 ℃水浴20 min。加入17 mmol/L 4-氨基苯磺酸和7 mmol/L 的α-萘胺各0.3 mL，混勻后，37 ℃，20 min。加入氯仿0.5 mL，混勻，8000×g、25 ℃離心 5 min，取上清液1.0 mL 于530 nm 測定吸光度值，即為超氧陰離子（O2-·）含量。

準(zhǔn)確稱取0.02 g 經(jīng)液氮凍樣的樣品，加入 0.2 mL 2 g/L 三氯乙酸勻漿，隨后在12000×g，4℃的條件下離心5 min 后取上清液。取0.1 mL 上清液于1.5 mL離心管中，加入0.2 mL 1 mol/L 碘化鉀溶液，輕輕混勻后于室溫（25±3）℃下放置30 min，然后測定反應(yīng)體系在560 nm 處的吸光度，即為H2O2含量。

1.2.2.8 超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）、過氧化氫酶（CAT）活性的測定 均參考田平平等[23]方法進(jìn)行測定。

超氧化物歧化酶（SOD）活性：準(zhǔn)確稱取2 g 經(jīng)液氮凍樣的樣品，加5 mL 0.1 mol/L，隨后在10000×g，4 ℃的條件下離心15 min，上清液于4 ℃保存。配制反應(yīng)體系：依次加入2.4 mL 0.1 mol/L pH8.7 硼酸硼砂緩沖液、0.2 mL 130 mmol/L 甲硫氨酸溶液、0.2 mL 100 μmol/L 乙二胺四乙酸溶液、0.1 mL 酶提取液、0.2 mL 750 μmol/L 氮藍(lán)四唑溶液和0.1 mL 20 μmol/L 核黃素溶液，用緩沖液代替酶液做空白，充分混勻。取3 支試管，其中一支置于暗處，其他兩支及測定管均在光強(qiáng)為4000 lx 的日光燈下光照1 h，然后立即遮光停止反應(yīng)，以暗處放置的空白管調(diào)零，然后測定反應(yīng)體系在560 nm 處的吸光度。以不加酶液的試管為最大還原管，以內(nèi)抑制NBT 光還原50%的酶液量為一個(gè)酶活單位（U）。

過氧化物酶（POD）活性：準(zhǔn)確稱取2 g 經(jīng)液氮凍樣的樣品，加 5 mL 0.1 mol/L 的磷酸緩沖溶液，冰浴研磨，隨后在10000×g，4 ℃的條件下離心20 min，上清液于-20 ℃保存。配制反應(yīng)體系：依次加入1 mL粗酶液、1 mL 磷酸緩沖溶液、1 mL 0.25%愈創(chuàng)木酚、0.5 mL 0.75% H2O2；以蒸餾水代替酶液為對(duì)照。測定470 nm 處3 min 內(nèi)的吸光度變化情況，以每分鐘470 nm 處吸光值上升0.01 作為一個(gè)酶活單位（U）。

過氧化氫酶（CAT）活性：準(zhǔn)確稱取5 g 經(jīng)液氮凍樣的樣品置于預(yù)冷研缽中，加少許石英砂，加入2.0 mL預(yù)冷的0.05 mol/L pH5.7 磷酸緩沖液（PBS），冰浴研磨，再用5.0 mL PBS 分3 次沖洗研缽及玻璃棒，轉(zhuǎn)移到10 mL 離心管中，隨后在10000×g，4 ℃的條件下離心10 min，上清液于4 ℃保存。配制反應(yīng)體系：依次加入1.5 mL 0.05 mol/L 的磷酸緩沖液（pH7.8）、1.0 mL 蒸餾水、0.5 mL 0.3%的H2O2溶液和0.01 mL的粗酶液，測定240 nm 處3 min 內(nèi)的吸光度變化情況，以緩沖液代替粗酶液作為空白對(duì)照，以每分鐘240 nm 處吸光值上升0.01 作為一個(gè)酶活單位（U）。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用OriginPro 2018 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，采用SPSS19.0 軟件的Duncan 氏新復(fù)極差法進(jìn)行數(shù)據(jù)差異顯著性分析及聚類分析法來分析各樣品品質(zhì)的變化（P＜0.05 為差異顯著，P＜0.01 為差異極顯著，P＞0.05 為差異不顯著）。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同褪黑素濃度處理對(duì)紅托竹蓀鮮品感官評(píng)價(jià)的影響

紅托竹蓀鮮品的感官評(píng)價(jià)是消費(fèi)者選擇產(chǎn)品的重要因素之一。由圖1 可知，貯藏12 d 時(shí)，CK、Y1、Y2 和Y3 處理組感官評(píng)價(jià)綜合得分分別為2.68、6.48、8.52 及7.28，說明不同濃度褪黑素處理均能夠有效地延緩紅托竹蓀鮮品的衰老進(jìn)程。Y2 和Y3 處理組在外觀新鮮度、水分、香味持久性和異味得分方面無顯著性差異（P＞0.05），但色澤、自溶、黏度得分方面，Y2 處理組顯著（P＜0.05）高于Y3 處理組，這與賈樂等[21]在香菇上的研究結(jié)果相似。綜上所述，褪黑素處理可以延緩紅托竹蓀鮮品感官評(píng)價(jià)得分的下降，其中100 μL/L 褪黑素處理組效果最好。

圖1 不同褪黑素處理對(duì)紅托竹蓀鮮品感官評(píng)價(jià)的影響Fig.1 Effects of different melatonin treatment on sensory properties of fresh Dictyophora rubrovolvata

2.2 不同褪黑素濃度處理對(duì)紅托竹蓀鮮品腐爛率的影響

腐爛率是衡量食用菌貯藏效果的最直觀標(biāo)準(zhǔn)之一[24]。圖2 表明，貯藏3 d 時(shí)，各組紅托竹蓀腐爛率較低，隨后CK 組腐爛率急劇上升，至第9 d 時(shí)，Y1處理組腐爛率開始急劇上升。貯藏12 d 時(shí)，CK 處理組腐爛率最高，分別是Y1、Y2、Y3 處理組的1.58、5.56 及4.36 倍，且差異顯著（P＜0.05），說明褪黑素處理可以降低貯藏期間紅托竹蓀鮮品的腐爛率，其中100 μL/L 褪黑素處理組效果較好。

圖2 不同褪黑素處理對(duì)紅托竹蓀鮮品腐爛率的影響Fig.2 Effects of different melatonin treatment on rot ratio of fresh Dictyophora rubrovolvata

2.3 不同褪黑素濃度處理對(duì)紅托竹蓀鮮品呼吸強(qiáng)度的影響

食用菌的呼吸作用一方面會(huì)消耗其營養(yǎng)物質(zhì)，另一方面呼吸作用產(chǎn)生的熱量又會(huì)加速食用菌的衰老進(jìn)程[24]。由圖3 可見，貯藏期間各處理呼吸強(qiáng)度均呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)，前期的下降可能與溫度變化有關(guān)[13]，后期的上升則是因?yàn)榧t托竹蓀衰老導(dǎo)致。圖3 還可知，CK 處理組的呼吸高峰出現(xiàn)在9 d，而其余各組呼吸高峰均出現(xiàn)在12 d 以后，且各處理組峰值均顯著（P＜0.05）低于CK 組。除此之外，Y2和Y3 處理組呼吸強(qiáng)度在整個(gè)貯藏期間均無顯著性（P＞0.05）差異。綜上所述，褪黑素處理可以降低貯藏期間紅托竹蓀鮮品的呼吸高峰峰值，推遲呼吸高峰的到來，其中100、150 μL/L 褪黑素處理組效果較好。

圖3 不同褪黑素處理對(duì)紅托竹蓀鮮品呼吸強(qiáng)度的影響Fig.3 Effects of different melatonin treatment on respiration rate of fresh Dictyophora rubrovolvata

2.4 不同褪黑素濃度處理對(duì)紅托竹蓀鮮品丙二醛含量的影響

丙二醛作為脂質(zhì)過氧化作用的次要終產(chǎn)物，常被用作膜完整性喪失的代謝指標(biāo)，反映膜受損的情況[25]。圖4 可見，貯藏期間各處理組丙二醛含量均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，貯藏12 d 時(shí)，CK、Y1、Y2 及Y3 處理組丙二醛含量分別為8.71、6.67、4.74 及5.36 mmol.g-1，說明褪黑素處理能夠有效抑制丙二醛含量的上升。

圖4 不同處理對(duì)紅托竹蓀鮮品丙二醛含量的影響Fig.4 Effects of different treatment on MDA content of fresh Dictyophora rubrovolvata

2.5 不同褪黑素濃度處理對(duì)紅托竹蓀鮮品褐變指數(shù)的影響

貯藏期間多酚氧化酶可以催化酚類氧化生成醌類，使紅托竹蓀發(fā)生褐變，從而紅托竹蓀的顏色由白色逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)楹稚肿兪怯绊懠t托竹蓀商品價(jià)值主要因素之一[7]。如圖5 所示，在貯藏3 d 時(shí)，各處理組間褐變指數(shù)無顯著性差異（P＜0.05），隨后CK 組開始加速上升。貯藏12 d 時(shí)，CK、Y1、Y2、Y3 處理組褐變指數(shù)分別為0 d 的10.90、5.12、1.39、3.51 倍，且各組之間差異顯著（P＜0.05）。結(jié)果表明，貯藏末期對(duì)照組褐變現(xiàn)象嚴(yán)重，而褪黑素處理能夠有效的延緩褐變現(xiàn)象的發(fā)生，其中100 μL/L 褪黑素處理效果最好。

圖5 不同褪黑素處理對(duì)紅托竹蓀鮮品褐變指數(shù)的影響Fig.5 Effects of different melatonin treatment on browning degree index of fresh Dictyophora rubrovolvata

2.6 不同褪黑素濃度處理對(duì)紅托竹蓀鮮品能量代謝的影響

細(xì)胞中的能量供應(yīng)是影響果蔬貯藏壽命的關(guān)鍵因素，較低的能量水平會(huì)加速果蔬的衰老，影響貯藏品質(zhì)[8]。圖6（A）表明，貯藏期間各處理ATP 質(zhì)量分?jǐn)?shù)均呈現(xiàn)先上升后下降趨勢(shì)，CK 組峰值出現(xiàn)在第6 d，而其余各處峰值出現(xiàn)在第9 d。貯藏12 d 時(shí)，CK、Y1、Y2 和Y3 處理組ATP 質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為27.48、30.94、41.48 和38.14 μg/g。由圖6（B）可知，ADP 質(zhì)量分?jǐn)?shù)的變化與ATP 相似，均為先上升后下降，除Y2 峰值在第9 d 外，其余各處理峰值均出現(xiàn)在第6 d。貯藏末期時(shí)，CK 組ADP 質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為Y1、Y2、Y3 處理組的1.25、1.95、1.86 倍。圖6（C）顯示，貯藏期間，CK 組AMP 質(zhì)量分?jǐn)?shù)呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，而其余各組呈現(xiàn)先下降后上升趨勢(shì)，且整個(gè)貯藏期內(nèi)CK 組AMP 質(zhì)量分?jǐn)?shù)均顯著（P＜0.05）高于其余各組。由此可知，褪黑素處理能夠更好的延緩貯藏期間紅托竹蓀細(xì)胞中ATP 向ADP 和AMP 的轉(zhuǎn)化，維持較高的細(xì)胞能量水平，延緩紅托竹蓀的衰老。

圖6 不同褪黑素處理對(duì)紅托竹蓀鮮品能量代謝的影響Fig.6 Effects of different melatonin treatment on energy metabolism of fresh Dictyophora rubrovolvata

能荷值能夠反映細(xì)胞中腺苷酸系統(tǒng)的能量狀態(tài)，是衡量細(xì)胞中能量可利用率的重要指標(biāo)[26]。圖6（D）可見，貯藏期間CK 和Y1 處理組能荷值呈現(xiàn)先下降后上升再下降趨勢(shì)，Y2 處理組能荷值呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，Y3 處理組能荷值呈現(xiàn)先上升后下降趨勢(shì)，貯藏12 d時(shí)，CK、Y1、Y2 和Y3 處理組能荷值分別為0.6142、0.6219、0.6643 及0.6536，說明褪黑素處理能夠更好的維持貯藏期間紅托竹蓀能量水平，延緩衰老進(jìn)程。

2.7 不同褪黑素濃度處理對(duì)紅托竹蓀鮮品超氧陰離子（O2-·）產(chǎn)生速率與H2O2 含量的影響

果蔬貯藏過程中活性氧的大量積累及自身抗氧化系統(tǒng)清除活性氧能力的下降是果蔬衰老的主要機(jī)制之一[21]。圖7（A）表明，貯藏6 d 時(shí)，各處理組O2·-產(chǎn)生速率均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，且各組之間差異不顯著（P＞0.05）。貯藏12 d 時(shí)，CK 處理組O2·-產(chǎn)生速率為2.95 μmol·min-1·g-1，是Y1、Y2、Y3 處理組的1.52、2.24、1.76 倍。圖7（B）可知，H2O2含量總體呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，與0 d 相比，貯藏結(jié)束時(shí)，各處理組H2O2含量分別上升了241.91%、195.45%、118.18%及159.09%。綜上所述，貯藏期間CK 組活性氧大量積累，而褪黑素處理能夠減緩紅托竹蓀鮮品貯藏期間H2O2的積累，抑制的O2-·產(chǎn)生，減少氧化應(yīng)激，延長紅托竹蓀貯藏期。

圖7 不同褪黑素處理對(duì)紅托竹蓀鮮品O2-·產(chǎn)生速率（A）與H2O2（B）含量的影響Fig.7 Effects of different melatonin treatment on O2-·generation rate and mass H2O2 fraction of fresh Dictyophora rubrovolvata

2.8 不同褪黑素濃度處理對(duì)紅托竹蓀鮮品SOD、POD和CAT 活性的影響

在果蔬貯藏的過程中，自由基不斷積累造成氧化脅迫不斷加劇，一方面加劇了膜脂過氧化等果蔬衰老進(jìn)程，另一方面也會(huì)激活果蔬抗氧化系統(tǒng)以抵御氧化脅迫對(duì)果蔬造成傷害，抗氧化系統(tǒng)由抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶構(gòu)成，其中超氧化物歧化酶（SOD）能夠直接將超氧陰離子歧化為O2和H2O2，而過氧化物酶（POD）和過氧化氫酶（CAT）則將H2O2氧化為H2O 和O2，這類酶的激活使得果蔬在一定程度上對(duì)氧自由基的破壞形成自我保護(hù)，但是隨著貯藏時(shí)間的延長，該類酶系統(tǒng)活性逐漸下降，并伴隨著果蔬衰老進(jìn)程的到來[24]。如圖8（A）表明，各處理SOD 活性先上升后下降，前期的上升主要是環(huán)境脅迫導(dǎo)致，其中CK 和Y1 處理組峰值出現(xiàn)在6 d，其余各組出現(xiàn)在9 d，且峰值大小順序?yàn)閅2＞Y1＞Y3＞CK。由圖8（B）可知，貯藏期間，除Y2 處理組POD 活性先下降后上升外，其余各組均呈現(xiàn)先下降后上升再下降趨勢(shì)，此外，貯藏9 d 開始，Y1、Y2、Y3 處理組POD 活性均顯著（P＞0.05）高于CK 組。圖8（C）顯示，貯藏期間，除CK 組先上升后下降，其余各組均呈波動(dòng)上升趨勢(shì)，貯藏12 d 時(shí)，CK、Y1、Y2 和Y3 處理組活性分別為：12.32、18.15、21.98 及21.17 U.g-1，這可能是因?yàn)橥庠赐屎谒靥幾鳛樾盘?hào)分子，直接清除自由基，激活其他抗氧化系統(tǒng)的能力[7]，也可能是促進(jìn)了內(nèi)源褪黑素的生成，增強(qiáng)紅托竹蓀抗氧化能力導(dǎo)致的[5]?？梢姡屎谒靥幚砟軌蚋玫匮泳徏t托竹蓀鮮品貯藏期間抗氧化酶系統(tǒng)酶活性的下降，其中100 μL/L 褪黑素處理組效果較好。

圖8 不同褪黑素處理對(duì)紅托竹蓀鮮品SOD、POD、CAT 活性的影響Fig.8 Effects of different melatonin treatment on activity of SOD,POD and CAT of fresh Dictyophora rubrovolvata

3 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)100 μL/L 褪黑素處理可以有效抑制采后紅托竹蓀鮮品呼吸強(qiáng)度的上升，延緩其衰老。細(xì)胞中的能量供應(yīng)是影響果蔬貯藏壽命的關(guān)鍵因素，較低的能量水平會(huì)加速果蔬的衰老，影響貯藏品質(zhì)[8]。除此之外，ATP 的缺乏會(huì)阻礙脂肪酰鏈的去飽和作用，影響脂質(zhì)的合成，最終影響生物膜的完整性[8]。本研究結(jié)果顯示，貯藏期間100 μL/L 褪黑素處理組能荷值始終高于CK 組，從而延緩維持紅托竹蓀細(xì)胞內(nèi)的能量供給，延緩因能量虧損造成的衰老進(jìn)程。果蔬貯藏期間，活性氧的不斷積累以及抗氧化系統(tǒng)能力的下降會(huì)加速膜脂過氧化進(jìn)程及蛋白質(zhì)氧化程度，從而加速果蔬的衰老[21]。本研究顯示，100 μL/L褪黑素處理能夠更好的維持貯藏期間紅托竹蓀鮮品SOD、POD 和CAT 的活性，從而減少H2O2和MDA含量的積累，抑制的O2-·產(chǎn)生，維持紅托竹蓀細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，從而保持紅托竹蓀鮮品的采后品質(zhì)。賈樂等也發(fā)現(xiàn)褪黑素處理能夠有效維持香菇采后品質(zhì)，降低活性氧代謝產(chǎn)物生成速率,提高機(jī)體的抗氧化能力[21]。除此之外，褪黑素處理還可以有效延緩紅托竹蓀褐變現(xiàn)象的發(fā)生，這與代惠芹等[7]在雙孢蘑菇上的結(jié)論相一致。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，外援褪黑素處理有助于保持紅托竹蓀品質(zhì)，但其具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。