基蛋Getein 1600干式免疫熒光法檢測降鈣素原的性能驗證

余錦旗 何偉 林倩倩 陳穎婷 歐財文 宋麗婷

1廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗醫(yī)學(xué)部，廣州 510120；2廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院皮膚科，廣州 510120；3 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院同德分院急診科，廣州 510130

通信作者：歐財文，Email：ervin_163@163.com

降鈣素原（procalcitonin，PCT）由神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞表達(dá)，經(jīng)酶切分解為（未成熟）降鈣素、羧基端肽和氨基端肽。健康人中PCT 含量很低，受細(xì)菌感染后明顯升高。PCT 的檢測在各臨床實驗室已經(jīng)普遍開展。按照ISO 15189《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》和《醫(yī)療機構(gòu)臨床試驗室管理方法》的要求［1-2］，臨床實驗室所開展的項目應(yīng)當(dāng)進(jìn)行分析并作出相應(yīng)評價。本研究參考《臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證》（WS/T 420-2013）［3］，設(shè)計試驗，對基蛋Getein 1600 測定PCT 進(jìn)行相關(guān)的性能驗證，為臨床提供可靠的依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

材料與方法

1、材料

1.1、儀器與試劑 南京新產(chǎn)業(yè)基蛋Getein 1600 熒光免疫定量分析儀（以下簡稱“基蛋1600”）、配套PCT試劑、原裝高低質(zhì)控品；德國羅氏診斷公司e602 電化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)（以下簡稱“羅氏e602”）、配套PCT試劑。

1.2、樣本 選取廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗科2019年8月檢驗后的34例無脂血、無黃疸、無溶血的肝素鋰抗凝標(biāo)本，離心后取血漿檢測。

2、方法

2.1、精密度驗證 參考 WS/T 420-2013［3］，根據(jù)基蛋1600 配套PCT 試劑說明書，選取正常值和病理值2 個濃度水平標(biāo)本，每個水平每天檢測1批，每批重復(fù)檢測3次，一共連續(xù)檢測5 d。計算重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)差Sr、期間標(biāo)準(zhǔn)差Sl，分別與廠家聲稱值σr和σl作比較。若Sr≤σr且Sl≤σl，則驗證廠家聲稱的精密度可靠；若Sr>σr或Sl>σl，可能存在無統(tǒng)計學(xué)意義的差異，需進(jìn)一步驗證。

2.2、正確度評價 廠家聲稱可溯源至羅氏全自動化學(xué)發(fā)光分析儀及配套試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法）。參考WS/T 420-2013［3］，選取30例濃度均勻分布在測量區(qū)間的標(biāo)本，于基蛋1600 和羅氏e602 同時檢測。計算每個標(biāo)本測量結(jié)果在兩個方法間的相對偏移brel和兩個方法間的相對偏移ˉbrel，并以為brel縱軸，羅氏e602 檢測結(jié)果為橫軸作偏移圖。若偏移圖中brel分布基本均勻，且ˉbrel≤20%，則正確度評價通過；若偏移圖中brel分布不均勻，考慮進(jìn)行多節(jié)段的ˉbrel以進(jìn)一步比較。

2.3、線性范圍驗證 參考WS/T 420-2013［3］，選擇高值和低值標(biāo)本濃度各1份，選擇高值標(biāo)本（H）濃度的要求盡量接近線性范圍的上限，同時要求低值標(biāo)本（L）濃度的要求盡量接近線性范圍的下限。按照5 L、4 L+1 H、3 L+2 H、2 L+3 H、1 L+4 H、5 H（分別對應(yīng)的稀釋度為1、2、3、4、5、6）的比例關(guān)系配置系列評價樣品，每份樣品連續(xù)測定3 次。以稀釋度為橫軸，每個稀釋度的測量均值為縱軸，求出線性回歸方程y=b0+b1x 和相關(guān)系數(shù)R2，如果R2大于等于廠家聲稱的0.980則驗證通過。

結(jié) 果

1、精密度驗證

基蛋1600 PCT 檢測系統(tǒng)的正常值濃度Sr為0.01、Sl為0.01，病理值濃度Sr為0.59、Sl為0.57。結(jié)果均小于廠家聲稱值，見表1所示。

表1 基蛋1600精密度驗證結(jié)果

2、正確度評價

基蛋1600 與羅氏e602 PCT 檢測結(jié)果偏移圖見圖1，偏移分布基本均勻。ˉbrel為19.01%，小于廠家聲稱的20%。

圖1 基蛋1600與比較方法檢測偏移

3、線性范圍驗證

以稀釋度為橫軸，每個稀釋度的測量均值為縱軸，在0.10～36.81 μg/L內(nèi)，線性回歸方程為Y=7.390 8 X-7.072 7，R2=0.997 9，線性回歸方程可見圖2。R2大于廠家聲稱的0.980，線性范圍與說明書接近，驗證通過。

圖2 基蛋1600線性回歸分析

討 論

PCT是可靠的感染性指標(biāo)之一。細(xì)菌性感染時，PCT升高且與炎性反應(yīng)的嚴(yán)重程度有關(guān)，病毒性感染時PCT 不升高或輕度升高［4-5］。目前PCT 檢測方法主要有酶聯(lián)免疫法、膠體金法、免疫熒光法、化學(xué)發(fā)光法、放免法等［6］。本次所驗證的PCT 試劑盒為干式免疫熒光法。干式免疫熒光法既有定量測定，又有快速測定的特點，但目前自動化程度不高，較適合標(biāo)本量少或者基層單位，也適用于急診標(biāo)本［7］。

按照《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》和《醫(yī)療機構(gòu)臨床試驗室管理方法》的要求，臨床實驗室所用的檢驗方法應(yīng)保證檢驗結(jié)果的可靠性，對試劑盒分析性能應(yīng)進(jìn)行驗證。美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會系列文件對試劑盒分析性能的要求較為全面［8-9］，但須消耗大量人力物力。對本次驗證參考WS/T 420-2013［3］對基蛋1600檢測PCT進(jìn)行性能驗證，其精密度（Sr正常值0.01，病理值0.59；Sl正常值0.01，病理值0.57）、正確度（ˉbrel為19.01%）、線性（Y=7.390 8 X-7.072 7，R2=0.997 9）符合廠家說明書的聲稱。

綜上所述，儀器基蛋1600 干式免疫熒光法檢測PCT 的主要性能符合要求，可用于臨床標(biāo)本檢測。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突