河南產(chǎn)南鶴虱揮發(fā)油的GC-MS分析

蔣文琪 王雅琴 陳山珊 曾境昱 賴晨楠 歐陽明 張偉云*

1.廈門醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系/廈門市中藥生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 廈門 361023；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建 福州 350122；3.青蛙王子(福建)嬰童護(hù)理用品有限公司，福建 漳州 363005

南鶴虱為傘形科植物野胡蘿卜(DaucuscarotaL.)的干燥成熟果實(shí)，具有殺蟲消積功效，醫(yī)者常常將其用于去除體內(nèi)蟲積等[1]?！缎滦薇静荨分袑⒈酒穯为?dú)作散劑服用，用以驅(qū)蛔蟲、殺蟯蟲；《小兒藥證直訣》收載了安蟲散，將南鶴虱與金玲子、大腹子、白礬等同用，可較好地緩解人體內(nèi)的蟲痛發(fā)作。

南鶴虱中的化學(xué)成分類型主要包括揮發(fā)油、萜類、黃酮類、香豆素類、甾體類、脂肪酸類等[2-5]，學(xué)者對揮發(fā)油的研究興趣較為濃厚。從南鶴虱中提取的揮發(fā)油也稱為鶴虱油，其質(zhì)地較為粘稠，顏色為暗棕紅色，久聞令人心情愉悅，具有香甜、辛辣、刺激的氣味。南鶴虱揮發(fā)油常被添加至香囊、香油、肥料等產(chǎn)品中。例如，上海制皂廠在香皂生產(chǎn)過程中添加南鶴虱精油，以增加所制香皂香味[6]。

南鶴虱主要產(chǎn)于江蘇、湖北、陜西、河南等省[7]，湖北[8- 9]、陜西[10]等產(chǎn)地的南鶴虱揮發(fā)油化學(xué)成分已被研究和報導(dǎo)，而河南產(chǎn)南鶴虱揮發(fā)油中主要化學(xué)成分未見有學(xué)者研究報道，本研究利用水蒸氣蒸餾法從河南產(chǎn)南鶴虱中提取揮發(fā)油，并利用GC-MS初步分析其化學(xué)成分和相對含量，以期為后續(xù)研究其生物活性并確定構(gòu)效關(guān)系奠定基礎(chǔ)，為南鶴虱的藥用、綜合利用等提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 篩網(wǎng)(10目)、電子天平、電熱套、2000 mL圓底燒瓶、0.45 μm微孔濾膜、氣質(zhì)聯(lián)用儀(Agilent 7890B/7000)。

1.2 試藥 實(shí)驗(yàn)所用河南產(chǎn)南鶴虱(使用前過10目篩)購自漳州集發(fā)醫(yī)藥有限公司，經(jīng)廈門醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系向云亞老師鑒定為傘形科植物野胡蘿卜(DaucuscarotaL.)的干燥成熟果實(shí)。甲醇、正己烷均為色譜級。

2 方法

2.1 水蒸氣蒸餾法提取南鶴虱 稱取100 g河南產(chǎn)南鶴虱，與1000 mL的蒸餾水共同加入2000 mL圓底燒瓶中，浸泡1 h，電熱套設(shè)定溫度為150 ℃，將藥材緩緩加熱至微沸，沸騰后，維持該狀態(tài)，持續(xù)加熱蒸餾2 h，停止加熱。重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)操作3次，收集蒸餾液，取上層淡黃色油狀液體層，加入無水硫酸鈉干燥，備用。

2.2 GC-MS條件與測定 移取上述提取物，用一定比例甲醇和正己烷溶解稀釋后，用0.45 μm微孔濾膜將樣品過濾保存至2 mL樣品瓶中，待測。

用Agilent Mass Hunter Qualitative Analysis B.06.00分析軟件在NIST MS譜庫中分析。部分分析條件參考文獻(xiàn)[10]，升溫程序?yàn)橹鶞貜?40 ℃ 保持1 min，以20 ℃·min- 1的速度升溫至 100 ℃，保持2 min；再以5 ℃·min-1升溫至220 ℃保持2 min，最后以60 ℃·min-1升至280 ℃，保持5 min。柱子參數(shù)：載氣為高純氦，總流速 40 mL·min-1，柱內(nèi)流速1.1 mL·min-1，進(jìn)樣口溫度250 ℃，進(jìn)樣量1 μL。GC和MS接口溫度270 ℃。質(zhì)譜條件：電子轟擊能量70 eV，離子源溫度230 ℃，掃描質(zhì)量范圍(m/z) 15～500 amu。

3 結(jié)果

3.1 水蒸氣蒸餾法提取河南產(chǎn)南鶴虱所得GC-MS圖譜 根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法中的條件及參數(shù)提取河南產(chǎn)南鶴虱中的揮發(fā)油，并采取GC-MS解析其中化學(xué)成分，圖1為實(shí)驗(yàn)所獲得的色譜圖。觀察色譜圖可以發(fā)現(xiàn)，提取所得大部分化學(xué)成分的保留時間處于18～26 min。

3.2 水蒸氣蒸餾法提取河南產(chǎn)南鶴虱主要化學(xué)成分鑒定 通過采用GC-MS分析，在NIST MS譜庫中搜索主要化合物的種類，并對主要化合物應(yīng)用峰面積歸一化法計(jì)算各成分相對含量，綜合各項(xiàng)分析鑒定，所得河南產(chǎn)南鶴虱主要化學(xué)成分見表1。其中，共發(fā)現(xiàn)67個色譜峰，鑒定得出42種主要化合物。在已鑒定的42個化合物中，單萜及倍半萜類化合物占60.73%，單萜及倍半萜含氧衍生物占23.32%。在單萜及倍半萜化合物中烯類化合物主要包括β-欖香烯(相對含量為0.27%)，1-石竹烯 (相對含量為0.41%)，β-芹子烯 (相對含量為24.87%)，α-芹子烯 (相對含量為14.58)，β-蓽澄茄烯 (相對含量為1.67%)，氧化石竹烯 (相對含量為0.35%)，β-芹子烯相對含量最高。

表1 水蒸氣蒸餾法提取河南產(chǎn)南鶴虱所得主要化學(xué)成分

4 討論

本研究利用GC-MS分析河南產(chǎn)南鶴虱揮發(fā)油，在42個化合物中包含文獻(xiàn)報導(dǎo)過的烯類化合物，例如β-芹子烯[4]、β-欖香烯[11]、1-石竹烯[7]、α-芹子烯[12]、β-蓽澄茄烯[12]、氧化石竹烯[12]。其中，本研究中所得相對含量最高的化合物為β-芹子烯(24.87%)，而文獻(xiàn)報導(dǎo)同樣利用水蒸氣蒸餾法提取的陜西省南鶴虱揮發(fā)油中共含有34種化合物，β-芹子烯相對含量僅有0.52%[10]。由此可見，不同產(chǎn)地南鶴虱揮發(fā)油中的化學(xué)成分所對應(yīng)的相對百分含量差距較大。另外，文獻(xiàn)[11]報導(dǎo)相對含量較高的化合物，如U-紅沒藥烯、氧化異佛爾酮,Furan, 2, 2- methylenebis等化合物在本研究中未檢出或相對含量極低。有學(xué)者從南鶴虱揮發(fā)油中共鑒定出16種化合物，包括了氧化異佛爾酮 (34.67%)、Furan, 2, 2-methylenebis (15.28%)等，但不包含U-紅沒藥烯[8]，說明不同產(chǎn)地南鶴虱揮發(fā)油中化學(xué)成分種類也有不同，這可能與地域?qū)?yīng)的氣候、土壤等條件對相關(guān)物質(zhì)積累有影響，另外，也可能與不同提取方法、相同提取方法但具體實(shí)驗(yàn)條件不同等因素都有關(guān)系，尚需對應(yīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證和深入研究。

續(xù)表1 表1 水蒸氣蒸餾法提取河南產(chǎn)南鶴虱所得主要化學(xué)成分

在河南產(chǎn)南鶴虱的主要化學(xué)成分中，發(fā)現(xiàn)其中相對含量最大的化學(xué)成分為β-芹子烯，占24.87%，目前關(guān)于β-芹子烯的藥理活性及用途報導(dǎo)較少，因此可對其進(jìn)一步研究，為河南產(chǎn)南鶴虱的藥理活性及應(yīng)用提供思路。

5 結(jié)論

采用水蒸氣蒸餾法及氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析河南產(chǎn)南鶴虱中化學(xué)成分，共鑒定得到42種主要化合物，對所得化合物進(jìn)一步分類，其中烯烴類成分占比最高，含量較大的化學(xué)成分如β-芹子烯、α-芹子烯、正十四烷等。本研究結(jié)果可為河南產(chǎn)南鶴虱今后的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。