海鮮菇母種繼代和菌種擴繁工藝的出菇效應研究

陳青 張軍輝 趙強 鄭明海 錢瓊秋陳再鳴

海鮮菇母種繼代和菌種擴繁工藝的出菇效應研究

陳青1張軍輝2趙強2鄭明海3錢瓊秋4陳再鳴4*

（1. 浙江省農業(yè)技術推廣中心，浙江 杭州 310020；2. 義烏市龍川農業(yè)開發(fā)有限公司，浙江 義烏 450000；3. 開化農業(yè)技術推廣中心，浙江 開化 324300；4. 浙江大學農業(yè)與生物技術學院，浙江 杭州 310058）

在海鮮菇工廠化栽培模式下，比較分析母種繼代和菌種不同擴繁工藝對其營養(yǎng)生長和生殖生長的影響。結果：母種繼代從第1代到第8代，在營養(yǎng)生長階段，菌絲萌發(fā)時間均為24 h，滿袋時間F2～F8與對照F1均為35～36天，無顯著性差異。在生殖生長階段，菌袋后熟時間，隨傳代數(shù)（F2～F8）的增加，呈延長的趨勢；原基形成時間，各處理均為8～9天；F2～F8代間的產量存在顯著差異，即隨繼代數(shù)的增加，單產逐步下降，呈負相關性。通過與常規(guī)固體三級菌種擴繁工藝比較，液化菌種工藝的菌絲萌發(fā)時間提早12 h，滿袋時間縮短10天，后熟期減少20天，污染率下降4.6個百分點，原基形成早2天，生物轉化率提高15.6個百分點，且子實體整齊、朵形好。

海鮮菇；母種；傳代；液化菌種；出菇

海鮮菇，又稱白玉菇、玉龍菇、玉蕈、鴻喜菇等，是真姬菇純白色品系，拉丁學名(Peck) H. E. Bigelow，隸屬擔子菌亞門、層菌綱、傘菌目、白蘑科、玉蕈屬。海鮮菇味鮮，具有獨特的蟹香味，口感上佳，深受消費者歡迎，是近年來我國工廠化栽培的新菇種之一。

由于海鮮菇工廠化栽培在我國起步較晚，核心技術依賴日本，尤其是在菌種的種性控制和菌種繁育等對子實體產量和品質具有關鍵影響的因子方面缺乏系統(tǒng)研究，整體生產效率低下，栽培效益欠佳，制約了其進一步發(fā)展[1,2]。近年來，國內學者和業(yè)內人士圍繞上述問題進行了一些有益的探索，如福建農林大學胡開輝通過對菌種質量控制、培養(yǎng)基質調配、菌包成熟度控制等入手，構建起工廠化海鮮菇高產栽培技術體系，使單袋產量穩(wěn)定在500 g以上[3,4]。在菌種繁育技術上，一些工廠用深層培養(yǎng)液體菌種生產工藝替代常規(guī)固體三級菌種，效率有所提高，但細菌性污染仍制約著大規(guī)模應用[5]。本研究旨在探明海鮮菇菌種擴繁代數(shù)對菌絲生長速度和產量的影響，考察液化菌種新工藝下的綜合栽培效益。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

（1）供試菌種。以浙江大學食用菌研究中心分離自義烏龍川農業(yè)開發(fā)有限公司栽培的海鮮菇子實體為種源。

（2）供試培養(yǎng)基。綜合PDA母種培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g/L、葡萄糖20 g/L、KH2PO41.0 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、蛋白胨2 g/L、維生素B110 mg/L、瓊脂20 g/L。固體原種、栽培種培養(yǎng)基：棉籽殼45%，木屑35%，麩皮20%，含水量60%±1%。出菇栽培袋配方：棉籽殼48%，木屑35%，麩皮10%，玉米粉5%，石灰2%，含水量60%±1%。

（3）菌種液化和接種設備。ZJU-8型智能菌種液化系統(tǒng)和液化菌種自動接種流水線，由浙江大學食用菌研究中心研制。

1.2 試驗方法

（1）母種繼代培養(yǎng)試驗。將組織分離、純化后的母種F0在無菌條件下，分批轉接到綜合PDA母種培養(yǎng)基中，按常規(guī)方法培養(yǎng)，檢測、淘汰不典型菌落，用正常菌落繼續(xù)繼代轉接，每轉接一次為擴繁一代，共擴繁8代，分別用F1～F8表示。

將8代供試母種，按1.1（2）供試培養(yǎng)基配方，制成固體三級菌種，再按常規(guī)方法接種至出菇栽培袋。每個處理設3次重復，每重復100袋。

（2）不同菌種擴繁工藝效果試驗。設置常規(guī)固體三級菌種和固體液化菌種擴繁工藝2個處理，以固體三級菌種為對照。2個處理均選用F1母種，其中固體三級菌種按1.2（1）方法制備，每袋接菌種30 g；固體液化專用菌種和液化工藝按浙江大學食用菌研究中心專利技術“海鮮菇液化專用菌種培養(yǎng)基及相應的培養(yǎng)法（ZL201510027583.1）”制備，將固體專用種源在智能液化系統(tǒng)中用無菌水液化稀釋后，在自動接種流水線上直接接種至出菇栽培袋，每袋接種量為30 mL。每個處理設3次重復，每重復100袋。

（3）出菇袋制作、培養(yǎng)和栽培條件控制。按照1.1（2）中的出菇栽培袋配方制作料袋，用規(guī)格為18 cm×35 cm的低壓聚乙烯薄膜袋，裝料濕重1.2～1.3 kg，料高18 cm。抽真空高壓滅菌280 min，冷卻后按1.2（2）方法接種。

將不同處理的菌袋置于同一培養(yǎng)室和出菇室內進行菌絲培養(yǎng)和子實體的培育。①菌絲培養(yǎng)：前7天溫度控制在22 ℃左右，菌絲開始定植后，袋內溫度不超過25 ℃，待長滿菌袋3/4左右時移入定植庫；滿袋后進入后熟期，控制溫度在23～25 ℃，后熟65～70天后開袋。②催蕾：去除菌袋表面的老化菌絲，前2天控制溫度在18～20 ℃，空氣相對濕度95%左右，不通風；第3～10天溫度穩(wěn)定在14～16 ℃，空氣相對濕度85%左右，給予適當光照和通風，菌絲變白逐漸形成菌皮，并扭結形成原基；第11～17天空氣相對濕度維持在90%～92%，二氧化碳濃度0.25%～0.3%，每天光照2 h，培育幼芽。③伸長期管理：控制空氣相對濕度在90%～95%，二氧化碳體積濃度提高到0.5%～0.6%，根據(jù)菌蓋大小調節(jié)光照時間，經(jīng)過28天左右，菌柄長至13～15 cm，即采摘。

（4）數(shù)據(jù)記錄和處理。營養(yǎng)生長期記錄菌絲萌發(fā)、封面、滿袋、后熟時間，計算污染率；生殖生長期記錄出菇時間，測量菌蓋直徑、菌柄長度、菌柄直徑及每袋菇根數(shù)，計算平均產量和生物轉化率。采用Excel2003和IBM Statistics 20.0進行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析。

2 結果與分析

2.1 母種不同擴繁代數(shù)的菌絲與子實體生長情況

母種不同擴繁代數(shù)（F1～F8代）的海鮮菇菌絲體和子實體生長結果見表1。用液化菌種接種料袋后，F(xiàn)1～F8代處理的菌絲萌發(fā)時間均為24 h，說明擴繁代數(shù)對液化菌種的菌絲萌發(fā)沒有影響。菌絲長滿袋時間F2～F8代與對照F1代都在35～36天之間，無顯著性差異。接種污染率以F5、F7代較高，與其他代處理間存在顯著差異，但污染率與擴繁代數(shù)有一定相關性，但規(guī)律不明顯。

菌袋后熟時間F2～F8代處理間呈正相關性，即隨擴繁代數(shù)的增加，后熟時間有延長的趨勢。原基形成時間，F(xiàn)2～F8代與對照F1代都為8～9天。單袋產量，F(xiàn)2～F8代處理間具有一定差異，以F2代的單袋產量較高，為582 g，其與對照F1代的差異不顯著，而F3～F8代處理均顯著低于對照。隨著擴繁代數(shù)的增加，單袋產量漸次降低，與代次呈負相關性，其中F8代的單袋產量僅499 g，子實體外觀品質與對照也有明顯差異（圖1）。

表1 海鮮菇母種不同擴繁代數(shù)的生長表現(xiàn)

擴繁代數(shù)菌絲生長子實體生長 萌發(fā)時間/h滿袋時間/d污染率/%后熟時間/d開袋時間/d原基形成時間/d單袋產量/g F1(ck)24351841188628±61.5 a F224352841198582±13.2 ab F324363861228557±15.1 b F424363841189544±32.4 bc F524354861209522±43.1 c F624353881238520±46.3 c F724355861218514±32.7 c F824353851209499±46.1 c

注：同列數(shù)據(jù)后小寫字母不同，代表差異顯著（＜0.5），表2同。

圖1 母種不同擴繁代數(shù)時的子實體生長情況

2.2 不同菌種擴繁工藝下的海鮮菇營養(yǎng)生長和生殖生長情況

試驗結果顯示，液化菌種接種料袋后，菌絲萌發(fā)時間為24 h，比對照固體菌種處理的36 h提早12 h；菌絲封面時間為8天，比對照的15天少7天；菌絲滿袋時間為30天，比對照的40天縮短10天；后熟期為70天，比對照的90天減少20天；接種污染率0.4%，比對照的5%大幅降低。表明液化菌種的活力強、萌發(fā)快，菌液滲透性好，菌絲滿袋時間和后熟時間明顯縮短，菌袋成品率大大提高，整個菌絲培養(yǎng)期縮短30天，且菌絲潔白、生長旺盛（圖2）。

A. 固體菌種接種12天；B. 液化菌種接種12天；C. 固體菌種接種30天；D. 液化菌種接種30天

液化菌種和常規(guī)固體三級菌種擴繁工藝下的海鮮菇子實體生長情況（表2）可見，將液化菌種接種的菌袋和固體菌種（對照）的同時開袋進行出菇管理，液化菌種處理的原基形成時間為9天，比對照快2天，出菇周期28天，比對照的31天縮短了3天。平均單袋產量，液化菌種處理為517 g，高于對照的439 g，但差異不顯著。生物轉化率，液化菌種處理為103.4%，比對照提高17.8%，但差異不顯著。進一步分析子實體的質量指標發(fā)現(xiàn)，液化菌種處理的子實體菌柄直徑較對照增大0.6 cm，有效菇數(shù)多18根，且表現(xiàn)生長整齊、朵形好、無畸形菇（圖3）。

圖3 液化菌種與固體菌種的子實體形態(tài)比較

2.3 不同菌種擴繁工藝的應用效果

液化菌種在海鮮菇工廠化栽培上應用，綜合效益明顯。由表3可知，從種源接種料袋數(shù)量方面看，每千克固體液化種源經(jīng)液化后，可接種料袋5 000袋以上，是對照組的151倍，菌種直接成本下降80%；從人工、能耗和培養(yǎng)周期測算，減少綜合費用40.1%。測算全周期效益，綜合產量提高、品質提升和污染率下降等效應，共節(jié)本增效32.9%。

3 討 論

3.1 海鮮菇屬異種結合四極性擔子菌，其菌絲體在母種階段培養(yǎng)時會產生較多的節(jié)孢子和厚垣孢子等無性孢子，這些無性孢子既有雙核，也有單核，其萌發(fā)后產生的雙核菌絲體或單核菌絲體隨著母種繼代數(shù)的增加，菌絲細胞遺傳性變異會不斷積累，最終引起種性的退化[8]。本研究顯示，母種繼代到F3代后，子實體單產就有較顯著的下降。所以在菌種繼代擴繁中，需要在母種階段嚴格控制繼代培養(yǎng)的代數(shù)，以避免栽培減產風險。

3.2 海鮮菇菌袋滿袋后，須經(jīng)90天以上的后熟期，栽培難度較金針菇、杏鮑菇等早熟型菇種大。常規(guī)固體菌種接種時，由于三級種源活力差異大、隱性帶菌多，加上早期種性檢測難，所以接種后的菌袋污染率高，尤其是后熟期的菌袋一致性較差，表面菌絲因過老化而易引起污染、溶菌等現(xiàn)象，致使子實體產量和質量降低。克服上述現(xiàn)象是海鮮菇工廠化栽培取得高效優(yōu)質的關鍵[6,7]。本研究采用由浙江大學食用菌研究中心團隊自主發(fā)明的固體液化菌種及新工藝專利技術，與常規(guī)固體菌種比較，全溶性固體專用菌種具有繁育系數(shù)高、菌種活力強、安全可控、儲運方便等優(yōu)點。在接種工藝上，采用二級液化接種新工藝，操作簡便、接種系數(shù)高，菌種接種系數(shù)比常規(guī)固體菌種提高150倍。在栽培應用方面，通過培養(yǎng)料配制、料袋制作、接種方式、菌袋培養(yǎng)、出菇控制等全程關鍵技術集成，菌袋接種污染率降低，菌絲培養(yǎng)時間縮短，生物學效率提高，綜合節(jié)本增效32.9%。

3.3 本試驗的液化菌種新工藝在海鮮菇工廠化栽培上的應用，與深層發(fā)酵技術和常規(guī)固體三級制種工藝比較體現(xiàn)出全方位的優(yōu)勢，一是菌種種源培育流程從4級簡化為2級，培育周期短，保質期長，儲運方便，更重要的是建立了種性預檢技術體系，能有效防范菌種種性變異及退化風險，安全性好；二是在菌液及接種應用方面，菌液只含純菌絲而無任何營養(yǎng)源，有效避免了深層發(fā)酵液體菌種和常規(guī)固體菌種存在的弊端，菌絲活力強、滲透性好，接種后菌絲萌發(fā)時間短，菌袋成品率高。

表2 液化菌種工藝與固體菌種工藝對海鮮菇生殖生長的影響

處 理原基形成時間/d出菇期/d菌蓋直徑/cm菌柄長度/cm有效菇數(shù)/袋單袋產量/g生物轉化率/% 液化菌種 9281.30±0.02 a15.3±1.3 a 116±15.2 a 517±48.9 a103.4±9.8 a 固體菌種(CK) 11311.31±0.01 a 14.7±0.9 ab 98±11.3 ab 439±35.6 ab 87.8±7.2 ab

表3 液化菌種與固體菌種應用效益比較

處 理接種數(shù)量*/袋每袋種源費/元每萬袋接種用時/h每袋接種人工費/元每袋能耗費/元每袋綜合費用/元 液化菌種5 0000.032.50.0150.50.545 固體菌種(CK)33 0.15100.060.70.91 比CK增減+150倍-80%-75%-66.7%-28.6%-40.1%

注：*為每千克固體種源的接種料袋數(shù)量。

綜合本試驗結果，海鮮菇液化菌種新工藝和相關精準栽培技術，突破了傳統(tǒng)固體菌種及相關栽培工藝生產周期長、效率低且穩(wěn)定性差、風險大的弊端，技術應用不但直接效益明顯，每萬袋接種成本僅300元，比傳統(tǒng)工藝節(jié)約500元，而且在菌種培養(yǎng)設施投入方面比傳統(tǒng)固體菌種制備工藝節(jié)省90%，既提高了生產效率，又降低了生產成本。

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S646

A

2095-0934（2022）04-302-05

浙江省“三農六方”科技協(xié)作項目“海鮮菇精準栽培技術研究與示范”（2018SNLF015）

陳青（1972.9—），正高級農藝師，主要從事食用菌技術研究和推廣工作。

陳再鳴（1963.10—），研究員，主要從事食用菌育種和栽培生理研究。E-mail：zaimingch@163.com。